全 文 ：2 8 5紫杉醇的生物合成 : 紫杉烷 13 以 . 轻化酶
是依赖细胞色素 P痴的单加氧酶 〔英 〕 / S te la h
J. 二 / P N AS 一20 1
,
9 8 ( 2 4 ) 一 13 59 5一 13 6X[ )
对诱导 的红豆杉细胞进行差异显示 ,
获得 了一个细胞色素 P 45 。 基 因家族 , 其中
一个在酵母 中表达 , 被认为是紫杉烷 10p -
经化酶 ( t a x an e l o p一h y dr o x y l a s e ) 。 对在酵
母 中不能表达的克隆 , 采用秋粘虫 一杆状病
毒体系进行异源表达 , 试图获得这些克隆
的基因功能 。
方法和材料 : 用带有细胞色素 P 45 。 开
放阅读框 的重组杆状病毒和带有东北红豆
杉 N A D P :H c yt P 4 5。 还原酶的重组杆状病毒
共 同感染秋粘虫 昆虫 细 胞 。 用紫衫二 烯
( t a x ad ien e )
、 紫杉二烯 一5一醇 ( axt iad en 一 5刃 l ) 、
紫 杉 二 烯 一 5一 基 乙 酸 酷 ( axt a id e n 一 5一yl
ac e at et ) 为底物对酶进行活性分析 , 反应
产物通过 G C 一 M S 、 反相放射 H P L C 、 N M R
等鉴定 , 并用示差光谱和免疫杂交进行酶
的特性研究 。
结果与结论 : 反应 产物经鉴定为紫杉
二烯 一 5 , 1 3一二醇 , 表 明己分离到编码细胞色
素 P 45 。的紫杉烷 1 3 a 一轻化酶的 c D N A 克隆 。
该克隆的开放阅读框为 1 4 58 bP , 编码 4 85
个氨基酸残基 , 分子量为 54 652 。 序列分
析表 明该克.隆与紫杉烷 10 p一轻化酶基因有
63 % 的同源性 。 其对应的酶的最适 p H 值
为 7 . 5 左右 , 对底物紫杉二烯 一 5 一醇和紫杉
二烯一 5一基乙酸酷的 K m 值分别为 (24 士9) “ M
和 ( 14 士4 ) 林M 。
实验 中发现紫杉烷 1 3 a 一羚化酶仅催化
紫杉 二烯 一5 一醇 和紫杉二烯 一5 一基 乙酸酷 底
物 , 而对紫杉二烯 一 5 , 10 一二醇 5 一 乙酸酷不
起作用 ; 而 以前研究中发现紫杉烷 10 p一轻
化酶仅催化紫杉 二烯 一 5一基乙酸酷底物 , 而
对紫杉 二烯一 5 , 13 一二醇不起作用 。 这些结果
表明紫衫烷 1 3以 一轻化酶和紫杉烷 1 0p一轻化
酶都有严格的底物选择性 , 因此在紫杉醇
生物合 成中的三轻基中间体不会是紫杉 -
4 (2 0 )
,
1 2 ( 12 )
一二烯 一5 , 10 , 1 3一三 醇及其相应
的乙酸酷 , 紫杉醇的生物合成至少存在两
条途径 , 一条经过紫杉二烯 一 5 , 10 一二醇 5 -
乙酸酷 , 另一条经过紫杉二烯一 5 , 13一二醇 。
(黄 新摘译 黄璐琦校 )
2 8 6 和尚菜中的 乙炔和单菇糖昔 〔英 〕 /
K w o n H… 刀 P l a n t a M e d一 2 0 0 1 , 6 7 ( 5 ) , 一4 8 2一
4 8 4
菊科植物和尚菜 切凌陇肠树闭 肋朋勿妇训 )
地上部分在韩 国用于治疗脓肿 、 出血和炎
症 。 据报道仅从中分离出咖啡酸衍生物 。
本次从其甲醇提取物中得到 2 个新化合物
( l
、
2 ) 以及 8 个已知成分 ( 3一 10 ) 。
将干燥和 尚菜地上部分 ( 4 . 4 gk ) 切碎 ,
用甲醇室温提取 3 次 , 甲醇提取物混悬于
水 , 依次用二氯 甲烷 、 乙酸乙 酷和 正丁醇
分配 。 二氯甲烷提取部分反复上硅胶柱层
析 , 得到化合物 1 、 3 ~ 7 。 乙酸乙 酷部分
反复上 s e p h a d e x L H 一 2 0 、 硅胶柱 , 得到化
合物 2 、 8一 10 。 己知化合物分别为植醇 ( 3 ) 、
l
一
O
一
(9乙 12乙 15-2 辛癸三烯酞 )甘 油 ( 4 ) 、
1
一
O
一己癸 酞甘油 ( 5 ) 、 卜O 一 (9 2, 12 -2 辛癸三
烯酸 )甘油 ( 6 )、 花揪搪昔 ( 7 )、 野樱昔 ( 8 ) 、
()Z
一
3
一己烯基卜 D 一毗喃葡糖普 ( 9 ) 、 9一轻基
里哪酞糖昔 ( 1 0 ) 。
新成分 l ( 10 m g ) 结构为 1一 o 一阿魏酞 -
十 四 一 4 E, 6 E , 12 -E 三烯 一 8 , 10一二 炔 , 淡黄色
油 , 分子式 e 2 4 H 2 40 。 。 新成分 2 ( 1 0毗 )
为 9 一轻基里哪酞 一 3一。 一 ( 4一O 一香豆酞 ) 一p一D 一毗
喃葡糖昔 , [a 昭一 27 . 5 9 。 ( c = 0 . 14 , 甲醇 ) ,
分子式 C 2 5 H 3 40 9 。
(清 风摘译 )