全 文 ：第９卷第１期
２０１１年１月
生　物　加　工　过　程
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ．９Ｎｏ．１
Ｊａｎ．２０１１
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－３６７８．２０１１．０１．００５
收稿日期：２０１０－０７－２９
基金项目：江苏省六大人才高峰资助项目
作者简介：吴勋贵（１９８６—），男，贵州遵义人，硕士研究生，研究方向：微生物与生化药学；王　（联系人），教授，博士生导师，Ｅｍａｉｌ：ｍｉｎｗａｎｇ
＠ｃｐｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
苦瓜多糖的提取、分离纯化及组成性质
吴勋贵，王泽根，蔡　寅，杨　烨，王　
（中国药科大学 生命科学与技术学院，南京 ２１０００９）
摘　要：正交实验确定提取工艺后，用热水提取法得到苦瓜多糖（ＭＣＰ）。对ＭＣＰ进行ＤＥＡＥ ３２离子交换层析分
离，得到３个多糖组分ＭＣＰ１、ＭＣＰ２和ＭＣＰ３。进一步采用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ ４００凝胶层析进行分离，经凝胶层析和高效
液相色谱检测表明，ＭＣＰ１、ＭＣＰ２为均一性多糖组分。通过高效液相凝胶色谱法测定了两者的相对分子质量分别
为１１６×１０６和７４５×１０５。用ＰＭＰ衍生化法测定其单糖，结果表明：ＭＣＰ１系由 Ｍａｎ、Ｒｈａｍ、ＧｌｃＵＡ、ＧａｌＵＡ、Ｇｌｕ、
Ｇａｌ、Ｘｙｌ、Ａｒａ等单糖组成的杂多糖，摩尔比为１０３∶２９３∶１００∶１４９５∶２１６∶３０７０∶２８５∶４５０。ＭＣＰ２系由 Ｒｈａｍ、
ＧａｌＵＡ、Ｇａｌ、Ｘｙｌ、Ａｒａ等单糖组成的杂多糖，对应的摩尔比为１６３∶２１８８∶４６６∶１００∶１２９。紫外光谱表明该多糖不
含蛋白质和核酸。
关键词：苦瓜多糖；分离纯化；单糖；衍生化
中图分类号：Ｑ５３９　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－３６７８（２０１１）０１－００１９－０５
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆ
Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
ＷＵＸｕｎｇｕｉ，ＷＡＮＧＺｅｇｅｎ，ＣＡＩＹｉｎ，ＹＡＮＧＹｅ，ＷＡＮＧＭｉｎ
（ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＣｒｕｄｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍＭｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａｗｉｔｈｈｏｔｗａｔｅｒ．Ｔｈｒｅｅｍａｉｎ
ｆｒａｃｔｉｏｎｓｏｆＭｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ＭＣＰ）：ＭＣＰ１，ＭＣＰ２ａｎｄＭＣＰ３ｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈ
ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｎＤＥＡＥ３２ｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｃｏｌｕｍｎ．ＴｈｅｆｒａｃｔｉｏｎｓｗｅｒｅｆｕｒｔｈｅｒｉｓｏｌａｔｅｄｂｙＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ４００
ｇｅｌｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｂｙＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ４００ａｎｄＨＰＬＣｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＭＣＰ１ａｎｄＭＣＰ２
ｗｅｒｅｂｏｔｈｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ．ＴｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｏｆＭＣＰ１ａｎｄＭＣＰ２ｗｅｒｅ１１６×１０６ａｎｄ７４５×１０５，ｒｅ
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｇｅｌｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．ＴｈｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＭＣＰｓｗｅｒｅ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣａｆｔｅｒＰＭＰｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＭＣＰ１ｗａｓｈｅｔｅｒｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
ｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆＭａｎ，Ｒｈａｍ，ＧｌｃＵＡ，ＧａｌＵＡ，Ｇｌｕ，Ｇａｌ，ＸｙｌａｎｄＡｒａ，ｗｉｔｈｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｍｏｌａｒｒａｔｉｏｓｏｆ１０３
∶２９３∶１００∶１４９５∶２１６∶３０７０∶２８５∶４５０．ＭＣＰ２ｗａｓｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆＲｈａｍ，ＧａｌＵＡ，Ｇａｌ，Ｘｙｌａｎｄ
Ａｒａ，ｗｉｔｈｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｍｏｌａｒｒａｔｉｏｓｏｆ１６３∶２１８８∶４６６∶１００∶１２９．Ｎｏｔｙｐｉｃａｌａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｏｆｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ
ｏｒｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＵＶｓｃａｎｎｉｎｇ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ
　　苦瓜（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａ，ＭＣ），别名凉瓜、锦
荔枝，为葫芦科苦瓜属植物。《本草纲目》中记载苦
瓜有“去邪热，解劳乏，清心明目，益气壮阳”的功
效［１］。现代药理学及临床研究表明，苦瓜还具有降
血糖、抗氧化、抗菌、调节和提高机体免疫力、抗肿
瘤和抑制艾滋病 ＨＩＶ的表面活性等多种药理活
性［２－３］。目前，国内外不少学者已经从不同品种的
苦瓜及其种子中分离得到三萜类、甾类、蛋白类、有
机酸类、生物碱类、糖类等物质［４］。作为苦瓜的 ２
个主要有效成分：苦瓜多糖（ＭＣＰ）和苦瓜皂苷，后
者的研究相对比较多，提取方法主要有有机溶剂提
取法、热水提取法、微波提取法等，但目前国内外对
ＭＣＰ的研究、开发和利用相对较少［５］。
　　本文以新鲜苦瓜片为原料，采用热水浸提、乙醇
沉淀、ＤＥＡＥ ３２离子交换层析和高效凝胶渗透色谱
等方法对 ＭＣＰ的分离纯化工艺进行了研究，并对
ＭＣＰ的组成性质进行了初步的分析，为ＭＣＰ后续的
研究和药物开发利用提供了有力的依据。
１　材料与仪器
１．１　材料与试剂
　　新鲜苦瓜片，镇江市绿健天然制品有限公司；
ＤＥＡＥ ３２离子交换树脂、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ ４００ＨＲ，上
海前尘生物科技有限公司；Ｌ 鼠李糖（Ｌ Ｒｈａｍ）、
Ｄ 阿拉伯糖（Ｄ Ａｒａ）、Ｄ 甘露糖（Ｄ Ｍａｎ）、Ｄ 葡
萄糖（Ｄ Ｇｌｕ）、Ｄ 半乳糖（Ｄ Ｇａｌ）、Ｄ 木糖（Ｄ
Ｘｙｌ）、Ｄ 核糖（Ｄ Ｒｉｂ）、Ｄ 半乳糖醛酸（Ｄ Ｇａ
ｌＵＡ）、Ｄ 葡萄糖醛酸（Ｄ ＧｌｃＵＡ）、Ｌ 岩藻糖（Ｌ
Ｆｕｃ）、三氟乙酸 （ＴＦＡ）、１ ｐｈｅｎｙｌ ３ ｍｅｔｈｙｌ５
ｐｙｒａｚｏｌｏｎｅ（ＰＭＰ），Ｓｉｇｍａ公司；右旋糖酐相对分子
质量标准对照品，中国药品生物制品检定所。其他
试剂均为分析纯。
１．２　实验仪器
　　ＳＨＢ Ⅲ循环水式真空泵，郑州长城科工贸有
限公司；Ｒ ２０１旋转蒸发器，上海申胜生物技术有
限公司；ＨＬ ２Ｓ恒流泵，ＢＳ １００Ａ自动部分收集
器，上海沪西分析仪器厂；Ａｎｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色
谱仪，美国安捷伦公司。
２　实验方法
２．１　ＭＣＰ的预处理与提取
２．１．１　原料预处理
　　将新鲜的苦瓜片进行干燥脱水处理，干燥箱内
温度控制在５０℃。干燥的苦瓜片经研磨器粉碎后，
过０３８ｍｍ筛，得到苦瓜粉，置于干燥器中密封保
存。称取１５０ｇ苦瓜粉，采用体积分数８０％乙醇对
苦瓜粉进行热水浴回流浸提，料液比（ｇ／ｍＬ）为１∶３，
反应温度８０℃，反应时间２ｈ。
２．１．２　ＭＣＰ的提取
　　将８０％乙醇回流浸提后的苦瓜粉抽滤，真空干
燥。然后按以下工艺提取 ＭＣＰ：苦瓜粉→加水浸泡
→水浴浸提→离心取上清液→浓缩醇沉→冷冻离
心→丙酮、乙醚洗涤→干燥后溶解透析→冻干
→ＭＣＰ。
２．１．３　ＭＣＰ的紫外吸收检测
　　紫外全波长扫描，精密称取 ＭＣＰ１ｍｇ，配制成
０１％的水溶液，以蒸馏水作空白对照，２００～４００ｎｍ
紫外扫描。
２．２　ＭＣＰ的分离纯化
２．２．１　ＤＥＡＥ ３２离子交换层析［６－７］
　　精确称取１２ｇＭＣＰ，溶于４０ｍＬ蒸馏水中，离心，
将上清液加入ＤＥＡＥ ３２离子交换柱中（３５ｃｍ×３０
ｃｍ），依次通过 ０～１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，０～０６ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ
的线性梯度洗脱液以及用 ０１５、０２、０２５、０３ｍｏｌ／Ｌ
ＮａＣｌ进行阶段洗脱，用 ＨＬ ２Ｓ恒流泵控制其流速
为１ｍＬ／ｍｉｎ，ＢＳ １００Ａ自动收集器以１５ｍＬ每管
收集洗脱液。苯酚 硫酸法跟踪检测，绘制洗脱
曲线。
　　将以上阶段洗脱得到的洗脱液分别浓缩，蒸馏
水透 析、浓 缩、冷 冻 干 燥，得 到 ＭＣＰ１、ＭＣＰ２
和ＭＣＰ３。
２．２．２　ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ ４００凝胶层析［８］
　　精确称取 ＭＣＰ１、ＭＣＰ２和 ＭＣＰ３各５０ｍｇ，分
别溶于１５ｍＬ的蒸馏水。离心后分别将上清液加
入ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ ４００柱中（１６ｃｍ×１００ｃｍ）。用恒
流泵控制其流速为０１ｍＬ／ｍｉｎ，并采用苯酚 硫酸
法跟踪检测，于４９０ｎｍ处测其吸光度，绘制各组分
多糖的洗脱曲线，收集主峰做纯度检测。
２．２．３　ＭＣＰ１和ＭＣＰ２的纯度检测
　　用Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱仪，以下列色谱
条件检测 ＭＣＰ１和 ＭＣＰ２的纯度。检测器：示差检
测器；色谱柱：ＳｈｏｄｅｘＳｕｇａｒＫＳ ８０４柱（８ｍｍ×３０
ｃｍ）；流动相：水；流速：１ｍＬ／ｍｉｎ。
２．３　ＭＣＰ的结构性质
２．３．１　ＭＣＰ１和ＭＣＰ２相对分子质量的测定［９］
　　将ＭＣＰ１与ＭＣＰ２分别用蒸馏水配制成５ｍｇ／ｍＬ
０２ 生　物　加　工　过　程　　 第９卷　
的试样液，１８０００ｒ／ｍｉｎ离心 １０ｍｉｎ，分别取
５００μＬ上清液，用 Ａｇｉｌｅｎｔ１１００测定其相对分子
质量。以右旋糖酐相对分子质量标准对照品制
作标准曲线。色谱条件：柱子，ｓｈｏｄｅｘ系列的
ＯＨｐａｋＳＢ８０４和 ＯＨｐａｋＳＢ８０２串 联；柱 温，
４５℃；流速，０５ｍＬ／ｍｉｎ；检测器，示差检测器；
流动相：水。
２．３．２　ＭＣＰ１和 ＭＣＰ２的单糖组成分析及相对摩
尔比［１０－１１］
　　单糖标准品混合溶液：精密称取８０℃干燥至
恒质量的 Ｄ Ｇｌｕ５９ｍｇ、Ｄ Ｇａｌ５６ｍｇ、Ｄ Ｍａｎ
５６ｍｇ、Ｌ Ｒｈａｍ５６ｍｇ、Ｄ Ａｒａ５６ｍｇ、Ｄ Ｘｙｌ
４７ｍｇ、Ｄ ＧｌｃＵＡ６６ｍｇ、Ｄ ＧａｌＵＡ５２ｍｇ、
Ｌ Ｆｕｃ５０ｍｇ和Ｄ Ｒｉｂ５９ｍｇ，加入蒸馏水定容
至 ５ｍＬ，混匀，ＰＭＰ衍生化，反相高效液相色谱检
测。色谱条件：色谱柱 Ｃ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，
５μｍ），流动相 ０１ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ
６７）／乙腈（体积比为 ８３∶１７）；等度洗脱条件：流
速 １ｍＬ／ｍｉｎ，紫外检测波长 ２５４ｎｍ；进样量 １０
μＬ，柱温 ３０℃。
　　试样溶液：精密称取 ＭＣＰ１、ＭＣＰ２各５ｍｇ，分
别加蒸馏水１ｍＬ配制成５ｍｇ／ｍＬ的溶液，置于安
瓿瓶中，加 ４ｍｏｌ／ＬＴＦＡ１ｍＬ，酒精喷灯封口，
１２０℃烘箱中反应 ２ｈ，冷却至室温。加甲醇
３ｍＬ，５０℃水浴旋转蒸干，重复３次，剩余物加水
１ｍＬ溶解，混匀。精密量取２５μＬ置５ｍＬ离心管
中，按单糖标准品的衍生方法处理试样，反相高效
液相色谱检测。
３　结果与分析
３．１　ＭＣＰ的提取工艺
　　为了研究ＭＣＰ的提取条件，本研究在参考其他
多糖研究的基础上，确定水浴温度、料液比、ＰＨ、提
取时间为影响因素，做正交实验，结果见表１。由极
差分析（表２）可知，影响 ＭＣＰ提取率各因素的主
次关系从大到小依次：水浴温度、料液比、ｐＨ、水浴
时间，即水浴温度９５℃，料液比（ｇ／ｍＬ）１∶５０，ｐＨ８，
时间５ｈ为最佳提取条件。因此，确定醇沉的体积
分数为９５％，料液比（ｇ／ｍＬ）为１∶３。
３．２　ＭＣＰ的紫外全波长测定
　　通过紫外全波长测定发现，水提的 ＭＣＰ在
２００～４００ｎｍ处没有吸收（图１），说明不含有蛋白
质及核酸，所以省略了后续除蛋白质的过程。
表１　正交实验结果
Ｔａｂｌｅ１　Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
方案
因素
Ａ
温度／℃
Ｂ
时间／ｈ
Ｃ料液比／
（ｇ·ｍＬ－１）
Ｄ
ｐＨ
提取率／％
１ ８５ ５ １∶４０ ７ １３５７
２ ８５ ６ １∶５０ ８ １６６１
３ ８５ ７ １∶６０ ９ １３９６
４ ９０ ５ １∶５０ ９ ２０５３
５ ９０ ６ １∶６０ ７ １７９８
６ ９０ ７ １∶４０ ８ １７８４
７ ９５ ５ １∶６０ ８ ２２６６
８ ９５ ６ １∶４０ ９ ２１８９
９ ９５ ７ １∶５０ ７ ２２１６
表２　正交实验结果分析
Ｔａｂｌｅ２　Ａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓｏｆｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
因素 Ｋ１ Ｋ２ Ｋ３ 极差 Ｒ 最优水平
Ａ １４７１ １８７８ ２２２７ ７５６ ９５００
Ｂ １８９２ １８８３ １７９９ ０９３ ５００
Ｃ １７７７ １９７７ １８２０ ２００ １５０
Ｄ １７９０ １９０４ １８７９ １１４ ８００
图１　ＭＣＰ的紫外吸收光谱
Ｆｉｇ．１　ＵＶｓｐｅｃｔｒａｍｏｆＭＣＰ
３．３　ＭＣＰ的分离纯化
　　通过ＤＥＡＥ ３２离子交换层析后，用苯酚 硫酸
法跟踪检测，绘制出洗脱曲线（图２、图３）。由图２、
图３可知，阶段梯度洗脱法（图３）明显优于线性梯
度洗脱法（图２）。因为从图２可以看出，用线性梯
度洗脱的ＭＣＰ无法得到分离；而在阶段梯度洗脱时
（图３），可以明显看到 ＭＣＰ被分为３个组分。图３
１２　第１期 吴勋贵等：苦瓜多糖的提取、分离纯化及组成性质
中的３种组分分别对应 ＭＣＰ１（０１５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ洗
脱）、ＭＣＰ２（０２０ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ洗脱）和 ＭＣＰ３（０２５
ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ洗脱）。
图２　ＭＣＰ的０～１．０ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ与０～０６ｍｏｌ／Ｌ
ＮａＣｌＤＥＡＥ ３２柱层析线性洗脱曲线
Ｆｉｇ．２　ＬｉｎｅａｒｅｌｕｔｉｏｎｃｕｒｖｅｏｆＭＣＰｗｉｔｈ０～１０ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ
ａｎｄ０～０６ｍｏｌ／ＬＮａＣｌｏｎＤＥＡＥ３２ｃｏｌｕｍｎ
图３　ＭＣＰ的０１５、０２０、０２５、０３０ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ
ＤＥＡＥ ３２柱层析阶段洗脱曲线
Ｆｉｇ．３　ＳｔｅｐｗｉｓｅｅｌｕｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＭＣＰｗｉｔｈ０１５，０２０，
０２５ａｎｄ０３ｍｏｌ／ＬＮａＣｌｏｎＤＥＡＥ３２ｃｏｌｕｍｎ
图４　ＭＣＰ１、ＭＣＰ２的ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ ４００柱洗脱曲线
Ｆｉｇ．４　ＥｌｕｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＭＣＰ１ａｎｄＭＣＰ２ｏｎ
ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ４００ｃｏｌｕｍｎ
　　经 ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ ４００分子筛层析后，ＭＣＰ１和
ＭＣＰ２可以得到单一的洗脱峰（图４），说明组分性
质较一致，两者可作为后续的研究试样。而 ＭＣＰ３
的洗脱曲线呈多峰状，所以不用作后续的研究。
３．４　ＭＣＰ１和ＭＣＰ２的液相纯度检测
　　通过高效液相检测，ＭＣＰ１和ＭＣＰ２都呈现单一
峰，说明得到了纯度较高的ＭＣＰ１和ＭＣＰ２（图５、图６）
图５　ＭＣＰ１的高效液相纯度检测
Ｆｉｇ．５　ＨＰＬＣｐｕｒｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆＭＣＰ１
图６　ＭＣＰ２的高效液相纯度检测
Ｆｉｇ．６　ＨＰＬＣｐｕｒｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆＭＣＰ２
３．５　ＭＣＰ１和ＭＣＰ２的相对分子质量的测定
　　通过高效液相检测，与右旋糖酐相对分子质量
标准对照品对比，运用ＧＰＣ软件分析得到：ＭＣＰ１和
ＭＣＰ２的相对分子质量分别为 １１６×１０６和
７４５×１０５。
３．６　ＭＣＰ１和ＭＣＰ２的单糖组成分析及相对摩尔比
　　与１０种标准单糖的 ＨＰＬＣ图谱对照后发现：
ＭＣＰ１是由 Ｍａｎ、Ｒｈａｍ、ＧｌｃＵＡ、ＧａｌＵＡ、Ｇｌｕ、Ｇａｌ、
Ｘｙｌ、Ａｒａ等单糖组成的杂多糖，其相对摩尔比为
ｎ（Ｍａｎ）∶ｎ（Ｒｈａｍ）∶ｎ（ＧｌｃＵＡ）∶ｎ（ＧａｌＵＡ）∶
ｎ（Ｇｌｕ）∶ｎ（Ｇａｌ）∶ｎ（Ｘｙｌ）∶ｎ（Ａｒａ）＝１０３∶２９３∶
１００∶１４９５∶２１６∶３０７０∶２８５∶４５０。ＭＣＰ２是由
Ｒｈａｍ、ＧａｌＵＡ、Ｇａｌ、Ｘｙｌ、Ａｒａ等单糖组成的杂多糖，
其相对摩尔比为 ｎ（Ｒｈａｍ）∶ｎ（ＧａｌＵＡ）∶ｎ（Ｇａｌ）∶ｎ
（Ｘｙｌ）∶ｎ（Ａｒａ）＝１６３∶２１８８∶４６６∶１００∶１２９
（图７～９）。
２２ 生　物　加　工　过　程　　 第９卷　
注：ＰＭＰ（１１８０６ｍｉｎ）、Ｍａｎ（１４３７３ｍｉｎ）、Ｒｉｂ（１８８４３ｍｉｎ）、
Ｒｈａｍ（２０３７０ｍｉｎ）、ＧｌｃＵＡ（２１８８７ｍｉｎ）、ＧａｌＵＡ（２４８８９ｍｉｎ）、
Ｇｌｕ（３０３３６ｍｉｎ）、Ｇａｌ（３４５７５ｍｉｎ）、Ｘｙｌ（３６９４１ｍｉｎ）、
Ａｒａ（３８３０８ｍｉｎ）、Ｆｕｃ（４５３３９ｍｉｎ）。
图７　标准单糖的ＰＭＰ衍生化高效液相色谱图
Ｆｉｇ．７　ＨＰＬＣｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｏｆＰＭＰｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ
ｏｆｓｔａｎｄａｒｄｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
注：ＰＭＰ（１１９６０ｍｉｎ）、Ｍａｎ（１４３７４ｍｉｎ）、Ｒｈａｍ（２０３４３ｍｉｎ）、
ＧｌｃＵＡ（２１８８１ｍｉｎ）、ＧａｌＵＡ（２４６４３ｍｉｎ）、Ｇｌｕ（３０２６５ｍｉｎ）、
Ｇａｌ（３４３３６ｍｉｎ）、Ｘｙｌ（３６８５５ｍｉｎ）、Ａｒａ（３８２１４ｍｉｎ）。
图８　ＭＣＰ１的ＰＭＰ衍生化高效液相色谱图
Ｆｉｇ．８　ＨＰＬＣｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｏｆＰＭＰｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｏｆＭＣＰ１
注：ＰＭＰ（１１８３４ｍｉｎ）、Ｒｈａｍ（２０３０７ｍｉｎ）、
ＧａｌＵＡ（２４７４５ｍｉｎ）、Ｇａｌ（３４３９６ｍｉｎ）、
Ｘｙｌ（３６８００ｍｉｎ）、Ａｒａ（３８１５６ｍｉｎ）。
图９　ＭＣＰ２的ＰＭＰ衍生化高效液相色谱图
Ｆｉｇ．９　ＨＰＬＣｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｏｆＰＭＰｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｏｆＭＣＰ２
４　结　论
　　苦瓜经热水浸提、醇沉和洗涤后，得到苦瓜多
糖ＭＣＰ。后经ＤＥＡＥ ３２离子交换层析和Ｓｅｐｈａｃｒ
ｙｌＳ ４００凝胶层析得到苦瓜多糖 ＭＣＰ１、ＭＣＰ２和
ＭＣＰ３，高效液相检测 ＭＣＰ１、ＭＣＰ２都为均一性多
糖。经过紫外光谱分析，排除含有蛋白质和核酸的
可能。运用ＰＭＰ衍生化方法测定其单糖组成，发现
ＭＣＰ１是由 Ｍａｎ、Ｒｈａｍ、ＧｌｃＵＡ、ＧａｌＵＡ、Ｇｌｕ、Ｇａｌ、
Ｘｙｌ、Ａｒａ等单糖组成的杂多糖。ＭＣＰ２是由 Ｒｈａｍ、
ＧａｌＵＡ、Ｇａｌ、Ｘｙｌ、Ａｒａ等单糖组成的杂多糖。两者的
相对分子质量分别为１１６×１０６和７４５×１０５。经
本实验得到的苦瓜多糖纯品，可为产业化提取以及
后续的药理活性研究和苦瓜多糖药物的开发利用
提供依据。
参考文献：
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ｃｏｍｅｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄａｃｔｉｖａｔｅＡＭＰａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ
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３２　第１期 吴勋贵等：苦瓜多糖的提取、分离纯化及组成性质