全 文 ：植物学通报 2005, 22 (2): 203~206
Chinese Bulletin of Botany
①教育部重点实验室开放基金和教育部重点项目(104191)资助。
②通讯作者。Author for correspondence. E-mail：zygorl@public.hr.hl.cn
收稿日期：2003-12-31 接受日期：2004-06-25 责任编辑：白羽红
技术与方法
刺五加叶中金丝桃苷含量的测定①
曹建国 赵则海 杨逢建 李庆勇 祖元刚②
(东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室 哈尔滨 150040)
摘要 用高效液相色谱法测定了刺五加(Acanthopanax senticosus (Rupr.& Maxin) Harms)叶中金丝桃
苷(hyperin)的含量。色谱柱为C18柱，流动相为甲醇和0.025 mol.L-1磷酸，比例为V甲醇:V0.025 mol.L-1磷酸
=55:45 (混合后用三乙胺调pH3.0~3.2)，检测波长360 nm。样品用甲醇超声提取。结果表明, 金丝桃
苷峰形良好，与其他组分的色谱峰达到基线分离。加样回收率为104%，相对标准偏差RSD为5.38%。
本研究为刺五加叶中金丝桃苷含量的测定建立了一种可靠的方法。
关键词 刺五加, 金丝桃苷, 高效液相色谱法
Determination of Hyperin in the Leaves of
Acanthopanax senticosus
CAO Jian-Guo ZHAO Ze-Hai YANG Feng-Jian LI Qing-Yong ZU Yuan-Gang②
(Key Laboratory of Forest Plant Ecology of Ministry of Education, Northeast Forestry
University, Harbin 150040)
Abstract This paper describes the use of high performance liquid chromatography (HPLC) to
determine the hyperin in the leaves of Acanthopanax senticosus on a C18 chromatogram column.
Methanol:0.025 mol.L-1 phosphoric acid solution (V/V, 55:45) was used as the mobile phase (the
mixture was adjusted with triethylamine to pH 3.0-3.2), and the detection wavelength was 360 nm.
The sample was extracted with methanol by the ultrasonic extraction method. Hyperin content showed
a symmetrical peak shape and reached the baseline separation with the peak content of other chemicals.
The average recovery was 104% and the relative standard deviation (RSD) 5.38%. This study pro-
vided evidence of an accurate and credible method of determining the content of hyperin in the
leaves of A. senticosus.
Key words Acanthopanax senticosus, Hyperin, High performance liquid chromatography
刺五加(Acanthopanax senticosus (Rupr.
& Maxin)Harms)的全株均含有多种药用成
分。它的根和根茎以及地上部分的茎和枝中
含多种刺五加甙，其中丁香甙含量最高(许正
斌和王明禹, 1984)。果实中含刺五加多糖，
具有明显的增强免疫的作用 (徐任生等 ,
1983)。而刺五加叶中黄酮类物质含量较高
(许正斌和王明禹, 1984；许正斌等, 1984)。
204 22(2)
黄酮类化合物种类多，通常具有较高的药用
价值(黄河胜等, 2000)。史九良等(1981)从刺
五加的叶中分离到一种黄酮苷，经鉴定为金
丝桃苷(hyperin)，药理试验表明其具有提高
动物耐低压缺氧的能力和镇静效果，并对垂
体后叶素引起的急性心肌缺血有保护作用。
另外，金丝桃苷还对缺血性脑损伤有很好的
保护作用(陈志武等, 1998)。这说明刺五加的
叶具有很大的开发价值。目前，在刺五加叶
的利用方面，山区的人们把刺五加嫩茎叶当
山野菜，已经开发出了五加参茶，具有调节
心脑血管的作用。由此可见，刺五加叶既可
食用又具有一定的药用价值。但到目前为
止，还没有对刺五加叶中金丝桃苷含量测定
的报道。本文首次采用高效液相色谱法测定
刺五加叶中金丝桃苷含量，结果表明本方法
操作简便、准确且重现性好。
1　实验部分
1.1 仪器和试药
主要仪器有LC-6A高效液相色谱仪(日本
岛津)、C-R3A色谱数据处理机和 SIL-6A自
动进样器。
金丝桃苷标准品购于美国 sigma 公司。
甲醇为色谱纯，磷酸和三乙胺为分析纯。刺
五加(经东北林业大学聂绍荃教授鉴定)叶于
2003年7月采自东北林业大学帽儿山试验林
场，生长于天然次生林林下。
1.2 色谱条件
色谱柱为C18柱(6.0 mmi.d.×150 mm，5
mm)，流动相为V甲醇:V0.025mol/L磷酸=55:45 (混
合后用三乙胺调 pH3.0~3.2)，检测波长 360
nm，流速 1.0 mL.min-1，柱温 25 ℃。
1.3 对照品溶液的配制
精确称取金丝桃苷对照品 1 mg置于 1.5
mL微量离心管中，用移液器精确吸取甲醇1
mL加入微量离心管中，摇匀，作为对照品
溶液，浓度为 1 mg.mL-1。
1.4 标准曲线建立
精密吸取金丝桃苷对照品溶液 5、10、
20、30、40、50和 60 mL，分别置于 1.5 mL
的微量离心管中，精确定容至 1 mL。在选
定的条件下，将以上各对照品溶液分别用
HPLC重复测定 3次，对峰面积积分，并取
峰面积平均值，以峰面积为纵坐标，以金丝
桃苷浓度为横坐标，进行线形关系分析，得
到峰面积-金丝桃苷浓度回归方程Y = 39764x
+2304.9, R2=0.9966。
根据该方程可以得到金丝桃苷含量的计
算公式如下：
样品中金丝桃苷的百分含量=
( ×V)/M
Y代表峰面积，V代表提取液体积(mL)，
M代表样品重量(mg)
1.5 样品的制备和测定
将刺五加叶干燥并粉碎，过 100目筛。
精确称定刺五加叶粉末 0.5 g左右，置于 25
mL量瓶中，加甲醇约 20 mL，在超声波发
生器内提取 60分钟，静置冷却，加甲醇至
刻度，摇匀。进样前经 15 000转 /分钟高速
离心处理。
吸取样品溶液20 mL左右注入液相色谱仪
中，实际进样为 10 mL，测定其中金丝桃苷
色谱峰峰面积，根据线性关系方程计算出样
品中金丝桃苷的浓度或含量。
2 实验结果
2.1 样品色谱图分析
通过多次试验发现，以 C 1 8 柱 ( 6 . 0
mmi.d.× 150 mm，5 mm) 为色谱柱，流
动相为 V 甲醇:V 0 .025 mol .L-1磷酸 =55:45，检
测波长 360 nm，流速 1.0 mL .min-1，柱
温 25 ℃的条件下，可使样品中金丝桃苷
与其他组分的色谱峰达到基线分离 (图1 ,
图 2 )。
Y-2304.9
39764
2052005 曹建国等: 刺五加叶中金丝桃苷含量的测定
准偏差(RSD)，结果见表 1。
2.3 重复性试验
精确称定刺五加叶粉末 0.5 g左右，按
1.5节的方法制备样品并测定其中金丝桃苷色
谱峰峰面积，重复 5次，计算出金丝桃苷在
刺五加叶中的百分含量和相对标准偏差，结
果见表 2。
2.4 加样回收率试验
精确称取上述已知金丝桃苷含量的样品
0.5 g左右，计算金丝桃苷的含量。加入对
照品溶液 100 mL，含金丝桃苷 100 mg。按
1.5节的方法制备样品并测定样品中金丝桃苷
的峰面积，计算出加样后金丝桃苷的含量，
用实测值减去原样品中金丝桃苷的含量再除以
加入的纯品量，计算出回收率，结果见表 3。
3 讨论
金丝桃苷是刺五加叶中的一种重要成分
(史久良等, 1981)。目前，还没有对刺五加
叶中金丝桃苷含量测定的报道，本文首次采
用高效液相色谱法测定其中金丝桃苷含量。
图 1 金丝桃苷标准品色谱图
Fig. 1 Chromatograms of hyperin of standard (7.017
min) (Time: 15.000 minutes; Amp: 0.000373 volts)
图 2 刺五加叶样品HPLC色谱图
Fig.2 Chromatograms of leaf sample of Acanthopanax
senticosus (7.067 min) (Time: 15.000 minutes; Amp:
0.000373 volts)
表 1 精密度试验
Table 1 Precision tests of determinations
Number Area Average Relative
standard
deviation (%)
1 225994
2 226748
3 227325 227387.2 2.73
4 219784
5 237085
表 2 刺五加叶中金丝桃苷含量的重复性试验
Table 2 Reproducibility test on the content of hyperin in the leaves of Acanthopanax senticosus
No. Weight(g) Area Content (%) Average (%) Relative standard deviation (%)
1 0.5127 225994 0.02743
2 0.5048 224543 0.02725
3 0.4910 214177 0.02598 0.02603 5.12
4 0.4916 207031 0.02510
5 0.5015 200932 0.02436
2.2 精密度试验
按 1.5节的方法制备出样品，连续进样
5次，测金丝桃苷的峰面积，计算出相对标
206 22(2)
陈志武，马传庚，赵维忠 ( 1 9 9 8 ) 金丝桃甙对脑缺
血再灌损伤保护作用的实验研究. 药学学报，3 3 :
14-17
黄河胜，马传庚，陈志武 ( 2 0 0 0 ) 黄酮类化合物药
理作用研究进展. 中国中药杂志，25: 589-592
史久良, 吴秉纯, 郭秀芳, 董天慧, 高凤兰 (1981) 刺五
加叶金丝桃甙的分离、鉴定和药理作用. 见: 黑龙
江省祖国医药研究所编著, 中国刺五加研究. 黑龙江
科学技术出版社，哈尔滨，7 0 - 7 9
宋必卫，陈志武，马传庚 ( 1 9 9 5 ) 金丝桃甙对中枢
神经系统的一般药理作用 . 安徽医科大学学报，
研究表明，刺五加的其他部位不含金丝桃
苷或含量甚微，但在叶中金丝桃苷的含量
很高。金丝桃苷在临床上对很多疾病有很
好疗效，金丝桃苷有提高动物耐低压缺氧
的能力和镇静效果(宋必卫等，1995)，对
急性心肌缺血有保护作用，具有镇痛、保
护脑缺血损伤等作用，并对钙离子内流有
影响(陶遵威， 2002)。因此，用金丝桃苷
作为衡量刺五加叶品质的指标是切实可行
表 3 金丝桃苷的加样回收率
Table 3 Recoveries of added standard hyperin
Sample Content of hyperin in Added Content of Recovery Average Relative standard
(g) the sample(mg) hyperin(mg) determination (mg) (%) recovery (%) deviation (%)
0.4965 129.24 100 236.02 107
0.4946 128.74 100 238.19 109
0.5019 130.64 100 226.81 96 104 5.38
0.4891 127.31 100 235.31 108
0.4778 124.37 100 225.03 101
的，这对开发和利用刺五加叶提供了科学
的依据。
本试验采用甲醇作提取剂，固液比为50:
1，在 40 ℃下超声提取 45分钟，一次性提
取基本完全，二次提取很难测到有金丝桃苷
的存在。而且金丝桃苷的峰形良好，与其他
成分的色谱峰完全达到了基线分离。可见，
用高效液相色谱法测定刺五加叶中金丝桃苷的
含量，其结果准确、重现性好且灵敏度高。
参 考 文 献
30: 253-255
陶遵威 (2002) 金丝桃甙 (hyperin) 药理作用研究进
展. 天津药学，14(2): 14-16
许正斌, 王明禹 (1984) 刺五加中丁香甙含量变化. 中
医药学报, 1: 55-58
许正斌，佟婉筠，杨光 ( 1 9 8 4 ) 刺五加各部位有效
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