全 文 ：第6卷第5期
2008年9月
生物加工过程
ChineseJournalofBioprocessEngineering
Sep．2008
· 13 ·
超声辅助从柿叶中提取熊果酸的工艺研究
邹盛勤1’2，黄华彩3
(1．江西省天然药物活性成分研究重点实验室，宜春336000；2．宣春学院生物工程研究所，宜春336000；
3．宜春学院 继续教育学院，宜春336000)
摘要：通过单因素实验，以熊果酸的提取率为指标，考察了柿叶中熊果酸超声提取过程的几个影响因素；并通过
正交实验，对过程参数进行了优化。结果表明，各因素对熊果酸提取效果的影响程度从高到低分别是：乙醇体积分
数一提取次数一提取时间一液固比；确定的最适提取条件为：体积分数95％乙醇溶液超声提取2次，每次40min，
液固比为10：l。
关键词：柿叶；熊果酸；超声提取；正交实验
中图分类号：R284．2 文献标志码：A 文章编号：1672—3678(2008)05—0013—05
UltrasonicassistedextractionofUrsolicacid
frompersimmonleaves
ZOUSheng—qin1一．HUANGHua—cai3
((1．KeyLaboratoryforResearchonActiveIngredientsinNaturalMedicinesofJiangxiProvince，Yichun336000，China；
2．BioengineeringR searchInstitute，YichunCollege，Yichun336000，China；
3．SchoolfContinuingEducation，YichunCollege，Yichun336000，China)
Abstract：TheultrasonicextractionconditionsofUr olieacidfrompersimmonleaveswereinvestigatedby
singlefactorexperimentsandorthogonalexperimentaldesignforimprovingrecoveryofUrsolicacid．Fac-
torsinfluencingtheultrasonicextractionpr cesswerealcoholc ncentration，extractiontimes，extraction
duration，andliqui —solidratio．Theoptimizedcon itionswere95％alcoholin40minfortwicewith
liquid-solidratioof10：1．
Keywords：persimmonleaves；Ursolicacid；ultrasonicextraction；orthogonalexperiment
柿叶为柿科植物柿(DiospyroskakiLinn．f．)的新
鲜或干燥叶，其性味苦、酸、涩、凉，具有清肺止咳、凉
血止血、活血化瘀、抗菌消炎、降血压之功效。主要用
于咳喘、肺气胀以及临床各种内出血、高血压、脑动脉
硬化、冠心病等症¨以J。柿叶化学成分较复杂，主要
含有黄酮类、三萜类、有机酸、香豆素类、酚类、脂肪酸
等化合物∞。]，还含有丰富维生素C、胡萝卜素、多种
氨基酸及铁、锌、钙等对入体健康有益的营养成
分∞。7J，具有较高的营养价值和医疗保健作用。
熊果酸(Ursolicacid，UA)，是柿叶中含量较高的
三萜类成分之一【8J，具有镇静、抗炎、抗菌、降酶、提高
机体免疫、美白、抗癌等功效一1。从植物中提取熊果
酸的方法主要有索氏提取法、回流提取法和超声提取
法，采用超声法提取，车前草中熊果酸的提取率比索
收稿日期：2008-03．16
基金项目：国家863计划资助项目(2002AA223217)；江西省教育厅科技资助项目(赣教技字[2006]267号)
作者简介：邹盛勤(1970一)．男．江西奉新人。副教授，研究方向：天然药物成分提取与分析。E—mail：zsq"y@163．toni
万方数据
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氏法高13．6％【10]，枇杷叶中的熊果酸提取率比回流
法高36．1％【lt]，且提取时间大为缩短。目前国内关
于柿叶的研究多侧重于植化方面，但有效成分的提取
方法研究很少。本研究采用超声提取法对柿叶中熊
果酸提取过程的几个关键因素进行了研究，旨在为充
分利用我国丰富的柿叶资源，进一步研究和开发柿叶
医药保健功能提供参考。
1实验部分
1．1仪器与试剂
1．1．1仪器
Waters高效液相色谱仪(515泵，2996光电二
极管矩阵检测器，柱温箱，Empower中文色谱工作
站，美国)；SK-2510HP超声提取仪器(上海汉克科
学仪器有限公司)；CP225D分析天平(十万分之一，
德国Sartorius公司)。
1．1．2试剂
甲醇(色谱纯，上海陆忠试剂厂)；体积分数为
95％乙醇(分析纯，江西洪都生物化学有限公司)；
水为高纯水；熊果酸对照品(中国药品生物制品鉴
定所，批号：110742-200314，供含量测定用)。柿叶
采自江西宜春市，干燥后经粉碎过80目筛备用。
1．2提取方法
准确称取10g左右柿叶干粉，按不同的液固
5．O 10．0 l5．0 20．0 25．0 30．0
tlmin
比加入体积分数75％一95％的乙醇溶液，置于超
声清洗器中超声提取一定时间，过滤，滤渣再加入
一定量乙醇提取。合并滤液，减压浓缩后烘干，称
重，备用。
1．3分析方法
1．3．1色谱条件
色谱柱为KroinasilC18柱(250toni×4．6mm，
5岬)，带预柱；流动相为V(甲醇)：V(水)=87：13；
检测波长210nm；流速0．8mL／min；柱温为25℃。
l。3，2标准监线的绘制
精密称取熊果酸对照品4．10mg置于25mL容
量瓶中，以甲醇定容，用移液管分别移取1，2，3，5，
10mL定容至10mL，即得5个浓度水平的对照品溶
液，其中熊果酸浓度别为16．4，32．8，49．2，82．0和
164．0斗g／mL。在上述色谱条件下，将以上各浓度
的对照品溶液分别进样20斗L进行测定。得熊果酸
线性回归方程为：
A=2．51×106C一1．30×103，R2=0．9995，线
性范围16．4—164．0ILLg／mL。
1．3．3供试品溶液的制备
将提取浓缩后所得的物料用甲醇定容至一定
体积，摇匀。取供试品溶液，用孔径为0．45斗m的
微孔滤膜过滤，进样量为20灿L，采用高效液相色
谱分析。熊果酸和供试品溶液的色谱图如图l
所示。
5．0 10．0 15．0 20．0 25．0 30．0
t／min
A一对照品；B一样品；1一熊果酸
图l 对照品和柿叶供试品的HPLC色谱图
Fig．1HPLCchromatogramofthestandardanthesample
1．4单因素实验
1．4．1提取溶剂的选择
熊果酸易溶于二氧六环己烷、吡啶、甲醇、乙
醇。考虑到成本和溶剂的安全性，选用乙醇为提
取溶剂。
I．4．2提取次数的考察
称取一定量的柿叶粉，用10倍量的体积分数
95％乙醇超声提取lh，抽滤。滤渣再用相同量的体
积分数95％乙醇反复超声提取。由于柿叶经过反
复多次提取，认为其中的熊果酸已基本提取完全，
万方数据
2008年9月 邹盛勤等：超声辅助从柿叶中提取熊果酸的工艺研究 ·l5·
柿叶中熊果酸的质量分数如下：
∑m。
W02而i=1 x100％
式中：m。为第i次提取液中熊果酸质量，mg；m。为
柿叶的质量，mg；zt，。为柿叶中熊果酸的质量
分数，％。
1．4．3提取时间的考察
称取一定量的柿叶粉，用8倍量的95％的乙醇
溶液超声提取，每隔10min定时取样一次，HPLC
分析。
1．4．4提取液固比的考察
称取一定量的柿叶粉，用95％的乙醇溶液分别
按液同比6，8，10，12，14超声提取40min，每个样品
提取2次。
1．4．5乙醇体积分数的考察
称取一定量的柿叶粉，分别用10倍量的75％，
80％，85％，90％，95％的乙醇溶液超声提取40min，
每个样品提取2次。
1．5正交实验
根据单因素实验确定的范围，以超声提取次
数、提取时间、乙醇体积分数和液固比作为考察的4
个因素，每个因素取3水平，以熊果酸的提取率为指
标，采用k(34)正交表安排实验，得出最佳的提取
条件。
2结果与讨论
2，1单因素实验
2．1．1提取次数的确定
提取次数与熊果酸提取量的关系如表1、图2
所示。从图2可以看出，经过2次提取后，已将柿叶
粉中的熊果酸大部分提取出来，此后提取率变化不
大，可以认为提取3次后，熊果酸被基本提取完全，
由此计算得熊果酸在柿叶中的加。为58．87％。所以
提取次数为1—2次为宜。
2．1．2提取时间的确定
从图3可看到，随着提取时间的增加，提取液中
熊果酸的提取率逐渐增大，最终达到提取平衡状
态。前30min内，提取率增大趋势明显，随后增加
的趋势变缓，熊果酸在固液相间的浓度逐渐趋于平
衡，而在40min后浓度增幅很小。故选择提取时间
为40rain。
表1 提取次数对熊果酸提取率的影响
TableTheffectofextracttimes0nthe
extractionpercentofursolicacid
图2提取次数对熊果酸提取率的影响
Fig．2Effectofextracttimesonthe
extractionefficiencyofUA
100
80
舞60
鬟40
20
O 20 40 60 80 100
提取时间／rain
图3提取时间对提取物浓度的影响
Fig．3Effectofextractingtimeonthe
concentrationofextractedUA
2．1．3提取液固比的确定
从图4可知，在液固比6—10之间，随着液固比
的增加，有利于熊果酸的溶出，提取率呈快速上升
趋势。液固比大于10后，提取率基本不变。液固比
为12时，提取效果最好。但考虑到提取过程的经济
性，适宜的液固比为10左右。
2．1．4乙醇体积分数的确定
由图5可以看出，随着乙醇体积分数的增大，提
取物中的熊果酸含量呈上升趋势，而提取率也呈现
相同的趋势。所以可以认为，乙醇的体积分数越
万方数据
· 16· 生物加工过程 第6卷第5期
大，对熊果酸的选择性更好，有利于柿叶中熊果酸
的提取。当乙醇体积分数达到90％后再增大乙醇
比例，对提取的影响已经不太明显，所以选择体积
分数90％左右的乙醇溶液作为提取溶剂为宜。
6 8 IO 12 14
液周比／(mL·g-11
图4液固比对熊果酸提取率及提取物含量的影响
Fig．4Effectofliquid2solidratioonthextraction
efficiencya dpurityofUA
图5 乙醇体积分数对提取率及提取物含量的影响
Fig．5Effectofethanolc ncentrationon hextraction
efficiencya dpurityofUA
2．2正交实验
2．2．1正交实验结果
由单因素实验结果可以看出，提取时间、提取
次数、提取液固、乙醇体积分数比4个因素对提取效
率有着不同程度的影响。因此，正交实验主要考察
这4个因素的不同水平下的组合对提取效率的影
响，具体的水平选择见表2，正交实验结果与结果分
析见表3、4，正交方差结果见表5。
表2正交实验因素与水平表
Table2 Factorandleveloforthogonaldesign
A B C D
因素 提取次数 ￡(提取) 液固比 妒(乙醇)
!竺翌 !f堡垦：g：2 1墅
l 20 8 85
水平 2 30 10 90
1 竺 !! !!
表3熊果酸提取率正交实验结果
Table3 Orthogonaldesigna danalysisOil
leachingrateofUrsolieacid
表4熊果酸正交实验结果分析
Table4 AnalysisresultsofUrsolieacid
2，2．2正交方差分析结果
从正交实验可以看出，乙醇体积分数对柿叶中
熊果酸的提取率有显著影响，其余因素影响不显
著，各因素对提取率的影响程度从大到小分别为：
D，A，B，C(表5)。由此得出的最佳的提取条件为
A283C2D3o
表5方差分析表
Table5 Analysisofvariance
·有显著性
3结论
从提取溶剂、提取次数、提取时间、乙醇体积分
数、液固比等几个方面的单因素实验和正交实验的
结果综合考察柿叶中熊果酸的提取工艺，最终确定
孵
舛
如
跖
娩
堡瓣爵璐
万方数据
2008年9月 邹盛勤等：超声辅助从柿叶中提取熊果酸的工艺研究
了优化的工艺条件为体积分数95％乙醇溶液超声
提取2次，每次40min，液固比为10：1，在该条件下
熊果酸的提取率可达95％以上。
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