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.
生殖与避孕 ( 1 9 9 5 ) 1 5卷 6期 4 5 9~ 吐 6 1页
R Pe or d
u ct io n 乙 C o n r r a c e P t io n ( 1 9 9 5 ) 1 5 ( 6 ) : 4 5 9~ 4 6 1
a 一苦瓜子蛋白对人绒毛细胞培养液
及小鼠血清中孕酮的影响
昊 强 刘福阳 韩维田
(辽宁省计划生育科学研究所 ,沈阳 , 1 1 0 0 3 1 )
a 一苦瓜子蛋 白 ( a 一 M o r m o r e h a r in , 简称 a
一 MM )是从葫 芦科苦瓜种子中提取 出来的一
种碱性糖蛋白 ,分子量 29 K d 。近年来 , 国内许多
学者对它的药理 、 毒理等基础实验进行大量研
究 。 药代动力学研究表明 l[] , 。 一 M M 在体内易
吸收 ,药物生 物利 用度为 76 . 6% , 它 的吸收和
消除符合二室开放动力学模型 。药物在胚胎 、 卵
巢和子宫脏器中含量较高 ,这对药物的抗生育
作用的发挥是有利的 。 Q 一 M M 抗生育实验证
实阁 ,它具有一定抗早孕和 中期引产的效果一
一 MM 抗生育机理显示 3[] , 它可 以直接杀伤滋
养层细胞 、 毒害蜕膜细胞 ,并能抑制滋养层细胞
h C G 的分泌 。 综上所述 , 植物蛋白 。 一 M M 有可
能成为新型的抗生育药物 。 为更加准确了解 。 -
M M 的抗生育机理 , 本文通过体内 、 体外实验
研究 。 一 M M 对孕酮 的影响 , 可为它将来的药
物临床应用提供进一步理论依据 。
材 料 与 方 法
一 、 药品 与试荆
a 一 M M 由香港中文大学 中草药研究中心
提供 ,分子量 29 K d , 电泳纯 。 F l 。培养基日本进
口 。 孕酮测定方法为 R I A ,灵敏度 0 . Z n g /m l , 批
内 C V = 8一 1 1% ,非特异性结合 ( N S B ) < 5% 。
二 、 浏 试仅器
下 一医用计数器为 2 1 0 3 一 G 型 (西安产 ) ,效
率 > 80 % ,本底 < 4 9 c p m ,倒置显微镜和 C O : 培
养箱均为 日本产 。
三 、 实验动物
选用雌性小 白鼠 , 昆明品种 , 由东北制药厂
提供 ,体重 23 一 25 9 , 鼠龄 6 周 。 实验前雌雄动
物 ( 3 : 1) 合笼 , 见阴栓为妊娠第 1 天 ( d l ) 。 为防
止空怀情况 , 全部实验所用的孕小鼠经剖检证
实 。
四 、 小 鼠血清的收集
小鼠妊娠第 7 天 ( d 7) 腹腔注药 , 药后 3 天
眼眶取血 ,分离血清 0 . Zm l , 贮存于 一 20 ℃冰箱
中 ,集中测定 。 同时设有空白对照组 。
五 、 人绒毛滋养层细胞培养液收集
按文献 〔。 介绍方法 , 无菌操作下选取妊娠
45 一 5 0 d 健康妇女人工流产的绒毛组织 ,剪碎 、
接种 、培养 。 4 h8 后镜下观察细胞生长 良好时 ,
从中选取 20 瓶 , 随机分为对照组和实验组 ,共
5 组 ,每组 4 瓶 ,弃去原培养液 , 更换含量不 同
浓度 a 一 MM ( 0 . 1 3 、 0 . 5 0 、 2 . 0 0 、 8 . 0 0拜g /m l )的
培养液 。对照组除换培养液外不加任何处理 ,相
差显微镜下逐 日观察 , 每瓶每次吸取 0 . Zm l 培
养液 ,置一 20 ℃冰箱保存 。分别测定未加药条件
下 。 、 3 、 6 、 2 4 、 4 8 、 7 2 h 和加药后 。 、 3 、 6 、 2 4 、 4 8 、
7 2 h 培养液中孕酮 的含量 。
结 果
一 、 。 一 M M 对早孕小 鼠体内孕酮 的影响
取孕 鼠 62 只 , 随机分为 6 组 ,每组 8一 12
只 。 测定给药后血清孕酮含量 , 其结果如表所
示 。 随着 a 一 M M 剂量增大 ,孕酮含量受抑制程
度 随之 加大 , 0 . o 4 m g 剂量 组与对照 组 比较
p < 0
.
0 5 , 其它 各剂量 实验组与对照组比较
P < 0
.
0 1 ( r = 一 0 . 8 8 ) 。
·
4 6 0
·
表 。 一 M M 对孕鼠血清孕酮含呈影响
剂量组
m g / 2 5 9 鼠重
小鼠数
(只 )
孕酮含量
12
1 2
1 1
1 0
9
8
(n g / m l )王士 ,
7
.
1 2士 2 . 1 4 .
6
.
3 4士 1 . 4 8 荟 .
5
.
1 2士 0 . 9 8 备 .
2
.
5 8士 0 . 3 6 奋 骨
2
.
0 8士 0 . 6 5 ”
1 4
.
0 9士 3 . 5 3
J任月勺80 01古月.…0
0
.
1 4
空白对照
与对照组 比较
二 、 。 一 M M
的影响
吞尸 < 0 . 0 5 二 尸 < 0 . 0 1
对人绒毛 滋养层细 胞分泌孕酮
培养液中孕酮 含量与细胞接种的多少有
关 , 为消除瓶间接种绒毛量的误差 ,采取每瓶培
养自身对照计算出激素分泌百分率 ,采用半对
数座标制图 。从图中各组 曲线可见 ,各实验组绒
毛细胞分泌孕酮不同程度地受到 a 一 M M 的抑
制 。 培养 h6 , a 一 M M 抑制孕酮分泌并不 明显 ,
除 8 · 0 拼g /m l 剂量组外 , 其余各实验组与对照
组 比较 尸> 0 . 05 。 培养近 20 h , 各实验组孕酮含
量均受到抑制 , 培养近 40 h ,孕酮含量受抑制程度与 。 一 M M 剂量呈现窥律性变化 , 各实验组
与对照组 比较 尸 < 0 . 0 1 。
图 。 一 M M 对人绒毛滋养层细胞分泌孕酮的影响
通过抑制孕酮分泌或阻断其作用 ,可导致子宫
出血而造成流产 ,这一作用仍是 目前节育工作
的主要方法 。 有文献报道 , 。 一 MM 经母体血液
可通过胎盘屏障 ,而且对滋养层细胞及蜕膜细
胞均有直接杀伤作用 。 为深入了解 。 一 M M 对
细胞功能性影响 , 分别通过体 内及体外实验观
察 a 一 M M 对孕酮分泌的作用 。
本研究 采用放射免疫分析法 ,分析 了 a -
M M 对孕小 鼠血清孕酮及人滋养层 细胞分泌
孕酮的影响 。 结果表明孕 鼠腹腔注入 。 一 M M
后 ,孕酮水平下降与 。 一 M M 剂量相关 。 空 白对
照孕酮含量 高达 1 4 . 0 9 n g / tn l ; 而 0 . i o m g / 2 5 9
鼠重剂量组孕酮与对照组相比下降 6一 7 倍 。 a
一
M M 小鼠抗早孕 有效剂量为 0 . o 4 m g / 2 5 9 鼠
重 , 从表中结果看出 , 各实验组对小 鼠体内孕酮
的分泌均有显著的抑制作用 。 对离体培养的人
胚滋养层细胞用 a 一 M M 处理 ,孕 酮分泌功能
亦明显受到抑制 ,处理时间越长 ,浓度越大则受
抑程度越重 。 当培养 h3 ,各剂量组与对照组比
较差异不明显 。培养近 2 h0 后 , 各剂量组与孕酮
受抑程度呈规律性变化 。 以 8 . 0拜g /m l 剂 量为
例 ,培养 2 4 、 4 8 和 7h2 , 其孕酮分泌量分别是对
照组的 1/ 4 、 1/ 8 和 1 9/ , 说明滋养层 细胞分泌
孕酮的功能受到严重的影响 , 同时也反映出绒
毛细咆对 a 一 M M 的敏感性 。 韩维 田等人 aLJ 曾
观察过 a 一 MM 对滋养层 h C G 分泌功能的影
响 , 结果提示 , 细胞培养至 2 h4 后 , h C G 开始受
到严重抑制 , 与对照组相 比较相差 6一 8 倍 , 与
我们观察的孕酮变化相类似 , 说明滋养层 细胞
受到 a 一 M M 作用后 , 影响各种激素分泌功能
基本上是同步的 。
。 一 M M 具有通过胎盘屏障作用及损伤滋
养层细胞的功能 l[] 。 本文通过体内 、体外实验研
究 a 一 M M 对孕酮的影响 ,结果证实 a 一 M M 具
有抑制孕酮分泌的功能 。 为该蛋白在抗生育作
用方面提供了进一步证据 。
讨 论 参 考 文 献
孕激素能维持胚胎 的正常生长 、 发育 。在妊
娠期 ,体内主要 由黄体细胞和滋养层细胞分泌 。
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A b
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e ia l t
r e a t m e n t fo r p a
-
t i e n t s w i th
n e g a t iv e b l
o e
k in g
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s u e e e s s
fu l t
r e a t m e n t in s e l e e t e d ca s e s
o f h a b i t u
-
a l a b o r t i o n
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A m J o b s t e t G y n e e o l 1 5 4 : 5 1 6
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a
b
o r t io n b y i m m u n i z a t io n w i t h P a t e r n a l e e ll s
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L a解 e t l : 9 4 1 , 1 9 8 5
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