全 文 ：·研究报告·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2014年第3期
肌动蛋白（Actin，ACT）是真核生物细胞中普
遍存在的一种古老蛋白质，由 375-377 个氨基酸残
基组成，分子量大约为 42 kD。高等植物肌动蛋白
是构成细胞骨架中微丝系统的主要成分，主要参与
细胞分裂、细胞形状变化、细胞物质运输，胞质环流、
细胞极性建立、细胞内信号传导及基因表达调控等
诸多生命过程［1，2］。迄今为止，已在许多高等植物中，
如在拟南芥［3］、玉兰［4］、霸王［5］、小花碱茅［6］和
箭筈豌豆［7］等中克隆了 ACT 基因。研究发现，肌
动蛋白在真核细胞进化过程中高度保守，各种生物
肌动蛋白的氨基酸序列同源性高达 70%-100%，且
收稿日期 ：2013-09-16
基金项目 ：国家自然科学基金项目（31272489），北京市农林科学院科技创新能力建设专项（KJCX20140103）
作者简介 ：郭强，男，博士，助理研究员，研究方向 ：草类植物逆境生理与分子生物学 ；E-mail ：guoqiang81@yeah.net
通讯作者 ：孟林，男，博士，研究员，研究方向 ：草业资源与遗传育种 ；E-mail ：menglin9599@sina.com
长穗偃麦草 Actin 基因片段克隆及表达模式分析
郭强  孟林  毛培春  田小霞  李杉杉  张琳
（北京市农林科学院 北京草业与环境研究发展中心，北京 100097）
摘 要 ： 根据已报道的其他植物肌动蛋白（Actin，ACT）基因的保守序列设计一对简并性引物，以长穗偃麦草根中总 RNA
为模板，采用 RT-PCR 方法克隆出 ACT 基因，命名为 EeACT。结果表明，该基因片段长度 598 bp，编码 198 个氨基酸，与其他植
物 ACT 氨基酸序列同源性较高，达 90% 以上。低温、盐及干旱处理 12 h，EeACT 在其地上部与根中的表达水平没有显著差异，说
明 EeACT 表达稳定。
关键词 ： 长穗偃麦草 Actin 基因 RT-PCR 同源克隆
Cloning and Expression Pattern Analysis of Actin Gene Fragment from
Elytrigia elongata
Guo Qiang Meng Lin Mao Peichun Tian Xiaoxia Li shanshan Zhang Lin
（Beijing Research and Development Center for Grasses and Environment，Beijing Academy of Agriculture and Forestry
Science，Beijing 100097）
Abstract:  A pair of degenerate primers was designed based on the conserved sequences of the actin（ACT）genes from other plants.
Total RNA was extracted from the roots of Elytrigia elongata to obtain an ACT gene fragment by reverse transcription polymerase chain reaction
（RT-PCR）. Results showed that the length of EeACT gene fragment was 598 bp encoding a 198 amino acids. The deduced amino acid
sequence of EeACT shared over 90% amino acid homology compared with other plants ACT. No significant differences in expression level of
EeACT were found between shoots and roots among low temperature, salt and drought treatments for 12 h, indicating that expression of EeACT is
stable.
Key words:  Elytrigia elongata Actin gene RT-PCR Homo-cloning
在高等植物的花粉、茎韧皮部、叶表皮细胞、叶鞘
细胞、根毛、卷须、内果皮及其茎形成层等组织中
均有表达［8，9］。鉴于 ACT 基因在植物各种组织中表
达恒定，因而常被作为一种重要的看家基因以比较
不同来源的目的基因 mRNA 表达量的差异［10］。
长穗偃麦草（Elytrigia elongata）是小麦族（Tr-
iticeae dumort）禾本科偃麦草属多年生根茎疏丛型草
本植物，是小麦（Triticum aestivum）的近缘种，原
产于欧洲东南部和小亚细亚，生境为海滨和盐碱草
甸，具有较强的耐盐碱性，在土壤盐碱化改良中发
挥着重要作用，是改良盐碱地的理想植物［11］。已成
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第3期74
为改良小麦不可缺少的野生基因库［12，13］。但有关长
穗偃麦草看家基因 ACT 的研究尚未见报道。鉴于此，
本研究以长穗偃麦草幼苗为材料，用 RT-PCR 方法
克隆长穗偃麦草 ACT 基因片段，并进行各种逆境胁
迫条件下该基因的表达稳定性分析，旨为开展长穗
偃麦草中重要的抗逆基因表达和调控研究奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
4 周龄的长穗偃麦草幼苗的鲜根，种子采自北
京市农林科学院小汤山草资源试验基地。大肠杆菌
菌株 Escherichia coli DH5α 由本实验室保存。
主 要 试 剂 UNIQ-10 柱 式 Trizol 总 RNA 抽 提 试
剂盒，PCR 扩增试剂盒，UNIQ-10 柱式 DNA 胶回收
试剂盒、PCR 产物克隆试剂盒等均购自生工生物工
程（上海）股份有限公司，PrimeScript RTase 第一
链 cDNA 合成试剂盒及 DNA marker 购自宝生物工程
（大连）有限公司，其他生化试剂均为进口或国产分
析纯。
1.2 方法
1.2.1 材料培养 将籽粒饱满长穗偃麦草种子经 5%
的次氯酸钠（NaClO）溶液消毒后，均匀的播种在
铺有吸水纸的培养皿中，25℃暗培养 7 d，待发芽后，
移入黑色培养盒（20×10×7 cm）中，浇灌 Hoagla-
nd 营养液（2 mmol/L KNO3，1 mmol/L NH4H2PO4，0.5
mmol/L MgSO·7H2O，0.5 mmol/L Ca（NO3）2·4H2O，
60 μmol/L Fe-citrate，92 μmol/L H3BO3，18 μmol/L
MnCl2·4H2O，1.6 μmol/L ZnSO4·7H2O，0.6 μmol/L
CuSO4·5H2O，0.7 μmol/L（NH4）6 Mo7O24·4H2O）
培养 4 周。Hoagland 营养液约 3 d 更换一次。培养
室昼夜温度为 22℃ /16℃，光照 16 h/d，光强约为
600 μmol/m2/s，空气相对湿度为 60%-80%。
1.2.2 引物的设计与合成 通过对已经克隆出的高
等植物 ACT 基因核苷酸序列进行同源性比较，找出
高度保守的区域 ；利用 DNAMAN 6.0 和 Primer 5.0
引物设计软件，并遵循同源性高和简并性低的原则，
设计一对简并性引物 P1 和 P2，用于扩增长穗偃麦
草 EeACT 片段，推测目的片段的长度为 598 bp。引
物由上海生工合成。
P1 ：5-GTGGTCGTACAACWGGTATTGTG-3 ；
P2 ：5-GCNCCTCCAATCCAGACACTG-3
其中，W= A/T，N= A/C/T。
1.2.3 EeACT 基因克隆及序列生物信息学分析 取
4 周龄长穗偃麦草幼苗的鲜根，采集其根经无菌水
冲洗后，置于消毒滤纸上吸干水分，于液氮中充
分研磨，参照上海生工 Trizol 试剂盒说明书提取总
RNA。cDNA 第一链的合成按照试剂盒操作说明书
进行（大连宝生物）。PCR 扩增反应体系 ：在 200
μL PCR 管 中 依 次 加 入 ：10×PCR Buffer 5 μL，25
mmol/L MgCl2 3 μL，2 mmol/L dNTP 5 μL，10 μmol/L
P1 和 P2 各 1 μL，Taq DNA polymerase（5 U/μL）0.5
μL，cDNA 4 μL，加水补至 50 μL。反应条件 ：94℃
预变性 2 min ；94℃变性 30 s、56℃退火 45 s、72℃
延伸 50 s，25 个循环 ；最后 72℃延伸 10 min。PCR
扩增产物用 1.2% 琼脂糖凝胶检测，目的片段的回收
和纯化按照 UNIQ-10 柱式 DNA 胶回收试剂盒操作
说明进行（上海生工）。将回收纯化后的 PCR 产物
与 pUCm-T 载体连接过夜，反应温度为 16℃ 。连接
产物转化至 E.coli DH5α 感受态细胞中，用含有 50
μg/mL 氨苄青霉素的 LB 固体培养基进行蓝白斑筛选，
转化白斑菌株经质粒 PCR 鉴定确认阳性克隆后，送
至上海生工测序。
序 列 的 比 较、 翻 译 和 系 统 进 化 树 分 析 均 在
DNAMAN 6.0 生物软件上进行，Blast 搜索在 NCBI
（www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST）网站上进行。
1.2.4 EeACT 基因表达模式分析 将 4 周龄长穗偃
麦草幼苗分别在低温（4℃）、盐（200 mmol/L NaCl）
及干旱（15%PEG）下处理 12 h 后，分别采集其根
和地上部经无菌水冲洗后，置于消毒滤纸上吸干水
分，于液氮中快速冷冻，直接用于 RNA 的提取。通
过电泳使 RNA 的浓度一致，以等量的 RNA 逆转录
为 cDNA，采用半定量 RT-PCR 方法分析长穗偃麦草
EeACT 基因表达模式，电泳结束后，取等量 PCR 扩
增产物用 1.2% 琼脂糖凝胶电泳检测，并用 FR-980
凝胶成像仪拍照，以条带的亮度判定 EeACT 基因表
达丰度的强弱。
2 结果
2.1 总RNA的提取
以长穗偃麦草根系为材料提取的总 RNA 经过
2014年第3期 75郭强等 ：长穗偃麦草 Actin 基因片段克隆及表达模式分析
甲醛变性凝胶电泳检测结果显示 28S rRNA 和 18S
rRNA 条带清晰（图 1），前者亮度约是后者的 2 倍，
说明所提取的 RNA 完整性较好 ；经 Quawell5000 型
超微量紫外可见分光光度计测得 RNA OD280/OD260 平
均值为 1.85，表明 RNA 纯度较高，可用于 RT-PCR
扩增。
注册，登录号为 KF981729。将推测的长穗偃麦草
EeACT 的氨基酸序列和其他植物 ACT 的氨基酸序列
进行多重比较发现（图 5），保守氨基酸多达 193 个，
而非保守氨基酸仅有 5 个。这表明所克隆的片段为
ACT 基因的高度保守区域。系统进化树（图 6）分
析表明，EeACT 与单子叶植物（如羊草和二穗短柄草）
亲缘关系较近，而与双子叶植物（如圆叶锦葵）亲
缘关系较远。
28S rRNA
18S rRNA
图 1 长穗偃麦草总 RNA 的甲醛变性凝胶电泳
2.2 RT-PCR扩增及阳性克隆鉴定
以总 RNA 反转录所得到的第一链 cDNA 为模板，
用 ACT 基因的简并性引物 P1 和 P2 进行 PCR 扩增。
扩增产物经凝胶电泳检测发现约在 600 bp 处有一条
亮带，且上下无杂带，与目的片段的大小一致（图 2），
推测可能是 ACT 基因片段，将此片段回收纯化连接
到 pUCm-T 克隆载体上，转化到 E.coli DH5α 中。从
转化的平板上随机挑取多个阳性克隆，随后从这些
克隆中任选 8 个提取质粒，进行 PCR 扩增，得到的
扩增片段大小约为 600 bp（图 3），与 RT-PCR 结果
一致，表明这些克隆为阳性克隆，可以进行测序。
598
600
500
400
bpbp
M 1 2
M ：DNA marker ；1，2 ：ACT 片段 RT-PCR 产物
图 2 RT-PCR 产物凝胶电泳图
2.3 序列分析
测序结果经分析发现，得到一个长 598 bp 的阳
性克隆序列，编码 198 个氨基酸（图 4）。将这个片
段进行 Blast 比较，结果显示，该片段与禾本科植物
的 ACT 基因核苷酸序列具有很高的同源性，其中与
羊草 ACT 基因（HM623326）核苷酸序列的同源性
高达 99% ；将该基因命名为 EeACT，并在 GenBank
598
600
500
400
bpbp
M 1 2
M ：DNA marker ；1，2 ：阳性克隆
图 3 阳性克隆的 PCR 鉴定
1
64
P1
P2
127
190
253
316
379
442
505
568
198
198
168
147
126
105
84
63
42
21
加框表示引物 P1 和 P2 序列
图 4 长穗偃麦草 EeACT 核苷酸序列及推测的氨基酸序列
2.4 低温、盐及干旱处理对长穗偃麦草EeACT表
达的影响
以 4 周龄长穗偃麦草幼苗在低温（4℃）、盐（200
mmol/L NaCl）和干旱（15%PEG）处理 12 h，分别
提取根和地上部的 RNA，以此为参照。半定量 RT-
PCR 分析（图 7）表明，各组织的 EeACT 表达并未
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第3期76
受到低温、盐及干旱的影响，且在不同处理下各组
织的表达量基本一致。
3 讨论
植物肌动蛋白是单一多肽链球状蛋白，在进
化上具有高度的保守性［14，15］。研究表明，大约每
5 600-9 400 万年，植物与动物肌动蛋白基因的分化
率仅为 1%［16］。说明肌动蛋白基因核苷酸的代换率
较低，是通过多轮复制由一个基因祖先进化而来。
暗示肌动蛋白基因在进化过程中携带很强的选择压
力，并在生物体内执行着重要的生物学功能［5，17］。
本研究得到的长穗偃麦草 EeACT 基因片段与其他植
物 ACT 基因核苷酸序列同源性均在 90% 以上，而与
50EeACT
50HvACT
50OsACT
50BdACT
Consensus g
G
G
G
G
r
R
R
R
R
t
T
T
T
T
t
T
T
T
T
g
G
G
G
G
i
I
I
I
I
v
V
V
V
V
l
L
L
L
L
d
D
D
D
D
s
S
S
S
S
g
G
G
G
G
d
D
D
D
D
g
G
G
G
G
v
V
V
V
V
s
S
S
S
S
h
H
H
H
H
t
T
T
T
T
v
V
E
V
V
p
P
P
P
P
i
I
I
I
I
y
Y
Y
Y
Y
e
E
E
E
E
g
G
G
G
G
y
Y
Y
Y
Y
a
A
A
A
A
l
L
L
L
L
p
P
P
P
P
h
H
H
H
H
a
A
A
A
A
i
I
I
I
I
l
L
L
L
L
r
R
R
R
R
l
L
L
L
L
d
D
D
D
D
l
L
L
L
L
a
A
A
A
A
g
G
G
G
G
r
R
R
R
R
d
D
D
D
D
l
L
L
L
L
t
T
T
T
T
d
D
D
D
D
c
C
C
S
C
l
L
L
L
L
m
M
M
M
M
k
K
K
K
K
i
I
I
I
I
l
L
L
L
L
t
T
T
T
T
e
E
E
E
E
100EeACT
100HvACT
100OsACT
100BdACT
Consensus r
R
R
R
R
g
G
G
G
G
y
Y
Y
Y
Y
s
S
S
S
S
f
F
F
F
F
t
T
T
T
T
t
T
T
T
T
t
T
T
T
T
a
A
A
A
A
e
E
E
E
E
r
R
R
R
R
e
E
E
E
E
i
I
I
I
I
v
V
V
V
V
r
R
R
R
R
d
D
D
D
D
i
I
I
I
I
k
K
K
K
K
e
E
E
E
E
k
K
K
K
K
l
L
L
L
L
a
A
A
A
A
y
Y
Y
Y
Y
v
V
V
V
V
a
A
A
A
A
l
L
L
L
L
d
D
D
D
D
y
Y
Y
Y
Y
e
E
E
E
E
q
Q
Q
Q
Q
e
E
E
E
E
l
L
L
L
L
e
E
E
E
E
n
N
N
A
S
a
A
A
A
A
k
K
K
K
K
s
S
S
S
S
s
S
S
S
S
s
S
S
S
S
s
S
S
S
S
v
V
V
V
V
e
E
E
E
E
k
K
K
K
K
s
S
S
S
S
y
Y
Y
Y
Y
e
E
E
E
E
l
L
L
L
L
p
P
P
P
P
d
D
D
D
D
g
G
G
G
G
150EeACT
150HvACT
150OsACT
150BdACT
Consensus q
Q
Q
Q
Q
v
V
V
V
V
i
I
I
I
I
t
T
T
T
T
i
I
I
I
I
g
G
G
G
G
a
A
A
A
A
e
E
E
E
E
r
R
R
R
R
f
F
F
F
F
r
R
R
R
R
c
C
C
C
C
p
P
P
P
P
e
E
E
E
E
v
V
V
V
V
l
L
L
L
L
f
F
F
F
F
q
Q
Q
Q
Q
p
P
P
P
P
s
S
S
S
S
f
F
F
F
F
i
I
I
I
I
g
G
G
G
G
m
M
M
M
M
e
E
E
E
E
a
A
A
A
A
a
A
A
P
A
g
G
G
G
G
i
I
I
I
I
h
H
H
H
H
e
E
E
E
E
t
T
T
T
T
t
T
T
T
T
y
Y
Y
Y
Y
n
N
N
N
N
s
S
S
S
S
i
I
I
I
I
m
M
M
M
M
k
K
K
K
K
c
C
C
C
C
d
D
D
D
D
v
V
V
V
V
d
D
D
D
D
i
I
I
I
I
r
R
R
R
R
k
K
K
K
K
d
D
D
D
D
l
L
L
L
L
y
Y
Y
Y
Y
g
G
G
G
G
198EeACT
198HvACT
198OsACT
198BdACT
Consensus n
N
N
N
N
i
I
I
I
I
v
V
V
V
V
l
L
L
L
L
s
S
S
S
S
g
G
G
G
G
g
G
G
G
G
s
S
S
S
S
t
T
T
T
T
m
M
M
M
M
f
F
F
F
F
p
P
P
P
P
g
G
G
G
G
i
I
I
I
I
a
A
A
A
A
d
D
D
D
D
r
R
R
R
R
m
M
M
M
M
s
S
S
S
S
k
K
K
K
K
e
E
E
E
E
i
I
I
I
I
t
T
T
T
T
a
A
A
A
A
l
L
L
L
L
a
A
A
A
A
p
P
P
P
P
s
S
S
S
S
s
S
S
S
S
m
M
M
M
M
k
K
K
K
K
i
I
I
I
I
k
K
K
K
K
v
V
V
V
V
v
V
V
V
V
a
A
A
A
A
p
P
P
P
P
p
P
P
P
P
e
E
E
E
E
r
R
R
R
R
k
K
K
K
K
y
Y
Y
Y
Y
s
S
S
S
S
v
V
V
V
V
w
W
W
W
W
i
I
I
I
I
g
G
G
G
G
g
G
G
G
G
ACT 氨基酸序列的来源和基因库登录号分别为 ：长穗偃麦草 EeACT（KF981729），大麦 HvACT（AK3622082），水稻
OsACT（AY212324）和二穗短柄草 BdACT（XM_003578821）
图 5 EeACT 氨基酸序列与其他植物 ACT 氨基酸序列的多重比较
0.05
EeACTElytrigia elongataˈ䮯ょٳ哖㥹
LcACTLeymus chinensisˈ㖺㥹
BdACTBrachvpodium distachvonˈҼょ⸝ᷴ㥹
TaACTTriticum aestivumˈሿ哖
LpACTLolium perenneˈཊᒤ⭏唁哖㥹
OsACTOryza sativaˈ≤に
SbACTSorghum bicolorˈ儈㋡
ZmACTZea maysˈ⦹㊣
MsACTMiscanthus sinensisˈ㣂
PtACTPuccinellia tenuifloraˈሿ㣡⻡㤵
VvACTVitis viniferaˈ㪑㨴
ZxACTZygophyllum xanthoxylumˈ䵨⦻
RcACTRicinus communisˈ㬆哫
HbACTHevea brasiliensisˈₑ㜦ṁ
PoACTPopulus trichocarpaˈ∋᷌ᶘ
AcACTAnanas comosusˈ㨐㩍
GhACTGossypium hirsutumˈ䱶ൠỹ
FhACTFreesia hybridˈሿ㣽ই
MpACTMalva pusillaˈശਦ䭖㪥
图 6 EeACT 与其他植物 ACT 的系统进化树
2014年第3期 77郭强等 ：长穗偃麦草 Actin 基因片段克隆及表达模式分析
氨基酸序列的同源性也在 90% 以上。由此表明，高
等植物的 ACT 作为看家基因不论在核苷酸还是氨基
酸水平上都具有高度的保守性，本试验结果无疑证
实了这一点。
一般而言，不同逆境条件下，由于 ACT 在植物
各组织中均能恒定表达，因而常被看作是内参基因
来衡量重要抗逆基因表达水平的强弱［10，18］。然而，
一些高等植物中，肌动蛋白是由一个多基因家族编
码的，衍生了多种肌动蛋白的异型体，导致 ACT 的
表达存在组织特异性［19-21］。例如，已证实在拟南芥
中 ACT 多达 10 多个，按组织特异性分为营养体型
和生殖体型，执行着不同的生物学功能 ；其中，拟
南芥 ACT1 和 ACT3 在叶片和根中不受诱导，则在花
粉中特异的表达，ACT2 和 ACT8 在所有的营养型器
官中均有表达，而 ACT4 和 ACT12 主要在花粉管伸
长过程中表达［22］。这些研究表明，并非所有的植物
ACT 在不同类型的细胞或组织中都能稳定表达［23］。
据此可知，在不同逆境胁迫条件下，分析 ACT 在长
穗偃麦草不同组织中的表达稳定性，以判定是否可
作为一个稳定的内标参照。本研究表明，在低温、
干旱及盐处理下 4 周龄长穗偃麦草幼苗的地上部与
根 EeACT 均能稳定表达，且根与地上部之间的表达
强度相当。这说明 EeACT 在长穗偃麦草不同组织中
均能恒定表达，不受逆境胁迫条件的影响，也不存
在组织特异性。
长穗偃麦草是小麦的近缘种，生境多为海滨和
盐碱草甸，其在长期的自然选择过程中具有极强的
抗逆性，可能蕴藏着丰富的抗逆基因资源。而本实
验室已成功从长穗偃麦草中克隆得到多个与耐盐抗
旱功能相关的基因。然而，要深入研究这些基因的
表达与调控机制，往往需要内标参照，而 ACT 恰好
是植物重要的内标之一。但在 GenBank 数据库中未
EeACT ൠк䜘
EeACT ṩ䜘
28S rRNA
18S rRNA
ሩ➗ վ⑙ ⴀ ᒢᰡ
图 7 半定量 RT-PCR 分析低温（4℃）、盐（200 mmol/L
NaCl）及干旱（15% PEG）处理 12 h 对长穗偃麦草
EeACT 表达的影响。
能搜索到与长穗偃麦草有关的肌动蛋白基因序列，
因此本研究结果填补了这方面的空白，同时也丰富
了肌动蛋白研究的资料库，为进一步研究长穗偃麦
草其他重要的抗逆基因表达与调控奠定了基础。
4 结论
长穗偃麦草 EeACT 片段为 598 bp，编码 198 个
氨基酸，与其他植物 ACT 氨基酸的同源性达 90%
以上 ；在低温、盐与干旱胁迫下，其地上部及根中
的 EeACT 基因 mRNA 表达量恒定，并不存在组织特
异性。
参 考 文 献
［1］ Vidali L, Hepler PK. Actin and pollen tube growth［J］.
Protoplasma, 2001, 215 ：64-76.
［2］ Collings DA, Harper JDI, Marc J, et al. Life in the fast lane ：actin-
based motility of plant peroxisomes［J］. Can J Bot, 2002, 80（4）：
430-441.
［3］ Nairn CJ, Winesett LL, Ferl RJ. Nucleotide sequence of an actin
gene from Arabidopsis thaliana［J］. Gene, 1988, 65（2）：247-
257.
［4］ 周海飞 , 赵武玲 , 阎隆飞 . 玉兰肌动蛋白基因的克隆与序列分
析［J］. 农业生物技术学报 , 2001, 9（3）：274-278.
［5］ 伍国强 , 席杰军 , 包爱科 , 王锁民 . 多浆旱生植物霸王 Actin 基
因片段的克隆及序列分析［J］. 生物技术通报 , 2008（2）：
101-104.
［6］ 王生银 , 张永超 , 李莉 , 等 . 拒盐型盐生植物小花碱茅肌动蛋
白基因片段的克隆及序列分析［J］. 基因组学与应用生物学 ,
2009, 4（28）：673-677.
［7］ 张磊 , 刘志鹏 , 张吉宇 , 等 . 箭筈豌豆两个肌动蛋白基因片段的
克隆及序列分析［J］. 生物技术通报 , 2010（9）：70-75.
［8］ 李园莉 , 江元清 , 赵武玲 , 阎隆飞 . 谷子肌动蛋白基因的克隆及
序列分析［J］. 植物学通报 , 2002, 19（3）：310-316.
［9］ 袁秀云 , 田云芳 , 蒋素华 , 等 . Actin 基因片段的克隆及序列分
析［J］. 中国农学通报 , 2012, 28（13）：243-248.
［10］ Thomas C, Meyer D, Wolff M, et al. Molecular characterization and
spatial expression of the sunflower ABP1 gene［J］. Plant Mol
Biol, 2003, 52 ：1025-1036.
［11］ 谷安琳 . 耐盐碱栽培牧草——长穗薄冰草［J］. 中国草地 ,
2004, 26（2）：9.
［12］ 张学勇 , 董玉琛 , 杨欣明 . 小麦与长穗偃麦草、中间偃麦草杂
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第3期78
种及其衍生后代的细胞遗传学研究 III. 小麦和偃麦草基因重
组的遗传基础浅析［J］. 遗传学报 , 1995, 22（3）：217-222.
［13］ 马渐新 , 周荣华 , 董玉琛 , 贾继增 . 来自长穗偃麦草的抗小麦
条锈病基因的定位［J］. 科学通报 , 1999, 44（1）：65-69.
［14］ 陈颖 , 王刚 , 赵俊霞 . 高等植物体内的肌动蛋白［J］. 生物学报 ,
2003, 38（1）：13-15.
［15］ 张少斌 , 刘国琴 . 植物肌动蛋白异型体研究进展［J］. 植物学
通报 , 2006, 23（3）：242-248.
［16］ Hightower RC, Meagher RB. The molecular evolution of actin［J］.
Genetics, 1986, 114 ：315-332.
［17］ 吴永娜 , 李剑 , 许瑞 , 等 . 党参肌动蛋白基因片段的克隆及序
列分析［J］. 中草药 , 2011, 42（12）：2518-2522.
［18］ 王学敏 , 王美珍 , 王赞 , 高洪文 . 柠条锦鸡儿肌动蛋白基因的
克隆和表达稳定性分析［J］. 植物生理通讯 , 2009, 45（8）：
765-770.
［19］ Drouin G, Dover GA. A plant processed pseudogene［J］. Nature,
1987, 328 ：557-558.
［20］ Kandasamy MK, Mckinney EC, Meagher RB. Functional non
equivalency of act in isovariants in Arabidopsis［J］. Mol Biol Cell,
2002, 13（1）：251-261.
［21］ Jiang YQ, Zhao WL. Expression and phylogenetic analysis of pea
actin isoforms［J］. J Integrat Plant Biol, 2002, 44 ：1456-1461.
［22］ An YQ, Huang SR, McDowell JM, et al. Conserved expression of
the Arabidopsis ACT1 and ACT3 actin subclass in organ primordia
and mature pollen［J］. Plant Cell, 1996, 8 ：15-30.
［23］ Thellin O, Zorzi W, Lakaye B, et al. Housekeeping genes as internal
standards ：use and limits［J］. Plant Mol Biol, 2003, 52 ：1025-
1036.
（责任编辑 狄艳红）