全 文 ：第 １４卷第 ２期
２０１６年 ３月
生　 物　 加　 工　 过　 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ􀆰 １４ Ｎｏ􀆰 ２
Ｍａｒ􀆰 ２０１６
ｄｏｉ：１０􀆰 ３９６９ ／ ｊ􀆰 ｉｓｓｎ􀆰 １６７２－３６７８􀆰 ２０１６􀆰 ０２􀆰 ００９
收稿日期：２０１５－０４－１３
基金项目：国家自然科学基金（３１２７０１６２）
作者简介：王鹏胤（１９８９—），女，江苏常州人，研究方向：分子微生物学；胡　 南（联系人），副教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｈｕｎａｎ＠ ｎｊｔｅｃｈ．ｅｄｕ．ｃｎ
Ｍ􀆰 ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４中 Ｎ２ ＯＲ的酶活
测定及环境因素对酶活力的影响
王鹏胤，高　 远，高浩峰，胡　 南
（南京工业大学 生物与制药工程学院，江苏 南京 ２１１８００）
摘　 要：氧化亚氮（Ｎ２Ｏ）是一种主要的温室气体，其生物学减量控制已经成为研究热点。 在自然环境中，氧化亚氮
还原酶（Ｎ２ＯＲ）是唯一能将 Ｎ２Ｏ 还原成 Ｎ２的酶。 以 １ 株能在高盐条件下进行厌氧及好氧反硝化作用的海杆菌
Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４为研究对象，建立了一种稳定的 Ｎ２ＯＲ酶活检测方法，考察了 ｐＨ、盐质量分数以
及碳氮比（Ｃ ／ Ｎ）等环境因素对 Ｎ２ＯＲ酶活力的影响。 结果发现：当 ｐＨ为 ７时、盐质量分数为 ６％～８％、Ｃ ／ Ｎ为 ８时，
Ｎ２ＯＲ呈现出了最高的酶活。 本实验结果丰富了对 Ｎ２ＯＲ酶学特征的了解，为 Ｎ２Ｏ生物减量控制提供了部分参考。
关键词：ｐＨ；盐浓度；Ｃ ／ Ｎ；Ｎ２ＯＲ
中图分类号：Ｘ７０１　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２－３６７８（２０１６）０２－００４７－０４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｉｔｒｏｕｓ ｏｘｉｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｉｎ
Ｍｏｕｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４
ＷＡＮＧ Ｐｅｎｇｙｉｎ，ＧＡＯ Ｙｕａｎ，ＧＡＯ Ｈａｏｆｅｎｇ，ＨＵ Ｎａｎ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１１８００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｎｉｔｒｏｕｓ ｏｘｉｄｅ （Ｎ２Ｏ） ｉｓ ａ ｍａｊｏｒ ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ ｇａｓ，ａｎｄ ｉｔｓ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｈａｓ ｂｅｃｏｍｅ ａ ｈｏｔ
ｔｏｐｉｃ． Ｎｉｔｒｏｕｓ ｏｘｉｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ （ Ｎ２ＯＲ） ｉｓ ｔｈｅ ｏｎｌｙ ｅｎｚｙｍｅ ｔｈａｔ ｃａｎ ｒｅｄｕｃｅ Ｎ２Ｏ ｔｏ Ｎ２ ｉｎ ｎａｔｕｒａｌ
ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ． Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４，ａ ｈａｌｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ａｎａｅｒｏｂｉｃ
ａｎｄ ａｅｒｏｂｉｃ ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｗａｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ􀆰 Ｗｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａ ｓｔａｂｌｅ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｏｆ Ｎ２ＯＲ，ａｎｄ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｋｅｙ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｎ２ＯＲ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｐＨ ｖａｌｕｅ，
ｓａｌｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃａｒｂｏｎ ／ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｒａｔｉｏ （Ｃ ／ Ｎ）． Ｗｈｅｎ ｐＨ ｗａｓ ａｔ ７，ｔｈｅ ｓａｌｉｎｉｔｙ ｗａｓ ６％ ａｎｄ Ｃ ／ Ｎ ｗａｓ
８，ｓｔｒａｉｎ ＮＹ⁃４ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ Ｎ２ＯＲ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄａｔａ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｔｈｅ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ ｏｆ ｔｈｅ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｎ２ＯＲ，ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｓｏｍｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｎ２Ｏ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐＨ； ｓａｌｉｎｉｔｙ； Ｃ ／ Ｎ； Ｎ２ＯＲ
　 　 氧化亚氮（Ｎ２Ｏ）是 ６ 种主要的温室气体之一，
由它产生的温室效应为 ＣＯ２的 ３２０ 倍［１］。 超过 ２ ／ ３
的 Ｎ２Ｏ源于土壤生态圈的氮素循环过程［２
－３］，
氧化亚氮还原酶（Ｎ２ＯＲ）是唯一能将 Ｎ２Ｏ 还原
成 Ｎ２的生物酶，在很多具有反硝化功能的微生物中
都证实了它的存在［４－６］。 关于氧化亚氮还原酶的酶
学性质，目前研究甚少，其中 Ｆｅｒｒｅｔｔｌ 等［７］和 Ｄｅｌｌ′
Ａｃｑｕａ 等［８－９］ 分 别 从 Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ 和
Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ６１７ 的细胞培养
物中直接分离出了 Ｎ２ＯＲ，并对其生化性质进行了
研究，他们提出反应体系中铜离子的存在及铜离子
价态差异对酶活性有重大影响；Ｌｉｕ 等［１０］将源于
Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｅｒｍｏｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ ＮＧ８０ ２ 的 Ｎ２ＯＲ 编
码基因在大肠杆菌中实现了外源表达，但酶活较
低；Ｓｈｅｎ 等［１１］将 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉ ＺｏＢｅｌｌ ＡＴＣＣ
１４４０５中的 Ｎ２ＯＲ 编码基因导入了烟草植物，发现
植入 Ｎ２ＯＲ 编码基因的植株具有更好的 Ｎ２Ｏ 还原
能力。
笔者所在实验室成员从盐城市新滩盐场分离
到了 １株高效的反硝化细菌海杆菌 Ｍ􀆰 ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏ⁃
ｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４，发现其能在厌氧及好氧条件下完成
快速的反硝化反应，反硝化终端产物均为 Ｎ２，而其
底物生长范围广泛，能在 １％ ～１５％的盐浓度条件下
生长，因此该菌具有重要的理论研究价值和应用前
景［１２］。 拟考虑到环境中影响 Ｎ２Ｏ 排放的主要因素
是 Ｃ ／ Ｎ和 ｐＨ［１３－１４］以及 Ｍ􀆰 ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４
是一种耐盐的海洋微生物，因此，本实验考察了碳
氮比（Ｃ ／ Ｎ）、ｐＨ 以及盐浓度对 Ｎ２ＯＲ 酶活力的影
响，并建立以细胞裂解液测定 Ｎ２ＯＲ酶活的方法。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 材料
菌株 Ｍ􀆰 ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４ 筛选自江苏
省盐城市的新滩盐场。
活化培养基（ｇ ／ Ｌ）：牛肉膏 ５，蛋白胨 １０，ＮａＣｌ
８０，ＫＣｌ ５，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ２􀆰 ５。
发酵培养基（ｇ ／ Ｌ）：蛋白胨 １０，酵母提取物 ５，
ＮａＣｌ １０，ＣｕＳＯ４·５Ｈ２Ｏ ０􀆰 ２。
１􀆰 ２　 Ｎ２ＯＲ粗酶液制备
将 ＮＹ４菌种从冻存管中取出，在活化培养基中
过夜培养，然后按 １％的接种量（体积分数）转接到
１００ ｍＬ 的发酵培养基，３０ ℃培养 １２ ｈ，将获得的
Ｍ􀆰 ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４菌液静置 ２４ ｈ，离心收
集菌体，重悬于 ５ ｍＬ浓度为 ２０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ缓
冲液中，超声波法进行细胞破碎（振幅 ２５％、频率 １０
Ｈｚ、１０ ｍｉｎ），高速离心后取上清，即得粗酶液 ５ ｍＬ。
粗酶液用 ０􀆰 ４５ μｍ 的水系过滤后，保存在充满气体
Ｈｅ的西林瓶中。
１􀆰 ３　 Ｎ２ＯＲ酶活的测定
酶活测定方法在文献［９］的基础上进行改进，向
容量为 ３􀆰 ５ ｍＬ 的比色皿中加入 ２０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ 的 Ｔｒｉｓ
ＨＣｌ缓冲液（ｐＨ ７􀆰 ０）１􀆰 ５ ｍＬ、１０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ的甲基紫精
溶液 ０􀆰 ２ ｍＬ，酶液 ０􀆰 １ ｍＬ，比色皿密封后反复进行抽
真空和充 Ｈｅ处理，用少量的 ７０４硅胶封住针孔，以确
保比色皿在测定过程中维持厌氧状态。 用微量注射
器向比色皿中注入适量现配浓度为 ５０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ 的连
二亚硫酸钠溶液，后者与甲基紫精形成蓝色中间体，
使得混合反应液在 ６００ ｎｍ处的吸光值（Ａ６００值）保持
在 １􀆰 ０～１􀆰 ２，相对稳定。 向比色皿中注入 ０􀆰 １ ｍＬ 的
Ｎ２Ｏ饱和溶液，启动酶催化反应，在Ｎ２ＯＲ的催化作用
下，甲基紫精与连二亚硫酸钠的蓝色中间体作为电子
供体向 Ｎ２Ｏ提供还原性电子，同时褪去蓝色，混合反
应液的 Ａ６００值也随之降低，Ａ６００斜率降低幅度反映了
Ｎ２ＯＲ酶催化反应的速率。 分光光度计记录 ５ ｍｉｎ内
每隔 １０ ｓ Ａ６００的变化（加入前 １ ｍｉｎ与加入后 ４ ｍｉｎ），
绘制 Ａ６００值的变化曲线，并计算斜率，前 １ ｍｉｎ内的曲
线斜率在－０􀆰 ０２～ ０􀆰 ０１ 之间为有效数据，后 ４ ｍｉｎ 的
斜率为这段时间的平均斜率，在数值上，酶活力 ＝
（－斜率） ／ １１􀆰 ４。 Ｎ２Ｏ饱和溶液采用 Ｎ２Ｏ气体向双蒸
水中持续鼓泡 ０􀆰 ５ ｈ 的方法获得［１５］。 甲基紫精的消
光系数为 １１􀆰 ４ ｍｍｏｌ ／ （Ｌ·ｃｍ） ［１６］。
１􀆰 ４　 环境因素对 Ｎ２ＯＲ酶活的影响
配制不同环境条件下的发酵培养基，按 １％的
接种量将活化后的菌株 ＮＹ４ 分别接入其中，在
３０ ℃转速为 ２００ ｒ ／ ｍｉｎ 的条件下过夜培养。 然后，
分别取 １ ｍＬ 菌液，在波长为 ６００ ｎｍ 处测定吸光值
Ａ６００，作为细菌生长量的参考。 剩余的菌液按照酶
活测定方法，测定 Ｎ２ＯＲ酶活。
１􀆰 ４􀆰 １　 ｐＨ对 Ｎ２ＯＲ酶活的影响
配制 ５份 １００ ｍＬ发酵培养基，用 ＨＣｌ和 ＮａＯＨ
调节其 ｐＨ分别为 ６、７、８、９ 和 １０。 此时，盐质量分
数为 ２％，Ｃ ／ Ｎ为 １０。
１􀆰 ４􀆰 ２　 盐质量分数对 Ｎ２ＯＲ酶活的影响
配制 ６ 份 ＮａＣｌ 质量分数分别为 ０、２％、４％、
６％、８％和 １０％的发酵培养基各 １００ ｍＬ。 此时 ｐＨ
为 ７，Ｃ ／ Ｎ为 １０。
１􀆰 ４􀆰 ３　 Ｃ ／ Ｎ对 Ｎ２ＯＲ酶活的影响
发酵培养基中的总氮为 ３ ０００ ｍｇ ／ Ｌ，化学需氧量
（ＣＯＤ）为３０ ｇ ／ Ｌ，Ｃ ／ Ｎ为１０，通过添加ＮａＮＯ３ 作为无机
氮调节培养基的 Ｃ ／ Ｎ分别至 ３、４、５、６、７、８、９和 １０，每
份配制 １００ ｍＬ。 此时的 ｐＨ为 ７，盐质量分数为 ２％。
２　 结果与讨论
２􀆰 １　 海杆菌 ＮＹ４的 Ｎ２ＯＲ酶活测定
根据实验方法制取菌株 ＮＹ４的粗酶液，以不具
有 Ｎ２ＯＲ酶活的大肠杆菌作为阴性对照。 反应过程
８４ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １４卷　
中的 Ａ６００值变化曲线如图 １所示。 由图 １可知：在 ５
ｍｉｎ的测定过程中，含有 Ｎ２ＯＲ 酶活的 ＮＹ４ 粗酶液
使甲基紫精与连二亚硫酸钠形成的蓝色中间体褪
色明显，在反应的第 １～２ ｍｉｎ内尤为剧烈，表明此时
大量的还原性电子从蓝色中间体传递至 Ｎ２Ｏ 并将
后者还原成 Ｎ２，而不含有 Ｎ２ＯＲ 酶的大肠杆菌细胞
裂解液几乎不能催化 Ｎ２Ｏ 的还原反应。 根据拟合
直线的斜率计算出酶活：０􀆰 １ ｍＬ 粗酶液的酶活为
０􀆰 ０５ Ｕ，依此推算，５ ｍＬ 粗酶液（１００ ｍＬ 菌液）中
Ｎ２ＯＲ的总酶活为 ２􀆰 ５０ Ｕ。
图 １　 测定 Ｎ２ＯＲ酶活时 Ａ６００的变化
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ Ａ６００ ｉｎ ｔｈｅ ａｓｓａｙｉｎｇ
ｏｆ Ｎ２ＯＲ ａｃｔｉｖｉｔｙ
Ｎ２ＯＲ对 Ｏ２ 极为敏感，反应体系在整个测定过
程中均要求维持厌氧状态，包括混合溶液中的溶解
氧也要去除干净，因此，Ｎ２ＯＲ 的酶活测定相对困
难，Ｄｅｌｌ′ａｃｑｕｑ等［９］采用厌氧手套箱完成整个测定
过程，由于常规分光光度计难以放置在实验室小型
厌氧手套箱内，因此笔者改进了测定方法，采用向
封闭比色皿中混合溶液反复冲加气体 Ｈｅ 的策略，
有效地维持了其厌氧状态，从而对 Ｎ２ＯＲ 的酶活进
行了准确测定。
２􀆰 ２　 ｐＨ对 Ｎ２ＯＲ酶活性的影响结果
实验设置了 ５ 个 ｐＨ 梯度，但当 ｐＨ 为 ６ 时，
Ｍ􀆰 ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４生长状况极差，因此没
有进行后续的酶活测定及分析。 从图 ２ 可以看出，
菌体生长量及 Ｎ２ＯＲ酶活在 ｐＨ为 ７时均为最大，并
随着 ｐＨ值的上升呈现同步下降现象，相对于菌体
生长，酶活下降则更为明显，尤其当 ｐＨ 为 １０ 时，
Ｎ２ＯＲ酶活急剧下降。 Ｄｅｌｌ′ａｃｑｕｑａ 等［９］在研究中指
出，Ｎ２ＯＲ对 ｐＨ 变化是敏感的，在碱性条件下能获
得更高的酶活。 而在实验结果中，酶活在 ｐＨ 为 ７
的中性条件下达到最高，随着碱性提高，Ｎ２ＯＲ 酶活
损失明显，这与土壤环境中 Ｎ２Ｏ 的释放规律是一致
的，研究表明自然环境中 Ｎ２Ｏ 的排放通常与环境
ｐＨ呈正相关关系［１７］。
图 ２　 ｐＨ对菌体生长及 Ｎ２ＯＲ酶活的影响
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐＨ ｏｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ
ａｎｄ Ｎ２ＯＲ ａｃｔｉｖｉｔｙ
２􀆰 ３　 盐质量分数对 Ｎ２ＯＲ酶活性的影响结果
Ｍ􀆰 ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４ 是一种海洋微生
物，盐质量分数对其生长代谢及反硝化能力都有影
响［１２］，结果如图 ３ 所示，由图 ３ 可知：菌体的最适生
长盐质量分数为 ２％，当盐质量分数为 ８％时，菌体
表现出最高的总氮去除能力。 随着盐质量分数的
增加，Ｎ２ＯＲ 的酶活呈现上升趋势。 当盐质量分数
大于 ６％时，即使细胞生长受到抑制，但 Ｎ２ＯＲ 酶活
稳定在 ２􀆰 ５０ Ｕ左右，而当盐质量分数低于 ４％时，酶
活显著降低，这个结果也部分解释了前期实验中发
现的高盐条件下获得更高总氮去除率的现象。 推
测的原因有二：一是较高盐条件下，Ｎ２ＯＲ 编码基因
的转录表达量增加；二是高盐条件下， Ｎ２ＯＲ具有更
高的底物催化效率。 具体原因有待后续实验证实。
图 ３　 盐质量分数对菌体生长及 Ｎ２ＯＲ酶活的影响
Ｆｉｇ􀆰 ３　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓａｌｉｎｉｔｙ ｏｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ
ａｎｄ Ｎ２ＯＲ ａｃｔｉｖｉｔｙ
２􀆰 ４　 Ｃ ／ Ｎ对 Ｎ２ＯＲ酶活性的影响结果
Ｎ２ＯＲ的电子竞争力较弱，足够的还原性电子有
利于 Ｎ２Ｏ 的还原，而还原力是由碳源提供的，因此，
Ｃ ／ Ｎ对 Ｎ２ＯＲ的活性及 Ｎ２Ｏ 的排放有较大影响［１３］。
９４　 第 ２期 王鹏胤等：Ｍ􀆰 ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４中 Ｎ２ＯＲ的酶活测定及环境因素对酶活力的影响
本实验采用固定碳源改变氮源的方式研究 Ｃ ／ Ｎ 对
Ｎ２ＯＲ酶活的影响，结果如图 ４ 所示。 由图 ４ 可知：
Ｃ ／ Ｎ对菌体生长影响较小，尤其是当 Ｃ ／ Ｎ为 ４～９时，
菌体生长平稳；但 Ｃ ／ Ｎ 的变化对 Ｎ２ＯＲ 酶活影响明
显，当 Ｃ ／ Ｎ小于 ８时，Ｎ２ＯＲ酶活随着 Ｃ ／ Ｎ的升高而
增加，当 Ｃ ／ Ｎ为 ８时酶活力达到峰值。
图 ４　 Ｃ ／ Ｎ对菌体生长及 Ｎ２ＯＲ酶活的影响
Ｆｉｇ􀆰 ４　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃ ／ Ｎ ｏｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ
ａｎｄ Ｎ２ＯＲ ａｃｔｉｖｉｔｙ
３　 结论
Ｎ２Ｏ的排放及减量控制受到了环境工作者越来越
多的关注，而氧化亚氮还原酶是自然环境中唯一能直
接将 Ｎ２Ｏ还原为 Ｎ２的生物酶。 本实验以一株源自海
洋具备处理含盐含氮废水能力的细菌 Ｍ􀆰 ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ⁃
ｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４为研究对象，建立了氧化亚氮还原酶的
酶活测试方法，考察了几种主要的环境因素对 Ｎ２ＯＲ
酶活力的影响，结果表明，当ｐＨ ７ 时、盐质量分数为
６％～８％以及 Ｃ ／ Ｎ为 ８时，菌体细胞表现出了最大的
Ｎ２ＯＲ活力。 研究结果对 Ｍ􀆰 ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ＮＹ４
中Ｎ２ＯＲ的酶活及影响因素进行了真实的评价，也为这
一类型反硝化细菌的后续应用提供了有力参考。
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ｏｘｉｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｆｒｏｍ Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ （ ＮＣＩＭＢ １１０１５）
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ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｕｒｐｌｅ ｆｏｒｍ ｏｆ Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ
ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ ｎｉｔｒｏｕｓ ｏｘｉｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ［ Ｊ］ ．Ｐｈｉｌｏｓ Ｔｒａｎｓ Ｒ
Ｓｏｃ Ｌｏｎｄ Ｂ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ，２０１２，３６７：１２０４⁃１２１２．
［ ９ ］ 　 ＤＥＬＬ′ＡＣＱＵＡ Ｓ，ＰＡＵＬＥＴＡ Ｓ Ｒ，ＭＯＮＺＡＮＩ Ｅ，ｅｔ ａｌ． Ｅｌｅｃｔｒｏｎ
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（责任编辑　 周晓薇）
０５ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １４卷