全 文 ：天 津 中 医 药
Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine
2013年 2月第 30卷第 2期
Feb． 2013,Vol．30 No．2
高效液相色谱法测定白子菜中芦丁的含量
王中华，陈 涛
（天津中医药大学第一附属医院，天津 300193）
摘要：[目的]白子菜在临床和民间广泛用于治疗高血压病、高脂血症及糖尿病，2010年卫生部将其列为新资源食
品。本文采用高效液相色谱法（HPLC）建立白子菜中的主要黄酮类成分（芦丁）的含量测定方法。[方法]石油醚（30～60℃）
前处理，取样量 1．000 g，60％乙醇 40 mL，超生提取 15 min。色谱柱：Xterra ＠RP 185 um；流动相：“甲醇 －1 ％ 冰醋
酸（40∶60）；检测波长：360 nm。[结果]通过线性关系考察，表明芦丁质量浓度在 0．011 2~0．067 2 mg/mL范围内线性关
系良好，r＝0．999 1。精密度、重复性、重现性、稳定性及加样回收率结果均能满足分析要求。[结论]此方法简便，准确，
可为测定白子菜中黄酮类成分（芦丁）的含量，提供一定的参考。
关键词：白子菜；高效液相色谱法；芦丁；含量测定
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1672-1519（2013）02-0112-0
作者简介：王中华（1970-），男，硕士，主管药师、执业药师，主
要从事临床药学，中药制剂分析。
白子菜（Crynura divaricata（L.）DC．）为菊科土三
七属植物，其根、茎、叶均可入药。其根性味甘、凉,能
清热凉血,散淤消肿。其茎、叶性味咸微辛、寒,有毒,
具有清热,舒筋,止血,祛痰之功效。白子菜地上部分
可作为药食两用之品，广泛用于治疗高血压病、高
脂血症及糖尿病等，故有“神仙草”之称。白子菜地
上部分含有丰富的黄酮类成分，现代药理学研究也
表明，黄酮类化合物有较好的降血糖作用。对于白
子菜的研究目前还处于基础阶段。迄今为止，关于
白子菜中黄酮类化合物的研究，国内外的报导较少，
还没有利用高效液相色谱法对其进行检测和含量
测定的相关研究。本文参照高效液相色谱法实验[1]，
采用高效液相色谱法对白子菜叶中黄酮类化合物
的（以芦丁计）含量进行分析测定，对色谱条件进行
优化选择，分析结果表明此法简单快速、准确灵敏。
本研究为分析白子菜中黄酮类化合物的药用价值
提供相关的理论依据． 可为白子菜的开发利用提供
相应的参考,具有一定的实用意义。
1 实验材料
1.1 仪器 Waters 600 E 高效液相色谱仪；Waters
2998 二极管阵列检测器；Waters Empower 数据工
作站；FA1104 电子分析天平（上海精科天平厂）；
DK98-1型电热恒温水浴锅（双列六孔、天津中环科
技开发公司）；ACO-3120型真空泵（上海会行农机
厂）；超声处理器（北京医疗设备二厂）；药典筛（浙
江五星冲压筛具厂）；101-2BS电热恒温干燥箱（天
津中环实验电炉有限公司）；ZDHW 调温型电热套
（5000 mL河北省黄骅中性仪器有限公司）；DL-1单
联电炉（2000 W北京中兴伟业仪器有限公司）；玻璃
仪器等。
1.2 试药与试剂 样品：白子菜（采集于天津中医
药大学植物药种植基地，经天津中医药大学药用植
物学研究室李天祥教授鉴定为菊科植物白子菜。对
照品：芦丁（购自中国药品生物制品检定所，供含量
测定用，批号：100080-200707）。甲醇、乙腈，磷酸等
为色谱纯，其余试剂均为分析纯；水为蒸馏水。
2 实验方法与结果
2.1 方法学的考察
2.1.1 检测波长的测定 参照《中国药典》2010年版
一部“槐花”项下芦丁的检测波长，用 Waters 600 E
高效液相色谱仪，流动相为甲醇-1%冰醋酸（40∶60），
在波长 200～600 nm进行扫描，芦丁对照品在 360 nm
处有最大吸收峰，最终确定 360 nm为检测波长。
2.1.2 流动相的考察 参考相关文献 [2]，筛选出四
组流动相即：甲醇-0.4%磷酸（50:50）；甲醇-2%磷酸
（45∶55）；乙腈-0.4%磷酸（20∶80）；甲醇-1%冰醋酸
（40∶60）；在相同的检测波长、流速、进样量的情况
下，由于前三组出峰时间偏短，基线分离不好，所以
最终确定流动相为：“甲醇-1%冰醋酸（40∶60）”，色
谱柱:Xterra@RP185um，柱温 30 ℃，流速 1 mL/min，
检测波长 360 nm，进样量 20 μL。
2.1.3 提取方法的考察 先将白子菜样品进行前
处理,以石油醚（30~60 ℃）回流提取 3 h 后干燥备
用。然后筛选出三种提取方法即：取样量 1.000 g，
60%乙醇 40 mL超生提取 15min；取样量 2.000 g，加
甲醇 20 mL超生提取 15min；取样量 3.000 g，60%乙
DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2013.02.18
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醇 30 mL与 25%硫酸 3mL，回流提取 3 h后乙酸乙
酯萃取[2]。在相同的色谱条件下：进样量 20 μL”进行
检测，结果显示，取样量 1.000 g，60%乙醇 40mL，超
生提取 15 min的条件出峰时间、峰面积、峰型、基线
分离度均较好，所以确定其为最佳提取方法。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品
1.00 mg，用甲醇定容至 10 mL的容量瓶中，即为芦
丁对照品溶液（浓度 0.10 mg/mL）
2.2.2 供试品的前处理 取白子菜的地上部分成
熟的叶片，去尘土洗净晾干，置于烘干箱内以 60 ℃
干燥 2.5 h使叶片水分基本蒸发，叶片呈土黄色质
脆易碎，药用粉碎机粉碎至能过 1 mm孔径筛的粗
粉，置于干燥的容器中备用。
精密称取白子菜粗粉 3.006 g和 3.007 g，分别
加石油醚（30~60 ℃）150 mL，置于索式提取器中回
流提取 3 h（料液比 1∶50，水浴温度 55 ℃），滤过，弃
去石油醚提取液，药粉残渣置蒸发皿中水浴 60 ℃、
20 min挥干石油醚，后置于干燥容器中备用。
2．2.3 供试品溶液的制备 精密称取经前处理的
白子菜粗粉 1.000 g和 1.001 g，各加 60%乙醇 40 mL
（料液比 1 ∶40），置于 100 mL 三角瓶中称质量，
静置 30 min，置超声提取器中（频率 50 Hz，功率
500 W，温度 56 ℃）提取 15 min，取出冷却至常温再
称质量，用 60%的乙醇补重，过滤，滤液备用[3]。残渣
再按以上方法提取一次。合并两次滤液，用 60%乙
醇分别定容至 100 mL的容量瓶中，用 0.45 μm微孔
滤膜滤过，取续滤液，此即为白子菜的供试品溶液。
2.3 线性关系的考察 精密称取干燥的芦丁对照
品 20.0 mg，加甲醇 100 mL配制成 0.20 mg/mL的标
准液。精密吸取对照品溶液 1、2、3、3.5、5、6 mL分别
置于 25 mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度，摇匀。精
密量取 20 μL注入液相色谱仪，记录芦丁峰面积。
以对照品浓度（mg/mL）为横坐标，峰面积值为纵坐
标进行线性回归的计算，得芦丁标准曲线（如图 1），
表明在 0.011 2~0.067 2 mg/mL 范围内线性关系
良好。
2.4 精密度实验 精密吸取上述对照品溶液，连续
进样 6次，每次 20 μL，测定芦丁峰面积的相对标准
偏差（RSD）为 0.837%，表明仪器精密度良好。
2.5 重复性实验 取经“2.2.2”前处理后白子菜供
试品，按“2.2.3”供试品溶液制备操作，按“2.1”方
法学考察中确定的色谱条件，连续进样 6次，每次
20 μL，测得其峰面积的相对标准偏差（RSD）为
1.76%，符合要求。
2.6 重现性实验 取经“2.2.2”前处理后白子菜供
试品，按“2.2.3”供试品溶液制备操作，配制平行样
6份，按“2.1”方法学考察中确定的色谱条件，每次
20 μL，计算芦丁平均含量为 0.729（mg/g），相对标准
偏差（RSD）为 1.49%，符合要求。
2.7 稳定性实验 取经“2.2.2”前处理后白子菜供
试品，按“2.2.3”项下制备供试品溶液，以“2.1”方法
学考察中确定的色谱条件，分别在 0、2、4、6、8、10、
12 h测定，结果芦丁峰面积的相对标准偏差（RSD）
为 1.76%，表明供试品溶液在 12 h内稳定。
2.8 加样回收率试验 精密称取经“2.2.2”前处理
后的白子菜供试品 6份，每份 1 g，分别置 100 mL
具塞锥形瓶中，分别精密加入 3 mL芦丁对照品溶
液（浓度 0.10 mg/mL），同“2.2.3”项下制备供试品溶
液。依法测定结果，结果显示供试品的平均回收率
为 98.7%，见表 1。
2．9 样品的含量测定 分别精密吸取供试品溶液
20 μL注入高效液相色谱仪，在流动相为甲醇— 1%
冰醋酸（40∶60），柱温 30 ℃，流速 1 mL/min ,检测波
长 360 nm，每隔 2 h进样 1次，共进样 6次，取平均
值按回归方程计算芦丁的含量，结果样品中芦丁的
平均含量为 0.729（mg/g），相对标准偏差（RSD）为
编号
称样量
（g）
样品中芦丁
含量（mg）
对照品
加入量（mg）
测得量
（mg）
回收率
（%）
1 1.000 1 0.74 0.30 1.07 102.9
2 1.000 3 0.75 0.30 1.04 99.0
3 1.000 2 0.75 0.30 1.01 96.2
4 1.000 8 0.75 0.30 1.02 97.1
5 1.000 8 0.75 0.30 1.05 100.0
6 1.000 5 0.75 0.30 1.02 97.1
表 1 加样回收率实验结果（n＝6）
Tab.1 Experimental results of average recovery（n＝6）
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1.49%（n=6）。（见表 2、图 2、图 3）。
3 讨论
实验结果表明，依据本实验考察确定的检测标
准，对白子菜中芦丁的含量采用高效液相色谱法进
行测定，其结果芦丁的峰形对称，与相邻杂质峰达
到基线分离，芦丁浓度与峰面积极显著相关，回归
方程为：y赞 =11.298x+0.052 1，r=0.999 1，结果显示白
子菜中芦丁的平均含量为 0.729（mg/g）。本方法操作
简便，灵敏度和精密度较高，可用于含芦丁天然植
物及其制剂的质量控制和检测。
白子菜抗逆性强，已实现人工栽培，栽培容易，
生长周期短，产量高，实际生产中每 667 m2，年可收
获叶和嫩茎 5 000~8 000 kg。对其深入开发和研究
可提高其营养价值、使用价值和经济价值，有利于
资源的开发利用，可作为绿色天然功能食品，改善
人们的膳食结构，提高人们的健康水平。
鉴于白子菜资源丰富，深入研究白子菜提取物
的药用和临床价值，尤其是对糖尿病患者的降糖作
用机制，以及其对小肠内 α-葡萄糖苷酶活性的影
响[4]。为其开展对糖尿病的预防和治疗，建立相关的
理论基础。
未来还应进一步建立白子菜黄酮类化合物中
的槲皮素 [5]、以及多糖类成分的含量测定方法和
标准。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：中国医药科技
出版社，2010.
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12（2）：146-149.
[3] 李 辉.超声辅助提取白背三七总黄酮[J]. 食品科学，2011，32
（14）：144-146.
[4] 马正东.白背三七水提取物对 2型糖尿病大鼠的降血糖作用及
其机制[J].中草药，2010，41（4）：623-626.
[5] 冼寒梅.白子菜药材薄层色谱鉴别的实验研究[J].辽宁中医杂志，
2008，35（2）：259-260.
（收稿日期：2012-12-03）
表 2 样品的含量测定（n＝6）
Tab.2 Assaying of samples（n＝6）
编号 保留时间（min） 峰面积（微伏 *秒） 芦丁含量（mg/g）
1 17.177 110 899 0.726
2 17.251 110 084 0.717
3 17.354 114 477 0.746
4 17.230 110 481 0.720
5 17.218 113 505 0.737
6 17.134 111 343 0.728
Determination of rutin content in Gynura divaricata by HPLC
WANG Zhong-hua, CHEN Tao
（The First Affiliated Hospital of Tianjin University of TCM, Tianjin 300193, China）
Abstract: [Objective] To establish assay method about the main ingredients of rutin in Gynura divaricata with HPLC. [Methods] Pre-
treatment was performed by petroleum ether (30~60℃). Mobile phase was “methanol-1% glacial acetic acid (40∶60)”. The detection
wavelength was 360 nm . Sample volume was 40 mL 1.000g 60 % ethanol extract. Ultra extract was processed for 15 min. Chromato-
graphic column was Xterra @RP 185 um. [Results] According to the linear relationship, it was showed that linear relation of rutin mass
concentration was good in 0.011 2~0.067 2 mg/mL, r=0.999 1. All accuracy, reproducibility, stability and recovery could meet the analy-
sis demand. [Conclusion] This method is simple and accurate, and it can provide some certain references for determination of rutin con-
tent in Gynura divaricata.
Key words: Gynura divaricata; HPLC; rutin; assaying
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