全 文 ：［质 量］
HPLC法同时测定达斯玛保丸中木香烃内酯、异土木香内酯和土木香内酯
倪 琳， 杨 锡
(甘肃省食品药品检验所，甘肃省中药品质与安全评价工程技术研究中心，甘肃 兰州 730000)
收稿日期:2011-05-17
作者简介:倪 琳(1979—) ，女，主管药师，从事中成药质量分析及检验工作。Tel : (0931)4968949，E-mail :niLingmanager937@ sohu． com
摘要:目的 建立达斯玛保丸(诃子、木香、藏木香、紫草茸、翼首草、藏茜草、安息香、麝香、铁棒锤、镰形棘豆、多刺绿绒
蒿、兔耳草、金腰子、榜嘎、止泻木子)中木香烃内酯、异土木香内酯和土木香内酯的测定方法。方法 采用 HPLC法对制
剂中主要成分木香烃内酯、异土木香内酯和土木香内酯进行定量分析。色谱柱为 CAPCELL PAK C18(4. 6 mm × 250 mm，
5 μm) ;流动相为乙腈 － 0. 4 %磷酸溶液(58 ∶42) ;检测波长 225 nm，柱温 30 ℃，体积流量 1. 0 mL /min。结果 木香烃内
酯在 0. 199 6 ～ 3. 493 μg、异土木香内酯 0. 219 6 ～ 3. 843 0 μg、土木香内酯 0. 210 6 ～ 3. 685 5 μg范围内均呈良好的线性
关系，平均回收率分别为 97. 57%、98. 91 %、97. 21%，RSD 分别为 1. 65%、1. 37%、1. 44%(n = 6)。结论 方法准确可
靠，专属性强，结果稳定，重复性好，可有效控制制剂质量。
关键词:木香烃内酯;异土木香内酯;土木香内酯;HPLC;达斯玛保丸
中图分类号:R927. 2 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2012)04-0664-03
Determination of costunolide，isoalantolactone and alantolatone in Dasi Mabao
Pill by HPLC
NI Lin， YANG Xi
(Gansu Provincial Institute for Food and Drug Control，Gansu Provincial Traditional Chinese Medicine Quality and Safety Evaluation of Engineering Tech-
nology Research Center，Lanzhou 730000，China)
ABSTRACT:AIM To establish a method for determining costunolide，isoalantolactone and alantolatone in Dasi
Mabao Pill (Chebulae Fructus，Aucklandiae Radix，Inulae Radix，Laccifer laccae Resinatum，Pterocephali Herba，
Rubiae Radix et Rhizoma，Benzoinum，Moschus，Aconiti szechenyiani Radix，Oxytropis falcatae Herba，Meconopsis
horridula Herba，Lagotis brachystachydis Herba，Chrysosplenii sinici Herba，Aconiti Herba，Holarrhenae antidysente-
riacae Semen)． METHODS The costunolide，isoalantolactone and alantolatone in Dasi Mabao Pill were deter-
mined by HPLC． CAPCELL PAK C18(4. 6 mm ×250 mm，5 μm)column was used． The mobile phase was aceto-
nitrile － 0. 4 % phosphoric acid (58 ∶ 42)with the flow rate of 1. 0 mL /min． The column temperature was main-
tained at 30 ℃ and UV detection wavelength was set at 225 nm． RESULITS The costunolide，isoalantolactone
and alantolatone were linear at the ranges of 0. 199 6 － 3. 493 μg，0. 219 6 － 3. 843 0 μg，0. 210 6 － 3. 685 5 μg，
respectively． The average recoveries were 97. 57%，98. 91 %，97. 21% and RSDs were 1. 65%，1. 37% and
1. 44%，respectively (n = 6)． CONCLUSION The established method is accurate，reliable and specific，and
can be used to control the quality of Dasi Mabao Pill．
KEY WORDS:costunolide;isoalantolactone;alantolatone;HPLC;Dasi Mabao Pill
藏药达斯玛保丸(藏文读音:达斯玛保日布)收
载于《中华人民共和国卫生部药品标准(藏药) (第
一册)》，由诃子、木香、藏木香、紫草茸、翼首草、藏
茜草、安息香、麝香、铁棒锤、镰形棘豆多刺绿绒蒿、
兔耳草、金腰子、榜嘎、止泻木子十五味药组成，具有
清热解毒、消炎杀疠的功效，用于脑膜炎、流行性感
冒、肺炎、咽炎、疮疡、各种瘟疠疾病［1］。原标准中
只有检查项。方中木香的主要有效成分为木香烃内
酯;藏木香中主要有效成分为土木香内酯和异土木
香内酯。本试验采用高效液相色谱测定木香烃内
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酯、土木香内酯和异土木香内酯，方法简便，结果准
确可靠，为有效控制产品质量提供了依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Waters Alliance e2695 四元泵，Waters
2998 二级管阵列检测器;Mettler AE240 电子天平。
1. 2 试药 木香烃内酯对照品(批号:111524-
200402)、土木香内酯对照品(批号:110760-200507)、
异土木香内酯对照品(批号:0761 -20002) ，均购自中
国药品生物制品检定所;达斯玛保丸样品(批号:
20100402、20100403、20100404)由青海久美藏药药业
有限公司提供;乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂
均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 分别精密称取木香烃内
酯、土木香内酯和异土木香内酯对照品适量，加甲醇
制成每 1 mL含木香烃内酯 0. 099 8 mg、土木香内酯
0. 021 06 mg、异土木香内酯 0. 019 8 mg 的混合溶
液，即得。
2. 2 供试品溶液的制备 取本品约 20 g，精密称
定，置锥形瓶中，精密加甲醇 50 mL，称定质量，超声
处理(功率 300 W，频率 40 kHz)30 min，放冷，用甲
醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2. 3 阴性对照溶液的制备 按供试品的处方和制
法，制成不含木香、藏木香的阴性样品，按上述供试
品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。
2. 4 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱选用
CAPCELL PAK C18柱(5 μm，4. 6 mm × 250 mm) ;
流动相为乙腈 － 0. 4 %磷酸溶液(58 ∶ 42) ;检测波
长为 225 nm;体积流量为 1. 0 mL /min;对照品进样
体积为 20 μL，样品为 10 μL;柱温为 30 ℃。理论板
数按木香烃内酯计算应不低于 3 000。对照品，供试
品以及阴性对照色谱图见图 1。阴性对照无干扰。
图 1 混合对照品(A)、达斯玛保丸(B)和阴性对照(C)高效液相色谱图
Fig． 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances (A)，Dasi Mabao Pill(B)and negative sample solution(C)
1. 木香烃内酯 2. 异土木香内酯 3. 土木香内酯
1. costunolide 2. isoalantolactone 3. alantolatone
2. 5 工作曲线与线性关系 分别精密吸取木香烃
内酯对照品溶液(0. 099 8 mg /L)、土木香内酯对照
品溶液(0. 105 3 mg /L)异土木香内酯对照品溶液
(0. 109 8 mg /L)的混合溶液 2、8、20、25、30、35 μL，
注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，以峰面积积分
值为横坐标(X) ，对照品溶液的进样量(μg)为纵坐
标(Y) ，分别作图，分别得到近过原点的一条直线，回
归方程:木香烃内酯 Y = 5. 895 3 × 10 －7 X + 5. 585 6 ×
10 －5，r = 0. 999 97，异土木香内酯 Y = 8. 343 7 ×
10 －7 X － 0. 010 6，r = 0. 999 94，土木香内酯 Y =
6. 735 1 × 10 －7 X + 2. 739 5 × 10 －3，r = 0. 999 96。结
果表明，木香烃内酯在 0. 199 6 ～ 3. 493 0 μg、土木
香内酯 0. 210 6 ～ 3. 685 5 μg、异土木香内酯 0. 219 6
～ 3. 843 0 μg范围内均呈良好的线性关系。
2. 6 精密度试验 精密吸取木香烃内酯、土木香内
酯、异土木香内酯对照品溶液各 5 μL，注入液相色
谱仪，连续进样 6 次，测定峰面积，木香烃内酯 RSD
为 1. 93%、土木香内酯 RSD 为 0. 41%、异土木香内
酯 RSD为 2. 22%，表明仪器精密度良好。
2. 7 稳定性试验 取同一供试品溶液，每隔 2 h 进
样 1 次，结果在 12 h 内，供试品溶液中木香烃内酯、
土木香内酯、异土木香内酯峰面积稳定，RSD 分别
为 1. 14%、1. 71%、1. 31%。
2. 8 重复性试验 取达斯玛保丸(批号:20100404)6
份，每份约 20g，精密称定，按供试品溶液制备方法制
备，在确定的色谱条件下进行分析，木香烃内酯、土木
香内 酯、异 土 木 香 内 酯 RSD 分 别 为 1. 24%、
1. 36%、0. 85%。
2. 9 加样回收率试验 取已知木香烃内酯、异土木
香内酯、土木香内酯量的供试品(批号:20100404)6
份，每份约 5 g，精密称定，置 50 mL 量瓶中，分别精
密加入一定量的木香烃内酯对照品(0. 499 mg /L)、
异土木香内酯对照品(0. 795 6 mg /L)、土木香内酯
对照品(0. 105 3 mg /L)对照品溶液，按供试品溶液
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制备方法制备，依法测定，即得。见表 1。
表 1 木香烃内酯、土木香内酯、异土木香内酯加样回收率
试验结果 (n =6)
Tab． 1 Recovery test results of costunolide，alantolatone
and isoalantolactone (n =6)
成分
原有
量 /mg
加入
量 /mg
测得总
量 /mg
回收
率 /%
平均回
收率 /%
RSD /
%
2. 613 1 1. 996 4. 565 4 97. 81
2. 556 2 1. 966 4. 537 6 99. 27
木香烃内酯 2. 579 5 2. 495 4. 953 0 95. 13 97. 57 1. 65
2. 583 8 2. 495 5. 060 8 99. 28
2. 576 6 2. 97 5. 468 8 97. 38
2. 572 3 2. 97 5. 439 5 96. 54
3. 996 5 3. 182 4 7. 219 2 101. 27
3. 909 5 3. 182 4 7. 039 7 98. 36
异土木香内酯 3. 945 1 3. 978 7. 812 1 97. 21 98. 91 1. 37
3. 951 7 3. 978 7. 867 2 98. 43
3. 940 6 4. 773 6 8. 612 5 97. 87
3. 934 1 4. 773 6 8. 676 2 99. 34
2. 920 5 1. 684 8 4. 591 1 99. 16
2. 857 0 1. 684 8 4. 480 8 96. 38
土木香内酯 2. 882 9 2. 106 4. 909 3 96. 22 97. 21 1. 44
2. 887 8 2. 106 4. 948 9 97. 87
2. 879 7 2. 527 2 5. 360 1 98. 15
2. 874 9 2. 527 2 5. 288 1 95. 49
2. 10 样品的测定 取 3 批达斯玛保丸按供试品溶
液的制备方法制成供试液，分别进样，测得峰面积
值，计算达斯玛保丸中木香烃内酯、土木香内酯、异
土木香内酯的含有量。见表 2。
表 2 样品测定结果 (n =3)
Tab． 2 Results of sample determination (n =3)
批号
木香烃
内酯 /
(mg·g － 1)
RSD /
%
土木香
内酯 /
(mg·g － 1)
RSD /
%
异土木
香内酯 /
(mg·g － 1)
RSD /
%
20100402 0. 49 0. 21 0. 55 0. 27 0. 89 0. 42
20100403 0. 52 0. 13 0. 57 0. 35 0. 93 0. 23
20100404 0. 49 0. 99 0. 56 0. 88 0. 90 1. 27
3 讨论
3. 1 提取时间的选择 实验中采取甲醇超声处理，
考察了不同超声时间 20、30、40、60 min 所提取的 3
种成分的含有量，结果以超声 30 min 提取完全，随
超声时间的延长，3 种成分含有量均有所下降，故本
实验确定超声处理 30 min作为样品的提取方法。
3. 2 流动相的选择 曾试验甲醇-水［2-6］、乙腈 －
0. 04%甲酸［7］、乙腈 － 0. 04%磷酸［8-9］、甲醇 － 0. 2%
磷酸［10］、甲醇-乙腈-水［11-12］、乙腈 － 0. 1 %磷酸［13］，
供试品色谱中木香烃内酯、土木香内酯、异土木香内
酯均不能达到基线分离。在木香烃内酯与异土木香
内酯之间的峰经试验确定是去氢木香内酯，但未达
到基线分离，经过多次调整流动相，去氢木香内酯达
不到基线分离，故正文中未提去氢木香内酯。在文
献［13］流动相基础上适当调整，木香烃内酯、土木
香内酯、异土木香内酯分离效果良好，最后确定乙腈
－ 0. 4%磷酸(58 ∶ 42)作为本实验流动相的方法。
3. 3 检测波长的选择 采用 DAD 在 190 ～ 400 nm
全波长扫描，结果木香烃内酯最佳吸收为 225 nm，
土木香内酯、异土木香内酯最佳吸收为 194 nm，在
225 nm处均有吸收且共同吸收最大。故选择 225
nm作为检测波长。
3. 4 采用 HPLC 法同时测定达斯玛保丸中木香烃
内酯、土木香内酯、异土木香内酯 3 种成分的含有量
尚未见文献报道，本方法缩短了分析时间，提高了工
作效率，且节约了流动相。
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