全 文 ：［收稿日期］ 20100902(005)
［基金项目］ 吉林省科技发展计划资助项目(200705428);吉林省中医药管理局科技项目(08SYS-105)
［第一作者］ 金爱花，硕士研究生，研究方向为肿瘤生化，E-mail:aihua1028@ sina. com
［通讯作者］ * 全吉淑，教授，硕士，研究方向为肿瘤生化，E-mail:quanjs@ ybu. edu. cn
祁州漏芦对 H22小鼠肝癌皮下移植瘤的抑瘤作用及其机制初探
金爱花1，许惠仙2，刘文静1，全吉淑1* ，尹学哲2
(1.延边大学基础医学院，吉林 延吉 133000;2.延边大学附属医院，吉林 延吉 133000)
［摘要］ 目的:探讨祁州漏芦水提物(RUWE)对小鼠 H22 移植瘤的生长抑制作用。方法:建立小鼠皮下 H22 移植瘤模
型，将实验动物分为模型组、RUWE 高、中、低剂量组和 5-Fu 组，RUWE 按 400，200，100 mg·kg － 1·d － 1剂量 ig 连续给药 10 d，5-Fu
组按 25 mg·kg － 1·d － 1剂量隔日 ip 给药，处死动物，计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数，并以 ELISA 法检测血清肿瘤坏死因子-α
(TNF-α)和白介素-2(IL-2)，比色法检测血清总抗氧化活力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量。结果:与模型组相比，RUWE 能显
著减小移植瘤瘤重，提高抑瘤率，其 RUWE 高、中、低剂量组抑癌率分别为 38. 05%，34. 98%，26. 95%。同时，明显升高荷瘤小
鼠的脾指数，增高血清 IL-2 和降低 TNF-α，增高血清 T-AOC 和降低 MDA 水平。结论:RUWE 对 H22 移植瘤具有明显的抑制作
用，其作用可能与其增高机体免疫机能和抗氧化能力有关。
［关键词］ 漏芦;H22;抗肿瘤;抗氧化
［中图分类号］ R285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)-0165-03
Studies on Anti-tumor Effect and Mechanism of Rhaponticum uniflorum
in H22-bearing Mice
JIN Ai-hua1，XU Hui-xian2，LIU Wen-jing1，QUAN Ji-shu1* ，YIN Xue-zhe2
(1. College of Basic Medicine，Yanbian University，Yanji 133000，China;
2 . Yanbian University Hospital，Yanji 133000，China)
［Abstract］ Objective:To investigate the anti-tumor effect of Rhaponticum uniflorum water extract(RUWE)in
H22-bearing mice.Method:The H22 transplanted mouse models were established and randomly divided into 5 groups:
model，high，medium and low dose RUWE，and 5-Fu group. Animals were treated with ig 400，200，100 mg·kg － 1·d － 1
RUWE once daily for 10 days，and with ip 5-Fu 25 mg·kg － 1·d － 1 every other day for 3 times，then the tumor growth in-
hibition ratios，spleen and thymus indexes were caluclated. The serum tumor necrosis factor-α(TNF-α)and interlekin-
2(IL-2)was determined with ELISA method，the total antioxidant capacity(T-AOC)and malondialdehyde(MDA)con-
tent were detected by colorimetric method. Result:The administration with 400，200，100 mg·kg － 1·d － 1 RUWE inhibi-
ted the growth of transplanted tumor with the inhibitory ratios of 38. 05%，34. 98%，26. 95%，respectively. In addi-
tion，RUWE treatment elevated the spleen index，reduced the serum TNF-α level，increased the serum T-AOC and de-
creased serum MDA level of H22-bearing mice. Conclusion:RUWE could exhibit an inhibitory effect on the growth of
transplanted H22 tumor，probably via the improved immune function and antioxdative capability.
［Key words］ Rhaponticum uniflorum;H22;anti-tumor;antioxdation
祁州漏芦广泛分布于我国华北、东北和西北诸
省，药源丰富。早在《神农本草经》中就记载漏芦
“下乳汁……久服轻身益气、耳目聪明，不老延
年”，将其列为上品，陶弘景指出“此药久服甚益
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第 17 卷第 5 期
2011 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 5
Mar.，2011
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.05.072
人”。近年来研究发现漏芦具有提高细胞免疫、抗
动脉粥样硬化、抗炎、抗衰老等作用［1，2］。本研究
采用小鼠 H22 肝癌移植瘤模型，观察了祁州漏芦
水提物(RUWE)对 H22 肝癌小鼠的抑瘤作用及免
疫增强作用。
1 材料
1. 1 RUWE 的制备 漏芦采自吉林省长白山，由延
边大学药学院刘勇镇教授鉴定。将 2 kg 祁州漏芦
切碎，加 10 倍体积水煎煮 4 h，共 3 次，合并滤液，减
压蒸馏、冷冻干燥即得 RUWE 0. 19 kg，得率 9. 5%。
1. 2 动物和细胞株 雄性昆明小鼠，普通级，体重
为 18 ～ 22 g，由延边大学医学院动物科所提供，合格
证号 SCKK(吉)2007-0004;基础饲料由延边大学医
学部动物科提供。小鼠 H22 肝癌细胞株由延边大
学基础医学院预防医学教研部韩春姬教授惠赠。
1. 3 试剂 5-氟尿嘧啶(5-Fu)购自上海旭东海普
药业有限公司，批号 20090512;小鼠白介素-2(IL-2)
ELISA 试剂盒和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)ELISA
试剂盒购自北京世都行生物科技开发中心，批号为
201004;蛋白质测试盒、丙二醛(MDA)测试盒和总
抗氧化活力(T-AOC)测试盒购自南京建成生物技术
研究所，批号为 20100319。
1. 4 仪器 HITACHI himac cp 100α 超速离心机，
日本日立公司;U-2010 型紫外分光光度仪，日本岛
津公司;RT-2100 型酶标仪，深圳雷杜公司。
2 方法
2. 1 建立 H22 小鼠肝癌移植瘤模型及分组处理
常规方法复苏 H22 小鼠肝癌细胞，调细胞密度为 2
～ 3 × 106 个 /mL，取 0. 2 mL 细胞悬液注射到雄性昆
明小鼠腹腔内，连续传 2 代。无菌操作取第 2 代腹
水，用无菌生理盐水稀释，调整细胞密度为 1 × 107
个 /mL，取 0. 2 mL 瘤细胞悬液接种到雄性昆明小鼠
右腋窝皮下［3］。接种第 2 d 随机分成模型组、RUWE
高、中、低剂量组和 5-Fu 组，每组 10 只。RUWE 高、
中、低剂量组分别按 400，200，100 mg·kg － 1·d － 1剂量
ig 给 药，每 日 1 次，共 10 次;5-Fu 组 按
25 mg·kg － 1·d － 1剂量隔日 ip，共 5 次;模型组则以生
理盐水替代药物 ig。ig 第 10 d 停药，禁食不禁水 16
h 后，处死动物。另设正常组 10 只，每天生理盐水
ig，共 10 d。
2. 2 抑癌率和免疫器官指数的测定 分别称取荷
瘤鼠体重、瘤质量、胸腺质量、脾质量，计算抑癌率、
胸腺指数和脾指数。
抑癌率 =(模型组平均瘤质量 －治疗组平均瘤质量)/模
型组平均瘤质量 × 100%
胸腺(脾)指数 =胸腺(脾)质量(mg)/体重(g)
2. 3 血清 TNF-α，IL-2 以及抗氧化指标的检测 眼
眶取血，分离血清，ELISA 法检测血清 TNF-α 和
IL-2，比色法检测血清 T-AOC 和 MDA 含量。
2. 4 统计学处理 数据以 珋x ± s 表示，用 SPSS11. 5
统计软件包，以 Turkeys 多因素 t 检验进行多组数据
间比较，P < 0. 05 有统计学意义。
3 结果
3. 1 RUWE 对荷瘤小鼠抑癌率的影响 结果见表
1。RUWE 低、中、高剂量组小鼠肝癌 H22 移植瘤的生
长有明显抑制作用，瘤重与模型组比较均有显著性差
异(P < 0. 05);但与 5-Fu 组相比，RUWE 各剂量组瘤
重均显著增高(P < 0. 05)，抑癌作用弱于 5-Fu 组。
表 1 RUWE 对荷瘤小鼠抑癌率的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
/mg·kg － 1·d － 1
瘤重 / g 抑癌率 /%
模型 － 1. 83 ± 0. 32 －
5-Fu 25 0. 52 ± 0. 251) 71. 25
RUWE 100 1. 34 ± 0. 471，2) 26. 95
200 1. 19 ± 0. 461，2) 34. 98
400 1. 13 ± 0. 361，2) 38. 05
注:与模型组相比1)P <0. 05;与 5-Fu组相比2)P <0. 05(表 2同)
3. 2 RUWE 对小鼠体重及免疫器官指数的影响
结果见表 2。与模型组比较，RUWE 中剂量组小鼠
体重显著升高(P < 0. 05)，RUWE 中、高剂量组小鼠
脾指数显著升高(P < 0. 05)，但胸腺指数无明显变
化;而 5-Fu 组小鼠体重、脾指数和胸腺指数均明显
低于模型组(P < 0. 05)。
3. 3 RUWE 对血清 TNF-α 和 IL-2 的影响 结果见
表 3。与正常组相比，模型组小鼠 IL-2 显著降低
(P < 0. 05)，TNF-α 显著增高(P < 0. 05)。与模型组
相比，RUWE 低、中剂量组小鼠 IL-2 明显增高(P <
0. 05)，TNF-α 显著降低(P < 0. 05)。RUWE 高剂量
组小鼠 TNF-α 与模型组相比也有类似的降低作用。
3. 4 RUWE 对血清抗氧化指标的影响 结果见表
4。与正常组相比，模型组小鼠 MDA 含量显著增高
(P < 0. 05)，T-AOC 显著降低(P < 0. 05)。与模型组
相比，RUWE 低、中剂量组血清 T-AOC 显著提高(P
< 0. 05)，而 RUWE 低、中、高剂量组血清 MDA 含量
显著降低(P < 0. 05)。
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 5
Mar.，2011
表 2 RUWE 对小鼠试验后体重及免疫器官指数的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
/mg·kg － 1·d － 1
试验前体重
/ g
试验后体重
/ g
胸腺指数
/mg· g － 1
脾指数
/mg·g － 1
模型 － 16. 88 ± 1. 34 30. 2 ± 3. 55 2. 52 ± 0. 84 5. 10 ± 1. 10
5-Fu 25 17. 44 ± 1. 27 25. 32 ± 3. 541) 0. 84 ± 0. 341) 3. 00 ± 0. 761)
RUWE 100 16. 71 ± 1. 29 32. 02 ± 2. 422) 2. 48 ± 0. 392) 6. 43 ± 2. 312)
200 16. 92 ± 1. 34 33. 53 ± 2. 481，2) 2. 75 ± 0. 472) 6. 87 ± 1. 921，2)
400 16. 69 ± 0. 96 32. 56 ± 2. 642) 2. 46 ± 0. 532) 7. 41 ± 1. 811，2)
表 3 RUWE 对血清 TNF-α和 IL-2 的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
/mg·kg － 1·d － 1
IL-2
/ ng·L － 1
TNF-α
/ ng·L － 1
正常 － 242. 71 ± 19. 21 64. 70 ± 1. 41
模型 － 181. 49 ± 21. 851) 83. 97 ± 4. 151)
5-Fu 25 217. 32 ± 7. 021，2) 72. 35 ± 2. 751，2)
RUWE 100 216. 53 ± 19. 361，2) 67. 35 ± 6. 412，3)
200 215. 35 ± 14. 771，2) 58. 24 ± 4. 341，2，3)
400 174. 41 ± 1. 801，3，4) 62. 50 ± 3. 011，2，3)
注:与正常组相比1)P < 0. 05;与模型组相比2)P < 0. 05;与 5-Fu
组相比，3)P < 0. 05;与 RUWE 200 mg·kg － 1剂量组相比，4)P < 0. 05
(表 4 同)。
表 4 RUWE 对血清抗氧化指标的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
/mg·kg －1·d －1
T-AOC
/U·mL － 1
MDA /μmol·L － 1
正常 － 12. 21 ± 0. 92 6. 23 ± 0. 40
模型 － 11. 10 ± 0. 641) 13. 09 ± 0. 981)
5-Fu 25 9. 37 ± 1. 611，2) 8. 11 ± 2. 421，2)
RUWE 100 16. 89 ± 3. 321，2，3) 11. 13 ± 1. 541，2，3)
200 18. 04 ± 2. 411，2，3) 11. 73 ± 1. 811，2，3)
400 10. 57 ± 1. 951，4) 9. 89 ± 2. 671，2，3，4)
4 讨论
本实验通过建立 H22 小鼠肝癌移植瘤模型，证
明了漏芦的抗肿瘤作用。本实验结果表明，漏芦对
小鼠 H22 肝癌移植瘤有抑制作用，其抑癌率约为
38%，虽然抑癌率与化疗药相比有差距，但能提高荷
瘤小鼠的脾指数，增加体重，减少因化疗所致的体重
减轻和免疫力低下的副作用。同时，漏芦对 H22 荷
瘤小鼠的血清细胞因子水平有一定的影响。模型组
荷瘤小鼠血清IL-2较正常小鼠显著降低，TNF-α 却明
显增高。而 RUWE 低、中剂量荷瘤小鼠血清 IL-2 明
显高于模型组，而 TNF-α 明显低于模型组，均趋向正
常水平，说明漏芦能调节荷瘤小鼠的免疫功能，在肿
瘤免疫中起着调节功能。值得注意的是 RUWE 高剂
量小鼠血清 IL-2 却无类似于其他剂量组的变化。这
可能是由高剂量漏芦发挥的免疫抑制作用而造成
的，表明漏芦可能兼具攻毒和补益双重功能。漏芦
在传统中医本草书中是一味补益正气的上品药，实
验结果也证实了漏芦是辅助正气的，可通过增强免
疫功能使肿瘤消退或延缓其发展。此外，目前也有
人认为中草药的抗肿瘤活性和增强机体免疫作用与
其能诱生 TNF-α 有关［4］，这似乎与本实验所测结果
相矛盾。考虑到 TNF-α 对肿瘤生长的双重作用和漏
芦的攻毒和补益双重功能，漏芦对肿瘤免疫的影响
需具体分析和进一步探讨。
肿瘤的发生发展与宿主的自由基水平及其代谢
产物有关。而导致自由基对人体产生损伤的主要原
因之一是其代谢产生的脂质过氧化物。MDA 是脂质
过氧化物的主要分解产物，其含量常常反映组织脂
质过氧化程度，也间接反映组织受自由基攻击的严
重程度。本试验结果表明，RUWE 能提高 H22 荷瘤
小鼠血清总抗氧化能力，降低 MDA 含量，提示漏芦
抗肿瘤作用可能还与其抗氧化作用有关。
综上所述，漏芦对小鼠 H22 肝癌移植瘤有一定
的抗肿瘤作用，并且一定程度上改善荷瘤小鼠的免
疫抑制状态和提高抗氧化能力。此研究对漏芦在肿
瘤防治中的开发利用具有一定的指导意义。
［参考文献］
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究［J］.沈阳药学院学报，1992，9(1):73.
［2］ 张学武，李天洙，孙权 . 漏芦提取物抗炎、镇痛、耐缺氧
及抗疲劳作用的研究［J］.四川中医，2005，23(7):45.
［3］ 李坤星，朱学萍，张海林，等 . 桑黄云芝胶囊对小鼠肉瘤
S180及肝癌 H22 移植性肿瘤生长的抑制作用［J］. 中国
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［4］ 肖顺汉，刘明华，钟琳，等 . 克癌新对荷瘤小鼠 IL-2，IL-
6，IL-12，TNF-α 水平的影响［J］. 中药药理与临床，
2008，24(2):82. ［责任编辑 聂淑琴］
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金爱花等:祁州漏芦对 H22 小鼠肝癌皮下移植瘤的抑瘤作用及其机制初探