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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2011 年第 8 期
黑曲霉 β-甘露聚糖酶基因 manA在
PK15 细胞中的分泌表达
邹娴1 张茂1，2 许惠1 林纯1 贺晓燕1 刘德武1 蔡更元2 吴珍芳1
(1华南农业大学动物科学学院，广州 510642;2广东省农业科学院畜牧研究所，广州 510600)
摘 要: 通过 RT-PCR方法，从黑曲霉总 RNA中克隆出 β-甘露聚糖酶基因 manA的成熟肽编码序列。将其与猪腮腺分
泌蛋白(parotid secretory protein，PSP)基因的信号肽序列通过重叠延伸 PCR方法得到拼接片段，并插入到真核表达载体 pcD-
NA6． 0 /HisTMA中，得到重组质粒 pcDNA-PSmanA。重组质粒经过 PCR、酶切、测序鉴定，证实含有目的片段，且读码框完全正
确。在脂质体介导下将 pcDNA-PSmanA转染猪肾(PK15)细胞进行分泌表达，通过 RT-PCR 方法证实其在 PK15 细胞中表达，
并在细胞培养液中检测酶活性得到 β-甘露聚糖酶基因酶活性为 14． 5 IU /mL。
关键词: 黑曲霉 β-甘露聚糖酶 重叠延伸 PCR PK15 细胞
Secretion Expression of β-mannanase (manA)Gene in
PK15 Cells from Aspergillus niger
Zou Xian1 Zhang Mao1，2 Xu Hui1 Lin Chun1 He Xiaoyan1 Liu Dewu1 Cai Gengyuan2 Wu Zhenfang1
(1College of Animal Science，South China Agricultural University，Guangzhou 510642;
2 Institute of Animal Science，Guangdong Academy of Agriculture Sciences，Guangzhou 510600)
Abstract: The mature β-mannanase gene (manA)was amplified by RT-PCR from Aspergillus niger total RNA． Then，the mature
peptide sequence and signal peptide sequence of pig parotid secretory protein(PSP)gene were splicing by overlap extension PCR (SOE-
PCR) ，which was subcloned into the eukaryotic expressing plasmid vector pcDNA6． 0 /HisTMA． The recombinant plasmid pcDNA-PSma-
nA was identified by PCR，enzyme digestion and DNA sequencing． The result showed that the recombinant plasmid of pcDNA-PSmanA
was constructed correctly． Meanwhile，the PK15 cells were transfected with pcDNA-PSmanA by cationic liposome，and the mRNA of the
target gene was determined by RT-PCR． The maximum yield of the recombinant β-mannanase in cell culture medium was 14． 5 IU /mL．
Key words: Aspergillus niger β-mannanase Overlap extension PCR PK15 cells
收稿日期:2011-01-24
基金项目:国家重大专项(2008ZX08006004，2009ZX08006-012B)
作者简介:邹娴，女，硕士研究生，研究方向:动物遗传育种与繁殖;E-mail:29046725@ qq． com
通讯作者:吴珍芳，男，博士，教授，研究方向:分子遗传与猪的育种;E-mail:wzfemail@ 163． com
甘露聚糖类物质作为半纤维素的第二大组分，
广泛分布于自然界中［1，2］。它是所有豆科植物细胞
壁的主要组成成分，在其他植物性饲料原料(如玉
米、小麦、菜籽粕和麸皮等)中含量也较高。从营养
角度来说，半纤维素是一种抗营养因子，不能被单胃
动物消化，会降低饲料的利用率［3］。传统方法一般
都是在强酸、强碱等极端条件下降解。随着生物技
术的发展，目前甘露聚糖的完全酶解主要依靠酶类，
其中 β-甘露聚糖酶应用得最广泛。β-甘露聚糖酶
是一类能水解含有 β-1，4-D-甘露糖苷键的甘露聚
糖，能将其降解成仅含 2 － 10 个残基的寡聚糖，从而
降低 β-甘露聚糖的抗营养作用，提高饲料的利用
率，促进畜禽生长，减轻环境的污染;还能吸附病原
菌，促进肠道有益菌群增值，提高动物的生产性能，
长期使用可防止沙门菌和肉毒杆菌等致病菌感染及
在肠道的定植和繁殖，减少抗生素的添加量［4，5］。
已报道的能产 β-甘露聚糖酶的微生物有枯草
芽孢杆菌、诺卡氏放线菌、黑曲霉及地衣芽孢杆菌
2011 年第 8 期 邹娴等:黑曲霉 β-甘露聚糖酶基因 manA在 PK15 细胞中的分泌表达
等。但动物消化道处于一种酸性及弱碱性状态，这
就要求 β-甘露聚糖酶要有较好的酸稳定性，利用黑
曲霉产生的 β-甘露聚糖酶属于酸性，而且酶活力较
高［6］。本试验从黑曲霉中克隆到酸性 β-甘露聚糖
酶基因(manA)的成熟肽编码序列，通过重叠 PCR
方法与猪腮腺分泌蛋白基因(parotid secretory pro-
tein，PSP)的信号肽序列进行拼接，将得到的拼接片
段插入到真核表达载体 pcDNA6． 0 /HisTMA 中，在脂
质体介导下成功将带有目的基因的真核表达质粒转
入 PK15 细胞，并通过提取 PK15 细胞中的 RNA，检
测 manA基因的表达，采用 DNS 法在细胞培养液上
清中检测 β-甘露聚糖酶活，从而实现异源基因分泌
表达，为进一步进行 manA 转基因动物的制备打下
良好基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 菌株 黑曲霉(Aspergillus niger)GIM3． 452
购自广东省微生物研究所微生物菌种保藏中心，基
因工程菌 DH5α购自宝生物(大连)有限公司。
1． 1． 2 载体 pMD18-T Vector 购自宝生物(大连)
有限公司，pcDNA6 /HisTMA 表达载体由广东省温氏
集团研究院生物技术研究中心保存。
1． 1． 3 酶类和主要试剂 PrimeScriptTMOne Step RT-
PCR Kit、PrimeSTAR HS DNA Polymerase、LATaqTM、
DH5α、DNA Ligation Kit Ver2． 0、ExTaqTM均购自宝生
物工程(大连)有限公司;PCR 检测用 Taq 酶购自广
州东盛生物科技有限公司;限制性内切酶 Nhe Ⅰ和
Xho Ⅰ购自 Fermentas 公司;RNA 抽提试剂盒、DNA
胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒均购自北京天根生
化科技有限公司;LipofectamineTM 2000 脂质体转染
试剂盒购自 Invitrogen 公司。甘露聚糖购自 Sigma
公司(美国)。引物合成及测序均由上海生工生物
技术有限公司完成。
1． 2 方法
1． 2． 1 黑曲霉液体培养及总 RNA的提取 配制液
体培养基:Sucrose(蔗糖)30 g，NaNO3 3 g，MgSO4·
7H2O 0． 01 g，K2HPO4 1 g，蒸馏水 1 000 mL，pH调至
6． 8，高压，冷却，接种黑曲霉到无菌液体培养基，
30℃，200 r /min，培养 3 d;收集菌体进行 RNA 抽提
(参照天根植物总 RNA提取试剂盒说明提取)。
1． 2． 2 β-甘露聚糖酶基因成熟肽编码序列的 RT-
PCR扩增 参照 GenBank 发表黑曲霉 manA(XM
001397260)的成熟肽序列设计两条特异引物。正
向引物 5-GCTTCCAACCAGACTCTGT-3;反向引物
5-TTAAGCCCCCTCCCAGTTTCA-3。以黑曲霉提取
的 RNA为模板，用 RT-PCR kit直接进行 PCR扩增，
取 RNA 16 μL，2 × 1 Step Buffer 25 μL，上、下游引物
各 1 μL，PrimeScript one Step Enzyme Mix 2 μL，双蒸
水 5 μL，反应程序:50℃ 30 min，94℃ 2 min;94℃ 30
s，52℃ 30 s，72℃ 1 min，35 个循环;最后 72℃延伸
10 min。取 PCR 产物用 1%的琼脂糖凝胶电泳检
测，用琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒回收纯化 PCR
产物，将回收产物连接到 pMD18-T 载体上，再将连
接产物转化感受态细胞 DH5α，挑选白色菌落，进行
菌液 PCR，选择 PCR检测为阳性的菌液送上海生物
工程技术服务有限公司测序，进行正反两个方向
测定。
1． 2． 3 融合基因 PSmanA 的重叠延伸 PCR 猪腮
腺分泌蛋白(PSP)基因在唾液腺中特异性高表
达［7］，猪 PSP 基因是研制猪腮腺转基因生物反应器
及进行抗病育种研究的最佳候选基因［8 － 10］，利用猪
PSP基因的信号肽序列，应用重叠延伸 PCR 的方
法［11 － 13］，与 β-甘露聚糖基因成熟肽编码序列进行
重叠延伸 PCR得到融合基因，以达到 manA 基因能
够分泌表达的目的。设计重叠延伸 PCR引物，并在
M1 和 M6 加入酶切位点 Nhe I和 Xho I(表 1) ，将最
后得到的 PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，然后
用琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒进行回收纯化。方
法同 1． 2． 2，将回收产物连接到 pMD18-T载体上，筛
选阳性克隆送上海生工生物工程技术服务有限公司
进行正反两个方向测定。
1． 2． 4 manA基因真核表达载体的构建 用 Nhe Ⅰ
和 Xho Ⅰ将 PSmanA片段释出，定向克隆到经同样处
理的 pcDNA6 /HisTM A 载体中，构建重组表达质粒
pcDNA-PSmanA，转化 DH5α后挑选白色菌落，直接以
菌液为模板进行 PCR 扩增，然后用琼脂糖凝胶电泳
检测。按质粒提取试剂盒说明提取重组质粒，以质粒
为模板再进行 PCR扩增、Nhe Ⅰ单酶切和 NheⅠ、Xho
Ⅰ双酶切、琼脂糖凝胶电泳检测和鉴定。选择酶切和
PCR鉴定为阳性的重组质粒上海生工生物工程技术
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生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2011 年第 8 期
服务有限公司测序，验证重组质粒读码框的正确性。
表 1 重叠延伸 PCR引物序列
引物名称 引物序列 (5→3)
M1 CTGGCTAGCNhe I
GTTTAAACTTAAGC
M2
CACAAGAAAACAAGTTTCCAAAGTTGAAACATGG-
TAAGCTTAAGTTTAAACGCTAGCCA
M3
AACTTTGGAAACTTGTTTTCTTGTGCGGTCTGCTCA-
TTGGGACCCTCAGCATCT
M4
GGACAGAGTCTGGTTGGAAGCAGATGCTGAGGTC-
CCAATGAG
M5 GCTTCCAACCAGACTCTGT
M6 ATTCTCGAGXho I
TTAAGAACCCCCTCCCAGTT
1． 2． 5 阳性重组质粒转染猪 PK15 细胞及其表达
酶活的测定
1． 2． 5． 1 PK15 细胞的复苏 从液氮中取出装有
PK15 细胞的冻存管，直接浸入 37℃温水中，摇动使
其尽快融化，然后用吸管洗出细胞悬液到培养皿中，
加入 10 倍体积培养液，混匀，1 000 r /min 离心 5
min，弃去上清，加入含有 10%的小牛血清培养液重
悬细胞，调整密度，接种于直径 10 mL 的培养皿中，
37℃培养箱静置培养，次日换液，继续培养，当细胞
长满后进行传代培养。
1． 2． 5． 2 重组质粒 pcDNA-PSmanA 转染 PK15 细
胞 细胞传代且已达到 80%融合度，将构建好的
重组质粒 pcDNA-PSmanA 在脂质体介导下转染
PK15 细胞。步骤如下:取两支 15 mL 离心管，分
别往各管加入提取好的质粒 DNA 60 μL，轻轻摇
匀，室温静置 5 min，然后将两管液体混合得到混
合液，再室温静置 20 min，将 PK15 细胞旧液吸弃，
用无血清培养基洗涤细胞，吸弃，将混合液滴加于
细胞轻轻摇匀，CO2培养箱内 37℃培养 2 h 后用含
血清培养基补充至 10 mL，继续培养 48 h 后可进
行酶活测定。
1． 2． 5． 3 细胞培养液粗酶液的酶活测定 将转染
后的 PK15 进行刮取，12 000 r /min离心 3 min，提取
PK15 细胞总 RNA(参照天根 RNA提取试剂盒) ，以
M1 和 M6 为引物，进行 RT-PCR扩增。
收集细胞培养液，采用 DNS 法测定重组 β-甘
露聚糖酶的酶活，以 1%甘露聚糖为底物，反应时
间为 10 min，pH3． 5 － 6． 0，温度为 40℃，波长为
550 nm［14，15］。1 个酶活单位(IU)定义为在上述的
反应条件下，以 1 μmol /min 的速度释放出甘露糖
所需的酶量。
2 结果与分析
2． 1 manA基因的 RT-PCR扩增
提取黑曲霉总 RNA，通过 RT-PCR扩增，取 PCR
产物在 1%琼脂糖凝胶上电泳，可见在 1 000 bp 有
一条特异带，与预期的 954 bp接近(图 1)。
M． DL2000 DNA Marker;1，2． manA的 RT-PCR产物
图 1 manA的 RT-PCR扩增
2． 2 manA基因的克隆及测序鉴定
将 manA基因的 RT-PCR 产物经纯化回收后，
与克隆载体 pMD18-T连接，转化 DH5α 后挑选白色
菌落，进行菌液 PCR，选择 PCR 检测为阳性的菌液
送上海生物工程技术服务有限公司测序，进行双向
测通，得到 954 bp 的核苷酸序列，含有一个完整的
阅读框，编码 317 个氨基酸，读码框完整。与 Gen-
Bank 中 注 册 的 β-甘 露 聚 糖 酶 manA 基 因
(XM001397260． 1)进行比较发现，该序列与黑曲霉
β-甘露聚糖酶 manA基因序列相似性为 98． 6%，氨基
酸比对相似性为99． 4%，其中第 250 位的 L 变为 V，
第 273位的 S变为 R。
对黑曲霉甘露聚糖 man 基因序列与 GenBank
公布的黑曲霉甘露聚糖酶基因序列进行系统进化树
分析，结果如图 2 所示。从系统进化树可以看出，黑
曲霉木聚糖酶 manA 基因与 XM002377295 和
XM001825696 亲缘关系较近。
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2011 年第 8 期 邹娴等:黑曲霉 β-甘露聚糖酶基因 manA在 PK15 细胞中的分泌表达
图 2 黑曲霉甘露聚糖酶进化树
2． 3 融合基因 PSmanA序列的克隆及测序鉴定
重叠 PCR 连上信号肽序列之后，连接到载体
pMD18-T，转化后挑选白色菌落，进行菌液 PCR，琼
脂糖凝胶电泳出现一条约比 manA 基因稍大的带，
与预期的片段接近(图 3) ，测序结果得到 1 051 bp
的核苷酸序列，含有 PSP 基因的信号肽序列、manA
基因的成熟肽编码序列以及 pcDNA6 /HisTM A 载体
上的一部分序列。测序结果与目的序列进行比较，
相似性为 100%，证明重叠延伸片段正确。
M． DL2000 DNA Marker;1． manA的 PCR产物;2． PSmanA的
重叠延伸 PCR产物
图 3 PSmanA的重叠 PCR结果
2． 4 pcDNA-PSmanA重组表达载体的构建
将 PSmanA的 PCR 产物与 pcDNA6 /HisTM A 表
达载体同时 Nhe I + Xho I 双酶切，纯化回收后构建
重组质粒 pcDNA-PSmanA(图 4)。以菌液为模板进
行 PCR扩增得到的产物进行琼脂糖凝胶电泳出现
约 1 051 bp的特异性条带;重组质粒经 Nhe I 单酶
切，电泳出现一条大约 5 996 bp的带;经 Nhe I + Xho
I双酶切电泳出现两条带，其中一条为载体质粒，约
5 000 bp，另一条为 PSmanA 片段，约 1 051 bp(图
5)。测序结果表明，该转化菌质粒含有目的基因片
段，且读码框正确。
图 4 重组质粒 pcDNA-PSmanA
M1． DL10000 DNA Marker;M2． DL2000 DNA Marker ;1． pc-
DNA-PSmanA的 Nhe I单酶切;2．重组质粒 pcDNA-PSmanA
的 Nhe I + Xho I双酶切
图 5 重组质粒 pcDNA-PSmanA酶切鉴定
2． 5 转染细胞 RT-PCR结果
以提取的 PK15 细胞 RNA 为模板进行 RT-PCR
扩增出约 954 bp的 manA基因编码成熟肽序列片段
(图 6) ，说明在转录水平有 manA基因表达。
2． 6 重组质粒分泌表达蛋白酶活性的测定
采用 DNS法测定细胞培养液上清的酶活，检测
到 β-甘露聚糖酶活力最高在 pH5． 0 时，为 14． 50
IU /mL。而对照组没有检测到酶活，说明重组质粒
分泌表达成功。
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生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2011 年第 8 期
M． DL2000 DNA Marker;1．未转染 PK15 的 RT-PCR产物;
2．对照 β-actin的 RT-PCR 扩增产;3． 重组质粒 pcDNA-PS-
manA转染 PK15 的 RT-PCR产物
图 6 RT-PCR检测 manA在 PK15 细胞中的表达
3 讨论
自 20 世纪 90 年代以来，β-甘露聚糖酶在基因
工程方面的研究已取得丰硕的成果。到目前为止，
已经有多种不同生物来源的 β-甘露聚糖酶基因得
到克隆和表达。本研究从黑曲霉中克隆出的 manA
基因与已发表的 XM001397260． 1 基因序列比较发
现有些差异，存在 13 个碱基突变，其中有 11 个碱基
发生了一些同义突变，2 个碱基发生非同义突变，分
析原因可能为已发表的来源菌株(CBS513． 88)与本
研究所用的菌株(GIM3． 452)不同，初步推断黑曲霉
β-甘露聚糖酶基因具有多态性，其变异对蛋白生物
学活性的影响还需进一步的研究。
随着基因工程和蛋白质工程技术的发展，对 β-
甘露聚糖酶的研究已经开始转向酶基因的克隆、表
达和活性位点等方面。目前已有一些微生物和动植
物的 β-甘露聚糖酶基因被克隆，并在大肠杆菌和真
菌表达体系中获得了表达，如 β-甘露聚糖酶在原核
生物中表达，但表达活力都不高［16，17］，只有当有
IPTG诱导时，酶活力才比较高，最高酶基因来源于
一株芽孢杆菌，酶活力达 41． 8 U /mL［16］。但由于大
肠杆菌表达量低、蛋白表达时易形成包涵体［18］，用
大肠杆菌表达主要目的是证明酶基因的活性功能，
近几年的研究主要集中于 β-甘露聚糖酶基因在真
核生物中特别是酵母中的表达，且表达活力特别
高［19］。上述所报道的微生物产的 β-甘露聚糖酶较
多都是碱性或中性，对酸性 β-甘露聚糖酶微生物生
产报道的还不多见;但由于动物胃液中 pH2． 5、肠道
中 pH5． 5，这就要求表达的重组蛋白能够在这个范
围内有较好的酸稳定性。本研究从黑曲霉中克隆到
的 manA 基因编码的是一种酸性 β-甘露聚糖酶，并
且分泌表达的重组蛋白为单一的蛋白，便于测定表
达重组蛋白的活性;转染 PK15 细胞后测其在 pH
3． 5 － 6． 0之间均有活性，且在 pH5． 0 时测得活性最
高，证明其在动物胃液和肠道环境中均有酶活性，在
动物胃肠道利用 β-甘露聚糖酶 manA基因制备转基
因动物是可行的。
本试验从黑曲霉中克隆到的 manA基因编码一
种酸性 β-甘露聚糖酶，并跟 PSP基因信号肽序列进
行拼接构建了真核表达载体，使得 β-甘露聚糖酶基
因能够在哺乳动物细胞内进行分泌表达，国内还未
见报道。同时重组的蛋白表现出酶活性在 pH5． 0、
温度 40℃的环境下测定其酶活，最高活力达 14． 5
IU /mL，实现了异源基因在哺乳动物细胞中分泌表
达，为将来转基因动物的制备打下基础。同时利用
转基因技术使 β-甘露聚糖酶基因在动物消化道内
表达，消化动物自身不能消化的 β-甘露聚糖，促进
营养物质的吸收、提高饲料利用率、减少环境污染等
将有广阔的应用前景。
参 考 文 献
［1］Nati S，Mendoza MA，Kazuhisa S． Cloning and sequencing of β-man-
nanase gene from Bacillus subtilis NM-39． Biochimica et Biophysica
Acta，1995，1243(3) :552-554．
［2］Zhang Q，Yan X，Zhang L，et al． Cloning，sequence analysis and het-
erologous expression of a beta-mannanase gene from Bacillus subtilis
Z-2． Molecular Biology，2006，40(3) :368-374．
［3］Pretty LA，Carter SD，Senne BW，et al． Effect of beta-mannanase ad-
dition to corn-soybean meal diets on growth performance，carcass
traits，and nutrient digestibility of weanling growing-finishing pigs．
Journal Animal Science，2002，80(4) :1012-1019．
［4］许牡丹，杨伟东，许宝红，等． 微生物 β-甘露聚糖酶的制备与应
用研究进展．动物医学进展，2006，27(9) :31-34．
［5］蔡发国，曹云鹤，陈权军． 新型酶制剂—β-甘露聚糖酶的研究进
展．饲料研究，2007，11(6) :15-17．
［6］陈小兵，丁宏标，乔宇． β-甘露聚糖酶的的酶学性质、工农业应用
及基因工程研究．中国生物工程杂志，2005 (S1) :156-159．
［7］Yin HF，Fan BL，Li N，et al． Cloning of pig parotid secretory protein
gene upstream promoter and the establishment of a transgenic mouse
model expressing bacterial phytase for agricultural phosphorus pollu-
tion control． Animal Science，2006，84(3) :513-519．
［8］田兴华，李宁，吴常信，等．猪腮腺分泌蛋白在腮腺生后发育过程
中表达特性研究．中国畜牧杂志，2005，41(10) :15-17．
［9］Golovan SP，Hayes MA，Phillips JP，et al． Transgenic mice expressing
bacterial phytase as a model for phosphorus pollution control． Nature
691
2011 年第 8 期 邹娴等:黑曲霉 β-甘露聚糖酶基因 manA在 PK15 细胞中的分泌表达
Biotechnology，2001，19(5) :429-433．
［10］Golovan SP，Meidinger RG，Ajakaiye A，et al． Pigs expressing sali-
vary phytase produce low-phosphorus manure． Nature Biotechnolo-
gy，2001，19(8) :741-745．
［11］韦跃华，毛爱军，何永志．里氏木霉内切-β-甘露聚糖酶基因在
毕赤酵母中的表达．生物工程学报，2005，21(6) :878-883．
［12］杨宇，吴元华，郑雅楠．利用重叠延伸 PCR技术进行 DNA的人
工合成．安徽农业科学，2006，34(9) :1810-1811．
［13］魏薇，李凡，陈海如．利用重叠延伸 PCR技术扩增长片段 DNA．
云南大学学报，2008，30(S1) :86-88．
［14］费笛波，冯观泉，袁超．饲用木聚糖酶活性测定方法的研究．浙
江农业学报，2004，16(2) :53-58．
［15］皮雄娥，费笛波，玉龙英，等． 黑曲霉 AS6034 酸性 β-甘露聚糖
酶的性质研究．饲料研究，2006(2) :50-52．
［16］谭秀华，武玉永，马立新，等．耐碱性甘露聚糖酶基因的克隆及
其在毕赤酵母中的表达．微生物学报，2005，25(4) :543-546．
［17］毛绍名，章怀云，张学文． 枯草杆菌 β-甘露聚糖酶基因的克隆
及表达．农业生物技术学报，2007，15(2) :360-361．
［18］马鑫，赵仲麟，李亮，等．芽孢杆菌 β-甘露聚糖酶基因的克隆及
表达．生物技术通报，2009(2) :77-81．
［19］Pan X，Zhou JG，Tian A，et al． High level expression of a truncated
β-mannanase from alkaliphilic Bacillus sp． N16-5 in Kluyveromyces
cicerisporus． Biotechnology Letter，2010，33(3) :565-570．
(责任编辑 马鑫
櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧
)
·征订启事·
《生物医学工程与临床》
《生物医学工程与临床》是一本连接临床与生物医学工程的综合性刊物。是中国科技论文统计源期刊
(中国科技核心期刊) ，并已被美国《化学文摘》(Chem Abstract)、俄罗斯《文摘杂志》(AJ of VINITI)、英国《国
际农业与生物科学研究中心》(CABI)等国际检索系统收录。本刊宗旨是以生物医学工程和临床的理论与实
践相结合，涵盖生物医学工程学及其相关的临床医学各学科，注重生物医学工程学在临床医学中的应用研究
和新技术、新经验、新成果的推广。以生物医学工程高起点为目标，以突出临床医学为特色，内容涉及医疗仪
器、生物力学、生物材料、人工器官、生物控制、生物医学信息测量与处理等领域的研究，以及临床工程等方
面。临床内容包括影像、超声、介入医学、电生理、骨科、腔镜、临床检验、放射(射频)治疗、人工器官和血液
净化、医疗器械及普外、神经微创、干细胞治疗等。《生物医学工程与临床》在《中国生物医学文献数据库》、
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群》、《中国知网》、《维普资讯网》等网上都能搜索到。
杂志为大 16 开，96 页，双月刊(每年单月 25 日出版) ，国内外公开发行。中国标准刊号:ISSN 1009 －
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