全 文 ：器 , 薏苡仁油由某药业有限公司提供。
1.2 不皂化物的提取
称取薏苡仁油 0.5 g, 加 0.5 mol/LKOH乙醇溶液 10
mL,加热回流 2 h后(使完全皂化), 放冷 ,加水 5 mL, 加正己
烷 10mL,振摇 3 min, 静置 , 分取正己烷层 , 水层再用正己烷
提取 2次 , 每次 5 mL, 合并正己烷层 , 用 1 g无水硫酸钠脱
水 , 滤过 ,作为供试品溶液。
1.3 测定条件
质谱实验条件 电离源为 EI, 电离电压:70ev,质谱质量
扫描范围:20 ～ 550 amu, 进样量 1 μL, 分流比:20∶1。
气相色谱实验条件 色谱柱:HP-5MS毛细管柱(30 m
×0.25 mm×0.25um),载气为氦气;载气流速每分钟 1mL,
程序升温:初始 200°C, 保持 2 min, 再以每分钟 10 °C升至
300°C, 保持 20 min。
2 结果与讨论
2.1 薏苡仁油不皂化物 GC-MS分析结果
所提取的不皂化物按照上述条件进行测试 ,得到的总离
子流(TIC)色谱图见图 1。
图 1 薏苡仁油中不皂化物总离子流(TIC)色谱图
GC-MS联用所得质谱信息经计算机用 NIST98数据库检
索与标准图谱对照分析 ,确认了其中部分化学成分。
薏苡仁油不皂化物化学成分分析结果见表 1。
表 1 薏苡仁油中不皂化物化学成分分析结果
编号 组分英文名 组分中文名 保留时间 /min
相对含
量 /%
1 squalene 角鲨烯 11.92 9.80
2 campesterol 菜油甾醇 15.84 7.63
3 ergostanol 麦角甾醇 15.98 2.97
4 stigmaterol 豆甾醇 16.25 5.58
5 obtuslfoliol 纯叶大戟甾醇 16.72 5.96
6 β-sitosterol β-谷甾醇 17.04 39.05
7 cholestanol 胆甾醇 17.19 13.79
8 chondrilast-7enol / 17.87 2.05
9 handianol 汉地醇 18.19 6.21
10 α-sitosterol α-谷甾醇 19.22 6.95
2.2 由表 1可知 , 薏苡仁油不皂化物中主要成分为烃 、甾
醇 、4-甲基甾醇 , 其中烃类主要为角鲨烯 , 占总成分的
9.80%, 甾醇类主要为菜油甾醇 、麦角甾醇 、豆甾醇 、β -谷甾
醇 、α-谷甾醇 、胆甾醇 , 占总成分的 75.97%, 4-甲基甾醇主要
为纯叶大戟甾醇的 5.96%;甾醇和 4-甲基甾醇的含量与其
他植物油基本类似 [ 2, 3] , 但其中角鲨烯含量较其他植物油
高 ,角鲨烯是三萜类开环化合物 , 是甾醇和 4-甲基甾醇的生
源前体 ,有助于提高油类的氧化稳定性 [ 4] 。
参考文献:
[ 1] 向智敏 ,祝 明 ,陈 勇 ,等.HPLC-MS分析薏苡仁油中的甘油
三酯成分 [ J] .中国中药杂志 , 2005, 30(18):1436.
[ 2] 陶海荣 ,高修库 ,肖吾开提 ,等.红花籽油中不皂化物成分的分
析 [ J] .油料作物学报 , 2000, 22(4):40.
[ 3] 杨晓静 , 王立众 , 李 和.紫苏子油不皂化物的分离与分析
[ J] .中国油料作物学报 , 2006, 28(2):207.
[ 4] 徐 莉 ,王若兰 ,曹晓博.橄榄油抗氧化成分变化研究 [ J] .河
南工业大学学报(自然科学版), 2007, 28(2):38.
HPLC测定香青兰中木犀草素 、异鼠李素的含量
向 阳 1 , 曹秀荣 2 , 袁 铭1 , 肖 飞 1 , 徐绍新 1
(1.湖北省暨武汉市中药现代化工程技术研究中心 ,湖北 武汉 430052;2.湖北省食品药品监督管理局 ,湖北
武汉 430070)
收稿日期:2008-05-16
作者简介:向 阳(1979-),男 ,工程师 ,从事中药新药研究与开发工作。 Tel:027-84514002 E-mail:xiangy79@sohu.com
关键词:香青兰;木犀草素和异鼠李素;HPLC
中图分类号:R284.1 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2009)06-0954-03
香青兰为唇形科植物香青兰 Dracocephalummoldavica
L.的干燥地上部分 ,维吾尔名为巴迪然吉布亚 ,有益心护脑 、
保肝健胃 、增强感觉力 、补充保护力 、增益智慧力 、开通脑中
闭塞等功效 , 在维吾尔医和民间广泛用于治疗冠心病及血液
质旺盛(高血压)、寒性神经性头痛 、寒性感冒 、气管炎等疾
病 [ 1] 。香青兰中含有多种黄酮类化合物 , 木犀草素 、异鼠李
素是其主要成分 [ 2] ,目前还没有文献报道对香青兰中的木犀
草素 、异鼠李素进行定量测定。本实验采用 HPLC法对其进
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行了含量测定 , 结果表明 , 该方法快速简捷 、重现性好 ,取得
了满意的结果。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
HP-Agilent1100型高效液相色谱仪 , 包括 G1322A真空
脱气机 , G1311A四元泵 , G1313A自动进样器 , G1365A多波
长检测器 , HPRev.A.07.01色谱工作站;BP211D型 1/10万
电子分析天平(德国 Sartorius公司)。
木犀草素对照品(批号:111520-200201, 供含测用)和异
鼠李素对照品(批号:110860-200205,供含测用)均购于中国
药品生物制品检定所。甲醇 、乙腈(色谱纯 , 美国 Tedia公
司),水为重蒸水 , 其余试剂均为分析纯。香青兰药材由红会
药材公司提供。
1.2 方法与结果
1.2.1 色谱条件与系统适用性考察 [ 3] 色谱柱:Kromasil-
C
18
(5 μm, 4.6 mm×250mm);流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液
(52∶48);流速:1 mL/min;检测波长:360nm;柱温:室温;进
样量:10 μL;理论板数按木犀草素峰计算应不低于 3 000;异
鼠李素峰与最近峰的分离度大于 1.5。色谱图见图 1。
图 1 对照品(A)和样品(B)的色谱图
1.木犀草素 2.异鼠李素
1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取木犀草素对照品
5.08 mg、异鼠李素对照品 4.96 mg,置 100 mL量瓶中 , 加甲
醇使溶解并定容至刻度 , 摇匀 , 作为对照品贮备液。精密吸
取 1 mL, 置 5mL量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 即得。
1.2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约 1.5
g, 精密称定 ,置具塞锥形瓶中 , 精密加入 2.5 mol/L盐酸甲
醇溶液 25 mL, 密塞 , 称定重量 , 加热回流 1 h, 放冷 , 再称定
重量 , 用 2.5mol/L盐酸甲醇溶液补足减失的重量 , 摇匀 , 滤
过。精密量取续滤液 2 mL, 蒸干 , 残渣用甲醇溶解 , 并转移
至 10mL量瓶中 ,定容至刻度 ,摇匀 , 滤过 ,取续滤液 , 即得。
1.2.4 线性关系考察 精密吸取 1.2.2项制备的对照品贮
备液 0.5、1、2、3、 4、10mL, 置 10mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 ,摇匀 , 分别吸取上述溶液 10 μL, 按 1.2.1项色谱条件测
定 ,以进样浓度为横坐标(X:μg/mL), 峰面积积分值为纵坐
标(Y:mAU＊s),进行线性回归 , 得回归方程:木犀草素 Y=
34.926X+4.307 2, r=0.999 92;异鼠李素 Y=24.869X+
0.135, r=0.999 94。结果表明 ,木犀草素在 2.54 ～ 50.8 μg/
mL、异鼠李素在 2.48 ～ 49.6 μg/mL的范围内呈良好线性关
系。
1.2.5 精密度试验 精密吸取 1.2.2项下制备的对照品溶
液 10 μL,重复进样 6次 ,测定峰面积 , 结果木犀草素的 RSD
=0.22%, 异鼠李素的 RSD=0.45%,表明本法精密度良好。
1.2.6 稳定性试验 取供试品溶液于制备后 0、 2、4、 6、 8、
10、12、24 h进样 , 木犀草素峰面积的 RSD=0.71%, 异鼠李
素峰面积的 RSD=0.97%,表明供试品溶液在 24 h内稳定。
1.2.7 重复性试验 称取同一批样品 6份 , 按 1.2.3项下
方法处理并测定含量 , 结果木犀草素 RSD=1.39%, 异鼠李
素 RSD=1.54%, 表明此方法重复性较好。
1.2.8 回收率试验 称取已知含量的样品 6份 , 分别精密
加入一定量的对照品 , 按 1.2.3项下方法处理并测定含量 ,
分别计算样品加样回收率(结果见表 1,表 2),木犀草素平均
回收率为 98.34%, RSD=1.67%;异鼠李素平均回收率为
97.32%, RSD=2.14%。
表 1 木犀草素回收率试验结果
称样量
/g
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均含
量 /%
RSD
/%
0.752 3 0.492 5 1.090 3 96.12
0.750 4 0.492 5 1.111 0 100.65
0.748 6 0.610 0 1.206 2 97.10
98.34 1.67
0.752 0 0.610 0 1.214 5 98.02
0.747 9 0.742 5 1.345 0 98.55
0.753 8 0.742 5 1.357 4 99.57
表 2 异鼠李素回收率试验结果
称样量
/g
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均含
量 /%
RSD
/%
0.752 3 0.177 5 0.395 7 97.92
0.750 4 0.177 5 0.390 5 95.27
0.748 6 0.217 5 0.427 7 95.13
97.32 2.14
0.752 0 0.217 5 0.439 5 100.09
0.747 9 0.267 5 0.478 2 96.30
0.753 8 0.267 5 0.487 8 99.21
1.2.9 样品的含量测定 3批 9个样品按前述方法测定 ,
结果见表 3。
2 讨论
2.1 检测波长的选择 参照有关文献 ,并经紫外可见分光
光度计全波长扫描 ,木犀草素在(350 ±2)nm波长处有最大
吸收 ,异鼠李素在(371±2)nm波长处有最大吸收 , 因此选
择 360 nm为二者的共同测定波长 。
2.2 流动相的选择 本实验通过对甲醇-水 、乙腈-水 、甲醇-
0.4%磷酸溶液 、乙腈-0.4%磷酸溶液 、甲醇-乙腈 -0.4%磷酸
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溶液等多种不同比例的流动相进行比较试验 , 结果甲醇-
0.4%磷酸溶液比例为 52∶48的系统分离效果较好 ,且出峰
时间较快 , 峰形较好 ,故选择本系统为流动相。
表 3 样品中木犀草素 、异鼠李素的含量测定结果
No. 含量 /%木犀草素 异鼠李素
总含量
/%
平均含量
/%
RSD
/%
0.083 0.029 0.112
1 0.081 0.030 0.111 0.113 1.85
0.084 0.031 0.115
0.104 0.035 0.139
2 0.107 0.036 0.143 0.141 1.47
0.105 0.037 0.142
0.091 0.032 0.123
3 0.092 0.030 0.122 0.124 1.68
0.094 0.032 0.126
2.3 提取方法的选择 文献报道香青兰中黄酮类成分多以
结合糖苷形式存在 , 本实验采用 a、甲醇超声提取;b、 2.5
mol/L盐酸甲醇溶液超声提取 , 取续滤液蒸干 , 残渣用甲醇
溶解并定容;c、2.5 mol/L盐酸甲醇溶液加热回流 , 取续滤液
蒸干 ,残渣用甲醇溶解并定容。结果经盐酸甲醇提取的木犀
草素与异鼠李素含量明显高于甲醇提取 , 证实香青兰中黄酮
类成分大部分以糖苷形式存在。 另加热回流提取的木犀草
素与异鼠李素含量要高于超声提取 , 说明加热更有利于糖苷
的水解。综合以上试验 ,选用方法 c作为供试品溶液的制备
方法。
参考文献:
[ 1] 冯长根 ,李 琼.香青兰化学成分与药理活性研究综述 [ J] .中
成药 , 2003, 25(2):155-157.
[ 2] 古海锋 ,陈若芸 ,孙玉华 ,等.香青兰化学成分的研究 [ J] .中国
中药杂志 , 2004, 29(3):232-234.
[ 3] 马 潇 ,丁永辉 ,赵剑邦 ,等.高效液相色谱法测定藏药独一味
中木犀草素及异鼠李素的含量 [ J].中国现代应用药学 , 2006,
23(2):152-155.
五味子红色素稳定性研究
范荣军 , 刘成柏 , 任 涛 , 陈 霞＊
(吉林大学生命科学学院 ,吉林 长春 130021)
收稿日期:2008-04-15
基金项目:吉林省科技厅中药现代化重大项目子课题(20030906-01)
作者简介:范荣军(1981-),男 , 硕士研究生 ,从事中草药有效成分提取研究。 Tel:(0431)88498036E-mail:frj101@email.jlu.edu.cn
＊通讯作者:Tel:(0431)88498036E-mail:bbbbz@ 163.com
关键词:五味子红色素;理化因素;稳定性
中图分类号:R284.1 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2009)06-0956-03
食用色素作为重要的食品添加剂 , 广泛应用于食品 、医
药及日用化工等领域 ,其需求量日增。目前人工合成色素多
属于苯胺类化合物 , 有致癌和诱导染色体变异的作用 ,对人
体健康造成严重威胁 , 因而其使用越来越受到严格的限
制 [ 1] 。天然色素以其自然的色泽 、安全无毒且具有一定的营
养和药理保健作用而备受人们青睐 ,研究工作十分活跃 , 发
展也较快 [ 2, 3] 。
五味子又名五梅子 、山花椒等 , 为木兰科植物五味子
Schisandrachinensis(Turcz.)Baill的成熟果实 , 是药食两用
中药。近代研究证明 , 五味子具有较强的兴奋强壮作用 , 能
调节心脑血管系统 , 改善血液循环 , 兴奋中枢神经 , 对治疗
疲劳 、嗜睡 , 尤其是对神经衰弱有特效 , 对治疗肝炎亦有良
好的效果 , 还有报道适量的五味子可以改善心肌收缩性能 ,
减少耗能及耗氧量 , 有利于恢复心肌的正常功能 [ 4] 。目前对
于五味子色素及其稳定性研究报道较少。本实验就五味子
红色素的稳定性进行探究 ,以期为该资源的深度利用提供科
学依据。
1 材料与仪器
五味子购于吉林省天益堂多邦医药有限公司 , 经公司药
剂师李英光 、李颖鉴定为北五味子 Schisandrachinensis
(Turcz.)Baill的成熟果实 , 其他试剂均为国产分析纯。
752型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司),
MP120-1型电子天平(上海第二天平仪器厂), DZKW-6型
电子恒温水浴锅(河北黄骅市渤海电器厂), RE52-3旋转蒸
发器(上海沪西分析仪器厂)。
2 方法和结果
2.1 五味子红色素的提取
花色苷类色素可溶于水和有机溶剂 , 而乙醇具比水低的
沸点 ,易于回收 , 较甲醇 、丙酮等更安全和经济 , 加之乙醇对
提取材料中的蛋白质 、多糖等的溶解度较低 , 可避免色素提
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