全 文 ：第 2 4卷
9 2 00年
第 1
2月 南 开 大 学 学 报
(自然科学版 )
Ae t aS c ie n t iar u m N
atur al i
u mU n iv e s r it at is Nn ak a ie n s is
V o l
.
42冲 l
Fe b
.
2 009
文章编号 :65 0 4一 9 7 42 (2 009 ) 01一 01 01一 06
大 T草 (G e r be rn n a a a dr ia(L .)S cB i hp .)对腺嚷吟诱导的
慢性肾功能衰竭大鼠 TG F一 p l和 E T一 1 mR A N表达的影响
苗绪红, ,2 , 苏冠男` , 饶冠华` , 王 峰` , 张 军` , 宋文芹`
( 1
. 南开大学 生命科学学院 , 天津 3 000 71 ; 2 . 天津医科大学 基础医学院 , 天津 30 0 0 70
摘要 : 采用 W is at r 大鼠灌胃腺嗦吟 4 周复制慢性肾衰模型后用大丁草水煎液进行灌胃治疗 , 4周后检测各
组 肾功能 、 肾脏组织病理学改变及转化生长因子一脚 (GT F 一邵 )和内皮素一 1 (E T 一 1 )m R N A 的表达结果发现大丁
草组大鼠血肌醉和尿素氮浓度分别为 ( 89 . 3 士 15 . 2 1 ) 拜m ol /L 和 ( 21 . 52 士 3 . 9 5) m m ol / L 与治疗前的建模组
( 290
.
33士 7 4 . 5 5 ) 拌m o l /L 和 ( 32 . 30士 2 . 35 ) m m o l / L 以及病理对照组 ( 1 49 . 67士 2 4 . 9 5 ) 产m o l / L 和 ( 33 . 18士
2
.
95 ) m m ol L/ 比较有所下降 , 经统计 尸 < 0 . 05 ,差异具有显著性与病理对照组相比大丁草组大鼠基因 T G F 一那
和 E T 一 1表达也明显降低 ,与看家基因 G A尸D H 的比值分别由 (0 . 2 02 6士 0 . 05 0 3) 和 (0 . 194 9士 0 . 09 6 9) 下降为
(0
·
128 5士。 . 0 4 4 7 )和 (0 . 07 8 10 士 0 . 02 2 9 ) , 经统计 尸 < 0 . 05 ,差异具有显著性 . 由此认为大丁草对腺嗦吟所致
慢性肾功能衰竭大鼠肾脏有保护作用 ,其机制可能是通过抑制 7 ,G F 一月1 和 E T 一 1 的表达来缓解肾脏损伤 ,恢复
l肾功能 .
关扭词 : 大丁草 ; 慢性肾衰 ; 转化生长因子一印 ; 内皮素一 1
中图分类号 : Q 34 3 文献标识码 : A
O 引 言
慢性 、 进行性肾损害造成的肾脏结构和功能改变 , 导致了慢性肾功能衰竭 ( hc or in c er an l fa i l盯 e ,
C R F )综合征 . 患者进人慢性肾功能衰竭终末期 (尿毒症 )阶段后 , 全身各系统都会受损 , 出现心力衰竭 、 精
神异常 、 昏迷等症状 , 危及生命 . 由于恶化的肾功能难以逆转 , 患者往往最后需要依靠透析或者肾脏移植来
维持生命 ,但昂贵的费用常给病人及社会带来沉重的经济负担 . 在早期抑制原发病对肾脏的进一步损伤 ,
尽可能挽救残余肾脏功能 ,延缓肾衰竭的发生 ,是目前临床医学关注的焦点之一 大丁草为菊科大丁草属
植物 , 以全草人药 ,洗净 , 鲜用或晒干备用 ,具有清热利湿 ,解毒消肿等作用 lj[ ,在我国民间常用大丁草治疗
慢性肾功能衰竭 . 本实验观察了大丁草对腺嗦吟所致慢性肾功能衰竭大鼠转化生长因子 一p1( T G F 一邵 )和
内皮素一 1 ( E T 一 1) 基因表达的影响 , 现报道如下 .
1 实验材料
L l 实验动物
雄性 W is at : 大鼠 40 只 , 清洁级 ,体重 ( 2 0 0士 10) 9 , 由中国医学科学实验动物研究所提供 . 尿蛋白试
纸检测阴性 .
1
.
2 实验药品
1
.
2
.
1 腺嗦吟 : ( A d e n i n e , C SH SN S , M W : 1 3 5 . 1 4 ) 购于生工生物工程 (上海 )有限公司 , B B I进 口分装 ,批
号 : C F 0 81 7B 157 Y . 用前加消毒牛奶配成 30 m g /m L 的混悬液 ,混匀灌胃 , 建模 4 周 .
1
.
2
.
2 大丁草水煎液 : 大丁草全草采自天津市蓟县山区 , 由南开大学生命科学院陈瑞阳教授鉴定 . 全草
收稿日期 : 2 0 0 8一 0 6 一 1 5藻薯薯异:喜露夏息攀黔臀留黔珊哭湍燕 ,博士研究生 .
10 2南 开 大 学 学 报 (自然科学版 )第 4 2卷
洗净 ,晾干 ,每 10 9 干大丁草用 1 0 0 m L 蒸馏水浸泡 30 m in , 先用武火煎沸后再用文火煎 20 m in ,倒出
上清 ,加水 ,再煎一次 . 两次的药液一起过滤 , 滤液在 72 ℃水浴中蒸馏 ,最后过滤成 25 m L 的棕色澄清溶
液 , 4 ℃保存备用 .
1
.
2
.
3 试剂 : 总 RN A 提取试剂 T R I z o l R e a g e n t ( B B I 公司 ,加拿大 ) ; e D N A 合成试剂盒 ( P r o m e g a 公
司 , 美国 ) ; D N a s e l (R N a s e 一 f r e e ) 、 T a q 聚合酶 ( T a k a r a 公司 , 日本 ) ; G A P D H 、 T G F 一月1 、 E T 一 1 引物 性工
生物工程公司 ,上海 ) .
2 实验方法
2
.
1 C R F 大限模型建立
4 0 只雄性 W is at r 大鼠用普通饲料饲养 1 周后 ,随机分为 2 组 : 正常对照组 6 只 ,灌胃 2 m L 消毒牛奶
d/ /只 ;建模组 34 只 , 灌胃 2 m L 腺嚓岭混悬液d/ /只 , 因考虑到建模过程中会有大鼠死亡 ,所以该组数量
多 ,大鼠按照每日 30 m g k/ g 体重灌胃腺嚓吟 . 大鼠自由摄取普通饲料 、饮水 ,建模 4 周 . 在建模过程中 ,
建模组 34 只大鼠中死亡 7 只 .
2
.
2 中药淮服
第 5 周开始把建模成功的 27 只大鼠随机分成病理对照组 、 大丁草组和尿毒清组 , 每组 9 只 . 大丁草
组 : 2 m L 大丁草水煎液d/ /只 ;尿毒清组 : 2 m L 尿毒清颗粒水溶液 /d/ 只 ,每 m L 含尿毒清颖粒 0 . 42 9 ;正
常对照组和病理对照组大鼠每天灌胃 2 m L 蒸馏水 , 给药 4 周 . 在此期间病理对照组 、大丁草组和尿毒清
组各有 3 只大鼠死亡 .
2
.
3 生化指标检测
末次给腺嗓吟后 24 h (禁食 12 h ) ,大鼠眼内毗静脉丛取血 , 3 O0 r /m in , 20 m in 离心分离血清进行生
化指标血肌醉 、 尿素氮和尿酸的检测 ,采用日立 7 0 2。 型 自动生化分析仪测定 .
大丁草水煎液灌胃 4 周后 24 h (禁食 1 2 h) ,取血 、离心和指标测定同上 .
2
.
4 肾脏病理学检查
大丁草水煎液灌胃 4周后 24 h( 禁食 12 h) , 用 10 %水合氯醛 1 m L 腹腔注射麻醉大鼠 , 剖腹取左侧肾
脏 , 用 10 % 甲醛固定 ,进行肾脏病理学检查 . 所有标本按常规方法固定 、 脱水 、包埋 ,切片厚 4 拌m , H E 染
色 .
2
.
5 R T
一
P C R
2
.
5
.
1 肾脏总 R N A 提取 : 大丁草水煎液灌胃 4 周后 24 h ,腹腔注射 1 m L 10 %的水合抓醛麻醉大鼠 ,剖
腹取出右侧肾脏 , 剪碎肾皮质 , 取 50 m g 于液氮中迅速研磨 , 将粉末置 于已加人 l m L 预冷 T ir oz l 的
1
.
5 m L E p eP
n d or f 管中 ,经氯仿抽提 , 异丙醇沉淀 , 75 %乙醇洗涤 ,空气干燥后 ,加 50 拌L D E P C 水溶解 ,
电泳检测 R N A 的完整性 , N a n o D r o p 检测浓度及纯度 .
2
·
5
·
2 除去 R N A 中的 D N A : 配制如下反应体系 : 全 R N A 2 0 ~ 5 0 拌g , 1 0 x D N a s e l b u f f e r s 拌L ,
D N a s e I Z 拌L , R N a s e I n h ib i t o r ( 4 o U扭 L ) 0 . 5 拌L ,加人 D E P C 水至总体积为 5 0 拜L , 3 7 ℃水浴 3 0 m i n ,然
后加入 D E P C 水 50 拜L ,用苯酚 :氯仿的 1 : 1 混合液进行抽提后用 2 . 5 倍体积的冷无水乙醇和 1 / 1 0体积
的 N a A 。 沉淀 3 0 m i n 以上 , 12 o o o r /m i n 离心 1 5 m i n ,倒掉上清液 ,用 7 5%乙醇洗涤沉淀 2 次后加 5 0 拌L
D E P C 水溶解 .
2
.
5
.
3 反转录 : 取 s 拜 L 去除 D N A 的总 R N A ,加人 1 拜L 0 119 0 d T ( 0 . 5 拜g扭L ) ,快速离心 , 7 0 ℃水浴 5
m i n
,迅速置于冰上 3 m i n ,依次加人 MM L V 5 x b u f f e r Z 拼L , d N T P ( 1 0 m m o l / L ) 0 . 5 拌L , R N a s e In h ib i t o r
0
.
5 拼L , M M L V 反转录酶 1 拌L ,离心 , 4 2 oC 水浴 l h , 取出后立即放入 7 2 ℃水浴 , 10 m i n ,然后放人一 2 0
℃保存 、 备用 .
2
.
5
.
4 半定量 P C R : 根据文献设计 7石 F 一八川 、 E T 一 ls[ 」和 G A尸D H 闭引物 , 引物序列及扩增产物片段长
度见表 1 .
第 1期 苗绪红等 :大丁草G ( e动 e a r朋 n a d、 ( L . )Sc hiB p . )对腺嗦吟诱导的慢性肾功能衰蝎大鼠G T F一队和 T E一 1 m R NA表达的影响 , 1 0 3 .
表 l 基因 T G F 一月l 、百r 一 l 、 G注尸D H 引物序列及扩增产物片段长度
T a b l e 1 p r im e r s e q u e n e e s a n d s i z e 6f g e n e r a t e d r r a g m e n ts o r g e n e r G F
一月l 、 E r 一 1 a n d ` A尸D衬
基因 上游序列 下游序列 长度 / bP
了, G F 一月1 5 ` 一G CC T CC G C A T C CC A C C T T T G 一 3 , 5` 一 G C G G G T G A C T T C T T T G G G G T 一 3 ` 3 96
E T
一
1 5`
一
C G T T G C T C C T G CT C CT T G A T G G
一
3
`
5
`一
A A G A T C CC A G CC A G C A T G G A G A G C
一
3
`
5 46
G A P D H S
` 一G A G G A CC A G G T T G T C T C C T G
一
3
,
5`
一
G G A T G G A A T T G T G A G G G A G A
一
3
`
3 00
配制如下 P C R 反应体系 : e D N A 模板为 5一 5 0 n g , 上游引物 1 0~ 2 0 p m o l , 下游引物 1 0~ 2 0 pm o l ,
l o X T a q缓冲液 2 拌L , dN T P s ( 1 0 m m o l / L ) 0 . 5 拌L , T a q 聚合酶 l一 1 . S U ,补充灭菌双蒸水至 2 0 “ L ,充分
混匀后短暂离心 . 扩增条件为 : 95 ℃ , 3 0 5 , 变性 ; 58 ℃ , 45 5 ,退火 ; 72 C , 30 5 , 延伸 ;末次循环后延伸 5
m in
.
G A尸D H 扩增 30 个循环 J , G F 一那 扩增 34 个循环 , E T 一 1 扩增 34 个循环 . 扩增产物经 2%琼脂糖凝
胶电泳检测 , 用 iB o g e en 紫外凝胶成像系统对电泳条带进行光密度分析 .
2
.
6 统计方法
实验数据以均数 士标准差 (灭士 , )表示 , 多组间比较采用方差分析 , 两组间比较采用 t 检验 , 应用
S P S 13
.
0 统计软件分析 . 尸< 0 . 05 表示差异具有显著性意义 .
3 实验结果
3
.
1 大鼠形态观察
正常对照组大鼠饮食如常 ,反应灵敏 ,体毛顺滑有光泽 , 大小便正常 . 随着腺嗓吟溶液灌 胃天数的增
加 , 建模组大鼠摄食量减少 ,饮水量增加 ,最高饮水量达正常对照组的 2~ 3 倍 , 同时体重下降 ,尿量明显增
多 , 体毛干枯 、 无光泽 ,精神萎靡 ,活动减少 、蜷缩弓背 、 外阴周围湿毛 . 有的大鼠出现肌肉震颤 、 抽搐 ,衰竭
而死亡 ,在建模过程中陆续有 7 只死亡 ,得到 27 只模型鼠 . 治疗期间 , 大丁草组和尿毒清组大鼠在灌胃大
丁草水煎液和尿毒清颗粒水溶液后逐渐恢复 ,摄食量增加 ,体重逐渐升高 ,活动增加 ,体毛逐渐恢复光泽 ,
弓背逐渐伸直 . 病理对照组大鼠状况也有所恢复 ,但没有大丁草组和尿毒清组大鼠明显 . 病理对照组 、大丁
草组和尿毒清组在治疗过程中各有 3 只大鼠死亡 .
3
.
2 大鼠肾脏形态观察
正常对照组大鼠肾脏大小正常 ,外观无肿胀 ,色红有光泽 ,被膜光滑 . 病理对照组大鼠肾脏肿胀 , 体积
增大 , 灰白色 , 表面颗粒状 , 缺乏光泽 , 呈 “ 大白肾” 状 ,包膜薄易剥脱 ,皮髓质界限不清 . 大丁草组大鼠肾脏
肿胀 ,体积较病理对照组为小 ,表面颗粒减少 ,大部分肾脏出现红色 ,皮髓质界限清晰 , 被膜结合紧 ,不易剥
脱 . 尿毒清组大鼠肾脏肿胀 ,表面深红色和灰白色点相间 ,不光滑 , 缺乏光泽 ,皮髓质界限大体清晰 . 大丁草
组和尿毒清组大鼠与病理对照组大鼠相比 ,慢性肾衰症状有所恢复 .
3
.
3 生化指标检测结果
正常对照组尿素氮为 ( 7 . 7 3士 1 . 2 7 ) m m o l / L ,血肌醉为 ( 2 9 . 3 3士 6 . 4 5 ) 拜m o l / L , 尿酸为 ( 34 . 5 0士 7、 6 6 )
拜m o l/ L ;建模组分别为 ( 3 2 . 3 0士 2 . 3 5 ) m m o l / L , ( 2 90 . 3 3士 7 4 . 5 5 ) 拌m o l / L 和 ( 85 . 8 1士 2 7 . 14 ) 拌m o l/ L , 均
高于正常对照组 ,经统计 尸< 0 . 01 , 差异具有显著性 ,说明慢性肾衰大鼠建模成功. 治疗后 ,大丁草组和尿毒清
组的血肌配 、 尿素氮和尿酸浓度与建模组相比显著下降 , 尸< 0 . 01 ,具有统计学意义 ;大丁草组和尿毒清组的血
肌配 、 尿素氮浓度比病理对照组降低 ,尸 < 0 . 0 1 ,差异具有显著性 ;大丁草组和尿毒清组之间 ,尸> 0 . 05 , 在统计
学上没有差异 (表 2 ) , 可见灌胃大丁草水煎液有一定的治疗效果 ,且与尿毒清的效果相近 .
表 2 治疗后各组生化指标测定结果
T a b l e 2 B i oc h em i e a l P a r a m e t e r s a f t e
r t r e a t m e n t
组别 血丽酉花 r不而 l几 一巧 尿走萝旦旦翌竺 )塑匕三生 j 遨卫丝吵丝丝业月O咬11tl咬UO曰nù11孟住O甘
:
QJ互口二JA`
口U叹U
正常对照组
病理对照组
大丁草组
尿毒清组
29
.
3 3士 6 .
1 4 9
.
6 7士 24
8 9
.
8 5
33士 15 . 2 1
45
。
9 5
抹 △ 斌
八O舟卜U.h
.
0 0士 13 . 8 9 # △
建模组
6
27 2 90
.
3 3士 74 . 5 5
7
.
73士 1 . 2 7
3 3
.
1 8士 2 . 9 5
21
.
5 2士 3 . 9 5科 △ 减
19
.
5 0士 3 . 20 。 △
3 2
.
3 0士 2 . 3 5 .
.
50士 .7
.
17土 .6
1 7士 15 .
3 3士 19 .
8 5
.
8 1士 27 . 14
, 和正常对照组比较 ,尸 < 0 . 01 ; # 和建模组比较 ,尸 < 0 . 01 ;△和病理对照组比较 ,尸 < 0 . 0 1 ; 淡 和尿毒清组比较 ,尸> 0 . 05
1 04南 开 大 学 学 报 (自然科学版 )第 4 2卷
3
.
4肾脏病理学检查结果
镜检结果显示 :病理对照组肾皮质区肾小球数量减少 , 萎缩呈分叶状 , 大多数肾小球毛细血管基底膜
增厚 ,系膜细胞增多 ,大量肾小管破坏 、萎缩 、消失 , 肾小管上皮细胞坏死 , 脱落 , 肾小管管腔明显扩大 , 肾小
管中有大量金黄色结晶 , 可见蛋白管型 、 细胞管型 . 肾皮质广泛结晶沉积 ,结晶周围有炎症细胞浸润 , 可见
异物巨细胞反应 , 间质纤维化明显 (图 1 , A 和 B ) . 而大丁草组和尿毒清组大鼠均有所恢复 ,大丁草组大鼠
肾小球系膜细胞轻度增生 , 肾小管轻度扩张 ,管腔内有少量嗦吟代谢产物结晶 ,上皮细胞脱落较少 , 肾间质
轻度炎性细胞浸润与纤维化 (图 1 , C 和 D ) . 尿毒清组大鼠肾小球系膜细胞轻度增生 , 肾小管轻度扩张 , 肾
小管中有少量金黄色结晶 , 轻度间质纤维化 , 可见少量肾小管上皮细胞脱落 , 肾间质中度纤维化 (图 1 , E
和 F ) ,大丁草组和尿毒清组差别不大.
一一` . . . ` . . . , . . ~ . . . . . . . . . . 曰 . . . . . . . . . .
. . . . . . . .口 . . . . . . . 一 `一 , , . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ` - . . . . . . . .
A
、
B 为病理对照组 ; C 、 D 为大 T 草组 ; E 、 F 为尿毒清组 . H E 染色 (A : 100 X ; B 一 F : 40 0 X )
图 l 大吸肾组织病理切片
F ig
.
1 H is t o P a t h o l o g l e a l r e s u l ts o f d if f e r e n t r a t s
’
k id n e y
3
.
5 GT F
一斑 , ET 一 1 甚因转录的半定 . 检测结果
利用 G e n e T 0 ol f or m S y n G e n e 分析软件测量每个标本 P C R 产物 目的条带灰度绝对值 (图 2 ) ,分别用
每个标本 T G F 一邵 与 E T 一 1 灰度绝对值除以各自 G A尸D H 灰度绝对值 , 以 G A尸刀月 作为内参 , 得出每个
标本 T G F 一夕1 与 E T 一 1 的相对转录量 ,算出每组 6 个相对转录量的平均值及标准差进行统计分析 ,结果见
表 .3
第 1期 苗绪红等:大丁草 G (盯加朋 朋 a刀 di ra( L. c ) S卜B i p . )对腺嗓岭诱导的慢性肾功能衰蝎大鼠 G TF一肛和 E T一 1m RNA表达的影响 · 10 5.
1~6为正常对照组 ; 7 ~ 2 1为病理对照组 ; 3 1~8 1为大丁草组 ; 9 1~ 24为尿毒清组 肾皮质 。D NA
C P R产物电泳结果
圈 2 TG F一月 l, ET 一 l m R N A 裹达结果
F l g
.
2 T G F
一斑 , E T 一 1 m R N A R T一 P C R r e s u一t s
裹 3 各组大吸 P C R 电泳圈中 T G F 一斑与 E T一 1 两基因与 G A P D H 的相对转录 t
T a b l e 3 T h e r e la t lv e t r a n s e r lP t i o n o f T G F
一口1 a n d ET 一 1 e o m Pa r e d t o G A P D H
组别 凡 GT F
一口一/ G八尸刀月 ￡T 一 l / G八尸刀月
正常对照组 6 ( 0 . 1 02 7土 0 . 0 64 1 ) ( 0 . 0 3 5 9士 0 . 02 8 4 )
病理对照组 6 ( 0 . 2 02 6士 0 . 0 50 3 ) ` ( 0 . 1 94 9士 0 . 0 96 9 ) ’
大丁草组 6 ( 0 . 12 8 5士 0 . 0 4 4 7 ) “ 冤 ( 0 . 0 75 1士 0 . 0 22 9 ) “ 减
尿毒清组 6 ( 0 . 0 7 7 3士 0 . 02 0 5 )△ ( 0 . 0 50 5士 0 . 0 5 4 4 )△
注 : , 与正常对照组比较 ,尸 < 0 . 0 1 ; # 与病理对照组比较 , 尸 < 0 . 05 ; △与病理对照组比较 , 尸 < 0 . 05 ; 狱与尿毒清组
比较 ,尸> 0 . 05
从表 3 结果可见 ,病理对照组的 T G F 一月1 , E T 一 1 两个基因相对转录量明显高出正常对照组 , 而给药以
后大丁草组和尿毒清组出现了明显的降低 . 说明建模后 , C R F 大鼠肾皮质 7 , G F 一邵 , E T 一 1 m R N A 的表达
上调 , 而灌胃大丁草和尿毒清后大鼠 T G F 一夕1 , E T 一 1 m R N A 的表达受到了抑制 , 而且这种抑制作用具有
统计学意义 .
4 讨 论
用腺嗦岭灌胃法制作 C R F 大鼠模型是经典的建模方法 4[, S J,腺嗦吟是一种含氮杂环嗦吟类化合物 ,在
体内可通过黄嗦吟氧化酶的作用生成 2 , 8一二经基腺嗦吟沉积于肾小球与肾间质部位 ,形成异物肉芽肿性
炎症 ,并堵塞肾小管腔 , 引起肾小管腔囊状扩张 . 随病程进展 , 肾单位大量丧失导致肾功能衰蝎 . 采用这种
方法 ,按体重灌胃给药 , 使每个动物尽可能获得同等程度的损伤 ,使模型易于标准化 , 并可根据腺嗦吟剂量
的大小和喂养时间的长短制成轻 、 中、重度肾衰模型 . 在本实验中 ,大鼠随灌胃腺嗦吟日数的增加而日渐消
瘦 、 畏寒肢冷 、蜷缩弓背 、精神萎靡 、体毛脱落 、 便澹 、 阴茎红肿 , 眼睛及尾部明显水肿 、 牙齿发黄折断 , 血肌
醉 、 尿素氮及尿酸水平升高 ,钙磷电解质代谢紊乱 ,这些指标表明建模成功 .
肾组织 T G F 一那 的表达与肾小球硬化密切相关6j[ ,是公认的肾纤维化指标 . 丁G F 一邵 可促进肾小球产
生胶原 、 纤维连接蛋白、 层粘连蛋白等细胞外基质蛋白分子 ;并通过上调蛋白酶抑制剂 (如纤溶酶原激活物
抑制剂 )的合成 ,下调基质降解蛋白酶 (如胶原酶 )的合成 ,阻断细胞外新合成基质的破坏 ,导致基质聚积 ,
引起肾脏纤维化 . 另外 , 在慢性肾衰竭的病理基础中 , 肾小球的血流动力学改变是导致肾单位进行性损伤
的重要原因 , E T 一 1 可引起肾脏血管的强烈收缩 ,减少肾血流量 , 降低肾小球滤过率 ,影响肾功能 ,并能使
肾小球系膜细胞进人 G l 期而产生增殖活性 ,并刺激细胞外基质的合成 , 促进肾小球硬化和肾功能损伤 .
腺嚓吟建模后 , 肾组织内沉积大量不溶性颗粒 ,引起炎症反应 , 使 T G F 一邵 表达升高 , 同时由于不溶性颗粒
的沉积 , 肾小动脉内皮细胞受机械牵张力及致炎因子的作用而使 E T 一 1 的合成与分泌增加 ,本实验采用腺
嗦吟灌胃制备 C R F 大鼠模型 ,结果发现建模后大鼠 T G F 一邵 、 E T 一 1 m R N A 表达上调 .
大丁草的化学成分包括香豆素、 苯乙酮 、 毗喃 、 褚类 、 黄酮 、 幽醇 、 有机酸等 , 实验表明大丁草有抗菌活
性 ,其中 4一经基香豆素是主要的抗菌成分 ,对灌胃给药大鼠的尿和粪便及对人肠道微生物培养后研究表
.1 0 6
· 南 开 大 学学 报 ( 自然科学版 ) 第 42 卷
明 4一经基香豆素的代谢产物主要以未开环的形式存在 , 并且会以两分子缩合成双香豆素 ,大丁草中大丁
贰 、大丁二糖贰也在肠道代谢成大丁贰元和双香豆素 ,然后进人体内发挥作用 1j[ . 灌胃大丁草水煎液结果
显示慢性肾衰大鼠 T G F 一爪 和 E T 一 1 m R N A 的表达下降 , 推测可能与大丁草富含双香豆素有关 , 双香豆
素可与维生素 K 拮抗起到抗凝血的作用 ,进而改善肾血流 ,增强肾小管排泄 ,增强纤维蛋白溶解性 ,从而
延缓肾小球硬化和肾纤维化的病程发展 ,但其确切机理有待进一步深人探讨 .
随着生物技术的发展在分子水平上探求中药治疗慢性肾衰的机制 ,是中医药开发研究的发展方向. 大
丁草在地理上分布广泛 , 取材容易 , 在民间已被广泛应用 ,是很有潜力的待开发中药 .
参 考 文 献
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