全 文 ：蕤核叶总黄酮分离纯化工艺的研究
韩蕾1，赵国建2，李雪姣1，邰源临3，魏学智1，*
（1.山西师范大学生命科学学院，山西临汾 041004；2.山西师范大学工程学院，山西临汾 041004
3.水利部水土保持植物开发管理中心，北京 100083）
摘 要：采用可见分光光度计测定蕤核叶总黄酮的含量，以总黄酮的吸附率、解析率为指标，比较分析 AB-8、DM-
130、HPD-100、HPD-600 4种树脂对蕤核叶总黄酮的分离纯化效果，确定最佳树脂型号及其最佳工艺条件。结果表
明：AB-8对蕤核叶总黄酮吸附性能最好，吸附率为 76.93 %，解吸率为 81.93 %；最佳工艺条件为提取液 pH为 4.0，上
样液的浓度为 1 mg/mL～2 mg/mL，上样量与树脂的比例 8 ∶ 1；洗脱剂选用 60 %乙醇，用量 4 BV（柱体积）。蕤核叶总黄
酮的含量在未纯化之前为 15.3 %，在最佳条件纯化之后可达到 48.6 %。
关键词：蕤核叶片；总黄酮；大孔吸附树脂；分离纯化
Separation and Purification Process of Total Flavonoids from Prinsepia uniflora Leaves
HAN Lei1，ZHAO Guo-jian2，LI Xue-jiao1，TAI Yuan-lin3，WEI Xue-zhi1，*
（1.College of life Science，Shanxi Normal University，Linfen 041004，Shanxi，China；2. Project Academy，
Shanxi Normal University，Linfen 041004，Shanxi，China；3. Plant Development Center for Soil and Water
Conservation Ministry of Water Resources，Beijing 100083，China）
Abstract：The visible spectrophotometer to measure the content of total flavonoids brought Prinsepia uniflora
Batal. leaves ，the adsorption rate and desorption rate of AB-8，DM-130，HPD-100，HPD-600 four kinds of
macroporous resins were analysed to determine the suitable resin and its optimum process conditions. The results
indicated：AB -8 resin was best absorbent for the total flavonoids in Prinsepia uniflora Batal.leaves， the
adsorption rate was 76.93 % ，the desorption rate was 81.93 %.The optimum technical conditions were that the
pH of extracts was 4.0， the concentration of sample solution was 1 mg/mL-2 mg/mL， the ratio of absorbing
solution to resin was 8 ∶ 1，the eluting solution was 60 % ethanol， the volume of the eluting solution was 4 BV.
The content of total flavonoids brought Prinsepia uniflora leaves in not before purification for 15.3 %， in the best
condition after purification can reach 48.6 %.
Key words：Prinsepia uniflora Batal.leaves；total flavonoids；macroreticular absorption resin；separation and
purification
基金项目：国家自然科学基金（30972396）
作者简介：韩蕾（1987—），女（汉），硕士，从事植物中活性成分的
研究。
*通信作者：魏学智（1956—），男（汉），教授，从事植物学研究。
食品研究与开发
Food Research And Development
2013年 11月
第 34卷第 21期
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.21.009
蕤核（Prinsepia uniflora Batal.）又名蕤李子（救荒
本草），扁禾木（树木分类学），茹茹（山西）等，属蔷薇科
（Rosaceae） 李亚科（Prunnoideae focke） 扁核木属
（Prinsepia Royle）的落叶灌木。主要分布于河南、山西、
陕西、内蒙古等省区，生长在 900 m~1 100 m山坡阳处
或山脚下，是喜光、耐旱、耐寒的阳性树种。果实风味
独特，酸甜适口，果仁可入药，养肝明目，是一种具有经
济价值野生植物资源[1]。黄酮类化合物（flavonoids）是高
等植物体内普遍存在的一大类重要的次生代谢产物，
对人类的衰老、肿瘤、心血管等疾病的预防和治疗具
有重要意义[2-3]。
目前有关蕤核黄酮类物质的研究报道甚少[4]，对总
黄酮分离纯化的工艺条件未见报道，因此本试验选取
4种大孔树脂进行静态吸附解吸及静态动力学研究，
筛选出最佳的树脂类型并确定其最佳工艺条件，为蕤
核叶总黄酮的分离纯化奠定了理论基础。
分离提取
29
1 材料与方法
1.1 材料
供试材料蕤核叶片，于 2011年 8月采自山西省
临汾市龙祠村。叶片除杂、洗净、烘干，用粉碎机粉碎，
过 60目筛置于塑封袋中备用。
1.2 仪器
RE-52A型旋转蒸发仪：上海青浦沪西仪器厂；
SHB-Ⅱ型循环水式多用真空泵：郑州长城科工贸有限
公司；721型可见分光光度计：上海天普分析仪器有限
公司；101- 3BS型电热鼓风干燥箱：金坛市荣华仪器
有限公司。
1.3 方法
1.3.1 树脂的预处理
用无水乙醇浸泡 24 h，使树脂充分溶脂，以湿法
装柱，乙醇洗脱至流出液乙醇-水（1 ∶ 5）不成白色浑浊
为止，然后用蒸馏水洗至无醇味，取出树脂备用[5]。
1.3.2 蕤核叶总黄酮提取液制备和含量测定
取叶片粉末适量，按料液比 1 ∶ 25，体积分数为
60 %乙醇在 70 ℃超声波仪器中，辅助提取 50 min 后
抽滤，重复 3 次，合并滤液浓缩，用石油醚反复萃取
直到醚相基本无色，去除色素等脂溶性的杂质，水
相用 3 倍~4 倍量 95 %乙醇沉淀去除多糖、蛋白质
等杂质 [6]。
测定含量参照梁晓华[7]的方法，以芦丁为标准品，
510 nm处测吸光值，绘制标准曲线，得到回归方程：A =
0.011 3C + 0.000 5（R2=0.999 8），式中：C为总黄酮浓度，
（mg/L）；A为吸光度。
1.3.3 静态吸附与解析
准确称取处理好的 4种树脂 1 g置于 100 mL锥
形瓶中，加入黄酮提取液 45 mL,封口后，室温下振荡
24 h，使其充分吸附后，吸取上层液按 1.3.2的方法测
定黄酮浓度。将静态吸附饱和后的 4种树脂抽滤干，
转至另 4个干净的 100 mL锥形瓶中，加入 60 %乙醇
溶液 45 mL，封口后，室温下振荡解吸 24 h，同法测定
解吸液中黄酮浓度。计算各大孔树脂对蕤核叶片黄酮
的静态吸附量、解吸率[8]。
吸附量（mg/g）=（提取液浓度-吸附后剩余溶液浓
度）×上样液体积/树脂质量
解吸率=[解吸液浓度×洗脱液体积/（提取液浓度-
吸附后剩余溶液浓度）×上样液体积] ×100 %
1.3.4 静态吸附动力学分析
准确称取处理好的大孔树脂 1.00 g于 100 mL锥
形瓶中，加入 45 mL提取液后振荡至吸附平衡，每隔
1 h取上层液测定吸光值，绘制吸附动力学曲线。
1.3.5 最适树脂分离纯化黄酮的工艺条件
1.3.5.1 提取液 pH的筛选
取 2 g预处理后的树脂于 100 mL锥形瓶中，分别
加入 pH2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0的提取液,吸附饱
和后测定黄酮的浓度，计算不同 pH条件下树脂的吸
附量。
1.3.5.2 上样液浓度的筛选
取 2 g预处理后的树脂于 100 mL锥形瓶中，依次
加入 50 mL 不同浓度的提取液 1、2、3、4、5 mg/mL，充
分吸附后测定黄酮浓度。
1.3.5.3 上样量的筛选
取 2 g预处理后的树脂于 100 mL锥形瓶中，分别
加入 10、16、20、26、30 mL的提取液，充分吸附后测定
黄酮的浓度。
1.3.5.4 洗脱剂浓度的筛选
将经过预处理的树脂湿法装柱，按照已确定的最
佳条件上样，充分吸附后，蒸馏水洗至无糖反应
（Molish反应），用浓度分别为 30 %、40 %、50 %、60 %、
70 %、80 %的乙醇溶液洗脱，洗脱流速为 2 mL/min，测
定黄酮的浓度。
1.3.5.5 洗脱剂用量的筛选[9]
按照最佳条件上样、吸附和洗脱，洗脱速度为
2 mL/min，每收集 0.5 BV体积测定其黄酮的浓度，共
收集 6 BV体积，绘制洗脱曲线，确定洗脱剂的用量。
2 结果与分析
2.1 4种树脂的静态吸附率和解析率
4种树脂的静态吸附率和解析率，结果见表 1。
大孔吸附树脂的纯化是利用特殊的吸附剂-大孔
吸附树脂的吸附性和分子筛相结合的原理，从提取液
中有选择地吸附住有效成分，去除杂质[10-11]。不同的树
脂对于黄酮的纯化效果不同，为了更大限度的回收有
效成分黄酮，考察树脂的吸附率和解析率尤为重要。
由表 1可知，大孔树脂 AB-8吸附率为 76.96 %，DM-
130吸附率为 75.44 %，两种树脂的吸附效果接近，从
解析率来看，AB-8的解析率明显的高于另外 3种树
表 1 不同型号树脂饱和吸附率和解析率
Table 1 Adsorption capacity and desorption rate of different kinds
of macroporous resins
树脂型号 吸附率/％ 解析率/％
AB-8 76.96 81.93
DM-130 75.44 75.68
HPD-100 72.91 69.43
HPD-600 67.85 66.51
分离提取韩蕾，等：蕤核叶总黄酮分离纯化工艺的研究
30
脂，达到 81.93 %。基于试验结果和综合考虑，初步确
定 AB-8大孔树脂是纯化蕤核叶总黄酮的最佳树脂。
2.2 静态吸附动力学曲线
对大孔树脂进行吸附动力学研究，结果见图 1。
由图 1可知，4种树脂在 4 h内吸附速度较快，4 h～
5 h基本达到饱和，5 h后黄酮浓度趋于平稳，其中大
孔树脂 AB-8对蕤核叶黄酮的吸附能力最强，结合上
述树脂的吸附率和解吸率，适合纯化黄酮类物质不仅
有较好的吸附能力，而且有较好的解吸能力，同时节
约时间，在工业化生产中能提高生产效率。所以选择
AB-8型大孔树脂作为纯化蕤核叶总黄酮的树脂。
2.3 AB-8纯化蕤核叶总黄酮工艺的确定
2.3.1 提取液 pH的筛选
黄酮类化合物是多羟基酚类，成弱酸性，在弱酸
或酸性条件下吸附效果较好[12]。提取液 pH的不同，树
脂对蕤核叶总黄酮的吸附效率也不同，结果见图 2。
由图 2可知，提取液的 pH为 4时吸附率最高，随
着 pH的增大，吸附率降低，所以确定提取液 pH为 4
时吸附效果最好。
2.3.2 上样液浓度的筛选
上样液浓度对吸附量的影响见图 3。
从图 3上样液浓度对吸附量的影响曲线中可以
看出，随着蕤核叶总黄酮提取液浓度的增加，树脂的
吸附量先升后降，当浓度达到 2 mg/mL时，吸附量最
大，之后吸附量出现了降低的趋势，所以蕤核叶总黄
酮的浓度在 1 mg/mL～2 mg/mL时吸附效果最佳。
2.3.3 上样量的筛选
上样液量与树脂比对吸附量的影响见图 4。
由图 4显示，在树脂量一定的情况下，添加同一
浓度不同量的上样量，上样量与树脂的比为 8 ∶ 1时吸
附量最大。上样量少时，吸附量大，但纯化周期长，上
样量多时，达到树脂的饱和吸附量后，会造成部分黄
酮的损失，树脂吸附率降低。所以上样量与树脂的比
例为 8 ∶ 1时吸附效果最佳。
2.3.4 洗脱剂浓度的筛选
洗脱剂浓度对解吸率的影响见图 5。
由图 5可知，不同浓度的乙醇溶液洗脱的效果不
同，乙醇浓度达到 60 %时洗脱率最高，继续增加乙醇
浓度，洗脱率的变化不大，考虑到溶剂成本，确定 60 %
的乙醇溶液是最佳洗脱溶剂。
2.3.5 洗脱剂用量的筛选
洗脱剂用量影响见图 6。
在树脂的洗脱过程中，洗脱剂的用量过少时，黄
0.400
0.350
0.300
0.250
0.200
0.150
0.100
0.050
0.000
总
黄
酮
含
量
/（
m
g/
m
L）
1 2 3 10
时间/h
4 5 6 7
HPD-600
HPD-100
DM-130
AB-8
8 9
图 1 静态动力学曲线
Fig.1 Static adsorption curvc of total flavonoids
90
85
80
75
70
65
吸
附
率
/%
1 2 3 9
pH
4 5 6 7 8
图 2 提取液 pH对吸附量的影响
Fig.2 Effect of pH value sample solution on adsorption
图 3 上样液浓度对吸附量的影响
Fig.3 Effect of sample concentration on adsorption
100
90
80
70
60
吸
附
率
/%
0 2 3
上样液浓度/（mg/mL）
4 5 61
80
79
78
77
76
75
74
73
72
吸
附
率
/%
0 5 8 18
上样液量与树脂比例/（mL/g）
10 13 15
图 4 上样液量与树脂比对吸附量的影响
Fig.4 Effect of ratio sample solution to resin on adsorption
80
70
60
50
解
吸
率
/%
0 30 40 100
乙醇浓度/%
50 60 70 80
图 5 洗脱剂浓度对解吸率的影响
Fig.5 Effect of eluent concentration on desorption rate
韩蕾，等：蕤核叶总黄酮分离纯化工艺的研究分离提取
31
酮不能完全被洗脱，用量太多，对于后期的浓缩带来
不便，也会造成时间过长和试剂的浪费。由图 6，在收
集的第 3份至第 6份洗脱液为清澈的黄色溶液，此时
总黄酮浓度最大。随着洗脱剂用量的增加，洗脱液颜
色逐渐变浅，当收集到第 8份时洗脱液几乎无色，经检
测黄酮含量极少，即第 8份已被完全洗脱，以树脂体积
计，洗脱剂约为 4 BV。
3 讨论与结论
大孔吸附树脂是由可聚合成分与添加剂经悬浮
或反悬浮聚合反应制备而成，具有大孔结构的高分子
吸附分离材料。其吸附作用源于范德华力或氢键作
用，吸附选择性源于其中的功能基及其网状结构的筛
分性能[13]。因此树脂的筛选至关重要。大孔吸附树脂具
有吸附容量大、吸附速度快、再生方便等优点，已被广
泛应用于医药工业、化学工业、分析化学等领域[14]。
本文通过 4种树脂对蕤核叶总黄酮吸附和解吸
性能的分析，综合考虑吸附率、解析率和静态吸附动
力学三方面因素，筛选出 AB-8型树脂最适合于蕤核
叶总黄酮的分离纯化。接着对影响纯化效果的工艺参
数进行了研究，首次对上样液浓度、上样液用量、洗脱
剂的浓度、洗脱剂的用量等因素的研究，得到 AB-8树
脂最佳纯化工艺条件：提取液 pH为 4，吸附时间 4 h，
上样液的浓度为 1 mg/mL～2 mg/mL，上样量与树脂之
比 8 ∶ 1；洗脱剂选用 60 %乙醇，用量 4 BV。通过实验
结果分析，应用 AB-8型大孔树脂纯化的最佳工艺条
件，蕤核叶总黄酮的纯度由 15.3 %提高到 48.6 %。
本试验在纯化处理之前，对粗提液进行了石油醚
脱脂等预处理，有效防止叶绿素及其杂质造成树脂的
污染和堵塞，提高树脂纯化效果并降低成本。
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收稿日期：2012-11-19
图 6 洗脱剂用量的影响
Fig.6 Effect of eluent solvent amount
12
10
8
6
4
2
0总
黄
酮
含
量
/（
m
g/
m
L）
0 2 3 13
收集份数
4 5 6 7 81 9 10 11 12
分离提取韩蕾，等：蕤核叶总黄酮分离纯化工艺的研究
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