全 文 :植物学报 Chinese Bulletin of Botany 2010, 45 (2): 233–235, www.chinbullbotany.com
doi: 10.3969/j.issn.1674-3466.2010.02.013
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收稿日期: 2009-10-10; 接受日期: 2009-12-22
基金项目: 中国博士后基金(No.20080430871)、黑龙江省博士后经费(No.20-415037)、黑龙江省青年科学技术基金(No.QC07C51)和东
北农业大学创新项目(No.CX2004-2)
* 通讯作者。E-mail: daidiche@yahoo.com.cn; yangcp@nefu.edu.cn
大花酢浆草的组织培养与快速繁殖
王金刚1, 2, 吴多1, 付慧娟1, 车代弟1* , 杨传平2*
1东北农业大学园艺学院, 哈尔滨 150030; 2东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室, 哈尔滨 150040
摘要 以大花酢浆草(Oxalis bowiei)鳞茎为外植体, 对适合大花酢浆草生长的培养基进行筛选, 并建立了大花酢浆草的无
性繁殖体系。结果表明, 丛生芽诱导及增殖的最适培养基为MS+0.25 mg·L–1 NAA, 继代苗在MS培养基中生根效果最好。
关键词 鳞茎, 大花酢浆草, 组织培养
王金刚, 吴多, 付慧娟, 车代弟, 杨传平 (2010). 大花酢浆草的组织培养与快速繁殖. 植物学报 45, 233–235.
随着生活水平的提高, 人们不仅仅满足于对城市
园林绿化的需求, 还对园林绿化提出了更高的要求
——既能观花, 也能观叶, 同时还要符合美学价值和
满足生态发展。酢浆草科(Oxalidaceae)园林植物既可
以在广场、平台布置花坛、花境, 也可以在道路两旁、
假山石处作点缀给人以亲切自然之美, 因而深受人们
的喜爱(王旭昭, 2007)。大花酢浆草 (Oxalis bowiei )
是酢浆草科酢浆草属(Oxalis)多年生草本植物, 既可
以盆栽, 也可以用作庭院绿化, 可以孤植, 亦可以群
植, 是良好的观赏花卉。
大花酢浆草在自然状态下采用地下鳞茎进行繁
殖, 但繁殖速度较慢。采用组织培养技术建立快速繁
殖体系, 可在短期内获得大量优质的组培苗, 对其规
模化生产有一定的参考价值。
1 植物材料
供试材料大花酢浆草(Oxalis bowiei LindI.)采自东北
农业大学园艺站。选取健康植株的地下鳞茎作为外植
体, 用含洗衣粉的溶液除去污物, 再用清水反复冲洗
干净, 然后放到超净工作台上进行消毒灭菌。在超净
工作台上将外植体切成1 cm×1 cm的小块, 用75%乙
醇浸泡10秒, 取出后用无菌水冲洗3次, 再将其放入
3%的NaClO中浸泡7分钟, 同时轻轻摇动容器, 取出
后再用无菌水冲洗5–6次, 将NaClO残液冲洗干净,
放置在经高温消毒处理过的培养皿中备用。
2 培养基成分与培养条件
实验所用培养基均含3%蔗糖和0.7%琼脂粉。诱导培
养基及增殖和生根培养基的pH值均为5.8, 并在
121°C高压灭菌20分钟。培养温度为(25±2)°C, 光照
强度为25 μmol·m–2·s–1, 光照时间为每天24小时。
2.1 丛生芽的诱导和增殖
以MS为基本培养基, 鳞茎为外植体进行诱芽培养。
6-BA和NAA的不同浓度组合见表1。每种培养基接种
15个外植体, 每瓶接种1个外植体。接种7天后观察芽
的生长情况, 以筛选出适合鳞茎芽诱导的最佳激素配
比。将丛生芽分割后进行继代培养, 每个增殖培养基
中移入1–2个芽。每15天继代1次。继代过程中观察
芽的增殖情况, 并筛选出芽增殖的最适培养基。
表1 6-BA和NAA的不同浓度组合
Table 1 Different concentration array of 6-BA and NAA
Combination
No.
NAA
(mg·L–1)
6-BA
(mg·L–1)
Number of
vaccination
1 0.00 1.0 15
2 0.25 0.0 15
3 0.50 1.5 15
4 0.75 2.0 15
·技术方法·
234 植物学报 45(2) 2010
表2 不同激素组合对大花酢浆草丛生芽诱导与增殖的影响
Table 2 Effects of different hormone combinations on the shoot induction and proliferation of Oxalis bowiei
Combination
No.
NAA
(mg·L–1)
6-BA
(mg·L–1)
Number of
induction
Inductivity (%) Bud number of
induction
Coefficient of
increament
1 0 1.0 5 33.3 52 10.4
2 0.25 0 8 53.3 228 28.5
3 0.50 1.5 12 80.0 184 15.3
4 0.75 2.0 6 40.0 68 11.3
图1 大花酢浆草的组织培养与快速繁殖
(A) 芽的诱导; (B) 丛生芽; (C) 生根培养; (D) 移栽苗。
Figure 1 Tissue culture and rapid propagation of Oxalis
bowiei
(A) Induction of the bud; (B) Multiple shoots; (C) Root
culture; (D) The transplanted plantlet.
2.2 生根培养
当生长健壮的丛生芽长到3 cm以上时, 将其分割成
单苗, 然后分别转入MS和1/2MS生根培养基中。培养
7天后观察生长状况。
2.3 炼苗和移栽
当根生长到2 cm以上且根数达到6条以上时即可进行
炼苗和移栽。先将培养瓶瓶口半敞开3天, 然后逐渐
将瓶口全部打开, 以达到幼苗逐渐适应外界环境的目
的。3天后取出组培苗, 用无菌水洗净根系附着的培
养基, 移栽到经高压灭菌的基质(园土:珍珠岩:木屑
=2:1:1)中; 用无菌水一次浇透, 放到人工气候培养箱
中, 将温度设为24°C, 湿度为90%, 光照时间为每天
12小时。15天后观察生长状况。
3 结果与讨论
3.1 激素配比的筛选
在外植体接种培养10天后进行观察。统计结果显示
(表2), 3号激素组合生长效果最好, 鳞茎幼芽萌发速
度最快(图1A), 诱导率达到80%。1号激素组合生长效
果最差, 诱导率只有33.3%。增殖培养20天后, 丛生
芽十分密集(图1B), 芽数多且短小, 增殖系数达10倍
以上, 达到了快速繁殖的目的。其中, 2号激素组合的
增殖效果最好, 增殖系数达到28.5(表2)。由此得出,
大花酢浆草芽诱导的最适培养基为MS+0.5 mg·L–1
NAA +1.5 mg·L–16-BA, 芽增殖的最适培养基为
MS+0.25 mg·L–1NAA。本研究结果与对紫叶酢浆草
(Oxalis vidacea)的研究(付慧娟等, 2008)所得到的最
佳诱导培养基配方相同。
3.2 生根培养
继代苗在MS培养基中生根效果最好, 生根率达90%
以上。培养7天后幼苗基部愈伤组织膨大, 有细小的
呈淡灰色的根长出。培养20天, 幼苗高达3–4 cm,
根数均达到10条以上时(图1C), 即可进行炼苗与移
栽。
3.3 炼苗和移栽
炼苗7天后, 幼苗叶片颜色发绿, 正常直立生长。炼苗
15天后, 可进行换盆移栽, 移栽成活率达85%以上
(图1D)。炼苗时要定期用无菌水浇灌, 但由于新生根
的活力还没有达到最佳状态, 所以每次浇灌要适量,
以免因对水分吸收不良而导致根腐烂。
王金刚等: 大花酢浆草的组织培养与快速繁殖 235
参考文献
付慧娟, 徐婷, 吴立君, 周爱民, 王金刚 (2008). 紫叶酢浆草
体细胞无性系建立的研究. 见: 张启翔编著. 中国观赏园艺
研究进展. 北京: 中国林业出版社. pp. 241–244.
王旭昭 (2007). 紫叶酢浆草栽培技术与推广应用. 安徽农业
科学 35, 11905–11922.
Tissue Culture and Rapid Propagation of Oxalis bowiei
Jingang Wang1, 2, Duo Wu1, Huijuan Fu1, Daidi Che1*, Chuanping Yang2*
1College of Horticulture, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China
2Key Laboratory of Forest Tree Genetic Breeding and Biotechnology, Ministry of Education, Northeast Forestry University,
Harbin 150040, China
Abstract We established an asexual propagation system of Oxalis bowiei using bulbs as explants. The optimal medium
for induction and proliferation of multiple buds was MS+0.25 mg·L–1 NAA and rooting took place from cultured shoots in
MS medium without growth regulators.
Key words bulb, Oxalis bowiei, tissue culture
Wang JG, Wu D, Fu HJ, Che DD, Yang CP (2010). Tissue culture and rapid propagation of Oxalis bowiei. Chin Bull Bot
45, 233–235.
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* Author for correspondence. E-mail: daidiche@yahoo.com.cn; yangcp@nefu.edu.cn
(责任编辑: 白羽红)