全 文 ：第 25卷 第 6期
2 0 0 7年 6月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 25 No. 6
Jun. 2 0 0 7
中华中医药
1139
学刊
复方土牛膝糖浆剂抗病毒作用的实验研究
梅全喜 1,钟希文1,崔小兰 2,田素英3,高玉桥 1,
吴惠妃1,林 慧 1,高英杰 2,金亚弘2,张 毅 2,李德凤2
( 1. 广州中医药大学附属中山中医院,广东 中山 528400; 2.中国中医科学院实验中心, 北京 100700;
3.广东药学院中山校区实验中心, 广东 中山 528405)
摘 要:目的: 观察复方土牛膝糖浆剂在体外和动物模型上的抗病毒作用。方法: 用细胞培养法, 通过观察细
胞病变评价复方土牛膝糖浆剂对常见的致上呼吸道感染的柯萨奇 B族病毒 4型 ( CoxB4 )、副流感病毒 ( HV J)、呼
吸道合胞病毒 ( RSV )、单纯疱疹病毒 (H SV -Ⅰ )所致的细胞病变 ( CPE)的抑制作用;通过用流感病毒滴鼻感染小
鼠来研究复方土牛膝糖浆剂对病毒感染小鼠所引起的死亡保护作用。结果: 复方土牛膝糖浆在体外对 CoxB4、
RSV病毒的致细胞病变作用有明显抑制作用,其 IC50分别为 2. 0、2. 8LL糖浆 /mL, T I分别为 5. 6和 4, 对 HSV - 1、
副流感 - 1型病毒的致细胞病变有一定的抑制作用。其 IC50分别为 4. 0、5. 0LL糖浆 /mL, T I分别为 2. 8和 2. 24。
在小鼠感染病毒 15天内, 复方土牛膝糖浆 5mL /( kg# d)剂量组动物的死亡率为 55% ; 死亡保护率分别为
38. 39% ,与感染对照组相比有显著差异 ( P < 0. 05),复方土牛膝糖浆 10m L /( kg# d)、5mL /( kg# d)两个剂量组
小鼠的存活天数较感染组明显延长, 与对照组比较有显著性差异。生命延长率分别为 17. 67% 和 22. 22%。结
论:复方土牛膝糖浆剂无论在体内或是体外均有较明显的抗病毒作用。
关键词:复方土牛膝糖浆剂;抗病毒; 细胞病变;小鼠死亡保护
中图分类号: R285. 5 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2007) 06 -1139 - 03
Empirica l Study of Antiv iro tic E ffect forCompound Chinese Eupatorium Syrup
M EI Quan-x i1, ZHONG Xi-w en1, CU IX iao-lan2, T IAN Su-y ing3, GAO Yu-qiao1,
WU Hu i-fe i1, L IN Hu i1, GAO Y ing-jie2, JIN Ya-hong2, ZHANG Yi2, L IDe-feng2
( 1. H ospital o f TCM of Zhongshan, Guangzhou Unive rsity of TCM, Zhong shan 528400, Guangdong, China;
2. Labo rato ry Center of China Academ y o f Chine seM ed ica l Sc ience s, Beijing 100700, China;
3. Labo rato ry Center of Zhong shan Co llege, Guangdong Pha rm aceutica l University, Zhongshan 528405, Guangdong, Ch ina)
Abstrac:t Ob jective: Obse rve the antiv iro tic effect of Compound Chinese Eupa to rium Sy rup ( CES) in v itro and an-
im al m ode ls. M ethods: To evalua te the CES e ffec t of depressing the cy topa th ic effec ts caused by CoxB4, HVJ,
RSV and HSV - by ce ll cu ltu re. M ice we re infected w ith influenza virus, the effec t o f CES and dea th p reven tion rate
we re investiga ted. Results: CES can depress the cy topathic effec ts caused by CoxB4, HVJ, RSV and HSV -. The dea th
prevention rate of the infected m ice in the CES group [5mL /( kg# d) ] w as 38. 39% . The e ffec t devia tion be tw een the
CES g roup and the contro l g roup w as sign ifican.t Conc lus ion: CES has conspicuous antiv iro tic effec.t
Keywords: com pound Chinese rupa to rium syrup; antiv irus; cytopa th ic effec ;t dea th prevention rate
收稿日期: 2007 - 01 - 09
基金项目:广东省中医药管理局资助项目 ( 1040188)
作者简介:梅全喜 ( 1962 - ),男,湖北蕲春人,教授、主任中药师, 硕
士研究生导师,主要从事中药研究与开发工作。
复方土牛膝糖浆剂是中山市中医院的自制制剂, 临床
上用于治疗急慢性咽喉炎、扁桃体炎等上呼吸道感染病症
疗效显著 [1 ]。为该复方在临床上的应用提供科学依据,笔
者对复方土牛膝糖浆剂的抗病毒作用进行了研究, 现把研
究情况报道如下。
1 材料与试剂
1. 1 药品 复方土牛膝糖浆剂 ( 0. 92g /mL, 取广东土牛
膝、岗梅根、山芝麻等煎煮 2次,第 1次煎煮 2h, 第 2次煎煮
1. 5h,合并两次滤液, 浓缩至密度为 0. 92g /mL,即可。)中山
中医院制剂室提供, 批号: 060213; 实验时糖浆稀释为 1B
128~ 1B1024 4个稀释度用于实验。病毒唑,湖北滨湖制药
厂生产,批号: 970512, 体外时用量为 180Lg /mL; 体内时小
鼠按临床等效剂量 0. 07g /( kg# d)灌胃给药。
1. 2 病毒 柯萨奇 B族病毒 4型 ( CoxB
4
)、副流感病毒
( HVJ)、呼吸道合胞病毒 ( RSV )、单纯疱疹病毒 ( HSV -
Ⅰ )、分别购自中国预防医学科学院病毒研究所及儿科研
究所,本实验室传代后使用。流感病毒亚甲型鼠肺适应株
( FM1), 购自中国预防医学科学院病毒研究所, 由本研究室
传代, - 70e 保存备用。
1. 3 细胞 人喉癌传代细胞 H ep - 2株, 购自中国预防医
学科学院病毒研究所,本实验室传代后使用。
1. 4 细胞培养液 含 10%小牛血清、0. 29mg谷氨酰胺 /
m L、100U /mL青、链霉素的 Eag le s MEM (日本日水制药株
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DOI：10.13193/j.archtcm.2007.06.52.meiqx.020
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学刊
式会社出品 ); 细胞维持液,除所含小牛血清为 2% 外,其他
含量均同培养液。
1. 5 主要仪器 CO2培养箱, 日本 Yam ato松株式会社产
品。倒置显维镜,日本 O lym pus产品。
1. 6 动物 ICR小鼠,雌雄兼用。体重为 ( 14 ? 1) g, 由北
京维通利华实验动物技术有限公司提供, 许可证编号:
SCXK (京 ) 2002 -0003。
1. 7 统计学处理 实验结果用 ( x¸ ? s )表示, 数据采用
SPSSV10. 0软件包进行分析,用 t检验。
2 实验方法
2. 1 复方土牛膝糖浆的体外抗病毒实验 [ 2- 3 ] ①药物对
Hep -2培养细胞的毒性试验: 实验前将复方土牛膝糖浆用
Eag le s培养液作 1B2~ 1B512倍比稀释后, 加到已长成单层
的 H ep - 2细胞培养板中, 100LL /孔, 每个稀释度药液做 4
个复孔,同时设正常细胞对照。将培养板置 37e 5% CO2
培养箱中培养 4天,置显微镜下观察细胞生长情况,确定细
胞不出现明显退变的最低稀释倍数 (最大浓度 ),实验时顺
延做到最小有效浓度 (即最大稀释倍数 )。按 Reed -
M uench法计算 50% 毒性浓度 ( TC50 )和最大无毒浓度
( TC0 )。结果见表 1。
表 1 复方土牛膝糖浆对培养细胞的 TC0 TC50 (LL /mL )
药液 原药液 TC0 TC50
复方土牛膝糖浆 原糖浆 7. 8 11. 2
病 毒 唑 4m g /m L 500Lg /mL 714Lg /mL
②对病毒致细胞病变作用的影响: 取已长成单层细胞
的培养板, 倒掉培养液, 接种 100TC ID50的不同病毒液
50LL, 置 37e 5% CO 2培养箱中吸附 1h后, 倒掉病毒液,用
不含小牛血清的 Eag le s维持液洗细胞面 2次后,加入相应
稀释度的药液 100LL /孔。同时设病毒对照、阳性对照药及
正常细胞对照。置 37e 5% CO 2培养箱中培养, 每日倒置显
微镜下观察细胞病变, 当病毒对照组细胞病变为 + + + +
时记录实验结果。细胞病变按 6级标准判断, 并按 Reed -
M uench计算 50%有效浓度 ( IC50 )和治疗指数 ( T I) : -: 细
胞生长正常, 无病变出现; ? : 细胞病变少于整个单层的
10% ; 1: 细胞病变约占整个单层细胞的 25%以下; 2: 细胞
病变约占整个单层细胞的 50%以下; 3:细胞病变约占整个
单层细胞的 75%以下; 4: 细胞病变约占整个单层细胞的
75%以上。治疗指数 ( T I) = TC50 /IC50。
2. 2 复方土牛膝糖浆对流感病毒致小鼠死亡的保护作
用 [4 - 6] ①剂量设计: 人临床用量为 60mL /60( kg# d),
小鼠体内实验分别采用 20、10、5mL /( kg# d) 3个剂量组
(分别相当与人临床用量的 2倍、等倍和 1 /2倍 )。②病毒
引起小鼠死亡最小毒力的测定: 将病毒用生理盐水稀释成
0. 5~ 4LD
50
的不同病毒液, 取小鼠 50只, 每个稀释度 10
只, 0. 05mL /只滴鼻感染。观察动物的死亡情况,取感染后
15天内动物死亡率在 90%以上的浓度, 为实验时的感染
量。实验结果显示: 2LD50感染时,小鼠的死亡率为 90% ,故
将其定为实验时的感染量。③观察对动物死亡保护情况:
取小鼠 100只 ,按体重随机分成 5组。分别为复方土牛膝
糖浆 3个剂量组、病毒唑阳性对照组及病毒感染对照组。
各给药组灌胃给药,每天 1次, 每次 0. 2mL /10g体重, 连续
7天, 病毒对照组在同等条件下给予蒸馏水。给药第 2天
各组小鼠用乙醚轻度麻醉后,以 2个 LD50流感病毒液滴鼻
感染,每只 0. 05mL。记录感染后小鼠的死亡数, 计算死亡
率、死亡保护率及平均存活天数、生命延长率。计算公式分
别为:死亡率% =死亡动物数 /动物总数 @ 100﹪; 死亡保
护率% = (对照组死亡率 -实验组死亡率 ) /对照组死亡率
@ 100﹪;生命延长率 = (实验组平均存活天数 -感染组平
均存活天数 ) /感染组平均存活天数。
3 实验结果
3. 1 对病毒致细胞病变作用的影响 复方土牛膝糖浆在
体外对 CoxB4、RSV病毒的致细胞病变作用有明显抑制作
用,其 IC50分别为 2. 0、2. 8LL糖浆 /m L, T I分别为 5. 6和 4。
对 H SV -1、副流感 - 1型病毒的致细胞病变有一定的抑制
作用。其 IC50分别为 4. 0、5. 0LL糖浆 /m L, T I分别为 2. 8
和 2. 24(见表 2)。
表 2 复方土牛膝糖浆体外抗病毒实验
药液 病毒种 IC50 ( LL /mL) TI
复方土牛膝糖浆 C oxB4 2. 0 5. 6
H SV -Ⅰ 4. 0 2. 8
RSV 2. 8 4
副流感 -1 5. 0 2. 24
3. 2 复方土牛膝糖浆对流感病毒致小鼠死亡的保护作用
小鼠感染病毒 15天内,复方土牛膝糖浆 5m L /( kg# d)剂量
组动物的死亡率为 55% ;死亡保护率分别为 38. 39% , 与感
染对照组相比有显著差异 ( P < 0. 05),表示复方土牛膝糖
浆在此剂量时对流感病毒感染致小鼠死亡有显著的保护作
用 (见表 3)。
表 3 复方土牛膝糖浆对流感病毒致小鼠死亡的保护作用
组别 剂量
[m L /( kg# d) ]
动物数
(只 ) 死亡数
死亡率
(% )
保护率
(% )
病毒感染组 ) 20 18 90
病 毒 唑 0. 07g 20 3 15 83. 33* *
大剂 量组 20 20 14 70 22. 22
中剂 量组 10 20 12 60 33. 33
小剂 量组 5 20 11 55 38. 89*
注:与对照组比较: * * P < 0. 01, * P < 0. 05。
复方土牛膝糖浆 10m L /( kg# d)、5mL /( kg# d) 2个剂
量组小鼠的存活天数较感染组明显延长, 与对照组比较有
显著性差异。生命延长率分别为 17. 67%和 22. 22%。表
示复方土牛膝糖浆在此剂量时对流感病毒感染致小鼠死亡
有明显的保护作用 (见表 4)。
表 4 复方土牛膝糖浆对流感病毒致小鼠死亡的保护作用
组别 剂量
[m L /( kg# d) ]
动物数
(只 )
平均存
活天数
生命延长率
(% )
病毒感染组 ) 20 9. 90 ? 1. 88
病毒唑 0. 07g 20 13. 50 ? 1. 31* * 36. 36
大剂量组 20 20 11. 05 ? 2. 43 11. 61
中剂量组 10 20 11. 65 ? 2. 30* 17. 67
小剂量组 5 20 12. 10 ? 2. 17* * 22. 22
注:与对照组比较: * * P < 0. 01, * P < 0. 05。
4 讨 论
由实验结果表明, 复方土牛膝糖浆在体外对 CoxB4、、
RSV病毒的致细胞病变作用有明显抑制作用,对 HSV - 1、
副流感 -1型病毒的致细胞病变有一定的抑制作用。复方
土牛膝糖浆在 5mL /( kg# d)剂量时与感染对照组相比有
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收稿日期: 2007 - 01 - 29
基金项目:湖南省卫生厅中医药科研基金资助项目 ( 02015)
作者简介:王小娟 ( 1955 - ) ,女, 湖南长沙人,主任医师,硕士研究
生导师,主要从事肾脏疾病内科的临床研究。
显著差异 ( P < 0. 05), 对流感病毒感染致小鼠死亡有显著
的保护作用。在 10mL /( kg# d)、5mL /( kg# d) 2个剂量
时,小鼠的存活天数较感染组明显延长,与对照组比较有显
著性差异;生命延长率分别为 17. 67%和 22. 22%。表示复
方土牛膝糖浆在此剂量时对流感病毒感染致小鼠死亡有明
显的保护作用。对病毒致死的动物保护是综合评价抗病毒
药的重要实验,它既包含药物对病毒增殖的抑制作用,也包
含了病毒感染机体功能的保护以及对病毒毒素作用的对
抗。但该药的体内抗病毒作用机理究竟是哪一类, 或是同
时发挥作用还有待进一步的研究。
广东土牛膝是广东地区著名的喉科要药, 自上世纪 50
年代发现其防治白喉有效以来, 被广东各地普遍应用于治
疗咽喉疾病 [7 ],复方土牛膝糖浆剂就是以广东土牛膝清热
解毒,消肿利咽为主药,辅以清热解毒、利咽消肿、散瘀止痛
的岗梅根、水杨梅根 ,以增强其治疗咽喉肿痛的效力。同时
佐以一点红清热凉血、解毒, 山芝麻清热燥湿解毒, 加强其
解毒疗效,佐以淡竹叶、菊花清热除烦、疏风散热,以增加其
清热作用。故诸药合用,共奏良好的清热解毒、利咽消肿止
痛作用 [8]。抗病毒是清热药一个重要的药理作用。柯萨
奇病毒是引起咽喉疾病最常见的一种病毒.但目前还没有
有效治疗柯萨奇病毒的药物, 复方土牛膝糖浆剂在体外能
较好地抑制柯萨奇病毒对细胞致病变作用,说明该药在临
床上能治疗咽喉疾病有一定的科学依据。
参考文献
[ 1 ] 孙一帆,梅全喜,徐庆文, 等.复方土牛膝糖浆治疗咽喉疾病
临床疗效观察 [ J ].中药材, 2005, 28增刊: 151
[ 2 ] 卫生部药政局.新药 (西药 )临床前研究指导原则汇编 [S ].
1993: 163
[ 3 ] 卫生部药政局.中药新药研究指南 (药学# 药理学# 毒理学 )
[S ]. 1994: 67, 118
[ 4 ] 陈奇. 中药药理研究方法学 [M ]. 北京:人民卫生出版社,
1994: 251 -255
[ 5 ] 徐淑云,卞如濂,陈修.药理实验方法学 [M ].北京:人民卫生
出版社, 1991: 1107
[ 6 ] 李仪奎.中药药理实验方法学 [M ].上海:上海科学技术出版
社, 1991: 295
[ 7 ] 梅全喜,吴惠妃. 广东土牛膝的药用历史及现代研究概况
[ J ].中医药学刊, 2005, 23( 11) : 1995 - 1997
[ 8 ] 曾聪彦,梅全喜,孙一帆, 等.复方土牛膝糖浆的制备与临床
应用 [ J].中医药学刊, 2005, 23增刊: 101 - 103
第 25卷 第 6期
2 0 0 7年 6月
中 华 中 医 药 学 刊
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学刊
肾衰颗粒对慢性肾衰竭患者脂质代谢的影响
王小娟,雷 颖,郭建生,郭 璇
(湖南中医药大学第一附属医院,湖南 长沙 410007)
摘 要:目的:探讨口服肾衰颗粒对慢性肾衰竭 ( CRF )患者总胆固醇 ( CHO )、甘油三酯 ( TG )、低密度脂蛋白
胆固醇 ( LDL -C )、血尿素氮 ( BUN )、血肌酐 ( Scr)和内生肌酐清除率 ( C cr)的影响。方法: 病人随机分为两组, 采
用优质低蛋白低磷饮食, 忌植物蛋白、纠正水及电解质平衡、酸中毒等; 在此基础上, 对照组用包醛氧淀粉于 3餐
后服用,并于每晚加服 1次; 治疗组予肾衰颗粒口服。结果:两组治疗后 BUN、Scr均有明显的降低 ( P < 0. 01) ;
C cr有明显的升高 ( P < 0. 01)。而治疗组较对照组 CHO、TG、LDL -C、均有降低 ( P < 0. 05), 结论: 肾衰颗粒口
服治疗 CRF时,可以明显改善 CRF病人的脂质代谢紊乱和肾功能。
关键词:肾衰颗粒;慢性肾衰竭; 脂质代谢紊乱
中图分类号: R692. 5 文献标识码: B 文章编号: 1673 -7717( 2007) 06 - 1141 -03
The E ffect of ShenshuaiG ranule on L ip in Metabolism of Chron ic Renal Fa ilu re Patient
WANG Xiao-juan, LEI Y ing, GUO Jian-sheng, GUO Xuan
( The F irst A ffilia ted H ospita,l TCM Unive rsity o f Hunan, Changsha 410007, Hunan, Ch ina)
Abstrac:t Ob jective: To discuss takes o ra lly the Shenshua i g ranu le to the chronic rena l fa ilure
( CRF ) the pa tient to tal cho leste ro l( CHO ), the trig lyce ride( TG ), the low density lipopro tein cho lesterol
( LDL - C ) , the blood urea n itrog en ( BUN ), the serum crea tinine ( Scr) and in c rea tin ine c lea rance
( Ccr) the influence. Me thods: The pa tien t sto chastically divide s in to two groups, U ses the h igh qua lity
low pro tein low phospho rus d ie ,t env ies the vege tab le pro tein, the co rrec tion w ater and the e lec tro lyte
balance, the ac idosis and so on; In th is founda tion, the contro l g roup take sw ith Oxyam y li tec tus A ldehy-
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