全 文 ：第 １４卷第 ４期
２０１６年 ７月
生　 物　 加　 工　 过　 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ􀆰 １４ Ｎｏ􀆰 ４
Ｊｕｌ． ２０１６
ｄｏｉ：１０􀆰 ３９６９ ／ ｊ􀆰 ｉｓｓｎ􀆰 １６７２－３６７８􀆰 ２０１６􀆰 ０４􀆰 ００７
收稿日期：２０１６－０４－２８
基金项目：国家高技术研究发展计划（８６３计划）（２０１４ＡＡ０９３５１３）
作者简介：阎金勇（１９７９—），男，湖北黄冈人，副教授，研究方向：微生物学与酶工程；∗为同等贡献，共同第一作者；缪明永（联系人），教授，
Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｍｉａｏｍｙ＠ １６３．ｃｏｍ
新型海洋源 β 半乳糖苷酶在毕赤酵母
中的表达与酶学性质
阎金勇１∗，董敬霞２∗，査根晗１，高　 云２，刘小宇２，缪明永２
（１􀆰 华中科技大学 生命科学与技术学院 分子生物物理教育部重点实验室，湖北 武汉 ４３００７４；
２􀆰 第二军医大学 生物化学与分子生物学教研室，上海 ２００４３３）
摘　 要：从海洋环境 β 半乳糖苷酶基因出发，采用毕赤酵母表达体系，构建产 β 半乳糖苷酶的基因工程菌，并对
重组酶酶学性质进行表征。 结果发现：海洋源 β 半乳糖苷酶具有优良的乳制品用酶特性，该重组酶的最适 ｐＨ 为
７􀆰 ０～８􀆰 ０，最适温度为 ４５ ℃，在 ５０ ℃以下孵育 １ ｈ可保持 ５５％以上的活力，能耐受 Ｆｅ２＋、Ｎａ２＋、Ｋ２＋、Ｃａ２＋等多种金属
离子。 宽广的 ｐＨ、温度、金属离子稳定性，以及低温活性赋予该酶良好的乳制品用酶特性。
关键词：半乳糖苷酶；毕赤酵母；重组
中图分类号：Ｑ８５１　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２－３６７８（２０１６）０４－００３３－０４
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌｍａｒｉｎｅ β⁃ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ
ｉｎ Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ
ＹＡＮ Ｊｉｎｙｏｎｇ１∗，ＤＯＮＧ Ｊｉｎｇｘｉａ２∗，ＺＨＡ Ｇｅｎｈａｎ１，ＧＡＯ Ｙｕｎ２，ＬＩＵ Ｘｉａｏｙｕ２，ＭＩＡＯ Ｍｉｎｇｙｏｎｇ２
（１􀆰 Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００７４，Ｃｈｉｎａ；２􀆰 Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００４３３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇ Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ， ｗｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ ｓｔｒａｉｎ
ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｍａｒｉｎｅ β⁃ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｔｈａｔ ｗａｓ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｅｎｚｙｍｅ ｈａｄ
ｏｐｔｉｍｕｍ ｐＨ ｂｅｔｗｅｅｎ ７􀆰 ０ ａｎｄ ８􀆰 ０． Ｉｔｓ ｏｐｔｉｍｕｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ４５ ℃， ａｎｄ ｏｖｅｒ ５０％ ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｂｅｌｏｗ ５０ ℃ ．Ｉｔ ｗａｓ ｓｔａｂｉｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ Ｆｅ２＋，Ｎａ２＋，Ｋ２＋ ａｎｄ Ｃａ２＋ ． Ｂｒｏａｄ ｓｔａｂｌｅ ｐＨ ａｎｄ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｒａｎｇｅ ａｎｄ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ ｍｅｔａｌ ｉｏｎｓ ｍａｋｅ ｔｈｉｓ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｅｎｚｙｍｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｉｎ ｖａｒｉｏｕｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ； Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ ｙｅａｓｔ； ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
　 　 β 半乳糖苷酶（ β ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ）是一类将半
乳糖苷类寡聚糖底物水解为半乳糖和糖苷的酶，存
在于多种动植物及微生物中，广泛应用于饲料和乳
制品添加剂领域［１］。 在缺乏 β 半乳糖苷酶或 β 半
乳糖苷酶活力不足的动物或人体内，乳糖不能被有
效分解利用，从而被肠道微生物发酵产生有机酸和
ＣＯ２等气体，造成肠道蠕动加强、腹疼、腹胀、腹泻等
乳糖不耐受症状［１－３］。 β 半乳糖苷酶作为乳制品添
加剂是公认解决乳糖不耐受症的有效途径，而大多
数 β 半乳糖苷酶难以同时满足乳制品用酶的特
性［４－５］，即能耐受乳制品环境与条件（如能耐受多种
金属离子，具有低温活性，具有宽广的 ｐＨ 和温度稳
定性等） ［６］。 因此，开发具有乳制品用酶的特性对
提高乳制品的品质意义重大。
野生菌产 β 半乳糖苷酶一般产量低，且常存在
杂质残留等安全问题，不宜用于乳制品体系。 通过
基因工程技术将野生菌 β 半乳糖苷酶基因导入更
安全、更易于遗传操作和扩大生产的异源宿主［７－９］，
如毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）中，是提高目标蛋白表
达量的有效途径之一。
第二军医大学缪明永课题组从中国东海海泥
中筛选获到了 １ 株产 β 半乳糖苷酶的盐单胞菌
Ｓ６２（Ｈａｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ􀆰 Ｓ６２），并克隆出 β 半乳糖苷酶
基因 βｇａｌ（ＧｅｎＢａｎｋ 登录号 ＪＱ３３７９６１） ［１０］。 该基因
与已经报道的 β 半乳糖苷酶基因的相似性较低，与
来源于 Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｗｏｅｓｅｉ的 β 半乳糖苷酶有 ２９􀆰 ９％
的同源性［９］。
本研究采用毕赤酵母分泌表达体系，构建产该
β 半乳糖苷酶的基因工程菌，并对重组酶酶学性质
进行表征，以期为下游生产应用奠定基础。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 菌株与基因
盐单胞菌 Ｓ６２（Ｈａｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ􀆰 Ｓ６２）的 β 半乳糖
苷酶基因保存于缪明永实验室。 保证氨基酸序列不
变，基于毕赤酵母密码子偏好性，由上海桑尼生物科
技有限公司对 βｇａｌ 进行密码子优化并全基因合成。
Ｅ􀆰 ｃｏｌｉ ＤＨ５α和质粒 ｐＰＩＣＺαＡ用于质粒构建与扩增，
Ｐ􀆰 ｐａｓｔｏｒｉｓ Ｘ３３用于 βｇａｌ 的异源表达，所用质粒与菌
株均保存于华中科技大学阎金勇所在的实验室。
１􀆰 ２　 培养基
Ｅ􀆰 ｃｏｌｉ ＤＨ５α 培养用液体 ＬＢ 培养或含有 １００
μｇ ／ ｍＬ 博莱霉素的固体 ＬＢ 琼脂平板培养基，
Ｐ􀆰 ｐａｓｔｏｒｉｓ 培养用 ＹＰＤ、ＢＭＧＹ 与 ＢＭＭＹ 培养基。
各培养基组成详见毕赤酵母表达手册［１１］。
１􀆰 ３　 重组质粒的构建与制备
将密码子优化后合成的 β 半乳糖苷酶基因
（βｇａｌ），克隆至 ｐＰＩＣＺαＡ载体的 ＥｃｏＲ Ｉ ／ Ｎｏｔ Ｉ位点，
构建重组质粒 ｐＰＩＣＺαＡ βｇａｌ。 将重组质粒转化
Ｅ􀆰 ｃｏｌｉ ＤＨ５α 感受态细胞，用含有 １００ μｇ ／ ｍＬ 博莱
霉素的固体 ＬＢ平板获得阳性转化子。 阳性转化子
经测序验证序列及连接位点的正确性。 将验证正
确的重组大肠杆菌接种于 ５ ｍＬ 的 ＬＢ 液体培养基
中，３７ ℃过夜培养，收集菌体。 按照 Ｏｍｅｇａ 公司质
粒小量提取及胶回收与纯化试剂盒说明书操作，提
取质粒，并用 ＢｓｔＸ Ｉ酶切制备线性化质粒。
１􀆰 ４　 重组质粒转化毕赤酵母
毕赤酵母感受态细胞的制备详见毕赤酵母表
达手册。 将制备好的 Ｐ􀆰 ｐａｓｔｏｒｉｓ Ｘ３３ 感受态细胞与
１０ μｇ的线性化重组质粒 ｐＰＩＣＺαＡ βｇａｌ 混合，转
移到预冷的 ０􀆰 ２ ｃｍ 电转化杯中，冰上放置 ５ ｍｉｎ。
将电转杯从冰上取出快速擦干并置于预热的电转
仪上电击，然后立刻加入 １ ｍＬ １ ｍｏｌ ／ Ｌ 的山梨醇，
吸出后于 ３０ ℃水浴中静置 １～２ ｈ。 电击参数：电压
１􀆰 ５ ｋＶ，电容 ２５ μＦ，电阻 ２００ Ω。 取 ８０～１００ μＬ涂
布于含有 １ ０００ μｇ ／ ｍＬ博莱霉素的 ＹＰＤ平板，３０ ℃
静置培养 ２～４ ｄ，挑取阳性转化子。
１􀆰 ５　 摇瓶发酵
将阳性转化子接种于装有 ５０ ｍＬ ＢＭＧＹ培养基
的 ５００ ｍＬ 摇瓶中，摇床转速为 ２５０ ｒ ／ ｍｉｎ，在 ２８ ℃
条件下培养 ２０ ｈ，无菌离心收集菌体，转入 ３０ ～ １００
ｍＬ ＢＭＭＹ诱导培养基中，在 ２８ ℃、２００ ～ ３００ ｒ ／ ｍｉｎ
条件下诱导培养 ２４～１２０ ｈ，每隔 ２４ ｈ向摇瓶中补加
１􀆰 ０％～２􀆰 ０％ （体积分数） 的甲醇，取样检测发酵液
的细胞密度（用 ＯＤ６００表示）以及上清液的酶活力。
１􀆰 ６　 β 半乳糖苷酶酶活力的测定
用邻硝基苯 β 吡喃半乳糖苷（ＯＮＰＧ）测定β
半乳糖苷酶活力。 取 ４００ μＬ 发酵上清液，加入 ６００
μＬ终浓度为 １０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ 的 ＯＮＰＧ（０􀆰 １ ｍｏｌ ／ Ｌ，ｐＨ
７􀆰 ２的 Ｎａ２ＨＰＯ４ ＮａＨ２ＰＯ４或者 Ｋ２ＨＰＯ４ ＫＨ２ＰＯ４缓
冲液配制），分别在 ５ ℃（低温活性）和 ４５ ℃下孵浴
１５ ｍｉｎ，加入 １ ｍＬ １ ｍｏｌ ／ Ｌ 的 Ｎａ２ＣＯ３终止反应，用
酶标仪在 ４１０ ｎｍ处测定吸光度以确定酶活性，同时
以 ０􀆰 １ ｍｏｌ ／ Ｌ 的 ｐＨ ７􀆰 ２ Ｎａ２ ＨＰＯ４ ＮａＨ２ＰＯ４或者
Ｋ２ＨＰＯ４ ＫＨ２ ＰＯ４缓冲液代替上清液作为空白对
照。 每分钟催化 ＯＮＰＧ 底物生成 １ μｍｏｌ 硝基苯酚
所需要的酶量定义为一个酶活力单位。
１􀆰 ７　 温度对酶活力的影响
在 ｐＨ ７􀆰 ０，０􀆰 ０５ ｍｏｌ ／ Ｌ 的 Ｔｒｉｓ⁃ＨＣｌ 中，在不同
温度下测定上述 β 半乳糖苷酶活力，以相对活力表
示（最高酶活设定 １００％）。 在 ｐＨ ７􀆰 ０，０􀆰 ０５ ｍｏｌ ／ Ｌ
的 Ｔｒｉｓ ＨＣｌ中，在不同温度下保温 １ ｈ，测定残余酶
活力，处理前的酶活力设为 １００％，以残余活力表示
温度稳定性。
１􀆰 ８　 ｐＨ对酶活力的影响
在 ０􀆰 ０５ ｍｏｌ ／ Ｌ不同 ｐＨ的缓冲液中，４５ ℃下测定
酶活力，酶活最高者设为 １００％。 在 ０􀆰 ０５ ｍｏｌ ／ Ｌ 不同
ｐＨ的缓冲液中，室温处理 １ ｈ，测定残余酶活力，处理
４３ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １４卷　
前的酶活力设为 １００％，以残余活力表示 ｐＨ稳定性。
１􀆰 ９　 金属离子等对酶活力的影响
在 ｐＨ ７􀆰 ０，０􀆰 ０５ ｍｏｌ ／ Ｌ 的缓冲液中，分别加入
不同的金属离子，使其终浓度为 １ ｍｍｏｌ ／ Ｌ，加入酶
液孵育 １ ｈ，４５ ℃下测定酶活力。 未加离子的酶活
力设为 １００％。
２　 结果与讨论
２􀆰 １　 β 半乳糖苷酶在毕赤酵母中的表达
挑取 ＹＰＤ 平板（含有 １０００ μｇ ／ ｍＬ 博莱霉素）
上最早出现的较大克隆子作为出发菌株。 分别研
究 ＢＭＭＹ培养基的装液量、摇床转速、甲醇添加量
与发酵时间对产酶的影响，如表 １所示。
表 １　 摇瓶发酵因素对酶活力的影响
Ｔａｂｌｅ １　 Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ
ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｔ ｆｌａｓｋ
因素 水平 酶活力 ／ （Ｕ·ｍＬ－１）
装液量 ／ ｍＬ
３０ ８１±２
５０ １０１±３
１００ ８２±１
转速 ／ （ ｒ·ｍｉｎ－１）
２００ １０１±４
２５０ １１０±２
３００ １０７±１
φ（甲醇） ／ ％
１􀆰 ０ １１０±３
１􀆰 ５ １２４±２
２􀆰 ０ １０３±１
由表 １可知：在 ５００ ｍＬ摇瓶中装载 ５０ ｍＬ ＢＭＭＹ
培养基，摇床转速 ２５０ ｒ ／ ｍｉｎ时，有利于产酶。 重组毕
赤酵母对氧气需求量大，较小体积的培养基盛装量与
较大的摇床转速均有利于促进摇瓶发酵过程中的溶
氧。 但过少的培养基（３０ ｍＬ ＢＭＭＹ）随着发酵过程
水分的蒸发，培养液变得黏稠，反而降低溶氧。 摇床
转速高于 ２５０ ｒ ／ ｍｉｎ时，并不能明显提高产酶，且过高
的转速易损耗能量与仪器。 所以选择 ５０ ｍＬ ＢＭＭＹ
培养基，２５０ ｒ ／ ｍｉｎ 摇床转速进行后续试验。 甲醇不
仅作为重组毕赤酵母的唯一碳源，也作为酶诱导表达
的诱导物。 本研究发现每隔 ２４ ｈ添加 １􀆰 ５％（体积分
数）的甲醇量最有利于产酶。 在单因子最优化组合条
件下，即 ５０ ｍＬ ＢＭＭＹ装液量，摇床转速 ２５０ ｒ ／ ｍｉｎ，
每隔 ２４ ｈ 添加 １􀆰 ５％的甲醇诱导表达，结果见图 １。
由图 １ 可知：诱导 ７２ ｈ 后，重组菌能获得最高产酶
１２４ Ｕ ／ ｍＬ，在 ７２ ｈ后酶活力缓慢下降，可能是发酵后
期毕赤酵母分泌的蛋白酶降解目标蛋白所致，且产酶
的趋势与细胞密度变化趋势一致。
图 １　 重组毕赤酵母产酶与细胞密度随时间的变化
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｔｉｍｅ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｄｅｎｓｉｔｙ ｐｒｏｄｕｃｅｄ
ｂｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ ｙｅａｓｔ
大多数 β 半乳糖苷酶采用大肠杆菌系统表达，
需要经过破碎细胞，分离纯化等繁琐步骤［３，９］；而本研
究采用含有 α 信号肽的毕赤酵母 ｐＰＩＣＺαＡ 表达载
体，可直接将酶分泌到胞外培养基中，分泌的杂蛋白
较少，且表达量也高于已报道的水平，优势明显。
２􀆰 ２　 重组 β 半乳糖苷酶酶学性质表征
２􀆰 ２􀆰 １　 温度对重组 β 半乳糖苷酶酶学的影响结果
考察温度对重组 β 半乳糖苷酶酶学的影响，结
果见图 ２。 由图 ２ 可知：最适温度为 ４５ ℃，该酶具
有优良的温度稳定性；在 ５０ ℃以下孵育 １ ｈ 可保持
５５％以上的活性（图 ２）。 在 ５０ ℃下时，稳定性在一
定程度上保证酶制剂成型过程中的活力。 值得强
调的是，该酶具有优良的低温活性，在 ４ ～ ８ ℃时仍
然能测出 ５０％以上活性，表明该酶在乳制品低温储
藏时，仍具有水解活力。 该酶的低温活性明显优于
来源于 Ｐｌａｎｏｃｏｃｃｕｓ，Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｐ􀆰 ２２ｂ 的 β
半乳糖苷酶［３，１２］。
图 ２　 温度对重组 β 半乳糖苷酶活力的影响
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
β⁃ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ
２􀆰 ２􀆰 ２　 ｐＨ对重组 β 半乳糖苷酶酶学的影响结果
考察 ｐＨ对重组 β 半乳糖苷酶酶学的影响，结
果见图 ３。 由图 ３可知：以 ＯＮＰＧ为底物时，重组β
５３　 第 ４期 阎金勇等：新型海洋源 β 半乳糖苷酶在毕赤酵母中的表达与酶学性质
半乳糖苷酶的最适 ｐＨ为 ７􀆰 ０ ～ ８􀆰 ０，具有宽广的 ｐＨ
稳定性，在 ｐＨ ５～１０条件下孵育 １ ｈ，重组酶还可保
持 ８０％以上的活性，在 ｐＨ ４或 １１时，酶稳定性急剧
降低。 过高或过低的 ｐＨ 环境，可能会破坏酶分子
的表面的电荷状态，进而影响酶分子的活性构象。
因此酶只有在一定范围 ｐＨ环境下，才能发挥活性。
图 ３　 ｐＨ对重组 β 半乳糖苷酶活力的影响
Ｆｉｇ􀆰 ３　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐＨ ｏｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
β⁃ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ
２􀆰 ２􀆰 ３　 金属离子对重组 β 半乳糖苷酶酶学的影响
结果
考察金属离子对重组 β 半乳糖苷酶酶学的影
响，结果见图 ４。 由图 ４ 可知：Ｆｅ２＋显著促进该酶活
性（２１０％），Ｃｕ２＋则显著抑制该酶活性（５２％），该重
组酶在 Ｎａ２＋、Ｋ２＋、Ｃａ２＋存在的条件下，表现出 ９７％ ～
１１６％的活力，该酶耐受多种金属离子的能力优于一
些已报道的 β 半乳糖苷酶［３，１２］。 较宽广的金属离
子耐受性赋予该酶在乳制品加工中的普适性，尤其
是加铁加钙乳制品。
图 ４　 金属离子对重组 β 半乳糖苷酶活力的影响
Ｆｉｇ􀆰 ４　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｍｅｔａｌ ｉｏｎ ｏｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
β⁃ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ
３　 结论
基于毕赤酵母表达体系，对海洋源 Ｈａｌｏｍｏｎａｓ
ｓｐ􀆰 Ｓ６２中的 β 半乳糖苷酶基因进行胞外表达，获得重
组 β 半乳糖苷酶。 酶学性质研究表明重组 β 半乳糖
苷酶的最适 ｐＨ为 ７􀆰 ０～８􀆰 ０，在 ｐＨ ５～１０孵育 １ ｈ还可
保持 ８０％以上的活性；最适温度为 ４５ ℃，在 ５０ ℃以下
孵育 １ ｈ可保持 ５５％以上的活力；在 ４～８ ℃条件下仍
然保持 ５０％以上的活性；能耐受 Ｆｅ２＋、Ｎａ２＋、Ｋ２＋、Ｃａ２＋等
多种金属离子。 宽广的 ｐＨ、温度、金属离子稳定性，以
及低温活性赋予该酶良好的乳制品用酶特性。
参考文献：
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ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｐ． ２２ｂ
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ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｗｉｔｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｇａｌｂ１⁃３ＧｌｃＮＡｃ
ｍｏｉｅｔｙ ｏｆ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，２００９，１９１：３０１１⁃３０２３．
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ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ β⁃ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ
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ｏｆ ａ ｐｓｙｃｈｒｏｔｒｏｐｈｉｃ Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｌｄ⁃ａｃｔｉｖｅ β⁃
ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ［Ｊ］．Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９４，６０：４５４４⁃４５５２．
［ ７ ］ 　 ＦＥＲＮＡＮＤＥＳ Ｓ，ＧＥＵＥＫＥ Ｂ，ＤＥＬＧＡＤＯ Ｏ，ｅｔ ａｌ．β⁃ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ
ｆｒｏｍ ａ ｃｏｌｄ⁃ａｄａｐｔｅｄ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ：ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｌａｃｔｏｓｅ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ［ Ｊ］ ．Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，
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［ ９ ］ 　 ＤＡＡＢＲＯＷＳＫＩ Ｓ，ＳＯＢＩＥＷＳＫＡ Ｇ，Ｍａｃｉｕńｓｋａ Ｊ，ｅｔ ａｌ． Ｃｌｏｎｉｎｇ，
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｉｓ６ ⁃ｔａｇｇｅｄ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅ β⁃
ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｗｏｅｓｅｉ ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ａｎｄ ｓｏｍｅ
ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｅｎｚｙｍｅ［ Ｊ］ ． Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ，２０００，
１９：１０７⁃１１２．
［１０］ 　 ＷＡＮＧ Ｇ， ＧＡＯ Ｙ， ＨＵ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ａ ｎｏｖｅｌ ｃｏｌｄ⁃ａｄａｐｔｅｄｂ⁃
ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｈａｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ． Ｓ６２： ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇ，
ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］ ． Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１３，２９：１４７３⁃１４８０．
［１１］ 　 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ．Ｐｉｃｈｉａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｋｉｔ：ａ ｍａｎｕａｌ ｏｆ ｍｅｔｈｏｄｓ
ｆｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ［Ｃ］．Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ：Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，２０１４．
［１２］ 　 Ｓｈｅｒｉｄａｎ Ｐ Ｐ，Ｂｒｅｎｃｈｌｅｙ Ｊ Ｅ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｓａｌｔ⁃ｔｏｌｅｒａｎｔ ｆａｍｉｌｙ
４２ β⁃ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ ａ ｐｓｙｃｈｒｏｐｈｉｌｉｃ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ Ｐｌａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｉｓｏｌａｔｅ
［Ｊ］．Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０００，６６：２４３８⁃２４４４．
（责任编辑　 荀志金）
６３ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １４卷