全 文 ：2012 年 3 月 1 日 第 3 期
No． 3 1 Mar． 2012
中 医 学 报
CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE
第 27 卷 总第 166 期
Vol． 27 Serial No． 166
* 基金项目:广东省自然科学基金项目(编号:K2100027)
复方土牛膝合剂对急性炎症大鼠 MDA、
SOD、NO及免疫功能影响的研究*
The Effect of Achyranthes Aspera Mixture on MDA，SOD，NO and the Immune Function of Acute Inflammation in Rats
邓敏贞 Deng Minzhen，秦劭晨 Qin Shaochen，黎同明 Li Tongming
广州中医药大学，广东 广州 510006
Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou，Guangdong，China 510006
摘要:目的:观察复方土牛膝合剂对急性炎症大鼠的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)及免疫功能的影
响。方法:采用二甲苯制备急性炎症大鼠模型，随机分为 5 组，正常对照组、急性炎症模型对照组和急性炎症模型复方土牛膝
合剂低、中、高剂量治疗组(每次剂量分别为 0． 182 g·kg －1、0． 363 g·kg －1、0． 726 g·kg －1)进行对比研究。结果:与正常对照
组及其相应的对照组比较，复方土牛膝合剂能降低急性炎症大鼠的 MDA 浓度，提高 SOD 和 NO 活性，增加外周白细胞数，提
高 T淋巴细胞增殖和自然杀伤细胞(NK)活性，降低肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)变化活性(P ＜ 0． 05)。
结论:复方土牛膝合剂具有一定的抗炎症和增强免疫功能的作用。
Abstract:Objective:To observe the effect of Achyranthes aspera mixture on MDA，SOD，NO and the Immune function of acute inflam-
mation in rats． Methods:The aged model was induced by Xylene and the rats were divided into five groups，normal control group，aged
model group and Achyranthes aspera mixture in the treatment of aged model group(dose of 0． 182 g·kg －1，0． 363 g·kg －1、0． 726 g·
kg －1)． Results:Compared with the normal group and the corresponding control group，Achyranthes aspera mixture reduces the concen-
tration of MDA，TNF-α and IL-1β activity，increases SOD and NO activity and the number of peripheral white blood cell in aged rats
and that promotes T lymphocyte proliferation and enhances NK cell activity(P ＜ 0． 05)． Conclusion:Achyranthes aspera mixture has a
certain effect of anti － inflammatory and immune function．
关键词:复方土牛膝合剂;急性炎症大鼠;丙二醛;超氧化物歧化酶;一氧化氮;自然杀伤细胞;降低肿瘤坏死因子-α;白细胞介
素-1β
Key words:achyranthes aspera mixture;acute Inflammation in rats;MDA;SOD;NO;NK;TNF;IL － 1β
中图分类号 CLC number:R285． 5 文献标识码 Document code:A 文章编号 Article ID:1674 －8999(2012)03 －0322 －03
广东土牛膝为菊科植物华泽兰 Eupatorium chiuense Linn
的根，又名土牛膝、多须公、六月霜、白须公、斑骨相思、大麻
等，是广东地区著名的中药，其药用历史最早记载见于清代
何克谏所著的岭南本草书籍《生草药性各要》，性味:辛、苦、
凉，具有清热解毒、凉血利咽等功效［1］。牛膝具有抗炎症的
功能，而土牛膝的主要活性成分多，因此土牛膝也有一定的
抗炎症功能，另牛膝多糖还具有提高免疫功能的作用［2］。复
方土牛膝合剂是由土牛膝、板蓝根、岗梅等中药加水提取浓
缩而制成的［3］，所以通过本研究来说明复方土牛膝合剂具有
一定抗急性炎症和增强免疫力的作用。
1 材料与方法
1． 1 实验动物
SD大鼠 50 只，雄性，体质量 200 ～ 220 g，由广东省实验
动物监测所提供，实验动物生产许可证号:SCXK 2008-0002。
1． 2 药物
复方土牛膝合剂(佛山市第二人民医院制剂室提供，批
号:20101012) ，浓缩后生药为 2． 50 g·mL －1。
1． 3 试剂与仪器
丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮
(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)试
剂盒(南京建成生物工程研究所) ，显微镜(OLYMPUS，
BX51) ，Packard Tricard 液体闪烁计数仪(美国 Packard 仪器
公司) ，PPO:为第一闪烁剂(上海试剂一厂) ，POPOP:为第二
闪烁剂(上海试剂一厂)。
1． 4 分组及给药方法
1． 4． 1 造模方法 将 SD大鼠适应性喂养 7 d 后，按实验处
理条件分为 5 组，每组 10 只，具体操作方法如下:正常对照
组(A组) :灌胃给予生理盐水 7 d，按每 100 g 体质量灌胃
1. 3 mL，每天 3 次。于末次灌胃 1 h后，在大鼠右耳两面不涂
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DOI:10.16368/j.issn.1674-8999.2012.03.035
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CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE
第 27 卷 总第 166 期
Vol． 27 Serial No． 166
二甲苯，左耳为对照，20 min 后，乙醚麻醉，腹主动脉取血后
将大鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径 7 mm打
孔器分别在同一部位打下圆耳片。模型对照组(B组) :灌胃
给予生理盐水 7 d，按每 100 g体质量灌胃 1． 3 mL，每天 3 次。
于末次灌胃 1 h后，在大鼠右耳两面涂二甲苯 30 μL，左耳为
对照，20 min后，乙醚麻醉，腹主动脉取血后将大鼠颈椎脱臼
处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径 7 mm打孔器分别在同一
部位打下圆耳片。复方土牛膝合剂低、中、高剂量治疗组
(0. 182 g·kg －1、0． 363 g·kg －1、0． 726 g·kg －1) ，依次为 C、
D、E组，每天分别按每 100 g 体质量给予 0． 7 mL、1． 3 mL、
2. 9 mL，每天 3 次，灌胃给药 7 d。各组于末次给药 1 h后，在
大鼠右耳两面涂二甲苯 30 μL，左耳为对照，20 min 后，乙醚
麻醉，腹主动脉取血后将大鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪
下两耳，用直径 7 mm 打孔器分别在同一部位打下圆耳片。
各组都用电子天平称质量，以两耳质量之差作为肿胀度，计
算肿胀抑制率;腹主动脉取血，检测 MDA、SOD、TNF-α、IL-1β
的指标。
1． 4． 2 对急性炎症大鼠 T淋巴细胞增殖的影响 实验分组
与给药同“1． 4． 1”。给药结束后，取脾脏制成 2 × 107 mL －1细
胞悬液。取 100 μL加入 96 孔细胞培养板中，每鼠设复孔。
再加 100 μL含 Con-A(20 mg·L －1)的 1640 培养液，将 96 孔
培养板置体积分数 5%的 CO2培养箱，37 ℃培养 72 h。培养
终止前 16 h，每孔加入 1 μL 3H-TdR，培养终止以常规法收集
细胞，以液闪仪测定每孔每分钟脉冲数(c·min －1) ，每鼠设
复孔的 c·min －1取其平均值。
1． 4． 3 对急性炎症大鼠 NK细胞活性的影响 实验分组与
给药同前。末次给药 1 h后，处死大鼠，取脾脏进行 NK细胞
活性测定。NK细胞活性测定采用3H-TdR前标法。即取 2 ×
107 mL －1脾脏细胞悬液 100 μL 分别加入 96 孔细胞培养板，
再加入3H-TdR标记的 YAC-1 靶细胞悬液(2 × 105 mL －1)50
μL每鼠设复孔，同时设 1640 培养液对照孔。将 96 孔培养
板放置温度 37 ℃、体积分数 5% CO2 培养箱内培养 16 h，培
养终止，按常规收集细胞，以液闪仪测定每分钟脉冲数
(c·min －1) ，计算细胞毒指数(CI%)。
1． 5 观察指标及方法
MDA、SOD、NO、TNF-α、IL-1β检测分别严格按试剂盒要
求操作。取血液 1 mL，肝素抗凝，白细胞计数。
抑制率 =模型对照组平均肿胀度 －给药组平均肿胀度
模型对照组平均肿胀度
× 100%
1． 6 统计学方法
所有数据用 SPSS 13． 0 软件处理，结果以均数 ±标准差
(珋x ± s)表示，组间比较采用单因素方差分析，计量资料间比
较用 t检验和 t’检验。P ＜ 0． 05 为差异有统计学意义。
2 结果
2． 1 复方土牛膝合剂对各组大鼠耳肿胀值和抑制率的影响
C、D、E组大鼠耳肿胀值和抑制率与 B组比较，差异有统
计学意义(P ＜ 0． 01)。见表 1。
表 1 复方土牛膝合剂实验各组大鼠治疗后
耳肿胀值和抑制率比较 (珋x ± s)
组别 剂量(g·kg － 1) 耳肿胀值(m /mg) 抑制率(/%)
B组 — 28． 19 ± 2． 18 —
C组 0． 546 15． 15 ± 3． 37△△ 50． 66
D组 1． 089 14． 73 ± 1． 36△△ 47． 15
E组 2． 178 13． 75 ± 1． 57△△ 38． 49
注:与 B组比较，△△P ＜ 0． 01
2． 2 复方土牛膝合剂对各组大鼠血MDA、SOD及 NO的影
响
B、C、D、E 组大鼠血清 MDA、SOD 及 NO 浓度与 A 组比
较，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05)。见表 2。
表 2 复方土牛膝合剂实验各组大鼠治疗后
MDA、SOD及 NO活性比较 (珋x ± s)
组别
剂量
(g·kg － 1)
MDA
(c /μmol·L － 1)
SOD
(NU·mL －1)
NO
(c /μmol·L － 1)
A组 — 1． 67 ± 0． 74 163． 0 ± 9． 2 20． 53 ± 4． 65
B组 — 3． 58 ± 1． 65＊＊ 119． 4 ± 9． 4＊＊ 12． 43 ± 3． 53*
C组 0． 546 3． 24 ± 0． 96＊＊ 125． 7 ± 9． 7＊＊ 16． 27 ± 4． 20*
D组 1． 089 2． 91 ± 1． 17＊＊△ 138． 3 ± 5． 8＊＊△ 18． 21 ± 5． 32＊△
E组 2． 178 2． 55 ± 0． 93＊＊△△ 152． 2 ± 4． 1＊＊△△ 19． 91 ± 5． 19＊＊△△
注:与 A 组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与 B 组比较，△P ＜
0. 05，△△P ＜ 0． 01
2． 3 复方土牛膝合剂对各组大鼠外周白细胞数的影响
B、C、D、E组大鼠外周白细胞数与 A 组比较，差异有统
计学意义(P ＜ 0． 01)。见表 3。
表 3 复方土牛膝合剂实验各组大鼠治疗后
外周白细胞数比较 (珋x ± s)
组别 n 剂量(g·kg － 1) 外周白细胞数(103 mm －3)
A组 10 — 42． 83 ± 1． 21
B组 10 — 8． 70 ± 1． 05*
C组 10 0． 546 45． 41 ± 1． 01
D组 10 1． 089 52． 93 ± 1． 16＊△
E组 10 2． 178 65． 91 ± 1． 10＊△
注:与 A组比较，* P ＜ 0． 01;与 B组比较，△P ＜ 0． 01
2． 4 复方土牛膝合剂对急性炎症大鼠 T淋巴细胞增殖、NK
细胞的影响
B、C、D、E组大鼠 T淋巴细胞增殖、NK细胞活性与 A组
比较，差异统计学意义(P ＜ 0． 05)。见表 4。
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表 4 复方土牛膝合剂实验各组大鼠治疗后
T淋巴细胞增殖、NK细胞的比较 (珋x ± s)
组别
剂量
(g·kg － 1)
T细胞
(c·min － 1)
NK细胞
平均(c·min － 1) CI%
A组 — 103 546 ± 3 766 1 158． 5 ± 47． 3 26． 9 ± 4． 7
B组 — 4 923 ± 522 1 118． 0 ± 58． 1* 17． 1 ± 5． 0*
C组 0． 546 5 557 ± 890 1 364． 5 ± 98． 1 22． 4 ± 7． 5
D组 1． 089 5 898 ± 985△ 1 229． 1 ± 81． 6 22． 7 ± 7． 6
E组 2． 178 6 104 ± 1 004△ 1 201． 1 ± 70． 3△ 23． 8 ± 6． 8△
注:与 A组比较，* P ＜ 0． 05;与 B组比较，△P ＜ 0． 05
2． 5 复方土牛膝合剂对急性炎症大鼠 TNF-α和 IL-1β的影
响
B、C、D、E 组大鼠 TNF-α 和 IL-1β 与 A 组比较，差异有
统计学意义(P ＜ 0． 05)。见表 5。
表 5 复方土牛膝合剂实验各组大鼠治疗后
T淋巴细胞增殖、NK细胞的比较 (珋x ± s)
组别 剂量(g·kg － 1) TNF-α(ρ /ng·L － 1) IL-1β(ρ /ng·L － 1)
A组 — 9． 55 ± 1． 96 8． 18 ± 2． 41
B组 — 104． 12 ± 4． 83 98． 10 ± 4． 32
C组 0． 546 100． 34 ± 8． 27＊＊△ 88． 68 ± 9． 63＊＊△
D组 1． 089 55． 22 ± 4． 74＊＊△ 52． 55 ± 5． 07＊＊△
E组 2． 178 25． 25 ± 2． 73＊△△ 24． 12 ± 3． 68＊△△
注:与 A 组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与 B 组比较，△P ＜
0. 05，△△P ＜ 0． 01
3 讨论
广东土牛膝，多年生草本或半灌木，常生长于山谷、林
缘、草地或灌木丛中。分布于中国东南部至西南部各省，老
挝、缅甸、泰国等国也有。全年可采挖，晒干或鲜用。广东土
牛膝资源丰富，抗炎效果较好，毒副作用较小，民间已广泛应
用［4-6］。
炎症产生的超氧阴离子自由基又能攻击生物膜中的多
价不饱和脂肪酸，其产生的脂质过氧化物如 MDA，对组织细
胞产生较大的破坏作用，其含量间接反映机体细胞受自由基
攻击的严重程度［7］。SOD 是广泛存在于需氧代谢细胞中的
一种自由基清除剂，其活力可反映机体清除氧自由基的能
力，SOD 催化 O2
－ 歧化反应生成 H2O2，再在过氧化氢酶
(CAT)的作用下，H2O2 转变成 H2O 和 O2，保护机体组织免
受损害［8］。NO是由气道和肺的上皮、内皮细胞以及炎症细
胞包括肺泡巨噬细胞等合成和释放的一种生物活性因子，与
多种呼吸疾病及其他疾病的发生、发展关系密切［9］。
本研究中急性炎症大鼠在治疗前后各指标都有显著的
差异。由表 1 可见，复方土牛膝合剂对二甲苯所致的大鼠耳
肿胀急性炎症有明显的抑制作用。由表 2 和表 3 可见，急性
炎症大鼠 MDA浓度升高，SOD 和 NO 活性显著降低，LPO 活
性显著升高，外周白细胞数显著减少，而经过复方土牛膝合
剂治疗后，急性炎症大鼠 MDA 降低，SOD 和 NO 增加，外周
白细胞数增多。由表 4 和表 5 可见，急性炎症大鼠的 T 淋巴
细胞增殖、NK细胞活性较正常鼠明显降低，而 TNF-α 和 IL-
1β活性明显升高，复方土牛膝合剂能促进急性炎症大鼠的 T
淋巴细胞增殖、提高急性炎症大鼠脾细胞的 NK 活性，降低
TNF-α和 IL-1β的活性。
综上所述，本研究对 MDA、SOD 和 NO 的活性影响说明
该药物不仅具有改善体内氧化与抗氧化平衡紊乱状态的作
用，还能清除机体自由基，对 TNF-α 和 IL-1β 的活性影响说
明该药物能减轻炎症反应。本研究在观察外周白细胞数、T
淋巴细胞增殖和 NK 细胞活性这些方面考察复方土牛膝合
剂对免疫的作用，结果显示土牛膝有一定增强免疫的功能。
该制剂的开发利用，造福了人类，其抗炎的机理，有待进一步
研究。
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收稿日期:2011 － 11 － 28
作者简介:邓敏贞(1987 －) ，女，广东佛山人，硕士研究生，研
究方向:方剂配伍规律与理论及方药药理研究。Email:nhd-
mz@ yahoo． com． cn
通讯作者:黎同明，男，博士，副教授。Email:ltmwgx@ yahoo．
com． cn
编辑:秦小川
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