全 文 ：·中药研究 Research into Traditional Chinese Medicine·
顶空气相色谱法测定漏芦总甾酮中苯及甲苯残留量
Determination the residual of Benzene andMethylbenzene in the Total Rhapontisterone by the gas chromatography with the headspace sampl ing
李肇进 Li Zhaojin1 ,张　蕴 Zhang Yun2 ,黄海英 Huang Haiy ing1
1.河南中医学院 Henan College of T raditional Chinese Medicine;
2.深圳太太药业有限公司 Shenzhen Taitai Pharmacy Industry co , L td.
摘要:目的:研究利用顶空气相色谱法测定漏芦总甾酮中苯及甲苯残留量。方法:采用顶空分析法控制漏芦总甾酮苯及甲苯
残留量。结果:回收率:苯为 95.8%, RSD为 1.5%;甲苯为 96.2%, RSD为 2.6%。结论:方法简便 、快速 、重现性好。
Abstract:objective:To de terminate the residual of Benzene and Methy lbenzene in the total Rhapontisterone by the gas chromato-
g raphy with the headspace sampling.Method:To determinate the residual of Benzene and Methylbenzene in the to tal Rhapontis-
terone by the gas chromatog raphy with the headspace sampling.Results:the rate of recovery o f Benzene w as 95.8%, RSD value w as
1.5%;the rate of recovery of Methylbenzene was 96.2%, RSD value was 2.6%.Conclusion:the method is rapid , simple w ith the
good repeatability.
关键词:顶空气相色谱法;漏芦总甾酮;苯及甲苯残留量
Key words:the gas chromatography with the headspace sampling;the total Rhapontisterone;the residual Benzene and Methylben-
zene
中图分类号 CLC number:R284.1　　文献标识码 Document code:A　　文章编号 Article ID:1672-6839(2005)05-0015-02
　　漏芦为菊科植物祁州漏芦〔Rhaponticum uniflo rum (L.)
CD〕的干燥根。主产地:辽宁省 、内蒙古自治区 、河北省[ 1] 。
收载于中华人民共和国药典 2000 年版一部 303 页漏芦项
下。主治清热解毒 , 消痈 ,下乳 ,舒筋通脉[ 2] 。从漏芦中提取
的总甾酮类成分能活血通络。可用于瘀血 、痹阻脉络所致的
中风 ,证见半身不遂 ,口舌歪斜 ,舌强言蹇或不语 , 偏身麻木 ,
头晕目眩 , 舌质暗淡 , 舌苔薄白或白腻 , 脉弦滑 , 以及现代医
学中缺血性中风恢复期见有以上证候者。工艺中使用了天
津农药股份有限公司树脂分公司产远航牌精品级 D101 型大
孔吸附树脂分离水溶性杂质 ,该树脂为苯乙烯共聚物 , 交联
剂为二乙烯苯 , 致孔剂为甲苯 , 另有多碳醇 , 烷烃类等添加
剂。树脂可能残留有以上有机物 ,另树脂工艺应用过程中涉
及到树脂的预处理 、再生 、水 、醇洗脱等工艺过程 ,均有可能
导致树脂有机残留物的洗出 ,对最终产品安全性构成影响。
为了控制原料质量 ,制订了本检查项。直接进样法由于
漏芦总甾酮有一定的水溶性 ,并且成分复杂 , 所含成分会影
响检测 , 所以采用顶空分析法控制漏芦总甾酮 、苯及甲苯残
留量 ,本法方法简便 、快速 、重现性好 , 结果满意。
1　材料与准备
1.1　材料
HP 6860 气相色谱仪;F ID检测器;苯及甲苯为分析纯。
1.2　准备
1.2.1　色谱条件　用弹性石英毛细管柱 SE-30(20 m ×
0.25 mm×0.33 μm);FID 检测器;进样口温度:200℃;检测
器温度:270℃。分流比 10∶1。程序升温:初始 50℃, 每分钟
8℃升至 105℃, 保持 10 min。理论塔板数按苯及甲苯峰计
算 ,应不低于 1000。
1.2.2　对照品溶液的制备　精密称取苯及甲苯各100 mg ,
置 100 ml 量瓶中 , 加水溶解并稀释置刻度 , 摇匀;精密量取
1 ml , 加水稀释至 100 ml。精密量取 10 ml , 置 20 ml顶空量
瓶中 ,加盖封口 , 即得。
1.2.3　供试品溶液的制备　取本品约 1.0 g , 精密称定 , 置
20 ml顶空量瓶中 , 精密加水 10 ml ,加盖封口 , 振摇 , 作为供
试品溶液。
1.2.4　测定法　将对照品溶液和供试品溶液置 70℃水浴
中 ,放置 20 min , 分别精密量取 0.5 ml顶空气体注入气相色
谱仪 ,测定 , 计算 ,即得。
1.2.5　气液平衡条件的选择　70℃水浴平衡 20 min 可以得
到很好的结果 , 所以选择 20 ml 顶空瓶 , 70℃水浴平衡
20 min。
2　方法与结果
2.1　线形关系考察
精密称取苯 、甲苯 100 mg , 置 100 ml量瓶中 ,加水溶解
并稀释至刻度 , 摇匀。精密吸取该溶液 0.1 , 1.0 , 2.0 , 4.0 ,
8.0 , 10.0 ml置 100 ml量瓶中 , 加水稀释至刻度 , 摇匀 ,各取
10.0 ml 置 20 ml 顶空瓶中 , 70℃水浴平衡 20 min , 各取
0.5 ml顶空气体注入气相色谱仪 ,以甲醇及氯仿峰面积对浓
度作图 ,得甲醇及氯仿标准曲线 , 结果见表 1 、2。
·15·
2005 年 9 月第 5 期
No.5　Sep.　2005　　　　　　　　　　
河 南 中 医 学 院 学 报
JOURNAL OF HENAN UNIVERSITY OF CHINESE MEDICINE
　　　　　　　　　　第 20 卷 总第 120 期
Vol.20 Serial No.120
DOI :10.16368/j.issn.1674-8999.2005.05.007
表 1　苯线性关系实验结果
浓度(ppm) 1 10 20 40 80 100
峰面积 152346 1539359 3082654 6078197 12451582 16751712
Y=-204656+164477X　r=0.9985
　　从结果可看出 ,在 1 ppm ～ 100 ppm 浓度范围内 , 苯与峰
面积有良好线性关系 , 由于曲线外推基本过原点 , 所以用外
标一点法测定含量。
表 2　甲苯线性关系实验结果
浓度(ppm) 1 10 20 40 80 100
峰面积 122689 1213132 2416379 4868079 9702207 12732377
Y=-82043+125686X　r=0.9994
　　从结果可看出 ,在 1 ppm ～ 100 ppm 浓度范围内 , 甲苯与
峰面积有良好线性关系 , 由于曲线外推基本过原点 , 所以用
外标一点法测定含量。
2.2　精密度试验结果
取同一浓度的对照品溶液 ,按上文所述方法进样 ,连续 5
次。结果见表 3、4。
表 3　苯精密度实验结果
次数 1 2 3 4 5 6
峰面积 1614240 1567432 1687553 1692209 1551330 1560885
RSD=3.96%
表 4　甲苯精密度实验结果
次数 1 2 3 4 5 6
峰面积 1287210 1173782 1242946 1220652 1219912 1213104
RSD=3.05%
2.3　重现性试验
精密称取 030301 批漏芦总甾酮约 1 g , 共 5 份 , 按上文
所述方法制备样品 ,进样 , 连续 5 次。结果见表 5、6。
表 5　苯重现性实验结果
次数 1 2 3 4 5 6
残留量(ppm) 0 0 0 0 0 0
平均 0 ppm　RSD=0%
表 6　甲苯重现性实验结果
次数 1 2 3 4 5 6
残留量(ppm) 0.115 0.116 0.116 0.116 0.116 0.115
平均 0.1 16 ppm　RSD=0.45%
2.4　回收率试验
由于漏芦总甾酮不含苯 , 甲苯含量非常少 , 已经低于标
准曲线检测浓度下限 , 所以不能用加样法进行回收率研究 ,
只能在原料中加入对照品 , 研究原料是否吸附对照品 , 研究
结果证明用本法测定苯 、甲苯含量 , 原料不会吸附对照品 , 从
而证明本法稳定可行。取 030301 批漏芦总甾酮原料再经真
空干燥后使原料含苯及甲苯用本法检测不到 ,精密称取 5 份
030301 批漏芦总甾酮约 6 g(苯残留量0 ppm , 甲苯残留量 0
ppm),加入 1 ppm 的甲醇 、氯仿对照液 10 ml ,加盖封口 , 振摇
使溶解 ,按正文所述方法制备样品 , 进样。结果见表 7 、8。
2.5　样品测定
按上文所述方法制备样品 , 进样 , 测定了 6 批漏芦总甾
酮中苯 、甲苯残留量 , 结果见表 9。
表 7　苯回收率结果
次数 1 2 3 4 5
样品称样量(g) 6.0025 6.0034 6.0055 6.0077 6.0010
样品残留量(ppm) 0 0 0 0 0
标准液加入量(ml) 10 10 10 10 10
标准液浓度(ppm) 1 1 1 1 1
测出浓度(ppm) 0.967 0.954 0.977 0.94 0.951
回收率(%) 96.7 95.4 97.7 94.0 95.1
平均回收率(%) 95.8
RSD=1.5%
表 8　甲苯回收率结果
次数 1 2 3 4 5
样品称样量(g) 6.0033 6.0054 6.0012 6.0038 6.0023
样品残留量(ppm) 0 0 0 0 0
标准液加入量(ml) 10 10 10 10 10
标准液浓度(ppm) 1 1 1 1 1
测出浓度(ppm) 0.979 0.994 0.932 0.965 0.943
回收率(%) 97.9 99.4 93.2 96.5 94.3
平均回收率(%) 96.26
RSD=2.64%
表 9　六批样品苯 、甲苯残留量测定结果
批号 030301 03030 2 030303 030304 030305 030306
苯残留量(ppm) 0 0 0 0 0 0
甲苯残留量(ppm) 0.114 0.114 0.116 0.113 0.111 0.113
3　讨论
参照国外人用药品残留溶剂的限度要求(ICH , 人用药品
注册国际协调会), 苯属第一类限制溶剂 , 浓度限度应小于 2
ppm;甲苯属第二类限制溶剂 , 浓度限度应小于 890 ppm , 其
他有机残留物则属于第三类或低毒溶剂 , 均未列入受限制范
围 ,与中国药典 2000 年版规定相符 , 所测定的六份样品均符
合规定。
由于漏芦总甾酮成分复杂 , 而且有一定的水溶性 , 直接
进样法漏芦总甾酮所含成分会影响检测 , 顶空分析法能防止
漏芦总甾酮中高沸点组分污染色谱柱 , 提高了灵敏度 , 所以
采用顶空分析法 ,结果证明方法简单可行。
手动进样要求操作者较熟练 ,平衡时间及进样体积保证
一致才能得到满意结果 ,若用自动进样器结果会更好。
参考文献:
[ 1] 江苏新医学院.中药大辞典[ M ] .上海:上海科学技术出版社 ,
1985.2576-2579.
[ 2]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典·一部[ M ] .北
京:化学工业出版社 , 2000.303.
编辑:程延安
收稿日期:2005-05-26
作者简介:李肇进(1964-), 男 ,河南郑州人 , 理学学士 ,制药
工程师 , 从事制药工程研究工作。// Add:450008 河南省郑
州市金水路 1 号
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2005 年 9 月第 5 期
No.5　Sep.　2005　　　　
河 南 中 医 学 院 学 报JOURNAL OF HENAN UNIVERSIT Y OF CHINESEMEDIC INE
顶空气相…Determinat ion the…　李肇进…Li Zhaojin… 　　　　
第 20 卷 总第 120 期
Vol.20 Serial No.120