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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第7期
D-氨 基 半 乳 糖(D-Galactosamine), 又 称 2-
氨 基 -2-脱 氧 -D-半 乳 糖、 半 乳 糖 胺 或 软 骨 糖 胺
(Chondrosamine),广泛存在于寡糖、糖蛋白和糖胺
聚 糖(glycosaminoglycan,GAG) 中。20 世 纪 50 年
代首次发现其有细胞毒作用[1],但对其特异性致肝
损伤机制尚不清楚。最早认为氨基半乳糖能竞争性
捕捉 UTP 生成二磷酸尿苷半乳糖(UDP-galactose,
UDP-gal),使磷酸尿苷耗竭,影响了肝细胞的能量
代谢及阻碍了核酸、糖蛋白、脂糖合成[2]。但随着
研究手段和方法的发展,发现它与肝细胞膜的完整
性、谷胱甘肽耗竭及肿瘤坏死因子有关[3]。在肝炎
收稿日期 :2013-03-08
基金项目 :国家“863“计划课题(2012AA021504)
作者简介 :张荣岭,男,硕士研究生,研究方向 :微生物酶技术 ;E-mail :zhangrongling86@126.com
通讯作者 :李丕武,男,副教授,硕士生导师,研究方向 :生物工程 ;E-mail :piwuli@126.com
一株氨基半乳糖产生菌的筛选鉴定及培养条件研究
张荣岭 王瑞明 李丕武
(山东轻工业学院食品与生物工程学院 山东省微生物工程重点实验室,济南 250353)
摘 要 : 从东营黄河口湿地一处富含鱼蟹腐烂物的淤泥中分离筛选获得一株产氨基半乳糖的细菌 YR06。根据形态特征、生
理生化特征及 16S rDNA 序列分析,鉴定该菌株为嗜水气单胞菌。通过对该菌株摇瓶发酵进行的单因素试验和正交试验,优化得
到培养基成分及培养条件 :果糖 10 g/L,尿素 15 g/L,Na2HPO4 15 g/L,CaCl2 22.2 g/L,MgSO4 0.18 g/L,KH2PO4 5 g/L ;发酵液初始
pH6.5,装液量为 60 mL/250 mL,温度为 33℃,培养时间 14 h。在此条件下氨基半乳糖产量达 128 mg/L。
关键词 : 嗜水气单胞菌 氨基半乳糖 筛选 鉴定 培养条件
Screening and Identification of a Galactosamine-producing Strain and
Study of Its Cultural Conditions
Zhang Rongling Wang Ruiming Li Piwu
(Shandong Provincial Key Laboratory of Microbial Engineering,School of Food and Biological Engineering
Shandong Institude of Light Industry,Ji’nan 250353)
Abstract: A galactosamine producing-strain YR06 was isolated from the sludge where the dead fish and crab was decomposed in
Dongying Yellow River estuary wetland. Based on morphology, physiological and biochemical characteristics as well as the 16S rDNA gene
sequence, strain YR06 was identified as Aeromonas hydrophila. Optimization of YR06 fermentation conditions was studied via single factor and
orthogonal test design. The optimum fermentations conditions were showed as followed :fructose 10 g/L, urea 15 g/L, Na2HPO4 15 g/L, CaCl2
22.2 g/L, MgSO4 0.18 g/L, KH2PO4 5 g/L ;initial pH6.5, fermentation holding 60 mL/250 mL, fermentation temperature 33℃. The yeild of
galactosamine achieved 128 mg/L after the optimization.
Key words: Aeromonas hydrophila Galactosamine Screening Identification Cultural conditions
药物药效学研究中,用氨基半乳糖制作的肝损伤模
型比用四氯化碳、乙醇、扑热息痛等药物制作的模
型优越[4]。如何合理地利用新的科学技术手段,研
究其肝损伤的靶向性和毒理学机制,作为药物研究
或新类似物合成治疗肝脏肿瘤等,是未来氨基半乳
糖毒理学研究的方向。然而,D-氨基半乳糖国际市
场价格昂贵,限制了国内外肝炎治疗新药筛选用理
想动物模型的建立。
目前,D-氨基半乳糖主要是以硫酸软骨素为原
料直接用盐酸水解后,经强酸性阳离子交换树脂分
离提纯制得的盐酸盐[5]。该法存在原料来源不足、
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第7期126
工艺复杂、环境污染严重等问题,限制了氨基半乳
糖的规模化生产。化学合成法研究进展缓慢,直到
2001 年 McGeary 等[6]采用苯甲酸钠和三甲磺酸与
氨基葡萄糖反应,合成 D-氨基半乳糖。因其工艺复
杂,产物稳定性差、成本高等原因未能实现产业化。
原核生物的糖酵解过程中,少量的 6-磷酸果糖在 6-
磷酸果糖转氨酶(GFAT)作用下,由谷氨酰胺提
供氨基,生成 6-磷酸氨基葡萄糖,在变位酶作用下
生成 1-磷酸氨基葡萄糖并立即乙酰化生成 N-乙酰 -
氨基葡萄糖。随后生成中间产物 UDP-N-乙酰氨基
葡萄糖并在 UDP-N-乙酰氨基葡萄糖 -4-差向异构酶
(GNE)的作用下异构化生成 UDP-N-乙酰氨基半乳
糖(UDP-GalNAc)[7]。在酸性环境下脱掉乙酰基得
到氨基半乳糖。利用微生物以糖质为原料转化生成
氨基半乳糖在此前未见文献报道。本研究从东营黄
河口湿地一处富含鱼蟹腐烂物的淤泥中分离筛选获
得一株产氨基半乳糖的细菌,分析其形态特征、生
理生化特征及 16S rDNA 序列,旨在为氨基半乳糖的
生物制造提供帮助。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 土样 东营黄河口湿地,黄海深海淤泥,青
岛沿海某渔场附近地表下 2 cm 土样。
1.1.2 培养基 (1)富集培养基 :LB 培养基、高氏
一号培养基、查氏培养基 ;(2)筛选培养基(g/L):
盐溶液Ⅰ:NH4Cl 10,NaCl 10,Na2HPO4 15,KH2PO4 5,
蒸馏水 980 mL ;盐溶液Ⅱ :1 mol/L 的 MgSO4 溶液 ;
盐 溶 液 Ⅲ :1 mol/L 的 CaCl2 溶 液 ;葡 萄 糖 溶 液 :
20% 的葡萄糖 ;配制方法 :将盐溶液Ⅰ在 1×105 Pa
灭菌 20 min,冷却后向盐溶液Ⅰ中添加 2 mL 经滤膜
过滤后的盐溶液Ⅱ和 0.1 mL 盐溶液Ⅲ以及 20 mL 葡
萄糖溶液。(3)基础发酵培养基 :同筛选培养基。
1.2 方法
1.2.1 分离筛选 采集样品经富集后,分别以 LB 培
养基、高氏一号培养基和查氏培养基为细菌、放线
菌、霉菌分离培养基,采用梯度稀释法和平板划线
法分离并纯化菌种。将滤纸灭菌后放置于 2% 的水
琼脂平板中,用 0.5-1.0 mL 的筛选培养基浸湿滤纸。
将纯化的菌株点种到滤纸上,37℃恒温培养 1 d。将
滤纸片取出晾干,喷洒 0.2% 的茚三酮溶液,95℃显
色 15 min。观察点样点及周围有无紫红色[8]。将显
色的菌株接入装有 50 mL 筛选培养基的 250 mL 摇瓶
中,摇床培养 1 d。将发酵液 5 000 r/min 离心 3 min。
取 上 清 液 10 mL, 调 pH 至 7.0。 分 别 用 薄 层 层 析
(TLC)法、比色法和高效液相色谱法检测,将产生
氨基半乳糖的菌株进行多次连续传代,保留产氨基
半乳糖性能稳定的菌株并做进一步研究。
1.2.2 氨 基 半 乳 糖 检 测 (1) 薄 层 层 析(TLC)
法[9]:展层剂的组成为吡啶∶乙酸乙酯∶水∶乙
酸 =5∶5∶3∶1[10], 点 样 25 μL 后 展 开, 待 展 层
剂挥发后均匀喷洒 0.2% 的茚三酮溶液,95℃显色
15 min。(2)比色法[10,11]:按 TLC 法展开 5 次,将
样点抠出并溶于 1.0 mL 蒸馏水中。取 0.4 mL 样液
加入 0.3 mL 乙酰丙酮试液Ⅰ,混匀于 100℃水浴 30
min,放冷,加入对二甲氨基苯甲醛试液 1 mL,5
min 后在 535 nm 处测光吸收值 Ah。同样取 0.4 mL 样
液加入乙酰丙酮试液Ⅱ,混匀于 25℃水浴中加热 2 h,
加 1 mL 对二甲氨基苯甲醛试液,混匀后在 50℃下
保温 15 min。取出在室温下放置 30 min 后于 530 nm
处测光吸收值 Al。以蒸馏水做空白对照。两种光吸
收值比值 Ah/Al≈1 时为氨基半乳糖,Ah/Al≈10 时为
氨基葡萄糖。(3)高压液相色谱(HPLC)法[12,13]:
HPLC 分 析 条 件 :色 谱 柱 :Inertsil NH2(4.6 mm×
250 mm,0.5 μm),检测器为岛津 RID-10A,流动相
为乙腈∶水 =7∶3(V/V),流速为 1.0 mL/min,进
样量 10 μL。样品处理 :0.22 μm 微孔滤膜过滤。(4)
氨基半乳糖含量的检测 :用高效液相色谱法检测,
色谱条件同(3)。
1.2.3 菌种鉴定 对菌株进行形态及生理生化试
验[14,15],结合伯杰氏细菌鉴定手册和 16S rDNA 同
源序列比对鉴定菌种。16S rRNA 相似性分析采用细
菌通用引物,正向引物 27F :5-AGAGTTTGATCCT-
GGCTCAG-3 ;反向引物 1492R :5-GGTTACCTTGT-
TACGACTT-3(由上海生工生物工程技术服务有限
公司合成)。PCR 体系:Pfu 体系,dNTP 4 μL,5×buffer
5 μL,引物Ⅰ 0.5 μL,引物Ⅱ 0.5 μL,模板 1 μL,Pfu
酶 1 μL,ddH2O 33 μL。PCR 程序设定 :94℃ 5 min ;
94℃ 40 s,54℃ 40 s,72℃ 2.5 min,35 个 循 环 ;
72℃ 10 min。琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。
2013年第7期 127张荣岭等 :一株氨基半乳糖产生菌的筛选鉴定及培养条件研究
1.2.4 系统发育学分析 PCR 产物送上海生工生物
工程技术服务有限公司测序,将测序结果用 BLAST
软件比对进行序列相似性分析,从 GenBank 选取相
关菌种的同源序列,利用 MEGA5.0 软件进行系统发
育分析,采用 Neighbor-jointing 算法构建系统发育树。
1.2.5 发酵培养基成分优化 (1)在培养条件不变
的基础上,按 4 g/L 的添加量,分别用半乳糖、蔗糖、
可溶性淀粉、果糖、麦芽糖替换培养基中的葡萄糖,
以 10 g/L 的添加量,分别用牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、
尿素、(NH4)2SO4、NaNO3、NH4NO3、氨水替换发
酵培养基中的 NH4Cl,按 1.2.2(4)中的方法检测
氨基半乳糖,做 3 个平行试验,确定最佳碳源和氮
源。(2)培养基成分的正交试验优化,选择最佳碳
源和氮源以及 4 种无机盐 Na2HPO4、CaCl2、MgSO4、
KH2PO4 共 6 个因素,设置 5 个水平,选用 L25(5
6)
正交表(表 1),做 3 个平行试验,按 1.2.2(4)中
的方法检测氨基半乳糖。
表 1 发酵液成分正交试验的因素和水平
因素 水平
Carbon source A(g/L) 4 6 8 10 12
Nitrogen source B(g/L) 5 10 15 20 25
Na2HPO4 C(g/L) 11 13 15 17 19
CaCl2 D(g/L) 5.55 11.1 16.7 22.2 27.8
MgSO4 E(g/L) 0.12 0.18 0.24 0.30 0.36
KH2PO4 F(g/L) 3 4 5 6 7
1.2.6 培养条件优化 在培养基优化的基础上,将
菌株 YR06 从斜面接入发酵培养基中,在其它培养
条件一致的情况下,设定以下 4 种不同培养条件,
200 r/min 摇床培养后用 1.2.2(4)中的方法测定产
物氨基半乳糖含量。①起始 pH 值对氨基半乳糖产
量的影响 :用酸度计将培养基的 pH 值分别调节为
6.0、6.5、7.0、7.5 和 8.0。②装液量对氨基半乳糖
产量的影响 :装液量分别调节为 250 mL 摇瓶装液
30、40、50、60 和 70 mL。③培养温度对氨基半乳
糖产量的影响 :培养温度分别调节为 30℃、33℃、
35℃、37℃和 40℃。④培养时间对氨基半乳糖产量
的影响 :在上述优化的条件下,培养过程中每隔 2 h
取样一次,测定发酵液 OD600 并用 1.2.2(4)的方法
测定氨基半乳糖含量。
2 结果
2.1 氨基半乳糖生产菌株的筛选
经过富集培养,分离纯化出单菌落 139 株,初
筛中得到 24 株颜色反应成红色及紫红色的菌株,复
筛得到 1 株产氨基半乳糖的菌株 YR06,产量为 63.5
mg/L。将该菌株作为出发菌株进一步研究。薄层层
析结果显示与氨基半乳糖标样的比移值相同(图 1)。
比色法(Ah/Al≈1)和高效液相色谱(图 2)检测并
确认产物为氨基半乳糖。
≘สॺң㌆ ਁ䞥⏢
m
V
17.5317.774
7.22
3.621
2.666 10.601
Timemin
ḷṧ7.216
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0
0
250
500
750
1000
1250
1500 Ự⍻ಘA:210 nm
图 1 发酵液的薄层层析图
图 2 粗提液的液相色谱图
2.2 经典分类学特征
菌株 YR06 在 LB 培养基上生长良好,37℃培养
12 h,形成边缘整齐、表面湿润、中央隆起、光滑、
半透明、淡黄色的圆形菌落(图 3-A)。发酵液有芳
香气味。 两端钝圆,直形短杆菌,革兰氏染色为阴性,
单个或成对排列,无芽孢(图 3-B)。生理生化试验
特征见表 2。
2.3 16S rDNA序列系统发育树
经 16S rDNA 测序,其碱基数为 1 451 bp,将测
序结果提交到 GenBank 数据库,用 BLAST 程序进行
比对,多序列连配分析后构建系统发育树(图 4),
结果发现 YR06 与气单胞菌的多个种 16S rDNA 序列
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第7期128
相似性达到 99%,与嗜水气单胞菌位于同一分支。
综合考虑 YR06 的形态特征、生理生化特征及
16S rDNA 序列分析,初步鉴定菌株 YR06 属于嗜水
气 单 胞 菌(Aeromonas hydrophila), 将 其 命 名 为 A.
hydrophila YR06。
2.4 菌株YR06培养条件的优化
2.4.1 不同碳、氮源对 A. hydrophila YR06 产氨基半
乳糖的影响 以葡萄糖等 6 种碳源的培养基培养菌
株 A. hydrophila YR06,均有氨基半乳糖产生,其中
以果糖为碳源时产量最大。其次是葡萄糖,而半乳糖、
蔗糖、淀粉、麦芽糖果较差(图 5)。因此,以果糖
为碳源。以牛肉膏等 8 种氮源的培养基培养 YR06,
以尿素为氮源时产量最大,以 NaNO3、NH4NO3 为氮
源时产量最小(图 6),因此以尿素为氮源。
2.4.2 培 养 基 成 分 的 正 交 试 验 以 果 糖、 尿 素、
CaCl2、Na2HPO4、KH2PO4、MgSO4 为因素,按 L25(5
6)
正交表设计 6 因素 5 水平正交试验,优化菌株 YR06
产氨基半乳糖的发酵液成分(表 3)。正交试验极
差分析表明,6 个因素对氨基半乳糖产量的影响为
A>D>B>F>E>C,方差分析表明,果糖添加量对菌株
YR06 发酵产氨基半乳糖产量影响最大。最优组合
为 A4B3C3D4E2F3 ;因此确立培养基配方为 :果糖
(10 g/L)、 尿 素(15 g/L)、Na2HPO4(15 g/L)、Ca-
Cl2(22.2 g/L)、MgSO4(0.18 g/L)、KH2PO4(5 g/L)。
2.4.3 菌株 YR06 产氨基半乳糖培养条件的优化
在确定发酵培养基配方的基础上对发酵条件进行了
图 3 菌株 YR06 菌落形态(24 h)(A)及革兰氏染色
(24 h,1 600×)(B)
表 2 菌株 YR06 的生理生化特征
生化特征 结果 生化特征 结果
阿拉伯糖 + V.P. 试验 +
葡萄糖 + M.R 试验 -
甘露醇 + 柠檬酸盐利用 +
麦芽糖 + 明胶液化 +
木糖 - 淀粉水解 +
果糖 + 硝酸盐还原 +
乳糖 + 吲哚试验 +
半乳糖 + 氧化酶 +
蔗糖 + 尿素酶 -
葡萄糖产气 + 最高生长温度(℃) 45
H2S + 运动性 +
+ :阳性 ;- :阴性
Aeromonas salmonicida strain JCM7873
Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida strain CECT894
Aeromonas molluscorum strain 848
Aeromonas encheleia strain A1881
Aeromonas bivalvium strain 868E
Aeromonas popoffii strain LMG317541
Aeromonas sobria strain 208
Aeromonas punctata strain ATCC15468
Aeromonas enteropelogenes strain DSM6394
Aeromonas hydrophila subsp. dhakensis strain LMG19562
Aeromonas hydrophila strain CCM7232ATCC7966
Aeromonas media strain RM
Aeromonas hydrophila subsp. ranae strain CIP107985
strain YR06
Aeromonas allosaccharophila strain CECT4199
Aeromonas schubertii strain CDC2446-81
Aeromonas veronii
Aeromonas jandaei strain CDC0787-80
69
100
77
43
82
74
98
49
88
48
50
24
93
46
92
0.002
Aeromonas salmonicida subsp. achromogenes strain 6263/4/5
Aeromonas salmonicida subsp. smithia strain AS20/1/1
Aeromonas bestiarum strain CIP7430
Aeromonas salmonicida subsp. pectinolytica strain34mel
图 4 菌株 YR06 的 16S rDNA 基因系统发育树图
A B
2013年第7期 129张荣岭等 :一株氨基半乳糖产生菌的筛选鉴定及培养条件研究
优化。研究结果表明,将培养基的初始 pH 调节为 6.5,
250 mL 三角瓶装 60 mL 发酵液,33℃,200 r/min 恒
温振荡培养 14 h,氨基半乳糖产量最高,达到 128
mg/L。因此选择此培养条件为发酵培养条件。
3 讨论
传统生产氨基半乳糖的方法不仅原料少,而且
生产过程中产生大量的废水,污染环境,产物提纯
也较复杂,因此,利用微生物直接发酵法生产氨基
半乳糖必将会成为未来最具竞争力的生产方法,实
现这一生产方法的核心是能够高效积累氨基半乳糖
的菌种。龚霞等[16]采用抑制差减法从嗜水气单胞
菌中杂交得到 gneJ 片段,扩增后并在大肠杆菌中进
行异源表达,重组表达蛋白可将 UDP-乙酰氨基葡萄
糖转化为 UDP-乙酰氨基半乳糖,证实 gneJ 基因编
码蛋白为 UDP-乙酰氨基葡萄糖 -4-差向异构酶。本
研究筛选得到的高产氨基半乳糖菌株经鉴定为嗜水
气单孢菌(A. hydrophila YR06),而目前对嗜水气单
胞菌的研究主要集中在致病性、耐药性以及疫苗等
方面,尤其是对水产养殖业的危害及防治方面。未
见有这类菌株积累氨基半乳糖方面的报道。从液相
图谱可以看出,该菌株的发酵产物相对单一,易于
分离,具有较好的工业化开发价值。
培养基优化过程中,果糖作为最适碳源出现,
其原因可能是果糖和葡萄糖的代谢途径具有高度的
A B C D E F
20
0
40
60
80
100
Th
e
ye
ild
o
f g
al
ac
to
sa
m
in
em
g/
L
carbon source
a b c d e f g h i
0
20
40
60
80
100
120
Th
e
ye
ild
o
f g
al
ac
to
sa
m
in
em
g/
L
nitrogen source
A :葡萄糖 ;B :麦芽糖 ;C :半乳糖 ;D :蔗糖 ;E :果糖 ;F :淀粉
图 5 不同碳源对氨基半乳糖产量的影响
a :牛肉膏 ;b :尿素 ;c :蛋白胨 ;d :酵母浸粉 ;e :NH4Cl ;f :NaNO3 ;g :
(NH4)2SO4 ;h :NH4NO3 ;i :氨水
图 6 不同氮源对氨基半乳糖产量的影响
表 3 菌株 YR06 产氨基半乳糖培养条件正交试验结果
Number A B C D E F
The yeild of galacto-
samine(mg/L)
1 4 5 11 5.55 0.12 3 75.8
2 4 10 13 11.1 0.18 4 83.5
3 4 15 15 16.7 0.24 5 91.7
4 4 20 17 22.2 0.30 6 89.3
5 4 25 19 27.8 0.36 7 84.1
6 6 5 13 16.7 0.30 7 89.4
7 6 10 15 22.2 0.36 3 93.8
8 6 15 17 27.8 0.12 4 97.3
9 6 20 19 5.55 0.18 5 93.8
10 6 25 11 11.1 0.24 6 90.9
11 8 5 15 27.8 0.30 6 105.6
12 8 10 17 5.55 0.24 7 99.6
13 8 15 19 11.1 0.30 3 107.3
14 8 20 11 16.7 0.36 4 103.2
15 8 25 13 22.2 0.12 5 116.8
16 10 5 17 11.1 0.36 5 101.0
17 10 10 19 16.7 0.12 6 108.2
18 10 15 11 22.2 0.18 7 115.7
19 10 20 13 27.8 0.24 3 102.9
20 10 25 15 5.55 0.30 4 106.4
21 12 5 19 22.2 0.24 4 108.4
22 12 10 11 27.8 0.30 5 101.9
23 12 15 13 5.55 0.36 6 99.8
24 12 20 15 11.1 0.12 7 107.3
25 12 25 17 16.7 0.18 3 104.6
K1 84.9 96.0 97.5 95.1 99.78 96.88
K2 93.0 97.4 98.5 98.0 100.64 98.10
K3 106.0 102.4 101.0 99.4 98.70 101.93
K4 106.8 99.3 98.4 104.8 98.86 98.76
K5 104.4 100.1 100.4 98.4 96.38 99.22
R 21.96 6.32 3.46 9.72 4.70 5.05
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第7期130
相似性,嗜水气单胞菌的糖代谢途径中存在着果糖
激酶,该酶受葡萄糖介导的抑制并受果糖诱导,将
果糖变为 6-磷酸果糖[17]。同时,UDP-N-乙酰氨基
葡萄糖在 GNE 作用下异构化为 UDP-N-乙酰氨基半
乳糖并最终导致细胞质中的 6-磷酸氨基葡萄糖无法
大量积累而减弱了 6-磷酸果糖转氨酶的限速作用,
该途径得以持续进行。Mg2+ 是许多酶活性中心必不
可少的一部分,能够保证菌体的良好生长。同时,
添加 Mg2+ 能有效的激活谷氨酰胺合成酶的活性,提
高谷氨酰胺的生成量[18]。Ca2+ 对产物产量的影响可
能是影响了细胞膜的透性,使得产物可透过细胞膜
分泌到细胞外部,减弱了对关键酶的反馈抑制作用。
氨基半乳糖转化菌株的筛选和分类鉴定工作对
于氨基半乳糖生物转化法生产工艺的建立有重要意
义。通过基因工程等手段将编码氨基半乳糖转化的
基因导入其他菌株,同时切断菌株将氨基半乳糖转
运至细胞内的途径,使之不能再降解氨基半乳糖,
有利于持续生物转化生产中产物的累积,实现其高
效安全生产。因此,有必要对菌株 YR06 进行进一
步育种及驯化培养等研究。
4 结论
从黄河口湿地一处富含鱼蟹腐烂物的淤泥中筛
选到一株具有氨基半乳糖转化能力的菌株,菌株 YR-
06 鉴 定 为 嗜 水 气 单 胞 菌。 优 化 该 菌 株 的 培 养 基
成分及培养条件:果糖 10 g/L,尿素 15 g/L,Na2HPO4
15 g/L,CaCl2 22.2 g/L,MgSO4 0.18 g/L,KH2PO4 5 g/L;
发酵液初始 pH6.5,装液量为 60 mL/250 mL,温度
为 33℃,培养时间 14 h。氨基半乳糖的产量达到
128 mg/L。
参 考 文 献
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(责任编辑 马鑫)