全 文 ：第 １３卷第 ３期
２０１５年 ５月
生　 物　 加　 工　 过　 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ􀆰 １３ Ｎｏ􀆰 ３
Ｍａｙ ２０１５
ｄｏｉ：１０􀆰 ３９６９ ／ ｊ􀆰 ｉｓｓｎ􀆰 １６７２－３６７８􀆰 ２０１５􀆰 ０３􀆰 ０１１
收稿日期：２０１４－０８－０３
基金项目：新疆维吾尔自治区高校科研计划科学研究重点项目（ＸＪＥＤＵ２０１２Ｉ３０）；新疆维吾尔自治区教育厅重点实验室项目（ＸＪＳＤ２０１３ ０６）；
新疆师范大学校级重点学科招标课题（ＸＪＭＢ １）
作者简介：付建红（１９７０—），女，河南平舆人，博士，副教授，研究方向：特殊环境生物多样性及其代谢产物的活性，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｆｊｈ＿７１９＠ １６３．ｃｏｍ
新疆石榴皮多酚的提取及其对酪氨酸酶的抑制作用
付建红１，２，郭丽艳１，２
（１． 新疆特殊环境物种保护与调控生物学重点实验室，新疆 乌鲁木齐 ８３００５４；
２． 新疆师范大学 生命科学学院，新疆 乌鲁木齐 ８３００５４）
摘　 要：优化新疆石榴皮多酚的提取工艺，并研究石榴皮提取物对酪氨酸酶的抑制作用。 采用超声波辅助法提取
石榴皮多酚，通过单因素试验和正交试验确定其最佳提取工艺条件：丙酮体积分数 ７０％、超声波功率 ２００ Ｗ、提取
温度 ４０ ℃、料液比 １ ∶ ３５ ｇ ／ ｍＬ、提取时间 ５０ ｍｉｎ、提取 ２次，在此条件下石榴皮多酚得率为 ２３􀆰 ７７ ｍｇ ／ ｇ。 同时测定
了石榴皮多酚提取物对蘑菇酪氨酸酶的抑制活性，石榴皮多酚提取物质量浓度在 １２ ｍｇ ／ ｍＬ时，对酪氨酸酶活力的
相对抑制率为 ４４􀆰 ０５％。 该研究为从石榴皮中提取天然酪氨酸酶抑制剂提供了实验依据。
关键词：石榴皮；多酚；酪氨酸酶；抑制作用
中图分类号：Ｑ９４６􀆰 ５　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２－３６７８（２０１５）０３－００５９－０５
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ
Ｘｉｎｊｉａｎｇ ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ
ＦＵ Ｊｉａｎｈｏｎｇ１，２，ＧＵＯ Ｌｉｙａｎ１，２
（１． Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｓｐｅｃｉａｌ Ｓｐｅｃｉｅｓ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｕｒｍｕｑｉ ８３００５４，Ｃｈｉｎａ；
２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｍｕｑｉ ８３００５４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｆｒｏｍ Ｘｉｎｊｉａｎｇ ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ ａｎｄ ｓｔｕｄｉｅｄ
ｉｔｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ⁃ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔ ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ
ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ． Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ａｎｄ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ： ａｃｅｔｏｎｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ７０％，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｐｏｗｅｒ ２００ Ｗ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ４０ ℃，ｒａｔｉｏ ｏｆ
ｔｈｅ ｐｏｗｄｅｒ ｔｏ ｔｈｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ １ ∶ ３５ ｇ ／ ｍＬ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ５０ ｍｉｎ， ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｗｉｃｅ． Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ａｂｏｖｅ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｆｒｏｍ ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ ｗａｓ ２３􀆰 ７７ ｍｇ ／ ｇ． Ａｂｏｕｔ ４４􀆰 ０５％ ｏｆ ｔｈｅ
ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｗａｓ １２ ｍｇ ／ ｍＬ．
Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ａ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｏｆ ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｒｏｍ ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ； ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ； ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ； ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ
　 　 石榴（Ｐｕｎｉｃａ ｇｒａｎａｔｕｍ Ｌ􀆰 ）为石榴科石榴属植
物，是新疆主要水果之一，主要分布在南疆喀什、和
田等地区。 在石榴加工过程中会产生大量的石榴
皮，若不加以综合利用，不仅造成资源浪费，而且还
会对环境造成污染。 石榴皮含有多酚、氨基酸、生
物碱等多种生物活性成分［１－２］，其中多酚类物质在
干石榴皮中的质量分数为 １０％ ～ ２０％［３－４］。 石榴皮
多酚是石榴皮中多酚羟基化合物的总称，包括鞣花
单宁、没食子单宁、鞣花酸、没食子酸、儿茶素、花色
素、绿原酸和栎精等多种化合物，具有抗氧化、抗衰
老、抗癌、抗菌、润肤美容、降血压和预防心脑血管
疾病等多种生理和药理活性［４－７］。
酪氨酸酶普遍存在于人和动植物体内，是黑
色素生物合成过程中的关键酶。 随着酪氨酸酶的
合成量和催化活力的升高，体内黑色素合成增多，
导致皮肤色斑及黑色素瘤的形成。 可通过抑制酪
氨酸酶活力来预防和治疗色素沉着及黑色素瘤，
因此，寻找有效且对人体无毒副作用的天然酪氨
酸酶抑制剂，已成为药物和化妆品行业研究热点
之一。 石榴皮的主要成分多酚对 Ｏ－２·具有良好的
清除作用，可用作酶的抑制剂［８］ 。 Ｂａｓｉｒｉ 等［９］研究
了伊朗设拉子市石榴皮提取物对太平洋白虾酚氧
化酶（酪氨酸酶）活性及冷藏期白虾质量的影响，
结果表明石榴皮提取物对白虾酚氧化酶的抑制作
用呈剂量依赖性方式。 孙慧等［１０］ 、谢贞建等［１１］和
张海均等［１２］分别研究了石榴皮多酚提取物对醛糖
还原酶、α 葡萄糖苷酶以及 α 淀粉酶的抑制作
用，探索了其降血糖作用的途径。 但目前有关新
疆石榴皮多酚提取物对蘑菇酪氨酸酶活性的影响
尚未见报道。
笔者以新疆和田产“皮雅曼”石榴为原料，在单
因素试验的基础上进行正交试验，筛选出石榴皮多
酚的最佳提取工艺参数，同时探讨多酚提取物对蘑
菇酪氨酸酶的抑制作用，以期为石榴皮资源的充分
利用提供实验基础。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 试剂与仪器
石榴皮粉由新鲜石榴皮晒干后粉碎、过 ８３０ μｍ
筛而成，置于干燥、避光的环境中保存备用。
没食子酸（ＡＲ），上海源叶生物科技有限公司；
福林酚（ＢＲ），上海荔达生物科技有限公司；二甲亚
砜（ＡＲ）、Ｌ 多巴（ＡＲ）、曲酸（ＡＲ）、蘑菇酪氨酸酶
（ＢＲ ）， Ｓｉｇｍａ⁃Ａｌｄｒｉｃｈ 公 司； 乙 醇、 丙 酮、 甲 醇、
Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨ２ＰＯ４和 Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ 均为市售国
产分析纯。
ＵＶ ２８００Ｈ型紫外可见分光光度计，尤尼柯上
海仪器有限公司；ＲＥ ２０００Ａ 型旋转蒸发器，上海
亚荣生化仪器厂；ＷＤ ９４１２ 型恒温循环器，北京市
六一仪器厂；ＳＨＢ Ⅲ型循环水式多用真空泵，郑州
长城科工贸有限公司；ＫＱ ２５０ＤＥ 型数控超声波清
洗器，昆山市超声仪器有限公司；ＧＬ ２０ＧＨ型离心
机，上海安亭科学仪器厂。
１􀆰 ２　 石榴皮多酚的提取
准确称取 ５ ｇ 石榴皮粉于磨口三角烧瓶中，按
照一定比例加入一定体积分数的提取溶剂，搅拌均
匀，置于超声波清洗器中，在超声波功率 ２００ Ｗ、温
度 ４０ ℃的条件下超声处理一定时间，４ ０００ ｒ ／ ｍｉｎ
离心 １５ ｍｉｎ 后取上清液，减压浓缩至原体积的
１ ／ １０，获得多酚粗提液。 利用没食子酸标准曲线的
回归方程求出粗提液中多酚的含量，计算多酚得率。
１􀆰 ３　 石榴皮提取物中多酚含量的测定
１􀆰 ３􀆰 １　 没食子酸标准曲线的绘制
参照文献［４，６－７，９］作适当改进。 精确称取没
食子酸 ２５ ｍｇ，用蒸馏水溶解并定容至 ２５０ ｍＬ，即得
０􀆰 １ ｍｇ ／ ｍＬ的标准品溶液。 精密吸取标准品溶液
０􀆰 ２、０􀆰 ４、０􀆰 ６、０􀆰 ８和 １􀆰 ０ ｍＬ于 １０ ｍＬ 容量瓶中，加
入 １ ｍＬ福林 酚显色剂，摇匀后再加入 ２ ｍＬ质量分
数为 １５％Ｎａ２ＣＯ３溶液，用水定容至 １０ ｍＬ，室温下
（避光）反应 ２ ｈ 后在 ７６０ ｎｍ 下测定吸光值。 由吸
光值对没食子酸浓度进行回归，得方程 ｙ ＝ ４６􀆰 ８５ｘ＋
０􀆰 ０７５ ５，相关系数 Ｒ２ ＝ ０􀆰 ９９９ １。
１􀆰 ３􀆰 ２　 多酚类物质含量的测定及得率的计算
移取多酚粗提液 ０􀆰 ５ ｍＬ置于 １０ ｍＬ容量瓶中，
依次加入 １ ｍＬ福林 酚显色剂及 ２ ｍＬ １５％Ｎａ２ＣＯ３
溶液并定容，按上述标准曲线测定方法测定吸光
值。 用回归方程计算多酚含量，按式（１）计算石榴
皮多酚的得率。
多酚得率 ＝ ρＶｎ ／ ｍ （１）
式中：ρ为按标准曲线得出的提取溶液多酚的质量
浓度，ｍｇ ／ ｍＬ；Ｖ为提取液体积，ｍＬ；ｎ 为稀释倍数；
ｍ为石榴皮干粉质量，ｇ。
１􀆰 ４　 单因素试验
称取一定量的石榴皮粉末，分别研究不同提取
方法、提取溶剂、超声处理时间、超声处理温度、料
液比和提取次数对多酚提取效果的影响。
１􀆰 ５　 正交试验设计
根据单因素试验结果，选择有机溶剂浓度、料
液比、超声处理时间和超声温度 ４个因素，以多酚得
率为指标，进行 Ｌ９（３４）正交试验。
１􀆰 ６　 石榴皮多酚提取物对酪氨酸酶抑制作用的
测定
　 　 以 Ｌ 多巴为底物，参照文献［１１－１２］报道的方
法进行酪氨酸酶的活性测定。 先将提取物用含体
０６ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １３卷　
积分数为 ５％二甲亚砜的磷酸盐缓冲液溶解，配制
成一定质量浓度的提取物溶液。 按表 １准确吸取提
取物溶液、ｐＨ ６􀆰 ８的磷酸盐缓冲溶液和 １􀆰 ０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ
的 Ｌ 多巴溶液，充分混合，于 ３０ ℃下水浴 １０ ｍｉｎ
后，加入酪氨酸酶溶液（１５０ Ｕ ／ ｍＬ），水浴反应 １５
ｍｉｎ，迅速转移至比色皿中，在 ４７５ ｎｍ处测定各反应
液吸光度值，按式（２）计算抑制率。 阳性对照组以
曲酸代替石榴皮提取液，空白组以含体积分数为
５％二甲亚砜的 ｐＨ ６􀆰 ８磷酸盐缓冲液代替酶液和提
取液。
抑制率 ＝ １ －
Ｂ１ － Ｂ２
Ａ１ － Ａ２
æ
è
ç
ö
ø
÷ × １００％ （２）
式中：Ａ１为酪氨酸酶催化氧化底物溶液产生的黑色
素的吸光度值；Ａ２为底物溶液的吸光度值；Ｂ１为酪氨
酸酶活性受提取物抑制后溶液的吸光度值；Ｂ２为提
取物的吸光度值。
表 １　 反应液组成
Ｔａｂｌｅ １　 Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｌｉｑｕｉｄｓ
ｍＬ
吸光值 Ｖ（提取物溶液）
Ｖ（磷酸盐
缓冲溶液）
Ｖ（Ｌ 多巴
溶液）
Ｖ（酪氨酸酶
溶液）
Ａ１ ０ ２􀆰 ０ １ ０􀆰 ５
Ａ２ ０ ２􀆰 ５ １ ０
Ｂ１ １ １􀆰 ０ １ ０􀆰 ５
Ｂ２ １ １􀆰 ５ １ ０
２　 结果与讨论
２􀆰 １　 石榴皮多酚提取的单因素试验
２􀆰 １􀆰 １　 提取方法的选择
采用浸提法（时间 １ ｈ，温度 ６０ ℃，料液比 １ ∶ ２０
ｇ ／ ｍＬ）、超声波辅助提取法（时间 ３０ ｍｉｎ，温度 ４０
℃，料液比 １ ∶ ２０ ｇ ／ ｍＬ，功率 ２００ Ｗ，频率 ４０ ｋＨｚ）和
振荡提取法（振荡时间 １􀆰 ５ ｈ，恒温摇床 ３０ ℃，料液
比 １ ∶ ２０ ｇ ／ ｍＬ，转速 １５０ ｒ ／ ｍｉｎ）进行试验，考察采用
不同提取方法对石榴皮多酚得率的影响，结果见表
２。 由表 ２可知，超声波辅助提取的效果优于溶剂浸
提法和振荡提取法。 这是由于超声波使液体发生
空化作用，物料周围空穴的形成、增大和闭合会产
生极大的冲击波和剪切力，使细胞破碎，增加有效
成分的溶出速度，从而提高有效成分的浸提率和缩
短浸提时间。
表 ２　 不同提取方法对多酚得率的影响
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓｌ
ｏｎ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｙｉｅｌｄ
提取方法 浸提法 超声波辅助提取法 振荡提取法
多酚得率 ／ （ｍｇ·ｇ－１） １０􀆰 ９３ １２􀆰 ６４ １０􀆰 ４７
２􀆰 １􀆰 ２　 提取溶剂及其用量对石榴皮多酚提取的
影响
称取石榴皮粉 ５ ｇ，料液比 １ ∶ ２０ ｇ ／ ｍＬ，超声波
２００ Ｗ，提取时间为 ３０ ｍｉｎ，提取温度 ４０ ℃，考察
提取溶剂及其用量对多酚得率的影响，结果见
图 １。
图 １　 提取溶剂及其体积分数对多酚得率的影响
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｖｏｌｕｍｅ
ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｎ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ
由图 １ 可知：甲醇、乙醇和丙酮体积分数在
３０％ ～７０％的多酚得率均高于各种纯溶剂提取时
的多酚得率。 有机溶剂和水的混合溶剂对多酚得
率的影响效果从高到低依次为 ５０％丙酮、７０％丙
酮、３０％丙酮、３０％乙醇、７０％乙醇、５０％乙醇、７０％
甲醇、３０％甲醇和 ５０％甲醇。 一方面是由于在植
物体内多酚通常与蛋白质、多糖以氢键和疏水键
形式形成稳定的化合物，而有机溶剂和水的复合
体系具有氢键断裂的作用，因此复合体系有利于
多酚的提取；另一方面可能由于丙酮等 ３ 种溶剂
分子与水分子之间作用力不同造成溶剂对多酚溶
解性能的不同所致。 由于丙酮的多酚得率与乙
醇、甲醇相比差异较大，因此，选用 ５０％丙酮作为
后续实验的提取溶剂。
２􀆰 １􀆰 ３　 提取时间对石榴皮多酚提取的影响
称取石榴皮粉 ５ ｇ，按料液比 １ ∶ ２０ ｇ ／ ｍＬ的比例
加入体积分数为 ５０％的丙酮溶液，在 ４０ ℃、２００ Ｗ
的超声波条件下，考察提取时间（１０、２０、３０ 和 ４０
ｍｉｎ）对多酚得率的影响，结果见图 ２。 由图 ２ 可知：
１６　 第 ３期 付建红等：新疆石榴皮多酚的提取及其对酪氨酸酶的抑制作用
随着提取时间的延长，多酚得率不断增高，３０ ｍｉｎ
时达到最大值。 但随着提取时间进一步延长，多酚
得率反而下降。 这可能与多酚不稳定、易氧化受损
有关。 因此，确定提取时间为 ３０ ｍｉｎ。
图 ２　 提取时间对多酚得率的影响
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ
２􀆰 １􀆰 ４　 提取温度对石榴皮多酚得率的影响
称取石榴皮粉 ２􀆰 ５ ｇ，按料液比 １ ∶ ２０ ｇ ／ ｍＬ的比
例加入体积分数为 ５０％的丙酮溶液，在功率 ２００ Ｗ
的超声波条件下提取 ３０ ｍｉｎ，考察温度对多酚得率
的影响，结果见图 ３。 由图 ３ 可知：提取温度对石榴
皮多酚得率影响较显著。 ４０ ℃时多酚得率最高，但
超过 ４０ ℃时，多酚得率反而下降。 随着温度的升
高，溶剂内分子运动速度加快，多酚的渗透、溶解、
扩散速度也加快，使多酚得率得以提高。 然而，多
酚类物质的稳定性较差，长时间受热会发生氧化或
水解反应，从而导致多酚得率下降。 因此，确定提
取温度为 ４０ ℃。
图 ３　 提取温度对多酚得率的影响
Ｆｉｇ􀆰 ３　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ
ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ
２􀆰 １􀆰 ５　 料液比的选择
料液比是影响原料中多酚提取的重要因素之
一。 适当的料液比既可使原料中的多酚类物质得
到充分提取，还可减少溶剂的消耗。 称取石榴皮粉
１ ｇ，在 ４０ ℃的条件下用 ２００ Ｗ 的超声波提取 ３０
ｍｉｎ，考察料液比对多酚得率的影响，结果见图 ４。
由图 ４可知：多酚得率随溶剂用量的增大而增加。
在料液比为 １ ∶ ５～１ ∶ ２０ ｇ ／ ｍＬ时，多酚得率增加的幅
度较为明显；当料液比超过 １ ∶ ２０ ｇ ／ ｍＬ 时，多酚得
率的变化幅度较为平缓。 这表明当料液比为 １ ∶ ２０
ｇ ／ ｍＬ时，原料中绝大多数多酚已被提取出来，再调
整料液比，多酚得率也不会明显提高。 考虑到节约
成本，选用 １ ∶ ２０ ｇ ／ ｍＬ的料液比较适宜。
图 ４　 料液比对多酚得率的影响
Ｆｉｇ􀆰 ４　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｏｌｉｄ⁃ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ ｏｎ
ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ
２􀆰 １􀆰 ６　 提取次数的选择
称取石榴皮粉 ２ ｇ，按 １ ∶ ２０ ｇ ／ ｍＬ 的料液比加
入体积分数为 ５０％的丙酮溶液。 在 ４０ ℃的条件
下，用 ２００ Ｗ 的超声波提取 ３０ ｍｉｎ，离心，所得沉
淀按上述提取方法再次进行提取，合并多次提取
所得上清液，浓缩，测定提取液中多酚含量，计算
其得率，结果见图 ５。 由图 ５ 可知：提取 ２ 次时，多
酚得率最高，说明多酚物质几乎全部浸出。 而提
取 ３ 次、４ 次多酚得率反而下降，这主要是由于提
取所用累计时间比较长，导致多酚氧化受损。 此
外，每次提取时需要消耗溶剂，这增加了浓缩时的
能耗，因此，从成本和时间考虑，选择提取 ２ 次较
为合适。
图 ５　 提取次数对多酚得率的影响
Ｆｉｇ􀆰 ５　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅｓ ｏｎ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ
２６ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １３卷　
２􀆰 ２　 正交试验结果与分析
根据单因素试验结果，以多酚得率为主要考查
指标，采用 Ｌ９（３４）正交试验考察丙酮体积分数（Ａ）、
提取时间（Ｂ）、提取温度（Ｃ）和料液比（Ｄ）对石榴皮
多酚提取的影响，结果及极差分析见表 ３ 和表 ４。
由表 ３和表 ４可知，各因素对多酚得率的影响次序
从大到小依次为丙酮体积分数、料液比、提取时间、
提取温度。 新疆石榴皮多酚的最佳提取工艺条件
为 Ａ２Ｂ３ Ｃ２ Ｄ３，即丙酮体积分数 ７０％、超声波功率
２００ Ｗ、提取温度 ４０ ℃、料液比 １ ∶ ３５ ｇ ／ ｍＬ、提取时
间 ５０ ｍｉｎ、提取 ２次，在此条件下，石榴皮多酚得率
为 ２３􀆰 ７７ ｍｇ ／ ｇ。 高于正交试验表中所列最佳组合
Ａ１Ｂ３Ｃ３Ｄ３得到的多酚得率，证明本实验确定的提取
条件是合理的。
表 ３　 正交试验结果
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ａｎｄ ｒｅｓｕｌｔ
实
验
号
因素
Ａ
φ（丙酮） ／
％
Ｂ
提取时间 ／
ｍｉｎ
Ｃ
提取温度 ／
℃
Ｄ
料液比 ／
（ｇ·ｍＬ－１）
多酚得率 ／
（ｍｇ·ｇ－１）
１ １（４０） １（１０） １（２０） １（１ ∶ １５） １４􀆰 ４３
２ １ ２（３０） ２（４０） ２（１ ∶ ２５） ２０􀆰 ３４
３ １ ３（５０） ３（６０） ３（１ ∶ ３５） ２２􀆰 ７８
４ ２（７０） １ ２ ３ ２２􀆰 ５３
５ ２ ２ ３ １ １５􀆰 ４０
６ ２ ３ １ ２ ２０􀆰 ５４
７ ３（１０） １ ３ ２ ２􀆰 ６３９
８ ３ ２ １ ３ ７􀆰 ７１３
９ ３ ３ ２ １ ４􀆰 ３７８
表 ４　 正交试验结果极差分析
Ｔａｂｌｅ ４　 Ｒａｎｇｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅｒｒｏｒ
误差源 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
Ｋ１ １９􀆰 ０５ １３􀆰 ２０ １４􀆰 ２３ １１􀆰 ４０
Ｋ２ １９􀆰 ４９ １４􀆰 ４８ １５􀆰 ７５ １４􀆰 ５１
Ｋ３ ４􀆰 ９１ １５􀆰 ９０ １３􀆰 ６１ １７􀆰 ６７
Ｒ １４􀆰 ５８ ２􀆰 ７０ ２􀆰 １４ ６􀆰 ２７
２􀆰 ３　 石榴皮多酚提取物对酪氨酸酶的抑制作用
取冻干的提取物，配成不同质量浓度的溶液，
按表 １反应体系分别测定不同浓度的提取物对酪氨
酸酶活性的抑制作用。 以提取物浓度为横坐标，抑
制率为纵坐标，绘制抑制曲线，结果见图 ６。 由图 ６
可见：随着石榴皮提取物浓度的不断增大，其对酪
氨酸酶的抑制作用不断增强。 在低质量浓度 （ ２
ｍｇ ／ ｍＬ）时，抑制率已经达 ３７􀆰 ３１％；当石榴皮多酚提
取物质量浓度达到 １２ ｍｇ ／ ｍＬ时，对酪氨酸酶的抑制
率为 ４４􀆰 ０５％，仅增加了 ６􀆰 ７４％。 说明随着石榴皮多
酚提取物浓度的增加，其对酪氨酸酶的抑制作用增加
缓慢，推测石榴皮提取物对酪氨酸酶的抑制作用已达
到稳态。 阳性对照曲酸（１􀆰 ０ ｍｇ ／ ｍＬ）的酶活抑制率
是 ９３􀆰 ７％，与其相比，石榴皮多酚提取物对酪氨酸酶
也具有较好的抑制效果，有可能成为一种新型功能性
化妆品添加剂应用于美白化妆品中。
图 ６　 石榴皮多酚提取物对酪氨酸酶的抑制作用
Ｆｉｇ􀆰 ６　 Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ
ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ ｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ
３　 结论
１）通过单因素试验和正交试验， 确定了超声波
辅助法提取新疆石榴皮多酚最佳的工艺参数：丙酮
体积分数 ７０％、超声波功率 ２００ Ｗ、提取温度４０ ℃、
料液比 １ ∶ ３５ ｇ ／ ｍＬ、提取时间 ５０ ｍｉｎ、提取 ２ 次，在
此条件下，石榴皮多酚得率为 ２３􀆰 ７７ ｍｇ ／ ｇ。
２）新疆石榴皮多酚提取物对蘑菇酪氨酸酶的
二酚酶具有较强的抑制作用，当提取物质量浓度为
１２ ｍｇ ／ ｍＬ时，石榴皮多酚对酪氨酸酶的相对抑制率
为 ４４􀆰 ０５％。 新疆石榴皮多酚提取物可能是潜在的
果蔬防褐变剂和皮肤美白剂。
参考文献：
［ １ ］ 　 滕碧蔚．石榴皮的研究与应用进展［ Ｊ］ ．大众科技，２０１３，１５
（２）：５９⁃６１．
［ ２ ］ 　 李道明，周端，王晓琴．我国石榴的研究开发现状及发展展望
［Ｊ］ ．农产品加工·学刊，２０１２（１０）：１１０⁃１１２．
［ ３ ］ 　 王华斌，包晓玮，韩海霞，等．新疆石榴皮多酚提取工艺研究
［Ｊ］ ．食品与机械，２０１０，２６（５）：１３７⁃１４０．
［ ４ ］ 　 王玲，焦士蓉，雷梦林，等．石榴皮多酚的提取及抑菌作用［ Ｊ］ ．
安徽农业科学，２０１０，３８（５）：８９９５⁃８９９７．
（下转第 ６９页）
３６　 第 ３期 付建红等：新疆石榴皮多酚的提取及其对酪氨酸酶的抑制作用