全 文 ：收稿日期:2008-04-14
作者简介:贺凤成(1983-),男 ,吉林农业大学野生植物保护与
利用专业在读硕士,主要从事天然药物化学研究。
＊通讯作者:李长田 , 副教授 , 硕士生导师 ,主要从事天然药
物化学研究。 E-mail:changtianli@126.com
泥胡菜中芦丁含量分析
贺凤成1 ,程金来 2 ,董金平 1 ,王艳梅1 ,李长田 1＊
(1.吉林农业大学 中药材学院 , 吉林 长春 130118;2.鲁南制药集团 , 山东 临沂 276006)
摘　要　建立高效液相色谱法测定泥胡菜中芦丁的方法 , 优化芦丁的提取工艺。使用 Diamonsil(TM)C18柱 , 流动
相:乙腈 -0.4%磷酸溶液(20∶80), 检测波长:255 nm, 流速:1 ml/min, 柱温:30℃。样品用 50%乙醇超声提取 30
min提取率最高为 0.166%;芦丁在 0.1 ～ 2.0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 4), 平均加样回收
率 99.3%(RSD=0.8%, n=5)。该方法准确 、快速 、重现性好 , 可作为控制泥胡菜质量的有效测定方法。
关键词　高效液相;泥胡菜;芦丁
中图分类号:S567　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006-9690(2009)02-0066-03
AnalysisofContentofRutininHemisteptialyrataBunge
HeFengcheng1 , ChengJinlai2 , DongJinping1 , WangYanmei1 , LiChangtian1
(1.ColegeofChineseTraditionalMedicine, JilinAgricultureUniversity, Changchun130118, China;
2.LuNanPharmaceuticalGroup, Linyi276006, China)
Abstract　ToestablishanHPLCmethodfordeterminationthecontentofRutininHemisteptialyrata
Bunge.TheDiamonsil(TM)diamondC18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm)wasused.Themobile
phaseconsistedofAcetonitrile0.4% H3PO4 solution(20∶80), thedetectionwavelengthwas255 nm.
Flowratewas1ml/minandcolumntemperatureat30℃.Themaximumextractionrateis0.166% with
theextractionsolventis50% alcoholandtheextractiontimeis30minutes;thelinearrangeofRutinwas
0.1 ～ 2.0μg(r=0.999 4), themeanrecoveryofRutinwas99.3% (RSD=0.8%, n=5).This
methodisaccurate, rapidandreproducible, canbeusedtodeterminerutininthematerialofHemisteptia
lyrataBunge.
Keywords　HPLC;HemisteptialyrataBunge;rutin
　　泥胡菜(HemisteptialyrataBunge)为菊科泥胡菜
属植物 ,广泛分布于我国各地。该植物有清热解毒 ,
消肿祛瘀的作用[ 1] , 临床用于治疗痔漏 、痈肿 、疔
疮 、外伤出血和骨折等[ 2] ,任玉琳 、杨峻山 [ 3-5]报导
泥胡菜中含多种化合物 ,但芦丁尚未见报道 。本文
首次对泥胡菜中的芦丁含量进行研究 ,并建立高效
液相色谱法测定泥胡菜中芦丁含量的方法 ,优化芦
丁的提取工艺 。结果该方法准确 、快速 、重现性好 ,
可以为泥胡菜的品质控制提供依据。
1　试验材料 、试剂与仪器
1.1　材料
泥胡菜采自吉林省临江市 ,经吉林农业大学胡
全德教授鉴定为泥胡菜(Hemisteptialyrata)。
1.2　仪器
安捷伦 1100高效液相色谱仪 , 1100系列 DAD
二极管阵列检测器 , DU7500型紫外分光光度计 , KQ
-250DB型数控超声波清洗器 。色谱柱:Diamonsil
(TM)C18(250 mm×4.6mm, 5μm)。
1.3　试剂
乙腈为色谱纯(美国),水为重蒸水 ,磷酸(分析
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第 28卷第 2期
2009年 4月 　　　　　　　　　　　　　 中 国 野 生 植 物 资 源ChineseWildPlantResources　　　　　　　　　　 　Vol.28 No.2Apr.2009
纯),甲醇(分析纯),芦丁对照品 ,批号 0080-9504,
购自中国药品生物制品检定所 。
2　试验方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱用十八烷基硅键合硅胶为填充剂 ,采用
Diamonsil(TM)C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm)柱 。
流动相:乙腈 -0.4%磷酸溶液 (20∶80), 柱温:
30 ℃,流速 1 mL/min。进样量 20μL。
2.2　检测波长
取芦丁对照品 ,加甲醇制成每 1 mL含 5 μg的
溶液 ,于紫外分光光度计上扫描 ,测得最大吸收波长
为 255nm,故选择为 255 nm为检测波长 。
2.3　系统适用性试验
精密称取芦丁对照品适量 ,加甲醇溶解并用流
动相稀释制成每 1 mL中含芦丁为 5 μg的溶液 ,作
为对照品溶液。按照 2.1节色谱条件进样 ,芦丁的
保留时间约为 8.0 min,芦丁的分离度良好。对照
品 、供试品的色谱图见图 1。
图 1　HPLC色谱图
2.4　试样制备
2.4.1　对照品溶液的制备　精密称取 120 ℃干燥
至恒重的芦丁标准品 50 mg置 50 mL容量瓶中 ,加
甲醇并稀释至刻度 , 摇匀 , 精密吸取 2.5 mL置
25 mL容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀(每 mL中约
含 0.1μg),过 0.45 μm滤膜 。
2.4.2　供试品溶液制备方法　取泥胡菜全草 ,粉碎
成细粉 ,精密称取 0.2g,置于 50mL三角瓶中 ,加入
一定浓度的乙醇溶液 20 mL,超声处理一定时间 ,过
滤 ,加一定浓度的乙醇溶液定容于 25mL容量瓶中 ,
摇匀 ,用 0.45μm的微孔滤膜滤过 ,即得 。
2.5　方法学考察
2.5.1　线性关系考察　精密吸取定量的溶液 ,分别
注入液相色谱仪 ,按色谱条件测定 ,以浓度与峰面积
求得曲线的回归方程为 Y=639.29X+47.147, r=
0.999 4,线性范围 0.1 ～ 2.0 μg。标准曲线测定结
果见表 1。
表 1　芦丁的标准曲线测定结果
进样量 /ng 峰面积
0.1 89.7
0.2 171.1
0.4 308.2
0.8 582.5
1.2 835.2
1.6 1 061.9
1.8 1 182.4
2.0 1 324.4
2.5.2　精密度试验　同一份样品溶液 ,在 2.1节色
谱条件下 ,连续进样 5次 ,每次 20 μL,测定芦丁的
峰面积 ,结果峰面积平均 216.8, RSD为 1.5%,表明
实验的精密度良好 。
2.5.3　稳定性试验　精密吸取同一份泥胡菜制成
的样品溶液 20 μL,每隔一定时间注入液相色谱仪 ,
测定芦丁峰面积 ,直至 24 h,其 RSD为 1.6%,表明
芦丁在 24 h内稳定性良好 。
2.5.4　重现性试验　同一份药材样品 ,重复测定 5
次 ,测定结果平均 0.169%, RSD%为 1.6%,表明实
验的重现性良好。
2.5.5　加样回收率试验　精密称取已知含量的泥
胡菜 5份 ,加入适量的芦丁溶液 ,按照样品的测定方
法测定 ,计算回收率 ,结果见表 2。
表 2　加样回收率试验
序
号
取样量
/g
样品中芦丁
含量 /mg
加入芦丁
量 /mg
测得芦丁
量 /mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
1 0.201 5 0.334 5 1.04 1.374 7 100.02
2 0.200 8 0.317 2 1.06 1.376 6 99.94
3 0.202 0 0.323 2 1.10 1.412 0 98.98 99.3 0.8
4 0.200 7 0.341 2 1.05 1.384 9 99.40
5 0.200 9 0.337 5 1.02 1.3369 97.98
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第 2期　　　　　　　　　　　　　　　　贺凤成 , 等:泥胡菜中芦丁含量分析 　　　　　　　　　　　　　　　　　
2.6　结果与分析
2.6.1　提取液浓度的优化　精密称取泥胡菜 5份 ,
每份 0.2 g,分别加入 10%, 30%, 50%, 70%, 90%
乙醇溶液 20 mL,超声处理 30 min,过滤 ,分别以各
自浓度的乙醇按样品测定法测定 ,结果表明 ,提取液
浓度可确定为 50%,见表 3。
表 3　提取液浓度测定
序号 提取液浓度 /% 芦丁含量 /%
1 10 0
2 30 0.133
3 50 0.166
4 70 0.150
5 90 0.143
2.6.2　提取时间的优化　精密称取泥胡菜样品 4
份 ,分别加入 50% 乙醇溶液 20 mL, 超声处理
10 min、20 min、30 min、40 min,按样品测定法测定 ,
结果表明 ,提取的时间可确定为 30min。见表 4。
表 4　提取时间的选择
序号 提取时间 /min 芦丁含量 /%
1 10 0.126
2 20 0.145
3 30 0.166
4 40 0.165
2.6.3　样品测定　由 2.6.1节 、2.6.2节确定最佳
提取液条件为:乙醇浓度 50%、提取时间 30 min,按
照 2.4.2节提取方法进行样品处理 ,在 2.1节色谱
条件下进行测定 ,测定结果代入标准曲线 ,算得芦丁
含量见表 5。
表 5　泥胡菜样品中芦丁含量
泥胡菜样品 芦丁含量 /% 平均值 /%
1 0.170
2 0.165 0.166
3 0.163
3　讨　论
采用超声提取 ,选择不同提取时间 ,以不同浓度
的乙醇为提取剂 ,考察了芦丁的提取效果。结果表
明 ,用浓度 50%乙醇提取 30 min时芦丁得率最高 ,
样品溶液过滤后可直接进样分析 ,对色谱柱未产生
损害 。
选择流动相时曾用乙腈和水 ,但峰形不美观 ,产
生拖尾现象 ,因为芦丁为黄酮类物质 ,其中含有多个
羟基 ,是一个具有酸解离基团的化合物 ,为抑制其解
离以减少色谱峰拖尾 ,选用乙腈和 0.4%的磷酸为
流动相 ,有效的解决了此问题 。
本实验首次采用高效液相色谱法测定泥胡菜中
芦丁的含量 ,优化芦丁的提取工艺 ,方法简便 、准确 、
可靠 ,对泥胡菜质量控制 、药物开发提供了一定的科
学依据。
参考文献:
[ 1] 　江苏新医学院.中药大辞典 [ M] .上海:上海人民出版社 ,
1985.3038-3039.
[ 2] 　邹忠杰 , 鞠建华 , 杨峻山.泥胡菜化学成分研究 [ J] .中国药
学杂志 , 2006, 41(1):102-103.
[ 3] 　任玉琳 , 杨峻山.中药泥胡菜化学成分的研究(一)[ J].中
国中药杂志 , 2001, 6:405-406.
[ 4] 　任玉琳 , 杨峻山.中药泥胡菜化学成分的研究 [ J].药学学
报 , 2001, 36(10):746-749.
[ 5] 　任玉琳 , 杨峻山.泥胡菜中两个新化合物的结构研究 [ J] .药
学学报 , 2002, 37(6):440-443.
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　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　第 28卷