全 文 ：
摇 摇 摇 摇 摇 生 态 学 报
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 (SHENGTAI XUEBAO)
摇 摇 第 31 卷 第 24 期摇 摇 2011 年 12 月摇 (半月刊)
目摇 摇 次
柑橘黄龙病株不同部位内生细菌群落结构的多样性 刘摇 波,郑雪芳,孙大光,等 (7325)………………………
小兴安岭红松径向生长对未来气候变化的响应 尹摇 红,王摇 靖,刘洪滨,等 (7343)……………………………
污水地下渗滤系统脱氮效果及动力学过程 李海波,李英华,孙铁珩,等 (7351)…………………………………
基于生态系统服务的海南岛自然保护区体系规划 肖摇 燚,陈圣宾,张摇 路,等 (7357)…………………………
羌塘地区草食性野生动物的生态服务价值评估———以藏羚羊为例 鲁春霞,刘摇 铭,冯摇 跃,等 (7370)………
湖北省潜江市生态系统服务功能价值空间特征 许倍慎,周摇 勇,徐摇 理,等 (7379)……………………………
滇西北纳帕海湿地景观格局变化及其对土壤碳库的影响 李宁云,袁摇 华,田摇 昆,等 (7388)…………………
基于连接性考虑的湿地生态系统保护多预案分析———以黄淮海地区为例
宋晓龙,李晓文,张明祥,等 (7397)
………………………………………
……………………………………………………………………………
青藏高原高寒草甸生态系统碳增汇潜力 韩道瑞,曹广民,郭小伟,等 (7408)……………………………………
影响黄土高原地物光谱反射率的非均匀因子及反照率参数化研究 张摇 杰,张摇 强 (7418)……………………
基于 GIS的下辽河平原地下水生态敏感性评价 孙才志,杨摇 磊,胡冬玲 (7428)………………………………
厦门市土地利用变化下的生态敏感性 黄摇 静,崔胜辉,李方一,等 (7441)………………………………………
我国保护地生态旅游发展现状调查分析 钟林生,王摇 婧 (7450)…………………………………………………
黄腹山鹪莺稳定的配偶关系限制雄性欺骗者 褚福印,唐思贤,潘虎君,等 (7458)………………………………
食物蛋白含量和限食对雌性东方田鼠生理特性的影响 朱俊霞,王摇 勇,张美文,等 (7464)……………………
具有捕食正效应的捕食鄄食饵系统 祁摇 君,苏志勇 (7471)………………………………………………………
桑科中 4 种桑天牛寄主植物的挥发物成分研究 张摇 琳,WANG Baode,许志春 (7479)………………………
栗山天牛成虫羽化与温湿度的关系 杨忠岐,王小艺,王摇 宝, 等 (7486)………………………………………
人工巢箱条件下杂色山雀的巢位选择及其对繁殖成功率的影响 李摇 乐,万冬梅,刘摇 鹤,等 (7492)…………
鸭绿江口湿地鸻鹬类停歇地的生物生态研究 宋摇 伦,杨国军,李摇 爱,等 (7500)………………………………
锡林郭勒草原区气温的时空变化特征 王海梅,李政海,乌摇 兰,等 (7511)………………………………………
UV鄄B辐射胁迫对杨桐幼苗生长及光合生理的影响 兰春剑,江摇 洪,黄梅玲,等 (7516)………………………
小麦和玉米叶片光合鄄蒸腾日变化耦合机理 赵风华,王秋凤,王建林,等 (7526)………………………………
利用稳定氢氧同位素定量区分白刺水分来源的方法比较 巩国丽,陈摇 辉,段德玉 (7533)……………………
2010 年冬季寒冷天气对闽江口 3 种红树植物幼苗的影响 雍石泉,仝摇 川,庄晨辉,等 (7542)………………
人参皂苷与生态因子的相关性 谢彩香,索风梅,贾光林,等 (7551)………………………………………………
芘对黑麦草根系几种低分子量有机分泌物的影响 谢晓梅,廖摇 敏,杨摇 静 (7564)……………………………
盐碱地柠条根围土中黑曲霉的分离鉴定及解磷能力测定 张丽珍,樊晶晶,牛摇 伟,等 (7571)…………………
不同近地表土壤水文条件下雨滴打击对黑土坡面养分流失的影响 安摇 娟,郑粉莉,李桂芳,等 (7579)………
煤电生产系统的能值分析及新指标体系的构建 楼摇 波,徐摇 毅,林振冠 (7591)………………………………
专论与综述
西南亚高山森林植被变化对流域产水量的影响 张远东,刘世荣,顾峰雪 (7601)………………………………
干旱荒漠区斑块状植被空间格局及其防沙效应研究进展 胡广录,赵文智,王摇 岗 (7609)……………………
利用农业生物多样性持续控制有害生物 高摇 东,何霞红,朱书生 (7617)………………………………………
研究简报
洪湖湿地生态系统土壤有机碳及养分含量特征 刘摇 刚,沈守云,闫文德,等 (7625)……………………………
氯氰菊酯和溴氰菊酯对萼花臂尾轮虫生殖的影响 黄摇 林,刘昌利,韦传宝,等 (7632)…………………………
学术信息与动态
SCOPE鄄ZHONGYU 环境论坛(2011)暨环境科学与可持续发展国际会议成功举办 (7639)……………………
《生态学报》3 篇文章入选 2010 年中国百篇最具影响国内学术论文摇 等 ( 玉 )………………………………
期刊基本参数:CN 11鄄2031 / Q*1981*m*16*316*zh*P* ￥ 70郾 00*1510*36*
室室室室室室室室室室室室室室
2011鄄12
封面图说: 泥炭藓大多生长在多水、寒冷和贫营养的生境,同时有少数的草本、矮小灌木也生长在其中,但优势植物仍然是泥炭藓
属植物。 泥炭藓植物植株死后逐渐堆积形成泥炭。 经过若干年的生长演变,形成了大片的泥炭藓沼泽。 这种沼泽地
有黑黑的泥炭、绿绿的草甸和亮晶晶的斑块状水面相间相衬,远远看去就像大地铺上了锦绣地毯一样美丽壮观。
彩图提供: 陈建伟教授摇 国家林业局摇 E鄄mail: cites. chenjw@ 163. com
第 31 卷第 24 期
2011 年 12 月
生 态 学 报
ACTA ECOLOGICA SINICA
Vol. 31,No. 24
Dec. ,2011
http: / / www. ecologica. cn
基金项目:中美合作项目(柑橘木虱生防菌与抗虫柑橘品种研究);福建省财政专项鄄福建省农业科学院科技创新团队建设基金(STIF鄄Y03)
收稿日期:2011鄄06鄄27; 摇 摇 修订日期:2011鄄11鄄10
*通讯作者 Corresponding author. E鄄mail: fzliubo@ 163. com
刘波,郑雪芳,孙大光,阮传清,范国成,段永平.柑橘黄龙病株不同部位内生细菌群落结构的多样性.生态学报,2011,31(24):7325鄄7342.
Liu B, Zheng X F,Sun D G,Ruan C Q, Fan G C, Duan Y P. The community structure of endophytic bacteria in different parts of huanglongbing鄄affected
citrus plants. Acta Ecologica Sinica,2011,31(24):7325鄄7342.
柑橘黄龙病株不同部位内生细菌群落结构的多样性
刘摇 波1,*,郑雪芳1,孙大光1,2,阮传清1,范国成3,段永平4
(1. 福建省农业科学院农业生物资源研究所,福州摇 350003; 2. 福建师范大学生命科学学院,福州摇 350003;
3. 福建省农业科学院果树研究所福州,350003 ; 4. 美国农业部佛罗里达园艺试验室,弗罗里达摇 34945)
摘要:采用 PCC(Pearson correlation coefficient)、系统聚类和多样性指数研究了柑橘黄龙病(citrus huanglongbing, HLB)植株不同
部位叶片、枝条及其根部内生细菌的相互关系及其群落结构多样性。 结果表明,从供试柑橘中分离得到 26 株内生细菌(叶片
10 株,枝条 14 株,根部 2 株)隶属于 10 个属 19 个种。 Nested鄄PCR结果显示,柑橘植株不同空间叶片中,黄龙病病原的阳性检出
率为 58. 3% 。 用 LSD法比较显示,柑橘内生细菌在不同器官的分布量大小依次为根>叶>枝条。 上、中、下不同部位叶片和枝条
内生细菌分布量差异不显著,而东、西、南、北不同方位的叶片和枝条内生细菌分布量差异显著(P<5% )。 柑橘内生细菌之间的
PCC分析表明,Bacillus pumilus 和 Bacillus sp. 与柑橘黄龙病病原菌呈显著负相关,Bacillus sp. 和 Bacillus pumilus 与 Bacillus
subtilis呈显著正相关。 Bacillus brevis和 Escherichia hermannii与 Bacillus vesiculariss存在显著正相关。 对柑橘不同器官内生细菌
的 PCC分析表明,同种器官的内生细菌之间呈正相关,不同器官的内生细菌之间呈负相关。 以内生细菌在各器官的分布量为
指标分析不同器官之间的相关性,结果表明,叶片与枝条呈正相关,PCC 为 0. 55,叶片与根部、枝条与根部均呈负相关,PCC 分
别为-0. 19 和-0. 13。 16S rDNA序列聚类分析表明,柑橘内生细菌可分为两大类,第玉大类为革兰氏阳性菌,第域大类为革兰
氏阴性菌。 第玉大类又可以分为芽孢杆菌属和短小杆菌属两个亚类,第域大类也可以分两个亚类。 对柑橘黄龙病病原与叶片
内生细菌进行聚类分析,可以分为三类,第玉类特征为内生细菌存在所有部位的叶片;第域类特征为内生细菌与黄龙病病原菌
存在负相关性;第芋类特征为内生细菌只存在特定部位叶片。 当马氏距离为 27. 23 时,可将柑橘黄龙病内生细菌群落结构聚为
3 类,第玉类特点是在不同部位叶片均有分布,为完全分布类型,且分布量较大,第域类特点是在各器官中均为不完全分布类
型,且分布量不均匀,第芋类特点是根部分布特性且分布量较大。 分析多样性指数表明, SHANNON(H1)指数在叶片最高,根部
最低。 SIMPSON(D)指数在枝条最高,根部最低。 Pielou指数在根部最高,枝条最低。
关键词:柑橘黄龙病;内生细菌;多样性;群落结构
The community structure of endophytic bacteria in different parts of
huanglongbing鄄affected citrus plants
LIU Bo1,*, ZHENG Xuefang1,SUN Daguang1,2,RUAN Chuanqing1, FAN Guocheng3, DUAN Yongping4
1 Agricultural Bioresource. Research Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350003, China
2 College Of Life Science Fujian Normal University, Fuzhou 350003, China
3 Research Institute. of Pomology, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350003, China
4 USDA鄄ARS鄄USHRL, Fort Pierce, FL 34945, U. S. A
Abstract: The analyses methods of Pearson correlation coefficient (PCC), hierarchical cluster analysis and diversity index
were used to study the relevance between citrus huanglongbing (HLB) and the endophytic bacteria in different branches and
leaves as well as roots of huanglongbing (HLB)鄄affected citrus trees. The results showed that 26 isolates (10 isolates from
leaves, 14 isolates from branches and 2 isolates from roots) from HLB鄄affected citrus plants belonged to 19 bacterial species
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in 10 Genus. Among the 12 tested leaf samples, 58. 3% of them were positive for the HLB pathogen using Nested鄄PCR.
The numbers of endophytic bacteria in the different parts of citrus plants ranked as in citrus root > in leaves > in sticks
using statistical LSD (least significant difference) . The numbers of endophytic bacteria in leaves with different orientations
were significant different but little differenct were found among upper parts, middle parts and lower parts. Among the
bacterial populations, Bacillus pumilus and Bacillus sp. were significantly negatively correlated to HLB. bacterium; Bacillus
sp. and Bacillus pumilus was positively correlated to Bacillus subtilis, while Bacillus brevis and Escherichia hermannii was
positively correlated to Bacillus vesicularis. Furthermore, there was no correlation between Bacillus subtilis and Bacillus
brevis based on PCC analysis. The correlations among the bacteria from the same tissue such as the leaves, sticks and roots
were significantly positive, while the correlations among the bacteria from the different tissues were negative. The correlation
coefficient of endophytic bacteria between the leaves and the sticks was over 0. 55 (P<0. 05). Based on clustering analysis
of 16S rRNA gene sequences, citrus endophytic bacteria was divided into two groups:Gram鄄positive and Gram鄄negative.
The correlations between HLB bacterium and other bacteria were divided into 3 groups. The bacteria in group 玉 distributed
in all leaves; and the bacterias in the group 域 were negatively corrected to HLB bacterium while in the group 芋 bacterias
resided only in certain leaves. When mahalanobis distance was 27. 23, the endophytic bacteria were clustered into three
groups. The bacterias in group I distributed in all leaves, so called completely distribution, but the bacterias in group 域
were incompletely distribution, and the bacteria in group 芋 only distributed in the roots. Based on the community diversity
indexes of Shannon, Simpson and Pielou, it is concluded that the maximum of SHANNON(H1) index was in the leaves,
and the minimum was in the roots, however, the maximum of SIMPSON(D) index was in the sticks, and the minimum was
in the roots and the maximum of Pielou index was in the roots while the miinimum was in the sticks.
Key Words: citrus huanglongbing; endophytic bacteria; diversity; community structure
柑橘黄龙病(Citrus huanglongbing,简称 HLB)是世界柑橘生产上最具毁灭性的病害之一[1],严重影响到
柑橘产业的发展。 柑橘黄龙病病原菌(Candidatus Liberibacter asiaticus)是一种韧皮部杆菌属类细菌,属于革
兰氏阴性细菌[2]。 对柑橘黄龙病的研究,在黄龙病分子检测[3],传播虫媒,流行规律,病原菌基因组 DNA 序
列[4],控制技术等方面已有过许多报道。 作者前期研究发现,在感染黄龙病的柑橘植株上,存在着同个器官
感染状态不同,如病株一部分叶(茎、根)感染,另一部分无感染;同个部位感染状态不同,如病株上部一部分
叶(枝)感染,另一部分无感染。 这种病株间不同器官、不同部位病原分布的差异性的原因是什么,是否与植
株内生菌的分布有关,这一现象国内外的相关研究未见报道。 柑橘内生细菌的研究前人有过报道,Lacava 等
从健康柑橘植株体内分离得到的萎蔫短小杆菌(Curtobacterium flaccumfaciens),能够明显减弱由苛养木杆菌
(Xylella fastidiosa)引起的杂色褪绿病(Citrus variegated chlorosis,CVC)的症状[5鄄6]。 Ara俨jo 等从幼小柑橘叶片
中分离得到很多细菌以及真菌,其中可以引起柑橘黑斑病的病原菌(Guignardia citricarpa)所分泌的代谢产物
可以抑制一些芽胞杆菌(Bacillus)的生长[6]。 然而,关于柑橘黄龙病植株内生细菌研究报道很少,仅见王爱华
等研究了柑橘黄龙病植株和柑橘健康植株内生细菌种类存在一定差异[7],而同一棵柑橘黄龙病植株不同部
位内生细菌分布差异的研究未见报道。
植物内生细菌(Endophyte bacterium)被公认的定义是指那些在其生活史的一定阶段或者全部阶段生活于
植物的各种组织和器官内部的细菌[8]。 这样的细菌长期以来生活在植株体内并在某种程度上与植株形成了
互利互助的关系。 植物内生菌几乎存在于所有目前已研究过的植物中其分布广,种类多。 研究表明,感染内
生菌的植物宿主往往具有生长快速、抗逆境、抗病害、抗动物危害等优势,比未感染植株更具生存竞争力[9]。
对于柑橘黄龙病植株,其黄龙病原在病株不同方位和部位的分布是否一致,不同方位、不同部位、不同黄龙病
状态的柑橘器官内生细菌分布是否存在着差异,这些问题尚不清楚。
本研究拟采用 Nested鄄PCR检测方法对柑橘黄龙病植株不同部位叶片进行黄龙病病原的检测,并采用纯
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培养的方法对柑橘(红心柚)黄龙病植株不同部位(上、中、下)和不同方位(东、西、南、北)叶片,枝条以及根
部内生细菌进行分离、鉴定,统计各类内生细菌的在柑橘黄龙病植株不同部位的分布数量,分析柑橘黄龙病植
株不同部位内生细菌分布特性及与黄龙病病原菌分布之间的相关性,为柑橘黄龙病的防治,柑橘内生细菌开
发与利用奠定基础。
1摇 材料与方法
1. 1摇 材料
柑橘样本采集:时间,2010 年 7 月 23 日;地点,顺昌北门水库边赵氏园艺技术研究所果树基地;经纬度,
东经 117. 8毅,北纬 26. 8毅;柑橘品种,红心柚(Citrus grandis Osbeck cv. Chandler);采集方法,选择一株具有典
型黄龙病病症的红心柚植株,分别从东、西、南、北面取其上部、中部、下部共 12 个部位叶片、枝条若干份,并记
录不同方位叶片症状,同时取其侧根若干段,置于 4 益冰箱保存备用。 试剂与仪器:牛肉膏鄄蛋白胨(NA)培养
基、CTAB、茁鄄巯基乙醇、异戊醇、氯仿、细菌总体 DNA提取试剂盒(Promega 公司)、引物(博尚生物工程公司合
成)、PCR仪、Bio鄄Rad电泳仪、UVP凝胶成像系统等。
1. 2摇 方法
1. 2. 1摇 柑橘内生细菌的分离与鉴定
柑橘内生细菌的分离参照蓝江林等[10鄄12]的方法,略作修改。 对采集样品表面进行严格消毒。 在无菌条
件下,将样品研磨成匀浆,并稀释 10-1、10-2、10-3 3 个梯度样品悬浮液,分别取 200 滋L 涂布在 NA 平板上,28
益培养 24 h,每份样品做 3 个重复。 观察菌落形态、颜色、边缘状态、透明度、表面干湿状态等特征,对菌株进
行初步分类,统计菌落数量并挑取各部位具有代表性的单菌落进行纯化,保存备用。 柑橘内生细菌的鉴定,参
考 Rainey等的报道[13],扩增柑橘内生细菌 16S rDNA。 引物序列、扩增程序见表 1。 将 PCR 产物送至上海生
工生物有限公司进行序列测定。 将测得的 16S rDNA序列与 Genbank中同源性序列进行比对,按 16S rDNA序
列同源性最大的菌株归于同一物种计[14]。 将内生细菌 16S rDNA 序列,用 Clustalx 1. 83 软件进行多序列比
对,并用 MEGA 4. 0 软件分析比对的结果,使用邻接法(Neibor鄄joining, NJ)构建系统进化树。
1. 2. 2摇 柑橘不同部位叶片黄龙病原的分子检测
采用改良的 CTAB法提取叶片的总 DNA[15]。 通过 Nested鄄PCR检测柑橘黄龙病病原,引物序列[16]、扩增
程序见表 1。 以本实验室现有柑橘黄龙病叶片 DNA 做为阳性对照,健康柑橘叶片 DNA 为阴性对照。 25 滋L
的扩增体系中含有 1U Taq酶,2. 5 滋L的 10伊PCR Buffer,0. 5 滋L的 10 mmol / L的 4 种 dNTP,1 滋L的 10 滋mol /
L的引物和 25 ng的 DNA模板,每个反应重复 3 次。 先使用外引物进行第一轮扩增,内引物进行第二轮扩增,
将第一次扩增的产物稀释 100 倍作为第二次扩增的模板。 扩增产物在电压 90 V,1. 5%琼脂糖凝胶电泳,EB
染色,使用 UVP凝胶成像系统照相。
表 1摇 PCR引物序列及其扩增程序
Table 1摇 Primer sequence and PCR amplification procedure
PCR类型
Type of PCR 引物序列 Sequence of primers PCR反应程序 Program of PCR
Direct PCR CG03F:5忆鄄RGGGAAAGATTTTATTGGAG鄄3忆;CG05R: 5忆鄄GAAAATAYCATCTCTGATATCGT鄄3忆
预变性 94 益3 min;变性 94 益30 s,53 益退火 30 s,72 益延
伸 45 s,40 个循环;72 益后延伸 7 min
Nest PCR LJ74f:5忆鄄CGGGCGATTAAGTTAGAGGT鄄3忆;
CG05R:5忆鄄GAAAATAYCATCTCTGATATCGT鄄3忆
预变性 94 益3 min;变性 94 益 30 s,53 益退火 30 s,72 益延
伸 30 s,35 个循环;72 益后延伸 7 min
16SrDNA鄄PCR 27f:5忆鄄GAGTTTGATCCTGGCTCAG鄄3忆;1525r:5忆鄄AGAAAGGAGGTGATCCAGCC 鄄3忆
预变性 94 益5 min;变性 94 益 30 s,退火 50 益 30 s,延伸
72 益 1 min30 s,进过 30 循环;72 益后变性 10 min
1. 2. 3摇 柑橘黄龙病原菌与内生细菌的相互关系
对采集的 12 个部位叶片进行黄龙病病原分子检测,将检测结果进行“1,0冶数量化,用“1冶代表该部位叶
片携带黄龙病病原菌为阳性,用“0冶代表该部位叶片没有携带黄龙病病原菌为阴性。 对不同部位叶片内生细
7237摇 24 期 摇 摇 摇 刘波摇 等:柑橘黄龙病株不同部位内生细菌群落结构的多样性 摇
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菌进行分离,根据 16S rDNA 鉴定结果对内生细菌进行分类并对其含量进行统计。 用皮尔逊相关系数
(Pearson correlation coefficient, PCC)分析黄龙病病原菌与叶片内生细菌的相互关系,将不同叶片黄龙病病原
菌存在与否和不同内生细菌在叶片中的含量构建成矩阵,以柑橘叶片黄龙病病原及其内生细菌为指标,以不
同部位叶片为样本。 PCC计算公式如下[17]:
r =
移XY - 移X移YN
(移X2 - (移X)
2
N )(移Y
2 -
(移Y) 2
N )
(1)
式中,变量 X和 Y分别表示柑橘黄龙病病原 X的存在与否和内生细菌 Y的含量,N表示样本总数。 对黄龙病
病原菌与不同叶片内生细菌进行聚类分析,统计带黄龙病病原叶片与不带黄龙病病原叶片内生细菌的数量分
布并构建矩阵,以柑橘叶片黄龙病病原菌和内生细菌为指标,以不同部位叶片黄龙病病原和内生细菌为样本,
以马氏距离为尺度,采用可变类平均法进行系统聚类分析。
1. 2. 4摇 柑橘不同部位叶片内生细菌的相互关系
统计不同部位叶片内生细菌的种类及其含量,利用不同部位叶片及其内生细菌的含量构建矩阵,用最小
显著性差异法(Least significant difference,LSD)比较不同内生细菌在不同部位叶片中含量差异。 (1)以内生
细菌为基础的不同部位叶片相关性分析,以不同种类内生细菌为指标,不同方位柑橘叶片为样本,采用 PCC
分析不同部位叶片之间的相互关系。 (2)以不同部位叶片为基础的内生细菌相关性分析,以不同部位的叶片
为指标,不同种类的内生细菌为样本,采用 PCC分析不同内生细菌在不同叶片分布的相互关系。
1. 2. 5摇 柑橘不同部位枝条内生细菌的相互关系
统计不同部位枝条内生细菌的种类及其含量,利用不同部位枝条及其内生细菌的含量构建矩阵,用最小
显著性差异法比较不同内生细菌在不同部位枝条中含量的差异。 (1)以内生细菌为基础的不同部位枝条相
关性分析,以不同种类内生细菌为指标,不同方位柑橘枝条为样本,采用 PCC 分析不同部位枝条之间的相互
关系。 (2)以不同部位枝条为基础的内生细菌相关性分析,以不同部位枝条为指标,不同种类的内生细菌为
样本,采用 PCC分析不同内生细菌在不同枝条分布的相互关系。
1. 2. 6摇 柑橘不同器官内生细菌群落结构多样性
柑橘各器官(叶、茎、根)内生细菌种群数量分布相关性分析,对从红心柚黄龙病植株叶片、枝条和根中分
离得到的内生细菌种类和数量进行统计分析。 利用不同器官与不同种类内生细菌的含量构建矩阵,以不同内
生细菌数量为变量,分别以不同器官及其内生细菌为样本,采用 PCC分析各器官之间的相互关系及其内生细
菌之间的相互关系。
柑橘各器官(叶、茎、根)内生细菌种群结构聚类分析,以柑橘不同器官内生细菌含量为指标,以内生细菌
为样本,利用不同器官与不同种类内生细菌的含量构建矩阵,以马氏距离为尺度,采用可变类平均法对不同内
生细菌之间进行系统聚类分析。
柑橘各器官(叶、茎、根)内生细菌种群多样性指数分析,将不同器官内生细菌含量作为数量测度,引入生
态学多样性测度 SIMPSON(D)指数、SHANNON(H1)指数、Pielou 指数等方法[18]。 SIMPSON(D)计算公式为:
D=1-移Pi,式中 Pi种内生细菌占该试验中总的内生细菌的个数比例。 SHANNON(H1)计算公式为:H1 = -移
PilnPi ,式中 Pi=Ni / N,Ni 为处理 i 的内生细菌个数,N 为该试验中总内生细菌个数。 Pielou 指数(J)计算公
式为:J= -移PilnPi / lnS ,式中 S为群落中的内生细菌的总种类数。
1. 3摇 数据处理
内生细菌数量分析、相关分析和系统聚类分析所用软件为浙江大学 DPS 7. 05 统计软件。
2摇 结果与分析
2. 1摇 柑橘黄龙病株内生细菌分离与鉴定
根据菌落形态的差异,从红心柚黄龙病株不同部位叶片、枝条和根部共分离出 26 株内生细菌,其中叶片
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10 株,枝条 14 株,根部 2 株。 利用 16S rDNA鉴定(表 2),结果表明,26 株内生细菌分别属于 10 个属,其中芽
胞杆菌属 ( Bacillus) 10 株,短小杆菌属 ( Curtobacterium) 4 株,埃希氏菌属 ( Escherichia) 4 株,肠杆菌属
(Enterobacter) 2 株,短短芽胞杆菌属 ( Brevibacillus)、短波单胞菌属 ( Brevundimonas)、鞘氨醇单胞菌属
(Sphingomonas)、甲基杆菌属(Methylobacterium)、不动杆菌属(Acinetobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)细菌
各 1 株。 分离的芽胞杆菌属菌株属于 6 个不同的种,包括枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽胞杆菌
(Bacillus cereus)、短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)、弯曲芽胞杆菌(Bacillus flexus)、高地芽胞杆菌(Bacillus
altitudinis)及 1 个芽胞杆菌属未确定种(Bacillus sp. )。
表 2摇 红心柚内生细菌 16S rDNA序列鉴定结果
Table 2摇 Identification of endophytic bacteria in Citrus grandis Osbeck cv. Chandler by 16S rDNA sequencing
菌株
Isolated strains
16SrDNA序列收录号
16SrDNA sequence Accession No
微生物学名
scientific name
中文名
Chinese name
1. FJAT鄄10074 HQ873726 Bacillus pumilus 短小芽孢杆菌
2. FJAT鄄10067 HQ873729 Bacillus sp. 芽胞杆菌属
3. FJAT鄄10076 HQ873722 Acinetobacter calcoaceticus 醋酸钙不动杆菌
4. FJAT鄄10072 HQ873730 Escherichia coli 大肠杆菌
5. FJAT鄄10746 HQ873716 Curtobacterium flaccumfaciens 萎蔫短小杆菌
6. FJAT鄄10721 HQ873707 Curtobacterium pusillum 极小短小杆菌
7. FJAT鄄10747 HQ873717 Curtobacterium citreum 柠檬色短小杆菌
8. FJAT鄄10726 HQ873711 Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌
9. FJAT鄄10722 HQ873713 Bacillus flexus 弯曲芽孢杆菌
10. FJAT鄄10748 HQ873708 Bacillus cereus 蜡状芽孢杆菌
11. FJAT鄄10821 HQ873709 Bacillus altitudinis 高地芽胞杆菌
12. FJAT鄄10724 HQ873714 Sphingomonas pseudosanguinis 伪血鞘氨醇单胞菌
13. FJAT鄄10720 HQ873710 Pseudomonas fluorescens 荧光假单胞菌
14. FJAT鄄10760 HQ873719 Brevundimonas vesicularis 泡囊短波单胞菌
15. FJAT鄄10714 HQ873720 Methylobacterium variabile 甲基杆菌属
16. FJAT鄄10742 HQ873712 Escherichia hermannii 赫氏埃希菌
17. FJAT鄄10752 HQ873718 Brevibacillus brevis 短短芽孢杆菌
18. FJAT鄄11906 HQ873731 Enterobacter amnigenus 栖水肠肝菌
19. FJAT鄄11266 HQ873732 Enterobacter asburiae 阿氏肠杆菌
从内生细菌 16S rDNA系统进化树(图 1)可以看出,柑橘黄龙病植株内生细菌分为两大类,第玉大类为革
兰氏阳性菌,第域大类为革兰氏阴性菌。 第玉大类又可以分为芽胞杆菌属和短小杆菌属两个亚类,其中第玉
亚类特点均为低 G+C%细菌;第域亚类特点均为高 G+C%细菌。 第域大类也可分为两个亚类,第玉亚类包括
泡囊短波单胞菌(B. vesicularis)、伪血鞘氨醇单胞菌(S. pseudosanguinis)、甲基杆菌属(M. variabile),其特点是
均属于 琢鄄变形菌纲细菌;第域亚类包括大肠杆菌(E. coli)、赫氏埃希菌(E. hermannii)、栖水肠肝菌(E.
amnigenus)、阿氏肠杆菌(E. asburiae)、醋酸钙不动杆菌(A. calcoaceticus)、荧光假单胞菌(P. fluorescens),其特
点是均属于 酌鄄变形菌纲。
2. 2摇 柑橘不同部位叶片黄龙病病原分子检测
红心柚黄龙病株不同部位叶片表型特征及其黄龙病病原检测结果见表 3,图 2。 携带黄龙病原的叶片组
织和阳性对照均扩增出一条 440 bp的特异性条带,而健康叶片组织 DNA和阴性对照未扩增出相同条带。 检
测结果表明,12 份样品中有 7 份携带黄龙病原,阳性检出率为 58. 3% ,其中显性性状有 4 个,分别为东面上
部、东面中部、西面下部、和北面下部叶片;隐性性状有 3 个,分别为西面上部、西面中部和北面中部叶片。
9237摇 24 期 摇 摇 摇 刘波摇 等:柑橘黄龙病株不同部位内生细菌群落结构的多样性 摇
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图 1摇 红心柚内生细菌系统进化树
Fig. 1摇 Phylogenetic tree of endophytic bacteria in Citrus grandis Osbeck cv Chandler
Bootstrap value依据 1000 次重复计算
表 3摇 不同部位叶片黄龙病病症表型及其黄龙病病原检测结果
Table 3摇 Detection of citrus huanglongbing bacterium from the HLB鄄affected leaves at different parts
部位
Position
东面 East
表型
Phenotype
病原菌
Pathogen
南面 South
表型
Phenotype
病原菌
Pathogen
西面 West
表型
Phenotype
病原菌
Pathogen
北面 North
表型
Phenotype
病原菌
Pathogen
上部 Upside 黄化 + 正常 - 正常 + 正常 -
中部 Middle 斑驳 + 正常 - 正常 + 正常 +
下部 Downside 正常 - 正常 - 黄化 + 黄化 +
摇 摇 “+冶代表检测出黄龙病病原,“-冶代表没有检测出黄龙病病原
图 2摇 Nested鄄PCR检测不同部位叶片黄龙病病原电泳图
Fig. 2摇 Nested鄄PCR detection of huanglongbing bacteria in different
leaves of Citrus grandis Osbeckcv
M:marker 分子量标准 ( 3000bp、 2000bp、 1500bp、 1200bp、 1031bp、
900bp、800bp、700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、200bp、100bp),1—
12:依次为北边上部、中部、下部,南边上部、中部、下部,西边上部、
中部、下部,东边上部、中部、下部叶片,CK+:阳性对照,CK-:阴性对
照;1. 5%琼脂糖凝胶,90V电泳, 1h
2. 3摇 柑橘黄龙病原菌与内生细菌的相互关系
(1)柑橘不同部位叶片黄龙病原菌存在情况及其
内生细菌数量分布见表 4,内生细菌 E. hermannii 和 E.
coli 在叶片中分布量少,而内生细菌 B. subtilis、 B.
cereus、B. pumilus 和 Bacillus sp. 存在于所有叶片之中。
B. subtilis、B. cereus、B. pumilus 和 Bacillus sp. 的含量在
携带有黄龙病病原菌叶片中低于在没有携带黄龙病原
菌叶片。 如 B. subtilis在携带有黄龙病原菌叶片中的平
均含量为 6. 93伊103 cfu / g,而在没有携带黄龙病病菌叶
片中的含量 8. 48伊103 cfu / g。
(2)不同部位叶片内生细菌与黄龙病病原菌的
PCC见表 5,内生细菌 B. cereus和 A. calcoaceticus与黄龙
病病原菌正相关不显著,其 PCC 较低分别为 0. 23 和
0337 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 31 卷摇
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0郾 19。 B. pumilus和 Bacillus sp.与黄龙病病原菌呈显著负相关,其相关系数分别为-0. 83 和-0. 78。 其他内生
细菌与黄龙病病原菌之间存在负相关,但相关性不显著,如 E. coli与黄龙病病原菌的 PCC仅-0. 11。
表 4摇 红心柚不同部位的叶片所带黄龙病病原情况及内生细菌含量
Table 4摇 Numbers of endophytic bacteria in different leaves from different orientations of the HLB鄄 affected citrus trees
菌株
Strain
东 East
/ (伊103 cfu / g)
上部
U
中部
M
下部
D
南 South
/ (伊103 cfu / g)
上部
U
中部
M
下部
D
西 West
/ (伊103 cfu / g)
上部
U
中部
M
下部
D
北 North
/ (伊103 cfu / g)
上部
U
中部
M
下部
D
HLB Pathogen 1 1 0 0 0 0 1 1 1 0 1 1
FJAT鄄10078(Bacillus subtilis) 6. 9 6. 7 7. 9 8. 5 6. 7 9. 8 6. 4 9 5. 4 9. 5 7. 9 7. 3
FJAT鄄10060 (Bacillus cereus) 7. 6 8. 4 9. 5 7. 2 5. 8 6. 1 8. 8 7. 9 6. 4 6. 7 5. 9 8. 3
FJAT鄄10074 (Bacillus pumilus) 7. 3 7. 4 8. 9 7. 3 8. 5 9. 9 6. 5 5. 7 6. 1 8. 7 5. 8 6. 6
FJAT鄄10067 (Bacillus sp. ) 7. 2 8. 1 9. 6 8. 3 7. 9 10. 2 7. 4 6. 9 5. 4 9. 2 6. 4 5. 1
FJAT鄄10076 (Acinetobacter calcoaceticus) 1. 2 2. 4 0 2. 5 1. 7 0 3. 1 2. 5 0 2. 3 3. 1 0
FJAT鄄10064 (Escherichia hermannii) 0. 4 0 0 0 0. 9 0 0 0 0 0 0 0. 5
FJAT鄄10071 (Escherichia coli) 1. 7 0 0 2. 1 0 0 0 0 0 0 0 0. 1
摇 摇 U代表上部,M代表中部,D代表下部;“1冶代表该部位含有黄龙病病原,“0冶 代表该部位不含黄龙病病原
表 5摇 不同部位叶片内生细菌与黄龙病病原菌的 PCC
Table 5摇 The correlation index between endophytic bacteria and citrus huanglongbing bacterium in different leaves
PCC X1 X2 X3 X4 X5 X6 X7 X8
HLB Pathogen(X1) 1. 00
FJAT鄄10078(Bacillus subtilis)(X2) -0. 53 1. 00
FJAT鄄10060 (Bacillus cereus)(X3) 0. 23 -0. 16 1. 00
FJAT鄄10074 (Bacillus pumilus)(X4) -0. 83** 0. 44 -0. 10 1. 00
FJAT鄄10067 (Bacillus sp. )(X5) -0. 78** 0. 60 0. 03 0. 86 1. 00
FJAT鄄10076 (Acinetobacter calcoaceticus)(X6) 0. 19 0. 08 -0. 05 -0. 39 -0. 01 1. 00
FJAT鄄10064 (Escherichia hermannii)(X7) -0. 09 -0. 31 -0. 22 0. 13 -0. 24 -0. 20 1. 00
FJAT鄄10071 (Escherichia coli)(X8) -0. 11 0. 04 0. 01 -0. 04 0. 03 0. 11 0. 06 1. 00
摇 摇 * P<0. 05 在 0. 05 水平显著相关,** P<0. 01 在 0. 01 水平显著相关
(3)不同部位叶片黄龙病病原及其内生细菌的聚类分析,对表 4 数据进行规格化,以马氏距离为尺度,采
用可变类平均法,对黄龙病病原菌和叶片内生细菌进行聚类分析(图 3),当马氏距离为 6. 18 时,可以分为 3
类。 第玉类特征为内生细菌存在所有部位的叶片,B. subtilis 和 B. cereus 与黄龙病病原菌之间的相关性较小;
第域类特征为内生细菌与黄龙病病原菌存在负相关性;第芋类特征为内生细菌只存在特定部位叶片,包括了
3 种内生细菌 A. calcoaceticus、E. hermannii 和 E. coli不存在于所有方位的叶片之中。
图 3摇 不同部位叶片内生细菌与黄龙病病原菌之间聚类分析图
Fig. 3摇 Cluster analysis for endophytic bacteria and huanglongbing pathogen
1337摇 24 期 摇 摇 摇 刘波摇 等:柑橘黄龙病株不同部位内生细菌群落结构的多样性 摇
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2. 4摇 柑橘不同部位叶片内生细菌的相互关系
(1)不同方位叶片中内生菌的分布量不同。 由表 6 可知,内生细菌在不同方位叶片中的分布具有多态
性,可分为完全分布和不完全分布。 B. subtilis、B. cereus、B. pumilus 和 Bacillus sp. 存在于所有部位的叶片之
中,为完全分布,而 A. calcoaceticus、E. hermannii、E. coli 只在特定部位叶片中有分布,为不完全分布。 B.
subtilis、B. cereus、B. pumilus 和 Bacillus sp. 在各部位叶片的平均含量差异不显著,但与 A. calcoaceticus、E.
hermannii和 E. coli 3 种菌在各部位叶片的平均含量存在显著差异(表 7)。 内生细菌的平均含量在上、中、下
不同高度叶片差异不明显(表 8),在东、西、南、北不同朝向叶片存在显著差异(表 9)。
表 6摇 红心柚黄龙病株不同部位叶片内生细菌含量
Table 6摇 Numbers of endophytic bacteria in citrus leaves of different parts
叶片部位
Leaf site
内生细菌含量 / ( 伊103 cfu / g)
FJAT鄄10078
(Bacillus
subtilis)
X1
FJAT鄄10060
(Bacillus
cereus)
X2
FJAT鄄10074
(Bacillus
pumilus)
X3
FJAT鄄10067
(Bacillus sp. )
X4
FJAT鄄10076
(Acinetobacter
calcoaceticus)
X5
FJAT鄄10064
(Escherichia
hermannii)
X6
FJAT鄄10071
(Escherichia
coli)
X7
东 上部 6. 9 7. 6 7. 3 7. 2 1. 2 0. 4 1. 7
中部 6. 7 8. 4 7. 4 8. 1 2. 4 0 0
下部 7. 9 9. 5 8. 9 9. 6 0 0 0
南 上部 8. 5 7. 2 7. 3 8. 3 2. 5 0 2. 1
中部 6. 7 5. 8 8. 5 7. 9 1. 7 0. 9 0
下部 9. 8 6. 1 9. 9 10. 2 0 0 0
西 上部 6. 4 8. 8 6. 5 7. 4 3. 1 0 0
中部 9 7. 9 5. 7 6. 9 2. 5 0 0
下部 5. 4 6. 4 6. 1 5. 4 0 0 0
北 上部 9. 5 6. 7 8. 7 9. 2 2. 3 0 0
中部 7. 9 5. 9 5. 8 6. 4 3. 1 0 0
下部 7. 3 8. 3 6. 6 5. 1 0 0. 5 0. 1
表 7摇 红心柚不同内生细菌在叶片中的含量统计
Table 7摇 Numbers of endophytic bacteria in citrus leaves
菌株名称
Strain
含量均值 / ( 伊103 cfu / g)
Mean content
5%显著水平
5% Significant level
FJAT鄄10078(Bacillus subtilis) 7. 6667 a
FJAT鄄10067 (Bacillus sp. ) 7. 6417 a
FJAT鄄10074 (Bacillus pumilus) 7. 3917 a
FJAT鄄10060 (Bacillus cereus) 7. 3833 a
FJAT鄄10076 (Acinetobacter calcoaceticus) 1. 5667 b
FJAT鄄10071 (Escherichia coli) 0. 3250 c
FJAT鄄10064 (Escherichia hermannii) 0. 1500 c
摇 摇 同一列中不同字母表示在 5 %水平上差异显著(Fisher忆s LSD test)
表 8摇 红心柚内生细菌在不同水平叶片中的含量统计
Table 8摇 Numbers of endophytic bacteria in citrus leaves of different height
叶片水平
Leaf height
含量均值 / ( 伊103 cfu / g)
Mean content
5%显著水平
5% Significant level
上部 4. 8857 a
中部 4. 4857 a
下部 4. 3964 a
摇 摇 同一列中不同字母表示在 5 %水平上差异显著(Fisher忆s LSD test)
2337 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 31 卷摇
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表 9摇 红心柚内生细菌在不同方向叶片中的含量统计
Table 9摇 Numbers of endophytic bacteria in citrus leaves of different orientations
叶片方向
Leaf orientations
含量均值 / ( 伊103 cfu / g)
Mean content
5%显著水平
5% Significant level
南面 4. 9238 a
东面 4. 8190 ab
北面 4. 4476 ab
西面 4. 1667 b
摇 摇 同一列中不同字母表示在 5 %水平上差异显著(Fisher忆s LSD test)
(2)对柑橘不同部位叶片进行 PCC分析,结果见表 10。 不同部位叶片之间的相关性很高,且都是在 0. 01
水平达到显著正相关,其中东面上部与东面下部、东面上部与西面下部、东面中部与西面上部、东面下部与西
面下部叶片之间的相关系数最高达 0. 99。 南面下部与北面下部叶片之间的相关系数最低为 0. 87。
表 10摇 红心柚不同部位叶片之间的 PCC
Table 10摇 The correlation index of leaves in different parts
PCC X1 X2 X3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11 X12
东面上部 X1 1. 00
东面中部 X2 0. 97** 1. 00
东面下部 X3 0. 99** 0. 98** 1. 00
南面上部 X4 0. 97** 0. 95** 0. 95** 1. 00
南面中部 X5 0. 90** 0. 95** 0. 96** 0. 93** 1. 00
南面下部 X6 0. 94** 0. 91** 0. 94** 0. 95** 0. 98** 1. 00
西面上部 X7 0. 94** 0. 99** 0. 94** 0. 93** 0. 89** 0. 84** 1. 00
西面中部 X8 0. 93** 0. 94** 0. 92** 0. 95** 0. 88** 0. 88** 0. 95** 1. 00
西面下部 X9 0. 99** 0. 97** 0. 99** 0. 94** 0. 95** 0. 93** 0. 94** 0. 92** 1. 00
北面上部 X10 0. 94** 0. 95** 0. 94** 0. 98** 0. 98** 0. 98** 0. 91** 0. 94** 0. 93** 1. 00
北面中部 X11 0. 91** 0. 94** 0. 89** 0. 96** 0. 91** 0. 91** 0. 93** 0. 98** 0. 90** 0. 97** 1. 00
北面下部 X12 0. 96** 0. 93** 0. 95** 0. 91** 0. 88** 0. 87** 0. 91** 0. 93** 0. 98** 0. 89** 0. 88** 1. 00
摇 摇 * P<0. 05 在 0. 05 水平显著相关,** P<0. 01 在 0. 01 水平显著相关
(3)对不同部位柑橘叶片内生细菌进行 PCC分析,结果见表 11。 不同内生细菌之间相关性不同,有些表
现为正相关性,如 B. pumilus 与 Bacillus sp. 为正相关,且相关系数最大为 0. 8564,有些表现为负相关,如
Bacillus pumilus与 Acinetobacter calcoaceticus为负相关,且负相关系数最大为-0. 3913。
表 11摇 不同部位叶片内生细菌之间的 PCC
Table 11摇 The correlation index of endophytic bacteria in citrus leaves of different parts
PCC X1 X2 X3 X4 X5 X6 X7
FJAT鄄10078(Bacillus subtilis)(X1) 1. 00
FJAT鄄10060 (Bacillus cereus)(X2) -0. 1563 1. 00
FJAT鄄10074 (Bacillus pumilus)(X3) 0. 4386 -0. 1047 1. 00
FJAT鄄10067(Bacillus sp. )(X4) 0. 6015* 0. 0296 0. 8564** 1. 00
FJAT鄄10076(Acinetobacter calcoaceticus)(X5) 0. 0827 -0. 0549 -0. 3913 -0. 0097 1. 00
FJAT鄄10064 (Escherichia hermannii)(X6) -0. 3134 -0. 2223 0. 1296 -0. 2384 -0. 1978 1. 00
FJAT鄄10071 (Escherichia coli)(X7) 0. 0375 0. 0075 -0. 0389 0. 0294 0. 1143 0. 0605 1. 00
摇 摇 * P<0. 05 在 0. 05 水平显著相关,** P<0. 01 在 0. 01 水平显著相关
2. 5摇 柑橘不同部位枝条内生细菌的相互关系
(1)不同部位枝条内生细菌的分布量不同,结果见表 12。 内生细菌 B. subtilis 在各个部位枝条中均有分
布,为完全分布,其他的内生细菌只存在于特定部位枝条中,如 C. pusillum 仅存在于东面中部的枝条,为不完
3337摇 24 期 摇 摇 摇 刘波摇 等:柑橘黄龙病株不同部位内生细菌群落结构的多样性 摇
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全分布。 枝条内生细菌 C. citreum、C. flaccumfaciens、B. flexus、E. hermannii、M. variabile、B. brevis、P. fluorescens、
C. pusillum、S. pseudosanguinis、B. altitudinis 和 B. vesicularis 在不同部位枝条的平均含量差异不明显,但它们与
B. subtilis和 B. cereus的平均含量存在显著差异(表 13)。 枝条内生菌在上、中、下 3 个不同高度枝条中平均含
量差异不明显(表 14),但在东、西、南、北 4 个不同朝向枝条平均含量差异显著(表 15)。
表 12摇 不同部位的枝条内生细菌种类和含量
Table 12摇 Types and numbers of endophytic bacteria in different parts of sticks
菌株
Strain
东 East
(伊103 cfu / g)
上部
U
中部
M
下部
D
南 South
(伊103 cfu / g)
上部
U
中部
M
下部
D
西 West
(伊103 cfu / g)
上部
U
中部
M
下部
D
北 North
(伊103 cfu / g)
上部
U
中部
M
下部
D
FJAT鄄10726(Bacillus subtilis) 1. 41 1. 63 1. 43 1. 42 1. 72 1. 44 1. 38 1. 49 1. 47 1. 5 1. 46 1. 36
FJAT鄄10748(Bacillus cereus) 0. 45 0. 12 0. 21 0 0. 87 0. 71 0. 59 0. 43 0 0. 81 0. 55 0. 71
FJAT鄄10722(Bacillus flexus) 0 0. 12 0. 31 0 0 0. 11 0 0 0 0 0 0. 16
FJAT鄄10821(Bacillus altitudinis) 0 0 0 0 0 0. 09 0 0 0 0 0 0. 25
FJAT鄄10750(Curtobacterium flaccumfaciens) 0. 43 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0. 39 0
FJAT鄄10721(Curtobacterium pusillum) 0 0. 47 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
FJAT鄄10747(Curtobacterium citreum 0 0 0. 44 0 0. 51 0 0 0 0 0 0 0
FJAT鄄10742(Escherichia hermannii) 0 0 0 0 0. 23 0 0 0 0 0. 39 0 0
FJAT鄄10720(Pseudomonas fluorescens) 0 0 0. 18 0 0 0 0. 13 0 0 0. 12 0 0. 09
FJAT鄄10724(Sphingomonas pseudosanguinis) 0. 12 0 0 0. 13 0 0 0 0 0 0 0 0. 14
FJAT鄄10752(Brevibacillus brevis) 0 0 0 0 0 0. 21 0 0 0 0. 33 0 0
FJAT鄄10760(Brevundimonas vesicularis) 0 0 0 0 0 0. 18 0 0 0 0. 06 0 0
FJAT鄄10714(Methylobacterium variabile) 0. 21 0 0 0 0 0. 19 0. 16 0 0 0 0 0
摇 摇 U代表上部,M代表中部,D代表下部
表 13摇 红心柚不同内生细菌在枝条中的含量统计
Table 13摇 Numbers of endophytic bacteria in different sticks
菌株
Strain
含量均值 / ( 伊103 cfu / g)
Mean content
5%显著水平
5% Significant level
FJAT鄄10726(Bacillus subtilis) 1. 4758 a
FJAT鄄10748(Bacillus cereus) 0. 4542 b
FJAT鄄10747(Curtobacterium citreum) 0. 0792 c
FJAT鄄10750(Curtobacterium flaccumfaciens) 0. 0683 c
FJAT鄄10722(Bacillus flexus) 0. 0583 c
FJAT鄄10742(Escherichia hermannii) 0. 0517 c
FJAT鄄10714(Methylobacterium variabile) 0. 0467 c
FJAT鄄10752(Brevibacillus brevis) 0. 045 c
FJAT鄄10720(Pseudomonas fluorescens) 0. 0433 c
FJAT鄄10721(Curtobacterium pusillum) 0. 0392 c
FJAT鄄10724(Sphingomonas pseudosanguinis) 0. 0325 c
FJAT鄄10821(Bacillus altitudinis) 0. 0283 c
FJAT鄄10760(Brevundimonas vesicularis) 0. 02 c
摇 摇 同一列中不同字母表示在 5 %水平上差异显著(Fisher忆s LSD test)
表 14摇 红心柚内生细菌在不同高度枝条中的含量统计
Table 14摇 Numbers of endophytic bacteria in citrus sticks of different height
枝条高度
Branch height
含量均值 / ( 伊103 cfu / g)
Mean content
5%显著水平
5% Significant level
上部 Up 0. 1962 a
中部 Middle 0. 1823 a
下部 Down 0. 1800 a
摇 摇 同一列中不同字母表示在 5 %水平上差异显著(Fisher忆s LSD test)
4337 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 31 卷摇
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表 15摇 红心柚内生细菌在不同方向枝条中的含量统计
Table 15摇 Numbers of endophytic bacteria in citrus sticks of different orientations
枝条方向
Branch direction
含量均值 / ( 伊103 cfu / g)
Mean content
5%显著水平
5% Significant level
北面 0. 2133 a
西面 0. 2003 ab
东面 0. 1931 ab
南面 0. 1449 b
摇 摇 同一列中不同字母表示在 5 %水平上差异显著(Fisher忆s LSD test)
(2)对不同部位枝条进行 PCC分析,结果见表 16,不同部位枝条之间在 0. 01 水平存在显著正相关,其中
南面上部和西面下部枝条之间相关系数为 1,为完全正相关。 东面下部与北面上部枝条之间的相关系数最小
为 0. 8。
表 16摇 不同部位的枝条 PCC
Table 16摇 The correlation index of different sticks
PCC X1 X2 X3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11 X12
东面上部 X1 1. 0000
东面中部 X2 0. 86** 1. 0000
东面下部 X3 0. 84** 0. 89** 1. 0000
南面上部 X4 0. 91** 0. 95** 0. 92** 1. 0000
南面中部 X5 0. 87** 0. 82** 0. 90** 0. 84** 1. 0000
南面下部 X6 0. 91** 0. 85** 0. 84** 0. 87** 0. 92** 1. 0000
西面上部 X7 0. 94** 0. 88** 0. 88** 0. 90** 0. 94** 0. 98** 1. 0000
西面中部 X8 0. 95** 0. 93** 0. 92** 0. 95** 0. 94** 0. 97** 0. 98** 1. 0000
西面下部 X9 0. 91** 0. 96** 0. 93** 1. 00** 0. 86** 0. 88** 0. 91** 0. 96** 1. 0000
北面上部 X10 0. 86** 0. 81** 0. 80** 0. 83** 0. 93** 0. 94** 0. 94** 0. 94** 0. 84** 1. 0000
北面中部 X11 0. 98** 0. 87** 0. 86** 0. 90** 0. 91** 0. 93** 0. 95** 0. 96** 0. 91** 0. 90** 1. 0000
北面下部 X12 0. 90** 0. 84** 0. 85** 0. 87** 0. 92** 0. 96** 0. 96** 0. 96** 0. 87** 0. 92** 0. 93 颐 1. 0000
摇 摇 * P<0. 05 在 0. 05 水平显著相关,** P<0. 01 在 0. 01 水平显著相关
(3)柑橘不同部位枝条内生细菌间相关系数见表 17,除 B. brevis和 B. vesicularis的相关系数为 0. 74,呈极
显著正相关,E. hermannii与 B. brevis的相关系数为 0. 68,呈显著正相关,其余内生细菌之间的相关性不明显。
表 17摇 不同部位的枝条内生细菌含量相关系数
Table 17摇 The correlation index of the endophytic bacteria in sticks
PCC X1 X2 X3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11 X12 X13
Bacillus subtilis X1 1
Bacillus cereus X2 0. 13 1
Bacillus flexus X3 -0. 16 -0. 14 1
Bacillus altitudinis X4 -0. 38 0. 35 0. 37 1
Curtobacterium flaccumfaciens X5 -0. 19 0. 07 -0. 28 -0. 18 1
Curtobacterium pusillum X6 0. 47 -0. 34 0. 2 -0. 12 -0. 13 1
Curtobacterium citreum X7 0. 49 0. 17 0. 4 -0. 18 -0. 2 -0. 13 1
Escherichia hermannli X8 0. 46 0. 55 -0. 27 -0. 17 -0. 19 -0. 13 0. 27 1
Pseudomonas fluorescens X9 -0. 37 0. 17 0. 55 0. 14 -0. 3 -0. 2 0. 28 0. 22 1
Sphingomonas pseudosanguinis X10 -0. 47 -0. 12 -0. 01 0. 5 0. 24 -0. 17 -0. 26 -0. 25 -0. 1 1
Brevibacillus brevis X11 0 0. 47 -0. 07 0. 04 -0. 19 -0. 13 -0. 19 0. 68* 0. 2 -0. 25 1
Brevundimonas vesicularis X12 -0. 08 0. 37 0. 1 0. 22 -0. 18 -0. 12 -0. 17 0. 15 -0. 08 -0. 23 0. 74** 1
Methylobacterium variabile X13 -0. 37 0. 24 -0. 13 0. 02 0. 35 -0. 17 -0. 26 -0. 25 -0. 06 0. 13 0. 15 0. 46 1
摇 摇 * P<0. 05 在 0. 05 水平显著相关,** P<0. 01 在 0. 01 水平显著相关
5337摇 24 期 摇 摇 摇 刘波摇 等:柑橘黄龙病株不同部位内生细菌群落结构的多样性 摇
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2. 6摇 柑橘黄龙病株不同器官内生细菌群落结构多样性
(1)柑橘内生细菌种群数量分布特性摇 不同内生细菌在红心柚黄龙病植株不同器官的分布及其含量不
同(表 18)。 E. amnigenus 和 E. asburiae 仅在根部分布,B. brevis、M. variabile、B. vesicularis、P. fluorescens、S.
pseudosanguinis、B. altitudinis、B. flexus、C. citreum、C. pusillum 和 C. flaccumfaciens 仅在枝条分布,E. coli、A.
calcoaceticus、 Bacillus sp.和 B. pumilus仅在叶片分布,B. subtilis、B. cereus 和 E. hermannii在根部和叶片均有分
布。 各内生细菌在根部和叶片分布总量相当,分别为 3. 5伊104 cfu / g和 3. 21伊104 cfu / g, 枝条分布总量较小为
2. 32伊104cfu / g。
表 18摇 内生细菌在红心柚内部的数量分布
Table 18摇 Numbers of endophytic bacteria in Citrus grandis Osbeck cv Chandler
菌株
Isolate strain
根
Root / (伊103 cfu / g)
枝条
Stick / (伊103 cfu / g)
叶
Leaf / (伊103 cfu / g)
FJAT鄄10726;FJAT鄄10078(Bacillus subtilis) 0 1. 480 7. 6667
FJAT鄄10748;FJAT鄄10060(Bacillus cereus) 0 0. 450 7. 383
FJAT鄄10074 (Bacillus pumilus) 0 0 7. 391
FJAT鄄10067 (Bacillus sp. ) 0 0 7. 6417
FJAT鄄10076 (Acinetobacter calcoaceticus) 0 0 1. 566
FJAT鄄10064 ;FJAT鄄10064 (Escherichia hermannii) 0 0. 052 0. 150
FJAT鄄10071 (Escherichia coli) 0 0 0. 325
FJAT鄄10750(Curtobacterium flaccumfaciens) 0 0. 068 0
FJAT鄄10721(Curtobacterium pusillum) 0 0. 039 0
FJAT鄄10747(Curtobacterium citreum ) 0 0. 079 0
FJAT鄄10722(Bacillus flexus) 0 0. 058 0
FJAT鄄10821(Bacillus altitudinis) 0 0. 028 0
FJAT鄄10724(Sphingomonas pseudosanguinis) 0 0. 033 0
FJAT鄄10720(Pseudomonas fluorescens) 0 0. 043 0
FJAT鄄10760(Brevundimonas vesicularis) 0 0. 020 0
FJAT鄄10714(Methylobacterium variabile) 0 0. 047 0
FJAT鄄10752(Brevibacillus brevis) 0 0. 045 0
FJAT鄄11906(Enterobacter amnigenus) 21. 7 0 0
FJAT鄄11266(Enterobacter asburiae) 13. 3 0 0
合计 Total 35 2. 442 32. 1251
(2)柑橘黄龙病植株不同器官的 PCC 分析摇 结果如表 19 所示,叶片与枝条之间的相关系数为 0. 55,在
0. 05 水平呈现显著正相关。 根部与枝条,根部与叶片之间的相关性不显著,相关系数分别为-0. 1300 和-0.
1900 呈现负相关性。
表 19摇 红心柚不同器官 PCC
Table 19摇 The correlation index of different citrus tisssues
器官 Tisssues X1 X2 X3
根 X1 1. 0000
枝条 X2 -0. 1300 1. 0000
叶片 X3 -0. 1900 0. 5500* 1. 0000
摇 摇 * P<0. 05 在 0. 05 水平显著相关,** P<0. 01 在 0. 01 水平显著相关
(3)柑橘黄龙病株内生细菌的 PCC分析摇 结果如表 20 表明所示,相同器官的内生细菌之间在 0. 01 水平
呈显著正相关,如叶片上的两株内生细菌 B. pumilus 与 Bacillus sp.之间的相关系数为 1。 不同器官内生细菌
之间呈负相关,但相关性不显著,如叶片内生细菌 B. cereus 与枝条内生细菌 C. flaccumfaciens 之间的相关系数
为-0. 45。
6337 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 31 卷摇
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表 20摇 红心柚黄龙病株内生细菌 PCC
Table 20摇 The correlation index of endophytic bacteria in Citrus grandis Osbeck cv Chandler
种类 Species X1 X2 X3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10
FJAT鄄10726;FJAT鄄10078
(Bacillus subtilis) X1 1. 00
FJAT鄄10748;FJAT鄄10060
(Bacillus cereus) X2 0. 99
** 1. 00
FJAT鄄10074 (Bacillus pumilus) X3 0. 98* 1. 00** 1. 00
FJAT鄄10067 (Bacillus sp. ) X4 0. 98* 1. 00** 1. 00** 1. 00
FJAT鄄10076 (Acinetobacter calcoaceticus) X5 0. 98* 1. 00** 1. 00** 1. 00** 1. 00
FJAT鄄10064;FJAT鄄10064
(Escherichia hermannii) X6 0. 99
* 0. 96* 0. 94 0. 94 0. 94 1. 00
FJAT鄄10071 (Escherichia coli) X7 0. 98* 1. 00** 1. 00** 1. 00** 1. 00** 0. 94 1. 00
FJAT鄄10750
(Curtobacterium flaccumfaciens) X8 -0. 33 -0. 45 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 17 -0. 50 1. 00
FJAT鄄10721(Curtobacterium pusillum) X9 -0. 33 -0. 45 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 17 -0. 50 1. 00** 1. 00
FJAT鄄10747(Curtobacterium citreum) X10 -0. 33 -0. 45 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 17 -0. 50 1. 00** 1. 00** 1. 00
FJAT鄄10722(Bacillus flexus)X11 -0. 33 -0. 45 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 17 -0. 50 1. 00** 1. 00** 1. 00**
FJAT鄄10821(Bacillus altitudinis) X12 -0. 33 -0. 45 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 17 -0. 50 1. 00** 1. 00** 1. 00**
FJAT鄄10724
(Sphingomonas pseudosanguinis) X13 -0. 33 -0. 45 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 17 -0. 50 1. 00
** 1. 00** 1. 00**
FJAT鄄10720(Pseudomonas fluorescens) X14 -0. 33 -0. 45 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 17 -0. 50 1. 00** 1. 00** 1. 00**
FJAT鄄10760(Brevundimonas vesicularis) X15 -0. 33 -0. 45 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 17 -0. 50 1. 00** 1. 00** 1. 00**
FJAT鄄10714(Methylobacterium variabile) X16 -0. 33 -0. 45 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 17 -0. 50 1. 00** 1. 00** 1. 00**
FJAT鄄10752(Brevibacillus brevis) X17 -0. 33 -0. 45 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 17 -0. 50 1. 00** 1. 00** 1. 00**
FJAT鄄11906(Enterobacter amnigenus) X18 -0. 65 -0. 55 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 77 -0. 5 -0. 50 -0. 50 -0. 50
FJAT鄄11266(Enterobacter asburiae) X19 -0. 65 -0. 55 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 77 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 50
种类 Species X11 X12 X13 X14 X15 X16 X17 X18 X19
FJAT鄄10726;FJAT鄄10078
(Bacillus subtilis) X1
FJAT鄄10748;FJAT鄄10060(Bacillus cereus) X2
FJAT鄄10074 (Bacillus pumilus) X3
FJAT鄄10067 (Bacillus sp. ) X4
FJAT鄄10076 (Acinetobacter calcoaceticus) X5
FJAT鄄10064;FJAT鄄10064
(Escherichia hermannii) X6
FJAT鄄10071 (Escherichia coli) X7
FJAT鄄10750
(Curtobacterium flaccumfaciens) X8
FJAT鄄10721
(Curtobacterium pusillum) X9
FJAT鄄10747
(Curtobacterium citreum) X10
FJAT鄄10722(Bacillus flexus)X11 1. 00
FJAT鄄10821(Bacillus altitudinis) X12 1. 00** 1. 00
FJAT鄄10724
(Sphingomonas pseudosanguinis) X13 1. 00
** 1. 00** 1. 00
FJAT鄄10720(Pseudomonas fluorescens) X14 1. 00** 1. 00** 1. 00** 1. 00
FJAT鄄10760(Brevundimonas vesicularis) Xd15 1. 00** 1. 00** 1. 00** 1. 00** 1. 00
FJAT鄄10714(Methylobacterium variabile) X16 1. 00** 1. 00** 1. 00** 1. 00** 1. 00** 1. 00
FJAT鄄10752(Brevibacillus brevis) X17 1. 00** 1. 00** 1. 00** 1. 00** 1. 00** 1. 00** 1. 00
FJAT鄄11906(Enterobacter amnigenus) X18 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 50 1. 00
FJAT鄄11266(Enterobacter asburiae) X19 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 50 -0. 50 1. 00** 1. 00
摇 摇 * P<0. 05 在 0. 05 水平显著相关,** P<0. 01 在 0. 01 水平显著相关
7337摇 24 期 摇 摇 摇 刘波摇 等:柑橘黄龙病株不同部位内生细菌群落结构的多样性 摇
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(4)柑橘内生细菌群落结构聚类分析摇 以马氏距离为尺度,采用可变类平均法,对红心柚黄龙病株内生
细菌进行聚类分析,当马氏距离为 27. 23 时,柑橘黄龙病株内生细菌可以分为 3 大类(图 4):
第玉大类摇 包括 B. subtilis, B. cereus,B pumilus和 Bacillus sp. 4 种芽胞杆菌,其特征是在不同部位叶片均
有分布,为完全分布类型,且分布量较大。 第玉大类又可分为两个亚类,第玉亚类包括 B. subtilis 和 B. cereus,
其特征为枝条和叶片分布特性,即在不同部位的枝条和叶片均有分布;第域亚类包括 B. pumilus 和 Bacillus
sp. ,其特征为叶片分布特性。
第域大类摇 包括 A. calcoaceticus、E. hermannii、E. coli、C. flaccumfaciens、C. pusillum、C. citreum、B. flexus、B.
altitudinis、S. pseudosanguinis、P. fluorescens、B. vesicularis、M. variabile和 B. brevis,其特征是在各器官中均为不完
全分布类型,且分布量不均匀,在有些部位分布量较大,有些部位分布量小或不分布。 第域大类又可分为两个
亚类,第玉亚类包括 A. calcoaceticus、 E. hermannii、E. coli、C. flaccumfaciens和 C. citreum 其特征是这类内生细菌
在不同器官、不同部位分布量不均匀,且平均含量中等。 第域亚类包括 C. pusillum、B. flexus、B. altitudinis、S.
pseudosanguinis、P. fluorescens、B. vesicularis、M. variabile和 B. brevis,其特征是枝条分布特性,即这类内生细菌
只存在于枝条之中,且平均含量较小。
图 4摇 红心柚黄龙病株内生细菌聚类分析
Fig. 4摇 Cluster analysis for endophytic bacteria in Citrus grandis Osbeck cv Chandler
第芋大类摇 包括 E. amnigenus和 E. asburiae,其特点是根部分布特性,即这类内生细菌仅存在于根部且其
含量较大。
(5)柑橘内生细菌群落结构的多样性分析摇 柑橘不同器官内生细菌的多样性指数不同,枝条的 SIMPSON
(D)指数最高为 1. 0063,其次是叶片为 0. 8032,根部最低为 0. 4851;叶片的 SHANNON(H1 )指数最高为
2郾 2771,其次是枝条为 2. 0663,根部最低为 0. 9580;均匀度 Pielou指数最高值出现在根部为 0. 9580,其次是叶
片为 0. 8111,枝条最低为 0. 5584。
表 21摇 不同器官内生细菌的多样性指数
Table 21摇 Diversity index of endophytic bacteria in different tissues
植物器官 Tissues SIMPSON(D) SHANNON(H1) Pielou(J)
根 Root 0. 4851 0. 9580 0. 9580
枝条 Stick 1. 0063 2. 0663 0. 5584
叶片 Leaf 0. 8032 2. 2771 0. 8111
3摇 讨论
研究植物内生细菌群落多样性可以选择多种指标,如磷脂脂肪酸 ( PLFA) [11]、变性梯度凝胶电泳
8337 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 31 卷摇
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(DGGE) [19]、物理芯片(PhyloChip Arrays)和 16S rRNA 序列[20]等,作者选用 16S rRNA 方法鉴定分离的柑橘
黄龙病内生细菌,得到 10 个属 19 个种的柑橘内生细菌。 王爱华等[7]根据细菌 16SrDNA 序列对柑橘黄龙病
株叶脉内生细菌的多样性进行了研究,其分离到的包括芽孢杆菌属(Bacillus)等 9 个属的内生细菌,其中 6 个
属的细菌与本研究的不同。 本研究分离的柑橘植株内生细菌大多为土壤微生物种类,其中假单胞菌属
(Pseudomonas)、 芽孢杆菌属 ( Bacillus )、 肠杆菌属 ( Enterobacter ) 为最常见的属[21]。 甲基杆菌属
(Methylobacterium) [22]、短芽孢杆菌属(Brevibacillus) [23]、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas) [24]、短波单胞菌属
(Brevundimonas) [25],这些细菌已经从很多植物体内分离的到,而且部分菌属存在于柑橘植株内,其中大部分
属的生理特性都已经有了一定程度的研究。 本研究分离得到的柑橘黄龙病株内生细菌中,芽孢杆菌属
(Bacillus)的种类和数量在叶片和枝条中都占有绝对的优势。 这一结果与张铎等[26]从棉花,卢云等[27]从哈密
瓜、高增贵等[28]从玉米中分离得到植物内生菌的优势菌株为芽孢杆菌(Bacillus)相一致。 因为芽孢杆菌属
(Bacillus)等可以分泌一些激素[29]、抗生素[30]等生长因子,对植物本身生长和病害防御有很重要的作用。 根
部内生细菌的种类单一,仅仅只有肠杆菌属(Enterobacter)。 这种情况可能是由于肠杆菌属(Enterobacter)细菌
本身含有很多产激素和抗菌物质的基因[31],在保护植物的同时对其他根内生细菌具有抑制作用。
关于柑橘黄龙病的检测,可以采用田间诊断与指示植物鉴定[32]、血清学实验[33]、电镜检测[34]等是初期
检测柑橘黄龙病的传统方法,然而这些方法有很多弊端,并会造成检测的不准确[35]。 随着分子检测技术提
高,常规 PCR、Nested鄄PCR和 RT鄄PCR已经应用到柑橘黄龙病的检测工作中。 其中 Nested鄄PCR技术在检测灵
敏度上远高于常规 PCR[36],RT鄄PCR能够定量的检测柑橘黄龙病病原,这为柑橘黄龙病的检测提供了准确、灵
敏的方法[37]]。 近年来,Hong lin等建立了一种 STDP(single closed tube dual primer)鄄Taqman PCR[38],这种方
法将 Nested鄄PCR和 RT鄄PCR结合起来。 本研究采用 Nested鄄PCR对柑橘不同部位叶脉进行柑橘黄龙病病原检
测,结果表明柑橘黄龙病发病状态的异质性,也即同一株柑桔黄龙病株在不同器官(叶、茎、根)、不同部位
(上、中、下)、不同方位(东、西、南、北)感染黄龙病与否的状态不同,如在病株中部分叶(茎、根)是健康的,部
分叶(茎、根)是染毒的;在西面上部和中部叶片及北面下部叶片中可以检测出柑橘黄龙病病原,但其并不会
表现出柑橘黄龙病病症,由于黄龙病的潜伏期为 6—18 个月[39],故有些不表现出黄化症状的叶片中含有黄龙
病病原。 关于不同部位柑橘叶片黄龙病病原携带状态异质性的研究未见报道。
植物内生菌是植物微生态系统中的重要组成部分,在长期的协同进化中,与植物形成了互惠互利的关系。
一方面宿主植物产生的光和产物可为提供其生长所需的营养,另一方面内生菌产生的代谢产物常包含一些促
生或抗菌的活性物质,能促进植物的生长发育,提高植物抗逆境、抗胁迫和抗病害的能力[40]。 Clay 等[41]发现
有内生真菌的草遭受真菌病害影响的程度远低于没有内生菌的。 王万能和肖崇刚[42]从烟草根部分离出能防
治烟草黑胫病的内生细菌。 石晶盈等[43]研究发现有些内生菌能产生抗生素类物质对病菌有拮抗作用。 然而
柑橘黄龙病病原与柑橘内生细菌之间的相关性还未见报道,本文通过 PCC 分析得出叶片黄龙病病原存在与
否与 B. pumilus和 Bacillus sp.的之间呈显著负相关,这说明这两种细菌对黄龙病病原菌的存在可能会有抑制
作用。 其中 B. pumilus已有研究报道可以产生一些生防物质并抑制一些病原菌的生长[44],Trivedi 等[45]从柑
橘根部分离得到的内生细菌中,有 6 株内生细菌对叶片中黄龙病病原菌(Candidatus Liberibacter asiaticus)的
生长有明显的抑制作用。 其中的内生细菌 Bacillus licheniformis 与本研究得到的部分内生细菌同为芽孢杆
菌属。
柑橘内生细菌的分布量与其生长环境关系密切,柑橘不同器官其内生细菌分布量不同,根部分布量最大,
其次是叶片,枝条分布量最小,与黎起秦等研究番茄内生菌分布特性的结果一致,他认为番茄根系是内生细菌
进入植物的入口,此处有较多植物次生根,机械损伤及病虫危害会造成伤口,因此聚集的内生细菌较多[46]。
在自然界中微生物与微生物之间存在着复杂相互关系,植物内生细菌之间的相互关系也不列外[47]。 本文通
过 PCC分析了柑橘不同器官(叶、茎、根)、不同部位(上、中、下)和不同方位(东、西、南、北)的内生细菌之间
的相关性,结果发现:在不同器官之间、叶片与枝条相互之间存在显著正相关,而叶片与根部、枝条与根部之间
9337摇 24 期 摇 摇 摇 刘波摇 等:柑橘黄龙病株不同部位内生细菌群落结构的多样性 摇
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关系不显著;不同部位叶片、枝条之间的内生细菌差异不显著,而不同方位叶片、枝条之间的内生细菌含量差
异显著,这可能与柑橘种植的朝向生态因子的差异有关。
有大量研究表明植物内生细菌群落结构与自身生长环境,营养条件,遗传背景有关[48]。 多样性指数可做
为度量微生物群落多样性高低的指标。 Maguran[49]指出 SHANNON(H1)指数反映群落物种多样性,指数越高
表明物种的数量越多,且在采样单位中分布越均匀;SIMPSON(D)指数反映群落中物种的优势度,指数越高表
明物种在样品中的集中度越高;Pielou指数反映群落物种分布的均匀程度。 本研究发现柑橘不同器官的内生
细菌群落多样性不同,SHANNON(H1)指数最大值出现在叶片,最低在根部,表明柑橘黄龙病植株叶片分布的
内生细菌分布量最大,且在各部位(上、中、下及东、西、南、北)分布较均匀,根部内生细菌分布量最少;
SIMPSON(D)指数最大值出现在枝条,最低在根部,表明柑橘黄龙病植株枝条中分离内生细菌种类最集中,根
部内生细菌种类最少;Pielou指数最大值出现在根部,最低在枝条,表明根部内生细菌分布均匀度最高,枝条
内生细菌在各部位(上、中、下及东、西、南、北)分布最不均匀。 柑橘内生菌这种分布的异质性对于认识柑橘
生长的生态环境和黄龙病的发生具有重要意义。
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2437 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 31 卷摇
ACTA ECOLOGICA SINICA Vol. 31,No. 24 December,2011(Semimonthly)
CONTENTS
The community structure of endophytic bacteria in different parts of huanglongbing鄄affected citrus plants
LIU Bo, ZHENG Xuefang,SUN Daguang,et al (7325)
………………………………
……………………………………………………………………………
A research on the response of the radial growth of Pinus koraiensis to future climate change in the XiaoXing忆AnLing
YIN Hong, WANG Jing, LIU Hongbin, et al (7343)
…………………
………………………………………………………………………………
Efficiency and kinetic process of nitrogen removal in a subsurface wastewater infiltration system (SWIS)
LI Haibo, LI Yinghua, SUN Tieheng, et al (7351)
……………………………
…………………………………………………………………………………
Designing nature reserve systems based on ecosystem services in Hainan Island
XIAO Yi, CHEN Shengbin, ZHANG Lu, et al (7357)
………………………………………………………
……………………………………………………………………………
Assessing ecological services value of herbivorous wild animals in Changtang grassland: a case study of Tibetan antelope
LU Chunxia, LIU Ming, FENG Yue, et al (7370)
……………
…………………………………………………………………………………
Spatial characteristics analysis of ecological system service value in QianJiang City of Hubei Province
XU Beishen,ZHOU Yong, XU Li,et al (7379)
…………………………………
……………………………………………………………………………………
Landscape pattern change and its influence on soil carbon pool in Napahai wetland of Northwestern Yunnan
LI Ningyun, YUAN Hua, TIAN Kun, et al (7388)
…………………………
…………………………………………………………………………………
Multi鄄scenarios analysis for wetlands ecosystem conservation based on connectivity: a case study on HuangHuaiHai Region, China
SONG Xiaolong, LI Xiaowen, ZHANG Mingxiang, et al (7397)
…
……………………………………………………………………
The potential of carbon sink in alpine meadow ecosystem on the Qinghai鄄Tibetan Plateau
HAN Daorui, CAO Guangmin,GUO Xiaowei, et al (7408)
………………………………………………
…………………………………………………………………………
The relations of spectrum reflectance with inhomogeneous factors and albedo parameterization ZHANG Jie, ZHANG Qiang (7418)…
Groundwater ecological sensitivity assessment in the lower Liaohe River Plain based on GIS technique
SUN Caizhi,YANG Lei,HU Dongling (7428)
………………………………
………………………………………………………………………………………
Ecological sensitivity of Xiamen City to land use changes HUANG Jing, CUI Shenghui, LI Fangyi, et al (7441)……………………
Investigation and analysis on situation of ecotourism development in protected areas of China
ZHONG Linsheng,WANG Jing (7450)
…………………………………………
………………………………………………………………………………………………
Handicapping male鄄cheaters by stable mate relationship in yellow鄄bellied prinia, Prinia flaviventris
CHU Fuyin,TANG Sixian, PAN Hujun,et al (7458)
……………………………………
………………………………………………………………………………
Effects of dietary protein content and food restriction on the physiological characteristics of female Microtus fortis
ZHU Junxia, WANG Yong,ZHANG Meiwen,et al (7464)
……………………
…………………………………………………………………………
Predator鄄prey system with positive effect for prey QI Jun,SU Zhiyong (7471)…………………………………………………………
Volatile constituents of four moraceous host plants of Apriona germari ZHANG Lin, WANG Baode, XU Zhichun (7479)……………
Relationship between adult emergence of Massicus raddei (Coleoptera: Cerambycidae) and temperature and relative humidity
YANG Zhongqi, WANG Xiaoyi,WANG Bao, et al (7486)
………
…………………………………………………………………………
Nest site selection and reproductive success of Parus varius in man鄄made nest boxes
LI Le, WAN Dongmei, LIU He, et al (7492)
…………………………………………………
………………………………………………………………………………………
A study on bio鄄ecology of the stopover site of waders within China忆s Yalu River estuary wetlands
SONG Lun,YANG Guojun, LI Ai, et al (7500)
……………………………………
……………………………………………………………………………………
The spatial鄄temporal change variations of temperature in Xilinguole steppe zone
WANG Haimei, LI Zhenghai,WU Lan, et al (7511)
………………………………………………………
………………………………………………………………………………
The growth and photosynthetic responses of Cleyera japonica Thunb. seedlings to UV鄄B radiation stress
LAN Chunjian, JIANG Hong, HUANG Meiling,et al (7516)
………………………………
………………………………………………………………………
Photosynthesis鄄transpiration coupling mechanism of wheat and maize during daily variation
ZHAO Fenghua, WANG Qiufeng, WANG Jianlin, et al (7526)
……………………………………………
……………………………………………………………………
Comparison of the methods using stable hydrogen and oxygen isotope to distinguish the water source of Nitraria Tangutorum
GONG Guoli,CHEN Hui,DUAN Deyu (7533)
…………
………………………………………………………………………………………
Effects of cold weather on seedlings of three mangrove species planted in the Min River estuary during the 2010 winter
YONG Shiquan, TONG Chuan, ZHUANG Chenhui, et al (7542)
……………
…………………………………………………………………
Correlation between ecological factors and ginsenosides XIE Caixiang,SUO Fengmei,JIA Guanglin,et al (7551)……………………
Effects of pyrene on low molecule weight organic compounds in the root exudates of ryegrass (Lolium perenne L. )
XIE Xiaomei, LIAO Min, YANG Jing (7564)
……………………
………………………………………………………………………………………
Isolation of phosphate solubilizing fungus (Aspergillus niger) from Caragana rhizosphere and its potential for phosphate solubili鄄
zation ZHANG Lizhen, FAN Jingjing, NIU Wei, et al (7571)……………………………………………………………………
Effect of raindrop impact on nutrient losses under different near 鄄surface soil hydraulic conditions on black soil slope
AN Juan, ZHENG Fenli, LI Guifang,et al (7579)
………………
…………………………………………………………………………………
Emergy analysis of coal鄄fired power generation system and construction of new emergy indices
LOU Bo,XU Yi,LIN Zhenguan (7591)
…………………………………………
………………………………………………………………………………………………
Review and Monograph
The impact of forest vegetation change on water yield in the subalpine region of southwestern China
ZHANG Yuandong, LIU Shirong, et al (7601)
…………………………………
……………………………………………………………………………………
Reviews on spatial pattern and sand鄄binding effect of patch vegetation in arid desert area
HU Guanglu, ZHAO Wenzhi,WANG Gang (7609)
……………………………………………
…………………………………………………………………………………
Sustainable management on pests by agro鄄biodiversity GAO Dong, HE Xiahong, ZHU Shusheng (7617)……………………………
Scientific Note
Characteristics of organic carbon and nutrient content in five soil types in Honghu wetland ecosystems
LIU Gang,SHEN Shouyun,YAN Wende,et al (7625)
………………………………
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Effects of cypermethrin and deltamethrin on reproduction of Brachionus calyciflorus
HUANG Lin, LIU Changli, WEI Chuanbao, et al (7632)
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《生态学报》2012 年征订启事
《生态学报》是中国生态学学会主办的自然科学高级学术期刊,创刊于 1981 年。 主要报道生态学研究原
始创新性科研成果,特别欢迎能反映现代生态学发展方向的优秀综述性文章;研究简报;生态学新理论、新方
法、新技术介绍;新书评介和学术、科研动态及开放实验室介绍等。
《生态学报》为半月刊,大 16 开本,280 页,国内定价 70 元 /册,全年定价 1680 元。
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生摇 态摇 学摇 报
(SHENGTAI摇 XUEBAO)
(半月刊摇 1981 年 3 月创刊)
第 31 卷摇 第 24 期摇 (2011 年 12 月)
ACTA ECOLOGICA SINICA
摇
(Semimonthly,Started in 1981)
摇
Vol郾 31摇 No郾 24摇 2011
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