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作 者 ：朱芳;邓思;罗立新;

期 刊 ：生物技术通报 2011年 0卷 06期 页码：218-222

关键词：金黄色葡萄球菌；pET32a-SrtA_(△N24)；pET32a-SrtA_(△N59)；大肠杆菌；原核表达；

摘 要 ：旨在pET32a(+)原核表达载体中表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的转肽酶分选酶(SrtA)并进行鉴定。以合有pET22-srtA质粒为模板,设计并合成引物,PCR扩增得到SrtA_(△N24)和SrtA_(△N59)基因,经过BamHⅠ、XhoⅠ酶切,克隆入表达载体pET32a(+)中,构建重组载体pET32a-SrtA_(△N24)及pET32a-SrtA_(△N59),并转化入大肠杆菌BL21(DE3)。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物分别进行分析和鉴定。然后对重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达条件进行了优化。结果显示重组载体pET32a-SrtA_(△N24)和pET32a-SrtA_(△N59)分别表达出相对分子量为约42 kD和37 kD的融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting检测显示其分子量与预期的大小相符合。成功构建了重组质粒pET32a-SrtA_(△N24)和pET32a-SrtA_(△N59),并且在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效融合表达。

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