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蒙药莲座蓟质量标准的研究
崔鸿江1， 林 燕2
(1．内蒙古医科大学第二附属医院 药剂科，内蒙古 呼和浩特 010050; 2．内蒙古自治区食品药品检验所蒙药科)
摘 要:目的:建立莲座蓟的鉴别与含量测定方法。方法:以蒙花苷作为指标，进行薄层色谱鉴别;并以蒙花
苷作为含量测定的指标，以高效液相色谱法测定含量。采用 Diamonsil C18色谱柱，流动相:甲醇－水－冰醋酸(45:
54．5:0．5) ，流速:1 mL /min．结果:蒙花苷在40．758～815．160 ng范围呈良好线性，r = 0．9996，平均回收率:101．13%，
ＲSD:1．77%。结论:本法简便、快速、重复性好，可用于莲座蓟药材的质量控制。
关键词:莲座蓟;薄层色谱;高效液相色谱;蒙花苷
中图分类号:Ｒ927．2 文献标识码:A 文章编号:2095－512X(2016)03－0228－05
STUDY ON THE QUALITY STANDAＲD
OF CIＲSIUM ESCULENTUM
CUI Hong－jiang， LIN Yan
(The Second Affiliated Hospital，Inner Mongolia Medical University，Hohhot 010050 China)
Abstract:Objective:To establish the TLC and HPLC methods for the identification and determi-
nation of flavonoids components in cirsium esculentum．Methods:TLC was used for identification and
content of linarin was determined by HPLC method．A Diamonsil C18column was used with acetonitrile－
water－glacial acetic acid(45:54．5:0．5)as mobile phase．The flow rate was 1mL·min－1．Ｒesults:The
linear range of linarin was 40．758 ～ 815．150 ng /mL，r = 0．9996． The average recovery rate was
101．13%，and ＲSD was 1．77%．Conclusion:The TLC and HPLC could be used for the quality control
of cirsium esculentum because the method is simple，rapid and reproducible．
Key words:cirsium esculentum;TLC;HPLC;linarin
莲座蓟药物植物中主要成分是黄酮类，具有广
泛的药理活性［1，2］。本文建立了莲座蓟中蒙花苷
的薄层鉴别和 HPLC的含量测定方法，为有效控制
莲座蓟药材及其制剂质量提供了科学依据。
1 仪器与试药
1．1 仪器
LC－2010A高效液相色谱仪(日本岛津) ;薄层
硅胶预制板(青岛海洋化工厂生产) ;ME－5型电子
天平:百万分之一;FY－135 型万能粉碎机:天津市
泰斯特公司;KQ－500 型数控超声波清洗器:昆山
市超声仪器有限公司;HHS 21．2型水浴锅:山西省
文水医疗器械厂;聚酰胺薄膜(10cm×10cm，批号:
20071120) ，台州市路桥器生化塑料厂;百分之一
·822· Journal Of Inner Mongolia Medical University June 2016 Vol．38 No．3
收稿日期:2016－01－21;修回日期:2016－04－01
作者简介:崔鸿江(1981－) ，男，内蒙古医科大学第二附属医院药剂科主管药师。
通讯作者:林燕，主任药师，E－mail:15034939320@ 163．com内蒙古自治区食品药品检验所，010050
DOI:10.16343/j.cnki.issn.2095-512x.2016.03.010
天平:沈阳龙腾电子称量仪器公司。
1．2 试药
蒙花苷对照品
中国药品生物制品检定所提供，批号:111528
－20标准含量:95．9%，供含量测定用。实验用莲
座蓟药材(内蒙古自治区锡林郭勒盟，经内蒙古自
治区食品药品检验所康双龙主任药师鉴定)。甲
醇、乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分
析纯。
2 方法与结果
2．1 薄层色谱鉴别
2．1．1 色谱条件 聚酰胺薄膜;展开剂:水－乙醇－
丁酮－乙酰丙酮(65 ∶ 15 ∶ 15 ∶ 5)［3，4］;显色剂:1%
AlCl3 乙醇溶液;点样量:对照品和样品溶液各
2μL;检视:紫外光灯 365nm。
2．1．2 溶液的制备 对照品溶液:称取蒙花苷对
照品适量，加甲醇制成每 1mL含0．4mg的溶液。供
试品溶液:取药材粉碎至 50 目，取粉末 1g。加甲
醇 10mL，超声提取 30min，滤过，残渣加甲醇 2mL
使溶解，作为供试品溶液。薄层色谱图如图 1。
2．2 含量测定
2．2．1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil(迪马)C－18
柱(4．6mm×250mm，5μm)［5，6］;流动相:甲醇－水－
冰醋酸(45 ∶ 54．5 ∶ 0．5) ;流动相流速:1mL /min;柱
温:30℃;进样量:10μL;检测波长:336nm。
2．2．2 对照品溶液的制备 精密称取蒙花苷对照
品2．038mg，加乙腈－甲醇(1 ∶1)适量溶解并定容到
50mL，制成每 1mL含40．758ng的溶液，过滤，即得。
图 1 薄层色谱图
Fig．1 Thin－layer chromatogram
展开剂:水－乙醇－丁酮－乙酰丙酮(65 ∶15 ∶15 ∶5)
展距:8．2cm Ｒf= 0．488
结果:供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，
显相同颜色的黄色荧光斑点。
2．2．3 供试品溶液的制备 取莲座蓟药材粉末约
0．80g，精密称定，置回流瓶中，精密加入 70%乙醇
100mL，称定重量，加热回流 5h，放冷，再称定重量，
用 70%乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液
测定。
2．2．4 方法专属性的考察 经 PDA检测器对峰斜
率、峰纯度的光谱扫描处理［7］，获得如下各图。
图 2 蒙花苷样品 PDA光谱扫描图
Fig．2 Linarin sample PDA spectrogram
图 3 蒙花苷对照品 PDA光谱扫描图
Fig．3 Linarin reference substance PDA spectrogram
由以上各图可知，正负斜率纯度和 3点峰纯度
值均为正值，峰轮廓图无交叉点，故样品中蒙花苷
的峰纯，专属性高。
2．2．5 线性关系的考察 精密称取蒙花苷对照品
2．125mg［8，9］，加乙腈－甲醇(1 ∶1)适量溶解并定容
到 50mL，用0．45μm尼龙滤膜过滤，设定仪器参数，
分别精密吸取 1μL，2μL，5μL，10μL，15μL，20μL，
在上述色谱条件下进行分析，测定峰面积值(A) ，
·922·内蒙古医科大学学报 2016年 6月 第 38卷 第 3期
并以峰面积值(A)对进样浓度(C)进行回归分析，
绘制标准曲线。回归方程为:A= 2604C－44940，r =
0．9996。线性范围:40．758 ～ 815．160ng。测定结果
见表 1。
图 4 蒙花苷样品 峰纯度图 1
Fig．4 Linarin sample peak purity Fig．1
图 5 蒙花苷对照品 峰纯度图 1
Fig．5 Linarin reference substance peak purity Fig．1
(Upslope purity:0．045224，downslope purity:0．016734，3point purity:0．030979正值说明峰纯)
图 6 蒙花苷样品 峰纯度图 2
Fig．6 Linarin sample peak purity Fig．2
图 7 蒙花苷对照品 峰纯度图 2
Fig．7 Linarin reference substance peak purity Fig．2
(Upslope purity:0．162596，downslope purity:0．107194，3point purity:0．134895正值说明峰纯)
表 1 线性关系测定结果(n= 6)
Tab．1 The results of linear relationship(n= 6)
进样量(ng) 40．758 81．516 203．790 407．580 611．370 815．160
平均峰面积值(A) 71700 165043 479672 990606 1585150 2063302
2．2．6 精密度试验 精密称取莲座蓟药材粉末
0．80g，加 70%乙醇 100mL，精密称定，热回流提取
5h，放冷，精密称定，补足减失重量，过滤，取续滤
液，连续测定 5 次，蒙花苷峰面积的平均值为:
375037．4，ＲSD 为0．31%。蒙花苷的含量为:2．046
mg /g。结果见表 2。
表 2 精密度试验测定结果
Tab．2 The investigation results of precision test
测定次数 第一次 第二次 第三次 第四次 第五次 平均值
平均峰面积值(A) 374419 374756 377019 374075 374918 375037．4
2．2．7 稳定性试验 精密称取莲座蓟药材粉末
0．810g，按上述方法，配制成溶液，分别在 0h，2h，
4h，8h，12h，36h后在上述色谱条件下进样测定，结
果峰面积平均值为373977．3，ＲSD 为0．57%。表明
样品溶液在 36h内稳定。
·032· Journal Of Inner Mongolia Medical University June 2016 Vol．38 No．3
表 3 稳定性试验测定结果
Tab．3 The investigation results of stability
测定时间(h) 0 2 4 8 12 36
平均峰面积值(A) 373288 374908 373250 376346 370464 375607
2．2．8 重复性试验 精密称取莲座蓟药材粉末 5
份，按上述方法，配制成溶液，分别进样 10μL，每份
测定 3次，结果见表 4，由表 4 可见，本方法重复性
较好。
表 4 重复性试验测定结果
Tab．4 The result of repetitive test
样品量(g) 样品溶剂容器总重(g) 峰面积(A) 平均值 含量(mg /g) 平均含量(mg /g)
0．80 197．27 373158、373352、375936 374149 2．04
0．80 193．07 370257、370725、370288 370423 2．02 2．02mg /g
0．74 196．03 346149、344547、342269 344322 2．03
0．67 195．08 313225、314165、310447 312612 2．04 ＲSD为1．44%
0．65 205．61 297277、292353、292895 294175 1．97
2．2．9 加样回收率试验 称取六份已知含量的莲
座蓟药材粉末约0．40g(取样量减半) ，加入对照品
约0．818 mg，按上述方法配制成溶液，分别进样
10μL测定，结果见表 5。
表 5 回收率试验结果
Tab．5 The recoveries result of kaempferol
取样量(g) 加入蒙花苷的量(mg) 测得的蒙花苷的量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%)
0．38 0．753 1．500 101．42
0．40 0．740 1．518 100．05
0．40 0．731 1．504 99．28 101．13
0．39 0．754 1．540 104．03 ＲSD为1．77
0．40 0．746 1．539 102．18
0．38 0．736 1．472 99．80
2005版中国药典规定合格范围为 98%～102%。
2．2．10 样品测定 称取不同产地莲座蓟药材粉
末约0．70克，按照上述方法配制成供试品溶液，分
别进样 10μL，按照上述色谱条件进行测定，结果见
表 6。
表 6 样品的含量测定结果
Tab．6 The analytical results of the samples
编号 药材产地 取样量(g) 含量(mg /g)
1 锡林郭勒盟郊区 0．70 2．243
2 锡林郭勒盟西乌旗 0．74 2．024
3 锡林郭勒盟阿巴嘎旗 0．72 2．113
3 讨论
3．1 薄层色谱展开剂的选择
莲座蓟药材主要化学成分为黄酮类物质，因而
选择聚酰胺薄膜为固定相［10］。展开剂分别采用:
(1)水－乙醇－丁酮－乙酰丙酮(65 ∶15 ∶15 ∶5)［11］;
(2)水－丙酮(1 ∶1)［12］; (3)乙醇－丁酮(1 ∶1)［13］等
系统进行比较，结果展开剂(1)分离效果最好，斑
点清晰、圆整，故选择水－乙醇－丁酮－乙酰丙酮(65
∶15 ∶15 ∶5)为薄层色谱展开条件。
3．2 含量测定流动相的选择
文献报道蒙花苷的液相色谱分离条件有:乙腈
－水－冰醋酸［14］，甲醇 －水［15］和甲醇 －水 －冰醋
酸［6，16］等系统，经实验比较，结果显示甲醇－水－冰
醋酸系统分离效果好，对以下配制比例的分离效果
进行考察:(1)45 ∶54．5 ∶0．5(2)30 ∶70 ∶1(3)56 ∶44 ∶
1。实验结果发现，按比例(1)所得样品色谱图分
离较好，无干扰，且保留时间适当。
3．3 含量测定对照品溶解情况的考察
按照中国药典(2005年版一部)密蒙花项下蒙
花苷含量测定方法及文献方法，分别用甲醇和甲醇
－水－冰醋酸(45 ∶54．5 ∶0．5)作溶剂溶解对照品，蒙
花苷均无法完全溶解。经过七种不同溶剂甲醇、
20%甲醇、50%甲醇、纯化水、70%甲醇、流动相、乙
腈－甲醇(1 ∶1)对蒙花苷溶解情况的考察，结果显
示，只有乙腈－甲醇(1 ∶1)溶解性最好，高效液相色
谱(HPLC)测定，峰面积值稳定，不发生波动。故
选择乙腈－甲醇(1 ∶1)为溶剂，溶解蒙花苷对照品。
3．4 含量测定供试品溶液制备方法的考察
3．4．1 提取溶剂的选择 实验中采用 70%乙醇、
乙腈－甲醇(1 ∶1)作溶媒进行比较，结果两种溶剂
对供试品中蒙花苷的提取效果相当，考虑到乙腈价
格昂贵，故选择 70%乙醇为提取溶剂。
·132·内蒙古医科大学学报 2016年 6月 第 38卷 第 3期
3．4．2 提取方法的选择 方法(1) :取莲座蓟药材
粉末约0．80g，精密加 70%乙醇 100mL，称定重量，
超声提取 3h 后，再称定重量，用 70%乙醇补足减
失的重量，滤过，取续滤液测定，该方法的提取效率
仅为方法(2)的44．34%，效率偏低。方法(2) :取莲
座蓟药材粉末约0．80g，置索氏提取器中，加石油醚
(60℃ ～ 90℃)100mL，脱脂 6h，取出，过夜晾干后，
转移至回流瓶，精密加 70%乙醇 100mL，称定重量，
热回流提取 5h，放冷，再称定重量，用 70%乙醇补
足减失的重量，滤过，取续滤液测定，结果该方法经
脱脂后，再回流提取与方法(3)直接回流提取的测
定结果基本相近，该方法操作复杂。方法(3) :取
莲座蓟药材粉末约0．80g，置回流瓶中，精密加入
70%乙醇 100mL，称定重量，加热回流 5h，再称定重
量，用 70%乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液
测定，结果该方法直接回流提取的测定结果与方法
(2)基本相近，且液相色谱图中蒙花苷主峰附近均
无干扰峰出现，考虑到方法的简便性和易操作性，
故选择该方法。
3．4．3 提取效率的考察 为保证被测成分提取完
全，本研究对 70%乙醇回流提取时间 4、5h和 6h进
行了考察。结果显示，供试品提取 5h和 6h的含量
测定值最高且相同，故确定提取时间为 5h。
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(责任编辑:程立新)
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
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