全 文 :西藏不同区域砂生槐在不同采收时间的花、茎、叶及
种子中苦参碱、氧化苦参碱含量比较
王聚乐 崔超英 徐福春 普 珍 玉 珍 央 拉
(西藏大学医学院高原医学研究中心 西藏拉萨850000)
摘要:目的:测定西藏不同区域产砂生槐在不同采收时间花、茎、叶及种子中的苦参碱与氧化苦参碱
的含量,为其合理采收利用提供科学依据。方法:使用高效液相色谱(HPLC):SHIMADZU C18色谱柱
(150×4.6);流动相:甲醇(0.05mol/L)-磷酸二氢钠溶液(含磷酸2ml/L)-高氯酸钠(15ml:85ml:0.5g),检
测波长为215nm,流速为0.7ml/min,柱温为室温。结果:种子中氧化苦参碱、苦参碱含量较高,最高的为日
喀则七月份采种子,苦参碱含量(24.48mg/g),氧化苦参碱含量(51.125mg/g)。结论:砂生槐花、茎、叶及种
子中均含有苦参碱和氧化苦参碱,不同区域、不同采收时间其含量有差异,种子采收7月份最佳,利用叶
子应在6-7月。
关键词:砂生槐;苦参碱;氧化苦参碱;高效液相色谱
中图分类号:S792 文献标识码:A 文章编号:1005-5738(2012)01-028-04
收稿日期:2011-11-09
基金项目:2009年度西藏自治区重点科研项目“砂生槐对西藏地区乙肝特殊类型治疗疗效的研究与开发”阶段性成果,项目
号:KJTGX1-10-8
第一作者简介:王聚乐,男,汉族,陕西咸阳人,西藏大学医学院教授,主要研究方向为藏药药效学、毒理学。
通讯作者简介:崔超英,女,藏族,西藏拉萨人,西藏大学医学院教授,主要研究方向为高原医学、西藏乙肝。
砂生槐(Sophora moorcroftiana(Benth.)Baker)为豆科植物,藏医中药名为觉伟哲吾。《中华本草藏药卷》
记述其味苦性凉,消炎解毒、催吐,主治湿热黄疸、白喉、痢疾、赤巴病、消化不良、虫病等[1]。在《度母本草》
中记述其味苦,气不香。《甘露本草明镜》中记述味极苦,消化后味苦,性凉。研究表明,砂生槐含有多种中
药化学成分,地上部分含有 α-苦参碱、氧化苦参碱和槐根碱;果实含氧化苦参碱1.64%、氧化槐根碱
0.5%、苦参碱0.172%和槐根碱0.005%[2];根含砂生槐黄烷酮H、I、J和甘草异黄酮A、山豆根黄烷酮A和菜
豆素,尚含砂生槐黄烷酮G、砂生槐异黄酮A、砂生槐黄烷酮B、甘草异黄酮B、毛蕊异黄酮、L-山槐素及苜
蓿酚。苦参碱和氧化苦参碱是砂生槐主要药用成分,具有抑制肿瘤细胞生长、抗风湿、抗肝纤维化、保肝、
促进肝功能恢复、抑制乙肝病毒、抗菌、升高白细胞数等多种药理作用[3-6]。本实验应用HPLC 法测定砂生
槐中苦参碱和氧化苦参碱含量,并比较了日喀则地区、曲水县、山南地区等地产砂生槐在不同采收时间
花、茎、叶、种子中苦参碱和氧化苦参碱的含量,对指导这一珍贵资源的合理利用具有重要意义。
西藏大学学报(自然科学版)
JOURNAL OF TIBET UNIVERSITY
Vol.27 No.1
May 2012
第27卷第1期
2012年5月
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DOI:10.16249/j.cnki.54-1034/c.2012.01.004
1仪器与供试药材
1.1 仪器
岛津LC-20AT型高效液相色谱仪、SPD-20A 型检测器、N2000色谱工作站、超声波仪、真空过滤装置、
水系膜及油系膜。
1.2 试药
苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用批号:519-02-08);氧化苦参碱对照品
(中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用,批号:16837-52-8);甲醇为色谱纯,其它试剂为分析纯。
1.3 供试品
采于西藏日喀则地区、曲水县、山南地区等地不同时间砂生槐 Sophora moorcroftiana(Benth.)Baker的
花、茎、叶及种子。
2方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:SHIMADZU-C18柱(150mm×4.6mm,5μl);流动相为甲醇0.05mol/L-磷酸二氢钠溶液(含磷酸
2ml/L)-高氯酸钠(15ml:85ml:0.5g);检测波长为215nm,流速为1.0mL·min-1;柱温为室温。理论板数按氧
化苦参碱峰计算应不低于3000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取苦参碱及氧化苦参碱对照品适量,加流动相制成每lml含苦参碱5μg及氧化苦参碱50μg
的混合溶液。
2.3供试品溶液的制备
供试样品细粉约1.0~2.0g,置具塞锥形瓶中,加入流动相50ml,精密称定重量,超声处理30分钟,
取出,自然冷却后,用流动相补足重量,摇匀,过滤,取滤液待用。
2.4 线性关系考察
分别吸取对照品溶液2,4,6,8和10μL进样分析,按上述色谱条件测定。以对照品含量为横坐标,峰
面积积分值为纵坐标,进行线性回归。得苦参碱回归方程为:Y=1750.8X-13953,r=0.9993;氧化苦参碱回
归方程为:Y=2332.7X-227284,r=0.9991。
2.5精密度实验
精密吸取对照品溶液5μL,连续注入液相色谱仪5次,按上述色谱条件测定面积积分值。苦参碱精
密度试验的RSD为1.27%,氧化苦参碱精密度试验的RSD为1.55%。
2.6稳定性实验
取同一批次的供试品溶液,分别于0,2,4,6和8h按上述色谱条件进样,分别测得苦参碱峰面积RSD
值为1.71%;氧化苦参碱的峰面积RSD值为1.47%,表明样品在8h内稳定。
2.7重现性实验
取同一批次的供试品,按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液6份,分别按上述色谱条件测定面
积积分值。苦参碱的峰面积RSD值为2.19%;氧化苦参碱的峰面积RSD值为1.82%,表明此方法有良好的
重现性。
2.8回收率实验
精密称取已知含量的同一批次供试品1.0g,加入对照品溶液,制备供试品溶液6份,按上述色谱条件
测定面积积分值,分别计算苦参碱和氧化苦参碱含量,计算回收率。苦参碱平均回收率为98.1%,RSD为
3.01%;氧化苦参碱平均回收率为98.9%,RSD为2.77%。
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2.9样品测定
取样品,制备供试品溶液3份。按拟定好的色谱条件分别进样,对照品进样5μL,样品进样3~6μL,
测定峰面积,计算含量,供试品的含量以3份样品的平均值计。
2.10 结 果
种子中氧化苦参碱及苦参碱含量较高,最高的为日喀则七月份采种子,苦参碱含量为24.48mg/g,氧
化苦参碱含量为51.125mg/g,结果见表1-3。
3讨论
目前测定苦参碱、氧化苦参碱的方法很多,有紫外-可见分光光度法、薄层色谱扫描法、高效液相色
谱法等方法。这些方法主要用于中药材苦参、苦豆子及部分中成药中苦参碱含量的测定,比较而言高效液
相色谱法最为准确,所以我们选择用HPLC法测定西藏地区产砂生槐中苦参碱、氧化苦参碱的含量。经实
验研究色谱柱:SHIMADZU-C18柱(150mm×4.6mm,5μ);甲醇0.05mol/L-磷酸二氢钠溶液(含磷酸2ml/L)
-高氯酸钠(15ml:85ml:0.5g)为流动相;检测波长为215nm,流速为1.0mL·min-1柱温 室温条件下可以
较好地测定砂生槐中苦参碱、氧化苦参碱的含量,该方法简便、快速、准确且分离效果好。
实验测试结果表明,西藏不同产地、不同采收时间、砂生槐不同药用部位苦参碱和氧化苦参碱含量有
差异。种子中氧化苦参碱及苦参碱含量均较高,最高的为日喀则7月份采种子,苦参碱含量为24.48mg/g,
氧化苦参碱含量为51.125mg/g。山南地区、拉萨地区曲水县7月份种子中苦参碱、氧化苦参碱的含量也较
样品 苦参碱含量(mg/g)氧化苦参碱含量(mg/g)
五月花 1.0 19.6
五月叶 1.725 30.5
五月茎 0.55 4.7
六月花 1.55 23.175
六月叶 1.575 22.9
七月叶 1.325 20.975
七月种子 0.8 29.4
八月叶 0.7825 11.35
八月种子 3.01 22.4825
表1 山南地区产砂生槐不同采收时间
花、茎、叶及种子中苦参碱和氧化苦参碱含量
样品 苦参碱含量(mg/g)氧化苦参碱含量(mg/g)
五月花 2.025 31.55
五月叶 2.343 3.575
五月茎 1.835 11.3
六月花 2.435 26.55
六月叶 2.83 26.25
七月叶 2.02 25.05
七月种子 24.48 51.125
八月叶 1.45 16.775
八月种子 6.925 34.975
表2 日喀则地区产砂生槐在不同采收时间
花、茎、叶及种子中苦参碱和氧化苦参碱含量
样品 苦参碱含量(mg/g)氧化苦参碱含量(mg/g)
五月花 1.5 39.3
五月叶 1.35 2.85
五月茎 0.45 5.725
六月花 1.075 16.6
六月叶 1.675 23.8
七月叶 4.25 22.875
七月种子 1.05 7.7
八月叶 1.55 14.425
表3 曲水县产砂生槐在不同采收时间
花、茎、叶及种子中苦参碱和氧化苦参碱含量
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高,因此采集种子应在7月份为好。叶子中苦参碱、氧化苦参碱的含量从5月开始逐渐升高,6-7月份达
到高峰,6、7月份含量差距不大,8月份开始下降,因此采集叶子应在6、7月份。另外茎、花中都含有苦参
碱、氧化苦参碱,茎中含量较低。
传统藏药砂生槐以种子入药,本测试结果表明此方法比较合理。叶子也可以作为提取苦参碱、氧化苦
参碱的原料。为了更有效地利用砂生槐,应该选择适当的时间进行采收。
参考文献
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Comparing Sophocarpidine and Ammothamnine contents
in flower, stem, leaf and seed of Sophora at different
harvesting time and different region in Tibet
Wang Ju-le Xu Fu-chun Pu-Zhen Yu-Zhen Yang-La Cui Chao-ying
(Medical College of Tibet University, Lhasa 850000, Tibet)
Abstract: In the present paper, the content of sophocarpidine and ammothamnine in flowers, stems, leaf and
seeds of Sophora collected at different time in different regions in Tibet were measured to provide scientific
basis for reasonable harvesting and use of recourse by using High Performance Liquid Chromatogram ((HLPC)
SHIMADZUC18 chromatic column 150 ×4.6, mobile phase including colonial spirit (0.05mol/L), sodium
dehydrogen phosphate solution (phosphoric acid 2ml/L), Sodium perchlorate (15ml: 85ml:0.5g), and 215nm of
detecting wavelength, 0.7ml/min of velocity rate at room temperature. The results showed the highest content of
ammothamnine and sophocarpidine are in seed collected in July from Shigaze and the content of
sophocarpidine and ammothamnine are difference between regions and at different collecting times.
Keywords: Sophora moorcroftiana; Sophocarpidine; Ammothamnine; H PLC
[责任编辑:郭小芳]
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