全 文 ：第 １２卷第 ３期
２０１４年 ５月
生　 物　 加　 工　 过　 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ􀆰 １２ Ｎｏ􀆰 ３
Ｍａｙ ２０１４
ｄｏｉ：１０􀆰 ３９６９ ／ ｊ􀆰 ｉｓｓｎ􀆰 １６７２－３６７８􀆰 ２０１４􀆰 ０３􀆰 ００８
收稿日期：２０１２－１２－１９
基金项目：国家高技术研究发展计划 （ ８６３ 计划） （ ２０１１ＡＡ０２Ａ２０９）；国家杰出青年科学基金 （ ２１２２５６２６）；国家自然科学基金青年基金
（２０９０６０４９）；国家自然科学基金重点项目（２０９３６００２）
作者简介：初旭明（１９７７—），男，黑龙江佳木斯人，硕士研究生，研究方向：生物化工；胡　 燚（联系人），副教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｈｕｙｉ＠ ｎｊｔｅｃｈ􀆰 ｅｄｕ􀆰 ｃｎ
功能化离子液体化学修饰猪胰脂肪酶的催化性能
初旭明１，贾　 儒１，杨　 姣１，黄　 和１，胡　 燚１，２
（１􀆰 南京工业大学 生物与制药工程学院，南京 ２１１８００； ２􀆰 材料化学工程国家重点实验室，南京 ２１０００９）
摘　 要：选取氯化 １ 羧甲基 ３ 甲基咪唑、氯化 １ 羧甲基 ３ 乙基咪唑、氯化 １ 羧甲基 ３ 丁基咪唑 ３种离子液
体对猪胰脂肪酶（ＰＰＬ）进行化学修饰，得到 ３种修饰的脂肪酶分别命名为 ＰＰＬ Ｍ、ＰＰＬ Ｅ、ＰＰＬ Ｂ。 以三乙酸甘
油酯水解为模型反应，考察离子液体修饰前后 ＰＰＬ的活力、热稳定性、耐有机溶剂性等酶学性质，并通过紫外光谱
研究修饰对 ＰＰＬ空间结构的影响。 结果表明：修饰后 ＰＰＬ的活力明显提高，对温度和 ｐＨ 的敏感度降低。 修饰酶
的热稳定性明显提高，在高浓度的甲醇及 Ｎ，Ｎ 二甲基甲酰胺（ＤＭＦ）中仍能保持游离酶活力的 １００％。 修饰后酶
的特征吸收峰发生红移，吸收强度增强，修饰后酶的微环境发生了改变。
关键词：酶；离子液体；化学修饰；猪胰脂肪酶
中图分类号：Ｑ６４３􀆰 ３　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２－３６７８（２０１４）０３－００４２－０５
Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｌｉｐａｓｅ ｂｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｏｎｉｃ ｌｉｑｕｉｄ
ＣＨＵ Ｘｕｍｉｎｇ１，ＪＩＡ Ｒｕ１，ＹＡＮＧ Ｊｉａｏ１，ＨＵＡＮＧ Ｈｅ１，２，ＨＵ Ｙｉ１，２
（１􀆰 Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１１８００，Ｃｈｉｎａ；
２􀆰 Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ⁃Ｏｒｉｅｎｔｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１０００９，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｐｏｒｃｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｌｉｐａｓｅ （ ＰＰＬ ） ｗａｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ ｉｏｎｉｃ ｌｉｑｕｉｄｓ
（［ＨＯＯＣＭＭＩｍ］［Ｃｌ］，ａｎｄ ［ＨＯＯＣＥＭＩｍ］［Ｃｌ］，［ＨＯＯＣＢＭＩｍ］ ［Ｃｌ］） 􀆰 Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｂｕｆｆｅｒ ａｎｄ ｏｒｇａｎｉｃ
ｓｏｌｖｅｎｔｓ，ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＰＰＬ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ
ｕｎｍｏｄｉｆｉｅｄ ＰＰＬ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｉａｃｅｔｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｒｅａｃｔｉｏｎ􀆰 Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｅｎｚｙｍｅｓ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ
ｔｏｌｅｒａｎｔ ｔｏ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｌｏｗ ｐＨ ｃｈａｎｇｅｓ ａｎｄ ｈａｄ ｂｏｔｈ ｈｉｇｈｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ􀆰 Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ ｉｏｎｉｃ
ｌｉｑｕｉｄｓ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｈｅｒｍａｌ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＰＰＬ􀆰 Ｅｎｚｙｍｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ １００％ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＰＰＬ ｉｎ ｈｉｇｈ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ Ｎ，Ｎ⁃ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ（ＤＭＦ） ａｆｔｅｒ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ􀆰 Ａｆｔｅｒ ＰＰＬ ｗａｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ
ｂｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ ｉｏｎｉｃ ｌｉｑｕｉｄｓ，ｒｅｄ ｓｈｉｆｔ ｏｆ ＰＰＬ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｐｅａｋ ａｎｄ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｉｎｃｒｅａｓｅ
ｏｃｃｕｒｒｅｄ ｄｕｅ ｔｏ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｌｉｐａｓｅ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ􀆰
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｅｎｚｙｍｅ；ｉｏｎｉｃ ｌｉｑｕｉｄ；ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｐｏｒｃｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｓ ｌｉｐａｓｅ
　 　 脂肪酶（ｌｉｐａｓｅ，ＥＣ ３􀆰 １􀆰 １􀆰 ３）主要是指一类能够
催化甘油三酯水解生成脂肪酸、甘油和甘油单酯或
二酯的酶［１－２］，广泛应用于水解或醇解、酯合成、酯
交换、内酯合成、多肽合成、高聚物合成及立体异构
体拆分等有机合成反应，是目前用途最广泛的酶催
化剂之一［３］。 猪胰脂肪酶（ｐｏｒｃｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｓ ｌｉｐａｓｅ，
ＰＰＬ）是一类重要的脂肪酶，在食品、化妆品、医药、
洗涤剂和畜牧业等领域中均有广泛应用［４］。 然而，
ＰＰＬ的应用仍然存在一些不足，如一般具有实际应
用价值的目标化合物并不是它的天然底物；ＰＰＬ 活
力不高，在有机溶剂、高温、极端 ｐＨ 等非天然环境
下极易失活等，这些不利因素限制了 ＰＰＬ 在工业上
进一步的广泛应用。 因此，对 ＰＰＬ 进行分子改性以
强化其催化性能，为工业应用提供活性更高、稳定
性更好、环境耐受性更强的新酶品种，具有重要的
实际应用价值［５］。
化学修饰具有廉价、周期短、实验室可行、容易
创造新型的酶学性质等优点，是对脂肪酶进行分子
改性的一种重要手段［６－７］。 虽然化学修饰 ＰＰＬ已经
取得了一定的研究进展，但仍然局限于脂肪酸、氨
基酸、酸酐、聚乙二醇（ＰＥＧ）和多糖等常用修饰剂
的研究，修饰酶的催化活性、稳定性、耐有机溶剂性
等性能往往不能同时得到有效的改善以满足反应
的需要。
离子液体近年来在生物催化领域的应用越来
越广泛，脂肪酶、蛋白酶、糖苷酶、醇氰酶、氧化还原
酶等多种酶都在离子液体中显示出了很好的稳定
性［８］。 在离子液体中酶催化的区域、对映体选择性
往往都有所增加，尤其作为高极性底物的酶催化反
应介质，离子液体显示出了巨大的潜力［９］。 笔者所
在课题组将功能化离子液体作为酶固定化载体材
料 ＳＢＡ １５的表面修饰剂［１０－１２］，结果表明修饰载体
固定化的酶对温度、ｐＨ 等的稳定性得到了有效提
升，而且相对活力较游离酶有了较大提高。 在固定
化方法中，离子液体作为载体修饰剂。 近几年，
Ｂｅｋｈｏｎｃｈｅ等［１３－１４］首次提出了离子液体修饰酶的新
型化学修饰方法，用含羟基的咪唑、吡咯等离子液
体修饰甲酸脱氢酶，修饰酶的活性和稳定性得到了
显著提升。 这些研究说明离子液体不仅可以作为
反应介质用于酶催化反应中，还可以分别用作固定
化载体及酶分子自身的修饰剂，目前还没有其他用
功能化离子液体修饰脂肪酶的报道。 本文以 ＰＰＬ
为例，希望发展一种酶分子改造的新方法。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 药品与试剂
ＰＰＬ购自 Ｓｉｇｍａ公司并在 ０ ～ ４ ℃下保存，酶的
蛋白质含量为 ９􀆰 ３％，以三乙酸甘油酯为底物时比
酶活力为 ３６２ Ｕ ／ ｇ（４５ ℃、ｐＨ ７􀆰 ５）。 ３ 种离子液体
氯化 １ 羧甲基 ３ 甲基咪唑（９９％）、氯化 １ 羧甲
基 ３ 乙基咪唑（９９％）、氯化 １ 羧甲基 ３ 丁基咪
唑（９９％）购自上海成捷化学有限公司。 １ 乙基
（３ 二甲基氨基丙基）碳二亚胺（９８％）、Ｎ 羟基琥
珀酰亚胺（９８％）、吗啉乙磺酸（９７％）购自阿拉丁试
剂公司。 其余试剂购自国药集团化学试剂有限公
司，均为分析纯。
１􀆰 ２　 离子液体的活化
取 ０􀆰 ００１ ｍｏｌ的离子液体，加入 ０􀆰 ００１ ２ ｍｏｌ １
乙基 （３ 二甲基氨基丙基）碳二亚胺及 ０􀆰 １１１ ５
ｍｏｌ Ｎ 羟基琥珀酰亚胺，在 ５ ｍＬ 的吗啉乙磺酸溶
液中，室温搅拌反应 ２ ｈ后停止［５］。
１􀆰 ３　 活化的离子液体修饰 ＰＰＬ
取 ２ ｇ ＰＰＬ用去离子水溶解，向酶溶液中缓慢
加入活化的离子液体，在 ０ ～ ４ ℃下，磁力搅拌 ６ ｈ
后，在去离子水中透析 ２４ ｈ备用。 修饰度的测量通
过三硝基苯磺酸法才测定［１５］。
１􀆰 ４　 蛋白质含量测定
按照 Ｂｒａｄｆｏｒｄ［１６］的方法，以牛血清蛋白作为标
准蛋白质绘制标准曲线。 测定酶液的吸光值，根据
标准曲线计算蛋白浓度。
１􀆰 ５　 酶活的测定
１）三乙酸甘油酯乳化液的制备 　 将 ６􀆰 ８３ ｇ 三
乙酸甘油酯在强力搅动下缓慢加入磷酸缓冲液（ｐＨ
７􀆰 ０），得到三乙酸甘油酯乳化液，再加入磷酸盐缓
冲液定容至 １００ ｍＬ。
２）酶活测定 　 取 １０ ｍＬ 上述制备的三乙酸甘
油酯乳化液于 １００ ｍＬ锥形瓶中，再加入 １５ ｍＬ磷酸
盐缓冲液（ｐＨ ７􀆰 ５），于 ５０ ℃、１５０ ｒ ／ ｍｉｎ 下预热 ５
ｍｉｎ，然后向其中加入酶开始反应。 反应 １０ ｍｉｎ 后
取出，立即加入 １５ ｍＬ 乙醇终止反应。 用 ０􀆰 ０２５
ｍｏｌ ／ Ｌ的 ＮａＯＨ 溶液滴定，记录 ＮａＯＨ 的消耗量。
在一定条件下，每分钟酶催化三乙酸甘油酯生成 １
μｍｏｌ乙酸所需要的酶量，定义为一个酶活单位
（Ｕ）。
１􀆰 ６　 最适温度及最适 ｐＨ的检测
１）最适温度　 调节反应缓冲液 ｐＨ为 ７􀆰 ０，分别
在 ３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０ 和 ６５ ℃下水浴反应 １０
ｍｉｎ，取出测定酶活。
２）最适 ｐＨ 　 调节反应液的 ｐＨ 分别为 ６􀆰 ０、
６􀆰 ５、７􀆰 ０、７􀆰 ５和 ８􀆰 ０，５０ ℃下水浴反应 １０ ｍｉｎ，取出
测定酶活。
１􀆰 ７　 酶的热稳定性
将酶置于 ５０ ℃水浴中保温，分别在 ０、０􀆰 ５、１、
２、４、６和 ８ ｈ取出，冷却至室温，再测定酶活。 酶活
３４　 第 ３期 初旭明等：功能化离子液体化学修饰猪胰脂肪酶的催化性能
测定方法同 １􀆰 ５。 设保温 ０ ｈ 时的游离酶的初始酶
活为 １００％。
１􀆰 ８　 有机溶剂耐受性
在酶活测定的反应体系中，加入不同浓度的有
机溶剂，测定修饰前后 ＰＰＬ在有机溶剂中的催化稳
定性，设不含有机溶剂体系游离酶的初始酶活
为 １００％。
１􀆰 ９　 紫外光谱测定
室温下，取相同浓度的 ＰＰＬ、ＰＰＬ Ｍ、ＰＰＬ Ｅ
和 ＰＰＬ Ｂ在紫外可见分光光度计上分别测定其紫
外可见吸收光谱，测定范围为 ２４０～３４０ ｎｍ。
２　 结果与讨论
２􀆰 １　 水解活力的考察
表 １为经修饰后的酶与 ＰＰＬ 的表观比酶活力
的数据。
表 １　 酶的水解活力
Ｔａｂｌｅ １　 Ｈｙｄｒｏｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅｓ
酶 比酶活力 ／（Ｕ·ｇ－１） 修饰度 ／ ％
ＰＰＬ ３１８􀆰 ５６±１２􀆰 ３
ＰＰＬ Ｍ ５５３􀆰 ８７±２４􀆰 ８ ４１􀆰 １±３􀆰 ４％
ＰＰＬ Ｅ ４７４􀆰 ５６±２３􀆰 ２ ３２􀆰 ４±２􀆰 ６％
ＰＰＬ Ｂ ４２２􀆰 １５±１２􀆰 ７ １８􀆰 ４±１􀆰 ５％
　 注：反应条件为 ５０ ℃、１５０ ｒ ／ ｍｉｎ反应 １０ ｍｉｎ，ｐＨ ７􀆰 ５ 水解三乙
酸甘油酯。
由表 １可知：猪胰脂肪酶在经过修饰之后，活力
有明显的提高，说明离子液体修饰脂肪酶的方法有
利于水解活力的提高。 其中离子液体修饰的酶，随
着修饰度的增加活力增大，含短链的修饰有更好的
水解活力，是游离酶的 １􀆰 ７４ 倍，而邻苯二甲酸酐对
ＰＰＬ的修饰只提高了 ２５％的水解活力［１７］。 随着修
饰剂的链长的增大，活力呈降低的趋势。
２􀆰 ２　 最适温度的考察
根据经典酸碱滴定的方法，在不同温度下考察
酶水解三乙酸甘油酯特性，结果见图 １。 由图 １ 可
知：原酶最适反应温度为 ４５ ℃左右；经离子液体修
饰后，ＰＰＬ的最适温度向高温方向移动至 ５５ ℃。 与
ＰＰＬ相比，修饰后的 ＰＰＬ 对温度的适应范围更广。
经过修饰后的酶对在高温区相对游离酶更加趋于
平缓，该点证明酶的离子液体修饰有助于提高温度
的耐受性。
图 １　 温度对 ＰＰＬ活力的影响
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＰＰＬ
２􀆰 ３　 最适 ｐＨ的考察
在不同 ｐＨ条件下考察猪胰脂肪酶的三乙酸甘
油酯水解特性，结果如图 ２所示。 由图 ２可知：修饰
酶及游离酶的最适反应 ｐＨ 均为 ７􀆰 ５，修饰的 ＰＰＬ
在 ６􀆰 ０～ ８􀆰 ０ 之间对 ｐＨ 的敏感度明显降低，离子液
体的修饰拓宽了酶的使用范围。
图 ２　 ｐＨ对修饰酶酶活的影响
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐＨ ｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｌｉｐａｓｅｓ
２􀆰 ４　 热稳定性的考察
热稳定性是酶催化工业化应用的一个重要因
素。 图 ３ 为酶的热稳定性实验结果。 由图 ３ 可知：
游离酶的热稳定性较差，酶活下降快。 在保温 ２ ｈ
后，酶活仅为初始酶活的 ２０％。 ＰＰＬ Ｍ、ＰＰＬ Ｅ
及 ＰＰＬ Ｂ的热稳定性均显著提高；在保温 ８ ｈ 后，
残余酶活仍然保持在游离酶初始酶活的 ６０％以上，
尤其是长链的离子液体修饰的酶，酶活降低的更缓
慢，热稳定性更好。
２􀆰 ５　 有机溶剂对酶活的影响
２􀆰 ５􀆰 １　 甲醇对酶活的影响
在 ｐＨ ７􀆰 ５、３０ ℃不同甲醇体积分数的条件下，
测定 ＰＰＬ、ＰＰＬ Ｍ、ＰＰＬ Ｅ 及 ＰＰＬ Ｂ 的活力变
化，结果见图 ４。
由图 ４ 可知：反应体系中加入不同体积分数的
４４ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １２卷　
图 ３　 修饰酶的热稳定性
Ｆｉｇ􀆰 ３　 Ｔｈｅｒｍａｌ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｌｉｐａｓｅｓ
图 ４　 甲醇对酶活的影响
Ｆｉｇ􀆰 ４　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ ｏｎ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｌｉｐａｓｅｓ
甲醇时，游离酶的相对活力一直在降低。 而 ３ 种修
饰酶的活力则是先升高，在高浓度的含甲醇体系中
会下降，这可能是修饰后的酶在低浓度的甲醇中仍
能维持构象稳定，而高浓度的甲醇会破坏部分氢键
从而造成酶的解折叠。 ３ 种酶的变化趋势比较一
致，且普遍高于 ＰＰＬ，３ 种修饰酶的活力大小顺序
（从大到小）为 ＰＰＬ Ｍ、ＰＰＬ Ｅ、ＰＰＬ Ｂ，但 ＰＰＬ
Ｂ的活力在含低浓度的甲醇中增加幅度高于其他 ２
种修饰酶，在含高浓度的甲醇中的活力降低程度要
低于其余 ２种修饰酶。
２􀆰 ５􀆰 ２　 Ｎ，Ｎ 二甲基甲酰胺（ＤＭＦ）对酶活的影响
在 ｐＨ７􀆰 ５、３０ ℃不同 ＤＭＦ 体积分数的条件下，
测定 ＰＰＬ、ＰＰＬ Ｍ、ＰＰＬ Ｅ 及 ＰＰＬ Ｂ 的活力变
化，结果见图 ５。
由图 ５ 可知：在反应体系中加入不同体积分数
的 ＤＭＦ 时，游离酶的活力一直在降低，而修饰酶
均保持了较高的活力，在反应体系中存在 ８０％的
ＤＭＦ时，３ 种修饰酶的活力仍然保持游离酶 １００％
的相对活力以上。 ３ 种修饰酶在不同浓度的 ＤＭＦ
的反应体系中，酶活变化趋势一致，修饰酶的水解
活性均高于原酶 ＰＰＬ。 在含低浓度 ＤＭＦ中，ＰＰＬ
Ｍ的酶活高于其他 ２ 种修饰酶，在 ＤＭＦ 浓度不断
图 ５　 ＤＭＦ对酶活的影响
Ｆｉｇ􀆰 ５　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＤＭＦ ｏｎ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｌｉｐａｓｅｓ
增加中，ＰＰＬ Ｂ 的活力受影响程度最弱，在 ７０％
以上的 ＤＭＦ体积分数中活力下降比例低于其他 ２
种修饰酶， ＰＰＬ 修饰后的耐 ＤＭＦ 的性能明显
提高。
２􀆰 ６　 紫外光谱表征
图 ６为脂肪酶 ＰＰＬ、ＰＰＬ Ｍ、ＰＰＬ Ｅ 及 ＰＰＬ
Ｂ的紫外光谱变化图。
图 ６　 酶的紫外吸收光谱
Ｆｉｇ􀆰 ６　 ＵＶ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ ｌｉｐａｓｅｓ
由图 ６可知：ＰＰＬ经离子液体修饰后，紫外吸收
光谱峰型未发生明显变化，说明修饰后对 ＰＰＬ 的空
间结构没有造成明显的影响，但原 ２７０ ｎｍ处的吸收
峰发生轻微红移，ＰＰＬ Ｍ、ＰＰＬ Ｅ 及ＰＰＬ Ｂ的最
大吸收波长值分别为 ２７１、２７２ 及 ２７５ ｎｍ，修饰酶的
紫外吸光值均有所提高。
３　 结　 论
以 ３种阴离子的咪唑类离子液体对 ＰＰＬ 进行
化学修饰，修饰后的 ＰＰＬ 水解活力明显提升，修饰
度越高，水解活力越高，且随着修饰剂的链长的增
大，活力呈降低的趋势。 与原酶相比，修饰酶的热
稳定、有机溶剂中的催化性能等酶学性质都得到了
提高。
５４　 第 ３期 初旭明等：功能化离子液体化学修饰猪胰脂肪酶的催化性能
参考文献：
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ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ ［ Ｊ］ ．
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ｌｉｐａｓｅ ｏｎｔｏ ｉｏｎｉｃ ｌｉｑｕｉｄ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｍｅｓｏｐｏｒｏｕｓ ｓｉｌｉｃａ ＳＢＡ⁃１５［ Ｊ］ ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｅｎｇ Ｊ，２０１０，５３９（１）：１５０⁃１５３．
［１１］ 　 Ｙａｎｇ Ｊ，Ｈｕ Ｙ，Ｊｉａｎｇ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｔｈｅ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ
ｐｏｒｃｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｌｉｐａｓｅ ｂｙ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｎ ＳＢＡ⁃１５ ｍｏｄｉｆｉｅｄ
ｂｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ ｉｏｎｉｃ ｌｉｑｕｉｄ ［ Ｊ］ ． Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｅｎｇ Ｊ， ２０１３， ７０：
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ｃｅｐａｃｉａ ｌｉｐａｓｅ ｏｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ ｉｏｎｉｃ ｌｉｑｕｉｄｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｍｅｓｏｐｏｒｏｕｓ
ｓｉｌｉｃａ ＳＢＡ⁃１５［Ｊ］ ．Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０１２，４７（１２）：２２９１⁃２２９９．
［１３］ 　 Ｂｅｋｈｏｕｃｈｅ Ｍ， Ｂｌｕｍ Ｌ Ｊ， Ｄｏｕｍｅｃｈｅ Ｂ． Ｉｏｎｉｃ ｌｉｑｕｉｄ⁃ｉｎｓｐｉｒｅｄ
ｃａｔｉｏｎｓ ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｂｏｕｎｄ ｔｏ ｆｏｒｍａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｍｐｒｏｖｅ ｉｔｓ
ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｉｏｎｉｃ ｌｉｑｕｉｄｓ［ Ｊ］ ．ＣｈｅｍＣａｔＣｈｅｍ，２０１１，３
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［１４］ 　 Ｂｅｋｈｏｕｃｈｅ Ｍ，Ｄｏｕｍｅｃｈｅ Ｂ，Ｂｌｕｍ Ｌ Ｊ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
ｓｔｅｍ ｂｒｏｍｅｌａｉｎ ｗｉｔｈ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ ｇｒｏｕｐｓ ｔｏ ｅｎｈａｎｃｅ ｉｔｓ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ
ｃａｔａｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］ ．Ｊ Ｍｏｌ Ｃａｔａｌ Ｂ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ，２０１０，６５（３ ／ ４）：
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［１５］ 　 Ｘｕｅ Ｙ，Ｗｕ Ｃ Ｙ，Ｗｈｉｔｅ Ｃ Ｊ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｅｍ
ｂｒｏｍｅｌａｉｎ ｗｉｔｈ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ ｇｒｏｕｐｓ ｔｏ ｅｎｈａｎｃｅ ｉｔｓ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ
ｃａｔａｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］ ．Ｊ Ｍｏｌ Ｃａｔａｌ Ｂ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ，２０１０，６３（３ ／ ４）：
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［１６］ 　 Ｂｒａｄｆｏｒｄ Ｍ． Ａ ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｍｉｃｒｏｇｒａｍ ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ［ Ｊ］ ． Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９７６，７２：
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究［Ｊ］ ．华南农业大学学报，２０１１，３２（２）：１２２⁃１２４．
（责任编辑　 荀志金）
６４ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １２卷