全 文 ： ·24· April 2004, Vol.6, No.4
中药科技 Research & Information on Traditional Chinese Medicine
川牛膝与其伪品头花杯苋及其
杂交后代同工酶的研究
范巧佳 李方安 李杰勤* 刘卫国* （四川农业大动科院 ）
川牛膝为苋科植物川牛膝 (Cyathula officinalis
Kuan) 的根[1]，是四川著名的道地栽培药材[2]，具有
逐瘀通经、通利关节、利尿通淋等功能，特别是现
代药理研究证明川牛膝还具有抗肿瘤、抗生育等新
的作用[3]，使其再次受到关注。而同属植物头花杯
苋（又称麻牛膝 Cyathula capitata （wall.）
moq.）的根，在四川、云南等省的部分地区，常混
作川牛膝使用，而两者的杂交后代（杂牛膝）在这
些地区也大量存在，不能等同混用。它们三者在植
物外观上是有一定区别的，但其根的外观特征则区
别不大，这已作了报道[4]。通过用聚丙稀酰胺凝胶
电泳方法，对它们的过氧化物酶、酯酶同工酶的谱
带进行分析，找出三者之间的差异。这方法快速、
准确，在很多植物中已得到运用[5][6][7]。而对三种植
物，还末见报导。
1 材料和方法
1．1材料 用当年采集的种子，在发芽箱内发芽（25
℃ 左右），取茎尖嫩叶部分。 川牛膝采自雅安天全
县紫石乡, 头花杯苋采自西昌冕宁县沙镇，杂交川
牛膝采自雅安天全小河乡。
1.2 方法
1.2.1 酶液提取 称取三种待测材料各0.5g，加入
5ml的冷却提取缓冲液（Tris -甘氨酸 + 40%蔗糖），
在冰浴中将材料研磨成匀浆后，在温度 - 4℃ ~ 6
℃，转速2000r/min条件下，离心20min，上清液保
存于-200C的低温冰箱中，待分析用。
1.2.2 电泳 采用夹心式聚丙烯酰胺凝胶垂直板
电泳。分离胶与浓缩胶的浓度分别为7%和3%，点样
量为40ul。整个电泳过程在4℃ 的冰箱中进行。开
始电压在250V，待指示剂溴酚兰前沿刚到达分离胶
时，加压至300V，稳流，继续电泳。直到前沿指示
剂迁移至距离橡胶框下缘1.7cm时，结束电泳，然后
进行染色。
1.2.3 染色：
1.2.3.1 过氧化物酶（POX）：将电泳后凝胶板浸
入0.1% 联苯胺液中，滴加数滴过氧化氢液，迅速混
匀，进行显色，片刻即显示出酶带，待全部酶带出
现后，随即用自来水漂洗去染色液，然后将凝胶板
保存于7%的乙醇液中。
1.2.3.2 酯酶（EST）：将电泳后凝胶板浸入醋酸 –
萘酯、醋酸 –萘酯和坚牢蓝的磷酸缓冲混和液中，
在370℃ 的温度下，充分显色，（30~40min），染毕，
用洗脱液（甲醇:冰醋:水5:1:10）漂洗至背景色变
浅，酶带清晰为止。
凝胶染色后，拍照，计算各酶带的迁移率（Rf
值），根据酶带的形状和着色深浅以及迁移率大小绘
制电泳示意图。
2 结果与分析
2.1 酯酶的同工酶带谱
三种样品的酶谱均较清晰（见图1、表1）。川牛
DOI:10.13313/j.issn.1673-4890.2004.04.006
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膝与头花杯苋的酯酶的同工酶带谱有较明显的区
别。川牛膝只有2条酶带，而头花杯苋则有4条酶带，
其中E1是共有带。杂交川牛膝的酶带中，丢失了父
母本共有的酶带E1，保存了川牛膝的E2带和头花杯
苋的E4、E5带，共有酶带3条。
表1 酯酶（EST）同工酶的迁移率和酶带数
样品号 E1 E2 E3 E4 E5 总酶带谱
川牛膝 0．06 0．37 — — — 2
头花杯苋 0．06 — 0．400 0．544 0．663 4
杂交川牛膝 — 0．37 — 0．544 0．663 3
2.2 过氧化物酶的同工酶带谱
三种材料的过氧化物酶的同工酶带谱清楚可辩
（见图2、表2），且显色快 。川牛膝共有6条酶带，
P1、P9、P10为其特征带，头花杯苋共有7条酶带，
P3、P5、P6、P7为其特征带，P2、P4、P8为两者共
有带，易于区别。而杂交川牛膝除了具备父母本的
共有特征带P2、P4、P8外，还 表现出了父母本的一
些特征带，即川牛膝的P9、P10带和头花杯苋的P3
带，共具酶带6条。
图1 酯酶同工酶电泳示意图 图2 过氧化物酶同工酶电泳示意图
1.川牛膝 2.头花杯苋 3.杂交种 1.川牛膝 2.头花杯苋 3.杂交种
F1
F2
F3
F5
P1
P8
P7
P10
1 2 3 1 2 3
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表2 过氧化物酶（POX）同工酶迁移率和酶带数
样品号 P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 P9 P10 谱带数
川牛膝 0.054 0.115 — 0.208 — — — 0.300 0.346 0.377 6
头花杯苋 — 0.115 0.146 0.208 0.231 0.246 0.267 0.300 — — 7
杂交川牛膝 — 0.115 0.146 0.208 — — — 0.300 0.346 0.377 6
3 小结与讨论
3.1 通过同工酶的电泳分析，能比较快速、准确的对
三种川牛膝进行鉴别，它们的同工酶酶谱区别明显。
3.2 川牛膝和头花杯苋的过氧化物酶同工酶和酯酶
同工酶带谱有显著差异，可作为鉴定两者的依据。
在酯酶同工酶带谱中，E1是共有带，E2是川牛膝的
特征带，E3、E4、E5是头花杯苋的特征带；在过氧
化物酶同工酶的带谱中，P2、P4、P8是其共有带，
而P1、P9、P10是川牛膝的特征带，P3、P5、P6、
P7为头花杯苋的特征带。
3.3 杂交川牛膝是川牛膝与头花杯苋的杂交后代，
不管是它的酯酶同工酶还是过氧化物酶同工酶的带
谱与其亲本既有联系也有区别，而且两种同工酶的
带谱的表现有差异。杂交川牛膝过氧化物酶同工酶
的带谱保留了双亲的共有带，也分别显现出一些双
亲的特征带。其中酯酶同工酶的带谱丢失了双亲的
共有带，保留了双亲的一些特有带。
3.4 本实验所选的材料来源比较单一，同一品种在
不同栽培地、不同生长时期等的过氧化物酶同工酶
和酯酶同工酶带谱是否会发生变化以及其杂交后代
同工酶带谱的变化是否受环境条件的影响还有待于
进一步研究。
参考文献
[1] 李家实、贾敏如 ，中药鉴定学 （规划教材）上海 上
海科学技术出版社，1996.7~69
[2] 胡世林 中国道地药材论丛 北京 中医古籍出版社
1997 62~65
[3] 陈红 刘友平 川牛膝多糖抗肿瘤作用初探 成都中医药
大学学报 2001 24（1）：49
[4] 范巧佳、高雨荣、刘 等，天全川牛膝生产现状调查 中
药研究与信息 2001,3（11）：16~17
[5] 潘瑞乐、徐锦堂，天麻种内变异不同类型的酯酶同工酶
研究 中国中药杂志 1996，21（3）：84~86
[6] 潘瑞乐、徐锦堂，天麻种内变异不同类型的过氧化物酶同工酶
及可溶性蛋白的电泳研究 中草药 1996，27（10）：617~620
[7] 张袖丽， 谢中稳，陶汉之， 半夏属植物同工酶电泳分
析 安徽农业大学学报 1997，24（3）：291~295
［责任编辑：刘志民］
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