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·中药及天然药物·
顶空气相色谱法测定杏香兔耳风提取物中大孔吸附树脂残留物
喻 佳1,毛晓宇2,于清峰1,汪 豪3*,杜迎翔1*(1.中国药科大学分析化学教研室,南京 210009;2.南京正科制药有限公
司,南京 210038;3.中国药科大学天然药物化学教研室,南京 210009)
摘要:目的 建立测定杏香兔耳风提取物中大孔吸附树脂残留物的测定方法。方法 采用顶空气相色谱法,色谱柱为Supelco-
Wax毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm),体积分数50% N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶解介质,FID检测器;进样口温度
210℃,检测器温度230℃,高纯氮为载气;柱温为程序升温:初始温度70℃,保持8min,以10℃·min-1的速率升温至220℃,
保持7min。结果 该法线性关系良好,r在0.996 5~0.999 9之间,RSD在0.54%~9.31%之间。结论 该方法操作简便快
速,准确度高,可作为杏香兔耳风提取物中大孔吸附树脂残留物的测定方法。
关键词:杏香兔耳风提取物;顶空气相色谱法;大孔吸附树脂;残留物
doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2012.04.001
中图分类号:R927 文献标志码:A 文章编号:1004-2407(2012)04-0289-03
Determination of macroporous resin residues in Ainsliaea fragrans extract by
headspace GC
YU Jia1,MAO Xiaoyu2,YU Qingfeng1,WANG Hao3*,DU Yingxiang1*(1.Department of Analytical Chemistry,China Pharma-
ceutical University,Nanjing 210009,China;2.Nanjing Zenkom Pharmaceutical Co.Ltd.,Nanjing 210038,China;3.Department of
Natural Medicinal Chemistry,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009,China)
Abstract:Objective To establish a method for detecting the residues of macroporous resin in Ainsliaea fragrans extract.Methods
Headspace GC with Supelco-Wax column(30m×0.25mm×0.25μm)was used to determine residues in Ainsliaea fragrans ex-
tract.The solvent medium was 50% N,N-dimethylformamide(DMF)and the detector was FID;The injector temperature was 210
℃,the detector temperature was 230℃,and carrier gas was high-purity nitrogen.The column temperature was changed according
to the program:initial temperature was kept at 70℃for 8min,then raised to 220℃at the rate of 10℃·min-1,and maintained
for 7min.Results There was a good linearity in the experimental concentration range(r=0.996 5-0.999 9),and relative standard
derivations(RSD)of precision were in the range of 0.54%-9.31%.Conclusion The method is simple,quick and accurate.It can be
used for the determination of macro-porous resin residues in Ainsliaea fragrans extract.
Key words:Ainsliaea fragrans extract;headspace GC;macroporous resin;residues
基金项目:科技部十一五重大新药创制(编号:2009ZX09103-315)
作者简介:喻佳,男,硕士研究生
*通信作者:汪豪:男,副教授;杜迎翔:男,教授
杏香兔耳风(Ainsliaea fragrans Champ.)为菊
科兔耳风属植物,药用部位为全草。本品具有清热解
毒、凉血解毒、利湿、止血等功效,适用于治疗虚劳骨
蒸、肺痨咳血、妇女崩漏、湿热黄疸、水肿、痈疽肿毒等
病症,民间验方及临床上用杏香兔耳风治疗宫颈糜
烂、子宫内膜炎、热疖、鹅口疮等[1]。本品的主要活性
成分为倍半萜及咖啡酰基奎尼酸类化合物,杏香兔耳
风提取物在制备过程中使用了 HPD-100型大孔吸附
树脂柱层析进行分离纯化。大孔吸附树脂的使用可
能引入正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲
苯、苯乙烯及二乙烯苯等残留物,国家食品药品监督
管理局规定对采用大孔吸附树脂柱层析工艺的中药提
取物中可能带来的有机溶剂残留物进行限量检测,其
中苯的限量为0.000 2%,其余一般应控制在0.002%
以下[2]。笔者参考有关文献[3-4],采用顶空进样气相
色谱法,同时对杏香兔耳风提取物中8种大孔吸附树
脂残留物进行了测定,该法操作简便快速,结果准确
可靠,重复性好,可用于杏香兔耳风提取物中有机溶
剂残留物的限量检测。
1 仪器与试药
1.1 仪器 岛津GC-14B气相色谱仪,FID检测器,
北京中兴DK-3001A型顶空进样器;Supelco-Wax毛
细管柱(30m×0.25mm×0.25μm);BS 124S电子
分析天平(0.1mg)。
1.2 试药 正己烷、苯、甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、
间二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯、N,N-二甲基甲酰胺
(DMF)均为分析纯;HPD-100型大孔吸附树脂为沧
州宝恩化工有限公司生产;杏香兔耳风提取物由中国
药科大学天然药物化学教研室自制。
2 方法与结果
2.1 气相色谱条件 检测器温度230℃,气化室温
度210℃,柱温:程序升温,初始温度70℃,保持8
min,以10℃·min-1的速率升温至220℃,保持7
min,载气为高纯氮,压力:100kPa,氢气、空气压力均
为50kPa,顶空进样瓶的平衡温度90℃,定量环温
度95℃,传输管温度100℃,平衡时间30min,进样
量1mL。
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2.2 对照品溶液的制备 精密吸取正己烷、苯、甲
苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯
对照品各适量,置于同一50mL量瓶中,加DMF定
容至刻度,摇匀,得混合对照品储备液。取上述混合
对照品储备液5mL置50mL量瓶中,加体积分数
50% DMF制成含正己烷、甲苯、对二甲苯、间二甲
苯、邻二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯各20.0μg·mL
-1和
含苯2.0μg·mL
-1的混合对照品溶液,精密吸取上
述混合溶液2.0mL,置已加1g杏香兔耳风提取物
的20mL顶空瓶中,加盖密封,作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 精密称取1g杏香兔耳风
提取物,置20mL顶空瓶中,精密吸取体积分数50%
DMF溶液2.0mL,加盖密封。
2.4 专属性实验 正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、间二
甲苯、邻二甲苯、苯乙烯及二乙烯苯的测定,样品中杂
质峰不干扰各待测溶剂,说明本法专属性强。结果见
图1。
图1 GC图
A.对照品溶液;B.供试品溶液;C.空白溶剂;
1.正己烷;2.苯;3.甲苯;4.间二甲苯;5.对二甲苯;6.邻二甲
苯;7.苯乙烯;8.二乙烯苯
Fig.1GC chromatograms
A.standard solution;B.sample solution;C.blank solution;
1.hexane;2.benzene;3.toluene;4.m-xylene;5.p-xylene;
6.o-xylene;7.styrene;8.divinylbenzene
2.5 线性关系考察 精密量取对照品储备液各适量,
加体积分数50% DMF稀释成2.5~30.0μg·mL
-1
混合对照品溶液。分别精密量取以上混合对照品溶
液各2mL于含1g杏香兔耳风提取物的20mL顶
空瓶中,加盖密封,照2.1项下方法进行测定,记录色
谱图,以质量浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,进行
线性回归,结果见表1。
2.6 检测限 按照信噪比S/N=3,本方法溶液中
正己烷、苯、甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、苯
乙烯、二乙烯苯的最小检测质量浓度为0.25,0.05,
0.10,0.10,0.10,0.10和0.20μg·mL
-1。
表1 线性范围和回归方程
Tab.1Linear range and regression equation
组分 回归方程 r 线性范围/μg·mL
-1
正己烷 Y=956.53 X-5 134.4 0.996 5 2.5~30.0
苯 Y=516.07 X+135.53 0.998 9 0.25~3.00
甲苯 Y=485.79 X+133.73 0.999 7 2.5~30.0
邻二甲苯 Y=337.18 X+113.75 0.999 8 2.5~30.0
间二甲苯 Y=433.91 X+146.29 0.999 8 2.5~30.0
对二甲苯 Y=429.35 X+158.44 0.999 7 2.5~30.0
苯乙烯 Y=236.58 X+131.85 0.999 8 2.5~30.0
二乙烯苯 Y=221.24 X+754.23 0.999 9 2.5~30.0
2.7 精密度实验 精密称取杏香兔耳风提取物6份
各1.0g,置于6个顶空瓶中,加对照品溶液2mL,照
2.1项下方法测定,正己烷、苯、甲苯、邻二甲苯、间二甲
苯、对二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯的RSD分别为9.31%,
0.54%,3.86%,4.52%,4.11%,4.20%,3.45%和
1.38%。
2.8 回收率实验 精密称取杏香兔耳风提取物9份
各1.0g,置于9个顶空瓶中,精密加入已知量对照品
溶液2mL,每个质量浓度3份,照2.1项下方法进行
测定,结果见表2。
表2 回收率测定结果
Tab.2Results of recovery rate
组分 加入量/μg
测出量
/μg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
正己烷 5.0 4.81 96.2 97.6 1.8
20.0 19.40 97.0
60.0 59.76 99.6
苯 0.5 0.47 94.0 94.1 4.9
2.0 1.79 89.5
6.0 5.92 98.7
甲苯 5.0 4.61 92.2 93.8 2.8
20.0 18.48 92.4
60.0 58.15 96.9
邻二甲苯 5.0 4.52 90.4 91.0 1.7
20.0 17.95 89.8
60.0 55.64 92.7
间二甲苯 5.0 4.69 93.8 91.3 2.4
20.0 18.11 90.6
60.0 53.78 89.6
对二甲苯 5.0 4.79 95.8 93.1 2.6
20.0 18.39 92.0
60.0 54.86 91.4
苯乙烯 5.0 4.33 86.6 88.3 4.0
20.0 17.17 85.9
60.0 55.42 92.4
二乙烯苯 5.0 4.63 92.6 92.9 1.9
20.0 18.25 91.3
60.0 56.90 94.8
2.9 样品的测定 精密称取杏香兔耳风提取物各
1.0g,分别置于顶空瓶中,加体积分数50% DMF溶
液2.0mL,充分混匀,照2.1项下方法进行测定,3
批供试品中均未检出正己烷、苯、邻二甲苯、间二甲
苯、对二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯等有机溶剂残留,结
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果见图1。
2.10 大孔吸附树脂处理前后残留量比较 取工业
级与药用级HPD-100型大孔吸附树脂各约1.0g,精
密称定,加体积分数50%DMF溶液2.0mL,充分混
匀,照2.1项下方法进行测定,结果见图2。
图2 大孔吸附树脂气相色谱图
A.工业级;B药用级
1.正己烷;2.苯;3.甲苯;4.苯乙烯;5.二乙烯苯
Fig.2GC chromatograms of solution
A.untreated macroporous resin;B.treated macroporous resin
1.hexane;2.benzene;3.toluene;4.styrene;5.divinylbenzene
药用级大孔吸附树脂与工业级产品比较,有机溶
剂残留量已得到有效地去除。
3 讨论
3.1 平衡温度及时间的选择 根据样品的稳定性,
选择在85,90和95℃条件下不同时间20,30和40
min进行平衡,以峰面积为考察指标,最终确定90℃、
30min为平衡最佳条件。
3.2 溶剂的选择 不同溶剂对待测提取物和对照品
溶解能力不同,而待测成分对照品溶解度小,易挥发,
制备的标准曲线线性关系差,本实验经过对不同溶剂
的比较,确定50% DMF水溶液作为溶剂,不仅对样
品有较好的溶解性,且标准曲线线性较好。
3.3 标准加入法与外标法方法的选择 实验起初采
用外标法,发现样品中各有机溶剂的回收率较低(<
85%),可能受样品基质效应的影响较大。为了排除
样品基质效应的影响,本实验采用标准加入法。结果
证明该方法线性、精密度、回收率均良好。
参考文献:
[1] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海人民出版
社,1977.
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化学工业出版社,2005:附录ⅧP.
[3] 杨建刚,胡碧荣,张琳,等.银杏胶囊中大孔吸附树脂有
机残留物限量的方法学研究[J].西北药学杂志,2009,
24(2):96-97.
[4] 何连军,邵胜荣,雷凯琴,等.顶空气相色谱法测定银杏
叶提取物中有机溶剂残留量[J].药物分析杂志,2005,
25(9):1099-1101.
(收稿日期:2012-02-17)
酶法提取白英中总生物碱的工艺研究
陈晓琳1,2,张岩柏3,邓振雪1,李永吉2,孙立新1*(1.沈阳药科大学药学院,沈阳 110016;2.黑龙江中医药大学药学院,
哈尔滨 150040;3.中国人民武装警察部队沈阳指挥学院,沈阳 110113)
摘要:目的 研究纤维素酶在提取白英总生物碱中的应用。方法 白英药材经纤维素酶处理后用乙醇回流提取总生物碱,通过正交
实验优化酶处理工艺参数。结果 酶解反应的最佳工艺条件为:温度50℃,酶反应时间3h,pH 4.5,酶质量浓度为1.6mg·mL-1,
且酶法提取率为传统提取法的5倍。结论 纤维素酶水解法适用于白英总生物碱的辅助提取。
关键词:白英;总生物碱;纤维素酶;正交实验
doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2012.04.002
中图分类号:R284 文献标志码:A 文章编号:1004-2407(2012)04-0291-03
Extraction of total alkaloids fromSolanum lyratumby celulase degradation
CHEN Xiaolin1,2,ZHANG Yanbai 3,DENG Zhenxue1,LI Yongji 2,SUN Lixin1*(1.School of Pharmacology,Shenyang Pharmaco-
logical University,Shenyang 110016,China;2.School of Pharmacology,Heilongjiang Traditional Chinese Medicine University,Ha-
erbin 150040,China;3.Shenyang Command Colege of the Chinese People′s Armed Police Force,Shenyang 110016,China)
Abstract:Objective To study the extraction of total alkaloids fromSolanum lyratumby celulase degradation.Methods Solanum
lyratum was treated by celulase before refluxed with absolute ethyl alcohol,and the parameters of celulase enzymatic hydrolysis
was optimized by an orthogonal experiment.Results The optimum celulase enzymatic hydrolysis conditions were as folows:enzy-
matic treatment temperature was 50℃,reaction time was 3h,pH of the buffer solution was 4.5and celulase mass concentration
was 1.6mg·mL-1.Compared with the traditional extracting method,the extraction yield of total alkaloids increased to 5folds by
using the celulase enzymatic hydrolysis method.Conclusion Celulase enzymatic hydrolysis could be applied as an assistant for the
extraction of total alkaloids fromSolanum lyratum.
Key words:Solanum lyratum;total alkaloids;celulase;orthogonal experiment
基金项目:辽宁省科技厅资助项目(2007226011);沈阳市科技局
资助项目(1071164-9-00)
作者简介:陈晓琳,女,硕士研究生
*通信作者:孙立新,女,教授,硕士生导师
192西北药学杂志 2012年7月 第27卷 第4期