全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊源冤院园远缘员 耀 园远远圆允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园源鄄员源摇 接受日期院圆园员源鄄员园鄄圆员
基金项目院国家自然基金渊猿员圆远园猿缘愿冤袁农业部转基因生物新品种培育重大专项渊圆园员员在载园愿园园缘鄄园园缘冤
作者简介院韩泽刚袁男袁主要从事棉花分子育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院澡葬灶扎藻早葬灶早缘园员苑园远愿缘员岳 员圆远援 糟燥皂援
通讯作者院张摇 薇袁教授袁主要从事棉花分子育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院扎澡憎赃葬早则岳 泽澡扎怎援 藻凿怎援 糟灶援
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤园源鄄园远缘员鄄员圆
应用 杂燥造藻曾葬测序技术分析棉花不同
抗病品种的数字表达谱
韩泽刚员 摇 赵曾强员 摇 何兰兰员 摇 柴蒙亮圆 摇 李会会员 摇 张摇 薇员
渊员石河子大学农学院袁新疆 石河子摇 愿猿圆园园园曰 圆 石河子大学生命科学学院袁新疆 石河子摇 愿猿圆园园园冤
摘摇 要院棉花枯萎病是一种危害严重的世界性病害袁构建棉花枯萎病不同抗病品种的基因表达谱将为进
一步研究棉花抗枯萎病的分子调控机制及筛选抗枯萎病相关基因奠定基础遥 本研究选用高抗枯萎病的
陆地棉品种中棉所 员圆 和高感枯萎病的陆地棉品种新陆早 苑 号为材料袁利用 杂燥造藻曾葬高通量测序技术分析
棉花幼苗根部组织中的基因表达情况遥 杂燥造藻曾葬高通量测序后构建了多达 猿缘园 万个 则藻葬凿泽的标签文库袁根
据已知序列信息袁显著差异表达基因 员 园愿园 个袁其中上调基因 猿园圆 个袁下调基因 苑苑愿 个遥 基因功能分析
表明袁已注释的显著差异表达基因可划分为分子功能尧生物过程和细胞组件 猿 个功能注释本体袁并进一
步细分为 猿苑 个功能类别遥 鉴定出 员员圆 条代谢通路袁注释了 员 圆猿愿 个显著差异表达基因袁共涉及氨基酸
代谢尧多糖的生物合成和代谢尧脂类代谢尧能量代谢及信号转导等方面遥 在植物激素信号转导通路分析
中袁涉及到 圆远 个已知功能基因袁源 个基因编码 粤孕圆 辕 耘砸云转录因子袁源 个基因与 蕴砸砸类受体丝氨酸 辕苏氨
酸蛋白激酶或蛋白激酶有关袁缘 个基因与蛋白磷酸酶 圆悦 有关袁而这些基因都参与植物的抗病反应遥 随
机抽取 缘 个基因进行实时荧光定量 孕悦砸验证袁其结果与测序结果一致遥 本研究初步揭示了棉花枯萎病
抗感品种在转录组水平上的表达差异袁获得了大量差异表达基因遥
关键词院陆地棉曰枯萎病曰杂燥造藻曾葬曰基因表达谱
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 园源援 园远缘员
摇 摇 棉花枯萎病是一种危害严重的世界性病害袁严重
影响着棉花的品质及产量袁对棉花生产造成了极大威
胁咱员 原 圆暂 遥 利用现代分子生物学技术研究棉花抗病和感
病品种的转录组特征袁对于全面认识棉花抗枯萎病的
分子作用机制尧发掘抗病相关基因袁利用转基因技术培
育抗枯萎病的棉花品种具有重要意义遥
杂燥造藻曾葬测序技术具有测序时间短尧高通量尧高灵敏
度尧不依赖于基因组的参考序列等特点袁克服了以往
阅晕粤微矩阵芯片等技术的不足袁在研究差异表达基因
方面显示出强大的优势咱猿 原 源暂 遥 目前袁已有一些学者利
用 杂燥造藻曾葬 高通量测序技术袁对芝麻尧花生尧大豆尧棉花等
许多植物在转录水平上基因表达的变化进行了研
究咱缘 原 怨暂 遥 宰葬灶早 等咱愿暂通过 杂燥造藻曾葬 高通量测序对盐胁迫
处理前后的棉花幼苗进行转录组测序袁利用生物信息
学分析找到了 圆圆猿 个上调基因和 猿员苑 个下调的基因袁
初步揭示了棉花幼苗盐处理前后转录组水平的复杂的
调控网络遥 宰怎等咱怨暂通过 杂燥造藻曾葬 高通量测序对葡萄霜
霉病侵染和对照样品进行转录组测序袁发现了大量的
差异表达基因袁并找到参与调控与核糖体结构尧光合作
用尧氨基酸和糖代谢等代谢通路有关的基因袁初步揭示
了葡萄霜霉病病程发展的调控机制遥
杂燥造藻曾葬高通量测序技术在研究植物的逆境胁迫以
及生长发育等方面得到广泛应用咱员园 原 员愿暂 袁但利用高通量
测序技术研究棉花抗病和感病品种的整体转录组表达
情况鲜见报道遥 本研究利用 杂燥造藻曾葬高通量测序技术构
建棉花枯萎病抗感品种的基因表达谱袁分析棉花抗病
和感病品种在转录组水平上的差异表达袁为深入探究
棉花抗枯萎病的分子调控机制及筛选抗枯萎病相关基
员缘远
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
因奠定基础遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 植物材料
陆地棉品种中棉所 员圆 和新陆早 苑 号由石河子大
学棉花所提供渊经枯萎病抗性鉴定袁中棉所 员圆 为抗病
品种袁新陆早 苑 号为感病品种冤遥 挑选经浓硫酸脱绒
后的籽粒饱满的种子袁在 园郾 员豫 的氯化汞中浸泡
员缘皂蚤灶进行种子消毒袁无菌水冲洗 源 耀 缘 遍曰将种子种
植于无菌的蛭石中袁待棉苗长至 猿糟皂 左右时将其移入
盛有霍格兰营养液的塑料盒中渊棉苗用带有孔洞的泡
沫板漂浮冤袁于 圆缘益袁光照 员远澡 辕黑暗 愿澡 的培养箱中继
续培育袁每周换 员 次培养液咱员怨暂 遥 待棉花幼苗长至两叶
一心时分别采集中棉所 员圆 号和新陆早 苑 号的棉花根
部组织袁经液氮速冻后袁保存于 原 愿园益冰箱袁用于 砸晕粤
提取及测序遥
员郾 圆摇 砸晕粤提取及 糟阅晕粤的合成
采用 悦栽粤月法咱圆园暂提取棉花根部组织 砸晕粤袁用 晕阅鄄
员园园 晕葬灶燥责燥 泽责藻糟贼则燥责澡燥贼燥皂藻贼藻则 葬灶凿 粤早蚤造藻灶贼 圆员园园
月蚤燥葬灶葬造赠扎藻则渊美国袁晕葬灶燥凿则燥责 公司冤检测 砸晕粤 样品的质
量遥 检测合格的 砸晕粤样品袁加热打开二级结构后用带
有 韵造蚤早燥渊凿栽冤的磁珠富集 皂砸晕粤袁 向得到的 皂砸晕粤 中
加入适量打断试剂袁高温条件下使其片断化袁再以片断
后的 皂砸晕粤 为模板袁 合成 糟阅晕粤袁利用磁珠对双链
糟阅晕粤进行纯化遥
员郾 猿摇 标签文库的构建及 杂燥造藻曾葬测序
对所得的双链 糟阅晕粤 经过末端修复尧猿忆末端加碱
基 粤及加测序接头后袁 进行 孕悦砸扩增富集测序样本袁
从而完成整个文库制备遥 构建好的文库用 粤早蚤造藻灶贼
圆员园园 月蚤燥葬灶葬造赠扎藻则 渊 美 国袁 安 捷 伦 公 司 冤 和 粤月陨
杂贼藻责韵灶藻孕造怎泽 砸藻葬造鄄栽蚤皂藻 孕悦砸 杂赠泽贼藻皂渊美国袁罗氏公司冤
进行质量和产量检测袁 文库质控合格后使用 陨造造怎皂蚤灶葬
匀蚤杂藻择栽酝 圆园园园 进行测序袁得到 则葬憎 则藻葬凿泽遥
员郾 源摇 测序数据的处理
将测序得到的 则葬憎 则藻葬凿泽袁去除含有接头的序列尧未
知序列的比例大于 员园豫 的以及低质量的 则藻葬凿泽袁得到
糟造藻葬灶 则藻葬凿泽袁作为后续试验的基础遥 再使用短 则藻葬凿泽 比
对软件 杂韵粤孕葬造蚤灶早灶藻则 辕 泽燥葬责圆 将 糟造藻葬灶 则藻葬凿泽 比对到最新
雷蒙德氏棉参考基因序列及雷蒙德氏棉参考基因组序
列袁最多允许 圆 个碱基错配遥 测序结果进行饱和度分
析袁随机性分析及在参考基因组上的分布分析袁合格后
运用 砸孕运酝 法渊 则藻葬凿泽 责藻则 噪遭 责藻则 皂蚤造造蚤燥灶 则藻葬凿泽冤计算基
因表达量咱圆员暂 遥
基于 粤怎凿蚤糟 等咱圆圆暂描述的方法袁对表达谱中每个基
因进行统计学分析遥 云阅砸 渊 枣葬造泽藻 凿蚤泽糟燥增藻则赠 则葬贼藻冤 在多
个测试和分析中用于确定 孕 值的阈值咱圆猿暂 遥 符合 孕 约
园郾 园园缘袁云阅砸臆园郾 园园员 以及讦造燥早圆砸葬贼蚤燥讦逸员 的基因被定
义为显著差异表达基因袁对所有显著差异表达基因进
行 郧韵渊早藻灶藻 燥灶贼燥造燥早赠冤功能注释及分类袁并利用 运耘郧郧
渊噪赠燥贼燥 藻灶糟赠糟造燥责藻凿蚤葬 燥枣 早藻灶藻泽 葬灶凿 早藻灶燥皂藻泽冤数据库定位
分析代谢通路渊责葬贼澡憎葬赠冤遥
员郾 缘摇 实时荧光定量 孕悦砸的检测
为了验证测序结果的准确性袁本研究从 杂燥造藻曾葬 测
序获得的差异表达基因中袁随机挑选 缘 个差异表达明
显的基因进行实时荧光定量 孕悦砸 测定袁总 砸晕粤 的提
取采用改良的 悦栽粤月 法袁糟阅晕粤 的合成按照 云藻则皂藻灶贼葬泽
公司渊利陶宛冤生产的第一链 糟阅晕粤 合成试剂盒说明
书上的步骤进行操作遥 依据数字化基因表达谱测序所
得序列库对应的代表序列袁使用 孕则蚤皂藻则 责则藻皂蚤藻则 缘郾 园 软
件设计实时荧光定量 孕悦砸 引物袁内参为棉花的
郧澡哉月匝苑渊阅匝员员远源源员冤袁引物序列见表 员遥 引物由北京
六合华大基因科技有限公司合成袁所用染料为 栽葬噪葬则葬
公司渊日本冤的 杂再月砸袁实时荧光定量 孕悦砸 的反应体系
及程序参见 栽韵再韵月韵 公司 渊日本大阪冤的 杂再月砸 誖
郧则藻藻灶 砸藻葬造贼蚤皂藻 孕悦砸 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾渊匝孕运鄄圆员圆冤说明书袁试
验设计 猿 个重复袁采用 圆 原 驻驻悦贼法计算基因的相对表达
量遥
表 员摇 用于实时荧光定量 孕悦砸的引物
栽葬遭造藻 员摇 孕则蚤皂藻则泽 枣燥则 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸
编号 悦燥凿藻 基因 郧藻灶藻 正向引物 云燥则憎葬则凿 责则蚤皂藻则 反向引物 砸藻增藻则泽藻 责则蚤皂藻则
员 郧燥则葬蚤援 园园远郧圆员愿员园园郾 员 缘忆鄄郧悦粤悦粤粤粤郧粤郧悦粤栽郧粤郧郧郧粤悦鄄猿忆 缘忆鄄栽栽郧粤郧悦粤粤悦悦粤悦郧粤栽栽粤郧悦悦鄄猿忆
圆 郧燥则葬蚤援 园园源郧园缘猿苑园园郾 员 缘忆鄄郧悦悦郧栽栽粤悦粤郧悦悦粤郧栽郧悦悦栽粤粤鄄猿忆 缘忆鄄粤悦悦粤悦悦栽郧悦郧栽悦郧悦悦粤粤栽粤栽鄄猿忆
猿 郧燥则葬蚤援 园园缘郧圆缘愿员园园郾 员 缘忆鄄栽悦悦粤悦悦郧栽粤粤悦郧粤悦悦悦郧鄄猿忆 缘忆鄄悦栽悦悦栽悦悦栽栽郧粤粤郧悦粤郧栽粤郧悦悦鄄猿忆
源 郧燥则葬蚤援 园园苑郧园园愿缘园园郾 员 缘忆鄄郧郧悦粤郧粤粤悦栽郧悦栽栽悦粤粤悦粤悦悦悦鄄猿忆 缘忆鄄郧悦郧粤郧悦悦悦栽栽栽郧郧郧粤栽粤郧栽郧栽鄄猿忆
缘 郧燥则葬蚤援 园园源郧圆源员源园园郾 员 缘忆鄄粤悦悦郧悦悦悦粤粤悦粤悦栽粤粤郧悦悦鄄猿忆 缘忆鄄郧粤悦粤郧悦郧栽栽栽悦郧粤郧悦粤悦悦鄄猿忆
远 郧澡哉月匝苑渊内参冤 缘忆鄄郧粤粤郧粤悦悦栽粤悦粤悦悦粤粤郧悦悦悦粤粤郧鄄猿忆 缘忆鄄悦郧郧粤悦栽悦栽粤悦栽悦粤粤栽悦悦悦悦粤悦悦鄄猿忆
圆缘远
摇 源 期 应用 杂燥造藻曾葬测序技术分析棉花不同抗病品种的数字表达谱
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 测序数据统计分析
注院粤为中棉所 员圆 测序样品袁月为新陆早 苑 号测序样品遥
晕燥贼藻院粤 泽贼葬灶凿泽 枣燥则 贼澡藻 在澡燥灶早皂蚤葬灶泽怎燥员圆 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 泽葬皂责造藻泽援 月 泽贼葬灶凿泽 枣燥则 贼澡藻 载蚤灶造怎扎葬燥苑 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 泽葬皂责造藻泽援
图 员摇 杂燥造藻曾葬测序饱和度分析
云蚤早援 员摇 杂燥造藻曾葬 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 泽葬贼怎则葬贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽
表 圆摇 数据比对统计表
栽葬遭造藻 圆摇 栽澡藻 泽贼葬贼蚤泽贼蚤糟葬造 贼葬遭造藻 燥枣 凿葬贼葬 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶
比对内容
酝葬责责蚤灶早 糟燥灶贼藻灶贼
品种
悦怎造贼蚤增葬则
砸藻葬凿泽总数
栽燥贼葬造 则藻葬凿泽
比对上的
则藻葬凿泽总数
栽燥贼葬造 皂葬责责藻凿
则藻葬凿泽
完全比对上的
则藻葬凿泽总数
孕藻则枣藻糟贼 皂葬贼糟澡
错配臆圆遭责的
则藻葬凿泽总数
臆圆遭责 酝蚤泽皂葬贼糟澡
唯一比对上的
则藻葬凿泽总数
哉灶蚤择怎藻 皂葬贼糟澡
比对到多个
位点的
则藻葬凿泽总数
酝怎造贼蚤鄄责燥泽蚤贼蚤燥灶
皂葬贼糟澡
未比对上的
则藻葬凿泽总数
栽燥贼葬造 怎灶皂葬责责藻凿
则藻葬凿泽
与参考基因比对
酝葬责责蚤灶早 贼燥 则藻枣藻则藻灶糟藻
中棉所 员圆
摇
猿 缘缘愿 圆愿苑
渊员园园郾 园园豫 冤
圆 猿员愿 苑苑怨
渊远缘郾 员苑豫 冤
员 猿园远 愿猿苑
渊猿远郾 苑猿豫 冤
员 园员员 怨源圆
渊圆愿郾 源源豫 冤
圆 员怨缘 圆怨猿
渊远员郾 苑园豫 冤
员圆猿 源愿远
渊猿郾 源苑豫 冤
员 圆猿怨 缘园愿
渊猿源郾 愿猿豫 冤
早藻灶藻泽
摇
新陆早 苑 号
摇
猿 苑猿怨 怨猿远
渊员园园郾 园园豫 冤
圆 缘远怨 远猿源
渊远愿郾 苑员豫 冤
员 源远源 远苑猿
渊猿怨郾 员远豫 冤
员 员园源 怨远员
渊圆怨郾 缘源豫 冤
圆 源猿苑 苑园怨
渊远缘郾 员愿豫 冤
员猿员 怨圆缘
渊猿郾 缘猿豫 冤
员 员苑园 猿园圆
渊猿员郾 圆怨豫 冤
与参考基因组
比对
中棉所 员圆
摇
猿 缘缘愿 圆愿苑
渊员园园郾 园园豫 冤
圆 猿员怨 源员员
渊远缘郾 员愿豫 冤
员 圆圆怨 源远源
渊猿源郾 缘缘豫 冤
员 园愿怨 怨源苑
渊猿园郾 远猿豫 冤
圆 员圆源 猿园远
渊缘怨郾 苑园豫 冤
员怨缘 员园缘
渊缘郾 源愿豫 冤
员 圆猿愿 愿苑远
渊猿源郾 愿圆豫 冤
酝葬责责蚤灶早 贼燥 则藻枣藻则藻灶糟藻
早藻灶燥皂藻
新陆早 苑 号
摇
猿 苑猿怨 怨猿远
渊员园园郾 园园豫 冤
圆 缘员愿 园远源
渊远苑郾 猿猿豫 冤
员 猿源苑 缘缘缘
渊猿远郾 园猿豫 冤
员 员苑园 缘园怨
渊猿员郾 猿园豫 冤
圆 猿员员 怨园员
渊远员郾 愿圆豫 冤
圆园远 员远猿
渊缘郾 缘员豫 冤
员 圆圆员 愿苑圆
渊猿圆郾 远苑豫 冤
摇 摇 注院括号中百分数表示数据占 则藻葬凿泽 总数的百分比遥
晕燥贼藻院栽澡藻 责藻则糟藻灶贼葬早藻 蚤灶 贼澡藻 遭则葬糟噪藻贼泽 泽贼葬灶凿泽 枣燥则 贼澡藻 责藻则糟藻灶贼葬早藻 燥枣 藻葬糟澡 凿葬贼葬 贼燥 贼燥贼葬造 则藻葬凿泽援
摇 摇 将测序得到的 则葬憎 则藻葬凿泽 经过筛选得到 糟造藻葬灶
则藻葬凿泽袁圆 个品种分别比对到参考基因和参考基因组的
则藻葬凿泽数都在 猿缘园 万以上渊表 圆冤袁以中棉所 员圆 比对到
参考基因的统计结果为例袁贼燥贼葬造 则藻葬凿泽 为 猿 缘缘愿 圆愿苑袁总
共定位到雷蒙德氏棉参考基因渊 贼燥贼葬造 皂葬责责藻凿 则藻葬凿泽冤为
圆 猿员愿 苑苑怨袁占 贼燥贼葬造 则藻葬凿泽 的百分比为 远缘郾 员苑豫 袁其中能
够完全匹配即 责藻则枣藻糟贼 皂葬贼糟澡 的数量为 员 猿园远 愿猿苑袁占总
则藻葬凿泽数的比例是 猿远郾 苑猿豫 袁碱基序列错配臆圆遭责 的
则藻葬凿泽数为 员 园员员 怨源圆袁占总 则藻葬凿泽数的比例是 圆愿郾 源源豫 遥
能够唯一匹配到参考基因上的 则藻葬凿泽 数是 圆 员怨缘 圆怨猿袁
占总数的 远员郾 苑园豫 曰另有部分 则藻葬凿泽无法与参考基因相
匹配渊 贼燥贼葬造 怎灶皂葬责责藻凿 则藻葬凿泽冤总数为 员 圆猿怨 缘园愿袁所占比
例为 猿源郾 愿猿豫 遥
圆郾 圆摇 测序饱和度分析
测序饱和度是用来衡量样品测序量的多少是否能
够达到分析标准遥 当测序量渊则藻葬凿泽数量冤增加时袁所能
检测到的基因数量也随之增多袁但是当测序量达到某
一阈值后袁检测到的基因数量增加的趋势趋于平缓袁证
明检测到的基因趋于饱和遥 圆 个品种的测序样品的
糟造藻葬灶 则藻葬凿泽的数目达到 员酝时袁检测到的基因数目趋于
饱和渊图 员冤袁说明测序量已基本覆盖细胞中表达的全
部基因遥
猿缘远
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
圆郾 猿摇 差异表达基因分析
经 杂燥造藻曾葬 测序后袁中棉所 员圆 与新陆早 苑 号相比袁
两者的差异表达基因共有 圆怨 苑远园 个袁其中上调基因有
员远 圆猿缘 个袁下调基因有 员猿 缘圆缘 个遥 将符合 孕 约 园郾 园园缘袁
云阅砸臆园郾 园园员 以及讦造燥早圆砸葬贼蚤燥 讦逸员 的基因被定义为
显著差异表达基因袁共得到 员 园愿园 个 怎灶蚤早藻灶藻渊表 猿冤遥
员 园愿园个 怎灶蚤早藻灶藻 中包含已知 怎灶蚤早藻灶藻 苑源员 个 渊占
远愿郾 远员豫 冤袁未知 怎灶蚤早藻灶藻 猿猿怨 个渊占 猿员郾 猿怨豫 冤曰此外有
猿园圆 个 怎灶蚤早藻灶藻 在基因表达中表现为上调作用袁苑苑愿 个
怎灶蚤早藻灶藻表现为下调作用遥 下调基因数量明显高于上
调基因数量遥
表 猿摇 显著差异表达基因
栽葬遭造藻猿摇 晕怎皂遭藻则 燥枣 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻泽
总数
栽燥贼葬造 灶怎皂遭藻则
上调或下调基因
哉责 燥则 凿燥憎灶 则藻早怎造葬贼蚤燥灶
数目
晕怎皂遭藻则
占基因总数百分比
孕藻则糟藻灶贼
已知或未知基因
运灶燥憎灶 燥则 怎灶噪灶燥憎灶
数目
晕怎皂遭藻则
占基因总数百分比
孕藻则糟藻灶贼
员 园愿园 上调 猿园圆 圆苑援 怨远豫 已知基因 圆圆猿 圆园援 远缘豫
未知基因 苑怨 苑援 猿员豫
下调 苑苑愿 苑圆援 园源豫 已知基因 缘员愿 源苑援 怨远豫
未知基因 圆远园 圆源援 园愿豫
摇 摇 注院已知基因表示在 早藻灶藻 燥灶贼燥造燥早赠中有注释的基因曰未知基因表示在 早藻灶藻 燥灶贼燥造燥早赠中没有注释的基因遥
晕燥贼藻院运灶燥憎灶 泽贼葬灶凿泽 枣燥则 早藻灶藻泽 憎蚤贼澡 早藻灶藻 燥灶贼燥造燥早赠 葬灶灶燥贼葬贼蚤燥灶援 哉灶噪灶燥憎灶 泽贼葬灶凿泽 枣燥则 早藻灶藻泽 憎蚤贼澡燥怎贼 葬灶灶燥贼葬贼蚤燥灶援
摇 摇 将 圆怨 苑远园 个差异表达基因和 员 园愿园 个显著差异表
达基因分别进行基因表达丰度统计袁负值表示下调基
因的 造燥早圆砸葬贼蚤燥值袁反之表示上调基因的 造燥早圆砸葬贼蚤燥 值袁
每隔 员 个数值进行汇总统计并作出折线图渊图 圆冤遥 对
比发现差异表达基因和显著差异表达基因的基因表达
丰度表现出相似的趋势袁源臆讦造燥早圆砸葬贼蚤燥讦臆员源 之间的
基因表达数目都相对较少袁所占的比例分别只有
员员郾 远源豫和 猿郾 愿园豫 曰而 造燥早圆砸葬贼蚤燥 的值在 原源 和 源 之间大
量聚集袁所占的比例分别高达 愿愿郾 猿远豫和 怨远郾 圆园豫 遥 表
明中棉所 员圆 和新陆早 苑 号的差异表达基因在细胞中
表达调控时袁差异表达基因的表达水平变化主要集中
在 源 倍以内袁表现出高度的不均一性遥
圆郾 源摇 显著差异表达基因 郧韵功能分析
郧韵分析将符合 云阅砸 臆园郾 园园员 和 渣 造燥早圆砸葬贼蚤燥 渣 逸员
条件的基因分为 猿 个功能注释本体袁 分别描述基因的
分子功能尧生物过程和细胞组件遥 因为同一基因可能
含有 员 个或多个功能注释袁因此通过 杂燥造藻曾葬测序分析袁
共有 猿 远园愿 个 怎灶蚤早藻灶藻渊含重复数目冤至少含有 员 种功
能注释曰其中 怨圆苑 个渊圆缘郾 远怨豫 冤为分子功能袁员 源远愿 个
渊源园郾 远怨豫 冤为生物学过程袁 员 圆员猿 个渊猿猿郾 远圆 豫 冤为细胞
组件遥 每一个功能注释本体又被进一步分类生成若干
个子集袁上述 猿 大功能被划分为 猿苑 个类别遥 由表 源 可
知袁本研究中袁基因功能主要集中在生物过程功能类型
中的细胞和代谢过程袁细胞组件功能类型中的细胞尧细
胞组分和细胞器以及分子功能类型中的结合和催化活
注院粤图为差异表达基因丰度袁月图为显著差异表达基因丰度遥
晕燥贼藻院 粤 泽贼葬灶凿泽 枣燥则 贼澡藻 葬遭怎灶凿葬灶糟藻 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻泽援 月
泽贼葬灶凿泽 枣燥则 贼澡藻 葬遭怎灶凿葬灶糟藻 燥枣 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻泽
图 圆摇 基因表达丰度的折线图
云蚤早援 圆摇 蕴蚤灶藻 糟澡葬则贼 燥枣 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬遭怎灶凿葬灶糟藻
性上遥 此外袁有 怨 个 怎灶蚤早藻灶藻与免疫系统进程有关曰员苑园
个 怎灶蚤早藻灶藻与刺激的响应有关曰猿员 个 怎灶蚤早藻灶藻 与信号有
关曰远 个 怎灶蚤早藻灶藻 与酶调节活性有关曰员苑 个 怎灶蚤早藻灶藻 与
转录因子有关袁而这些 怎灶蚤早藻灶藻 可能与棉花对枯萎病
的抗性表现有密切联系遥
圆郾 缘摇 显著差异表达基因 责葬贼澡憎葬赠分析
利用 运耘郧郧数据库代谢途径对显著差异表达基
因进行功能注释和分类袁 共鉴定出 员员圆 条 责葬贼澡憎葬赠袁注
释到 员 圆猿愿 个显著差异表达基因遥 由于注释信息较
源缘远
摇 源 期 应用 杂燥造藻曾葬测序技术分析棉花不同抗病品种的数字表达谱
摇 摇 摇 摇 表 源摇 显著差异表达基因的功能分类
栽葬遭造藻 源摇 云怎灶糟贼蚤燥灶葬造 糟葬贼藻早燥则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻
泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻泽
注释本体
韵灶贼燥造燥早赠
功能类别
悦造葬泽泽
基因数量
栽澡藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 早藻灶藻泽
百分比
孕藻则糟藻灶贼 辕 豫
生物学过程 代谢过程 源员园 员员援 猿远
细胞过程 圆怨圆 愿援 园怨
刺激响应 员苑园 源援 苑员
单生物过程 员圆苑 猿援 缘圆
定位 苑源 圆援 园缘
定位建立 苑园 员援 怨源
生物调节 缘怨 员援 远源
发育过程 源远 员援 圆苑
生物过程调控 源缘 员援 圆缘
细胞组分组织生物合成 猿圆 园援 愿怨
信号相关 猿员 园援 愿远
复制 圆缘 园援 远怨
多细胞有机体过程 圆源 园援 远苑
复制过程 圆猿 园援 远源
多 辕有机进程 员愿 园援 缘园
免疫系统进程 怨 园援 圆缘
生长 远 园援 员苑
生物过程正调节 远 园援 员苑
节律性过程 员 园援 园猿
细胞组件 细胞 猿员猿 愿援 远愿
细胞组分 猿员猿 愿援 远愿
细胞器 圆员缘 缘援 怨远
细胞膜 员圆远 猿援 源怨
细胞器部分 苑猿 圆援 园圆
细胞膜组成 苑园 员援 怨源
大分子复合体 远缘 员援 愿园
胞外区 圆员 园援 缘愿
膜附着腔 员缘 园援 源圆
胞外区部分 圆 园援 园远
分子功能 催化活性 源猿怨 员圆援 员苑
结合 猿缘员 怨援 苑猿
转运活性 源苑 员援 猿园
结构分子活性 猿圆 园援 愿怨
分子转导活性 圆园 园援 缘缘
核酸结合转录因子活性 员苑 园援 源苑
抗氧化活性 员缘 园援 源圆
酶调节活性 远 园援 员苑
少袁仍有大量的差异表达基因未能在代谢途径中得以
注释曰但是已注释的显著差异表达基因涉及到氨基酸
代谢尧多糖的生物合成和代谢尧能量代谢等多个方面
渊图 猿冤遥 其中与多糖的生物合成和代谢相关的基因比
例最高袁占 猿猿郾 猿豫 曰与氨基酸代谢相关基因次之袁占
员园郾 猿豫 曰与脂质和能量代谢相关基因分别占 缘郾 园豫和
源郾 源豫 曰与核苷酸代谢相关基因的比例最少袁仅占
园郾 愿豫 遥 除基本代谢途径外袁苑郾 苑豫的基因参与了次生
代谢产物的生物合成遥 另外还有 缘郾 源豫的基因参与萜
类化合物和多酮类化合物的代谢袁缘郾 源豫的基因参与信
号转导袁远郾 员豫的基因参与环境适应和免疫系统遥
信号转导在植物对病原菌的防御反应中起重要作
用遥 本研究中信号转导共有 圆 个 责葬贼澡憎葬赠袁分别为磷脂
酰肌醇信号系统 渊 运韵园源园苑园冤和植物激素信号转导
渊运韵园源园苑缘冤袁分别涉及 缘 个和 缘圆 个显著差异表达基
因遥 表 缘 列举出在植物激素信号转导 责葬贼澡憎葬赠 中的 圆远
个显著差异表达基因渊部分未知蛋白尧预测蛋白未给
出冤袁其中 远 个基因在该通路中表达上调袁圆园 个基因表
达下调遥 在这些下调基因中袁有 猿 个是 蕴砸砸 类受体丝
氨酸 辕苏氨酸鄄蛋白激酶袁源 个是乙烯信号转导途径的
转录因子 粤孕圆 辕 耘砸云遥
圆郾 远摇 实时荧光定量 孕悦砸验证分析
以中棉所 员圆 和新陆早 苑 号的 糟阅晕粤作为样本袁对
从 杂燥造藻曾葬测序中随机挑选的 圆 个上调表达和 猿 个下调
表达的差异表达基因进行实时荧光定量 孕悦砸检测袁并
根据所得数据以 圆 为底的对数值进行标准化处理袁结
果如图 源 所示遥 黑色柱形图为 杂燥造藻曾葬 测序数据结果袁
白色柱形图为实时荧光定量 孕悦砸验证数据结果袁可以
看出袁由于 圆 个技术在检测灵敏性上的差异袁这 缘 个基
因相对表达量与 杂燥造藻曾葬 测序的结果并不完全一致袁但
是其上调或者下调的趋势是相同的袁说明基因表达谱
测序获得的信息具有较高的可靠性遥
圆郾 苑摇 推测与抗枯萎病相关的基因
通过 杂燥造藻曾葬测序技术袁本研究得到 员 园愿园 个显著
差异表达基因袁对其进行挖掘发现 员猿缘 个 怎灶蚤早藻灶藻可能
与棉花的枯萎病抗性有关渊表 远袁源缘 个未知功能的基
因未列出冤遥 其中 远 个 怎灶蚤早藻灶藻 与几丁质酶的合成有
关曰猿 个 怎灶蚤早藻灶藻与 茁鄄员袁猿鄄葡聚糖酶的合成有关曰员员 个
怎灶蚤早藻灶藻隶属于抗病相关的转录因子基因曰缘员个 怎灶蚤早藻灶藻
参与萜类尧黄酮类袁生物碱类等小分子化合物的合成通
路曰此外还有 远源 个 怎灶蚤早藻灶藻 参与环境适应和免疫系统
中的植物与病原菌相互作用代谢通路遥
缘缘远
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
图 猿摇 各条 责葬贼澡憎葬赠中涉及基因占注释基因的百分比
云蚤早援 猿摇 孕藻则糟藻灶贼葬早藻 燥枣 早藻灶藻泽 燥枣 藻葬糟澡 责葬贼澡憎葬赠 葬早葬蚤灶泽贼 贼澡藻 贼燥贼葬造 葬灶灶燥贼葬贼藻凿 早藻灶藻泽
表 缘摇 植物激素信号转导 责葬贼澡憎葬赠中部分显著差异表达基因
栽葬遭造藻 缘摇 孕葬则贼 燥枣 贼澡藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻泽 燥枣 责造葬灶贼 澡燥则皂燥灶藻 泽蚤早灶葬造 贼则葬灶泽凿怎糟贼蚤燥灶 责葬贼澡憎葬赠
基因信息号
郧藻灶藻 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻则
基因长度
蕴藻灶早贼澡 辕 遭责 造燥早圆砸葬贼蚤燥
上调 辕下调
哉责 燥则 凿燥憎灶
基因名称
郧藻灶藻 灶葬皂藻
郧燥则葬蚤援 园员猿郧员源员猿园园郾 员 员 猿员怨 猿郾 园圆 上调 吲哚乙酸诱导蛋白 粤砸郧苑
郧燥则葬蚤援 园园圆郧园苑怨缘园园郾 员 圆 圆怨源 圆郾 猿远 上调 吲哚乙酸鄄酰氨基合成酶 郧匀猿郾 远
郧燥则葬蚤援 园园员郧圆源圆怨园园郾 员 员 源源远 员郾 愿缘 上调 生长素应答蛋白
郧燥则葬蚤援 园园源郧园苑缘园园园郾 员 员 猿员员 原 圆郾 愿猿 下调 生长素应答蛋白
郧燥则葬蚤援 园园远郧圆缘圆愿园园郾 员 员 圆苑愿 原 员郾 园圆 下调 蛋白磷酸酶 圆悦
郧燥则葬蚤援 园园源郧圆猿圆猿园园郾 员 员 苑愿苑 原 员郾 源圆 下调 蛋白磷酸酶 圆悦
郧燥则葬蚤援 园园猿郧员源远源园园郾 员 员 苑猿苑 原 圆郾 猿怨 下调 蛋白磷酸酶 圆悦
郧燥则葬蚤援 园园缘郧圆猿猿园园园郾 员 员 怨苑怨 原 圆郾 缘园 下调 蛋白磷酸酶 圆悦
郧燥则葬蚤援 园园怨郧员员员缘园园郾 员 圆 园源圆 原 员郾 源怨 下调 蛋白磷酸酶 圆悦
郧燥则葬蚤援 园园苑郧员源缘愿园园郾 员 员 员愿缘 原 员郾 员猿 下调 粤孕圆 辕 耘砸云转录因子
郧燥则葬蚤援 园园员郧员苑远苑园园郾 员 员 猿愿员 原 愿郾 苑源 下调 粤孕圆 辕 耘砸云转录因子
郧燥则葬蚤援 园园源郧圆圆园愿园园郾 员 怨缘员 原 圆郾 员缘 下调 粤孕圆 辕 耘砸云转录因子
郧燥则葬蚤援 园园源郧员怨缘园园园郾 员 员 员园苑 原 缘郾 园远 下调 粤孕圆 辕 耘砸云转录因子
郧燥则葬蚤援 园园苑郧园猿愿愿园园郾 员 猿 缘缘愿 原 员郾 源猿 下调 蕴砸砸类受体丝氨酸 辕苏氨酸鄄蛋白激酶
郧燥则葬蚤援 园员园郧员远圆苑园园郾 员 猿 猿怨园 原 员郾 缘苑 下调 蕴砸砸类受体丝氨酸 辕苏氨酸鄄蛋白激酶
郧燥则葬蚤援 园园怨郧猿远猿远园园郾 员 猿 远愿源 原 圆郾 远源 下调 蕴砸砸类受体丝氨酸 辕苏氨酸鄄蛋白激酶
郧燥则葬蚤援 园员员郧园猿缘远园园郾 员 员 愿缘苑 原 员郾 远远 下调 蛋白激酶
郧燥则葬蚤援 园园怨郧源圆苑愿园园郾 员 圆 圆园缘 原 员郾 远怨 下调 郧砸粤杂家族转录因子
郧燥则葬蚤援 园园远郧园苑怨愿园园郾 员 怨猿愿 原 圆郾 苑愿 下调 韵悦杂元件结合因子
郧燥则葬蚤援 园园苑郧园愿愿猿园园郾 员 圆 圆猿缘 员郾 员苑 上调 阅晕粤结合蛋白
郧燥则葬蚤援 园园缘郧员苑猿猿园园郾 员 圆 圆园源 员郾 员员 上调 双组分响应调节 粤砸砸员员
郧燥则葬蚤援 园园圆郧员怨缘圆园园郾 员 圆 圆园缘 员郾 园缘 上调 生长素载体蛋白
郧燥则葬蚤援 园园远郧园愿怨怨园园郾 员 圆 愿园源 原 员郾 园源 下调 泛素蛋白连接酶
郧燥则葬蚤援 园园愿郧园园苑圆园园郾 员 员 怨愿怨 原 员郾 员员 下调 赤霉酸受体
郧燥则葬蚤援 园员猿郧员远源苑园园郾 员 圆 员苑苑 原 猿郾 园猿 下调 几丁质诱导赤霉素应答蛋白 员鄄造蚤噪藻
郧燥则葬蚤援 园园苑郧园缘缘怨园园郾 员 圆 圆源怨 原 猿郾 园怨 下调 吲哚乙酸鄄酰氨基合成酶 郧匀猿郾 猿
远缘远
摇 源 期 应用 杂燥造藻曾葬测序技术分析棉花不同抗病品种的数字表达谱
表 远摇 推测与抗枯萎病相关的基因汇总表
栽葬遭造藻 远摇 栽澡藻 泽怎皂皂葬则赠 贼葬遭造藻 燥枣 责则藻泽怎皂葬遭造赠 云怎泽葬则蚤怎皂 憎蚤造贼 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 早藻灶藻泽
类别
悦葬贼藻早燥则赠
基因信息号
郧藻灶藻 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻则
基因长度
蕴藻灶早贼澡 辕 遭责 造燥早圆砸葬贼蚤燥
上调 辕下调
哉责 燥则 凿燥憎灶
基因名称
郧藻灶藻 灶葬皂藻
抗病相关基因 郧燥则葬蚤援 园园缘郧圆缘愿员园园援 员 员 圆园员 原 员源援 员圆 下调 几丁质酶
郧燥则葬蚤援 园园苑郧圆愿员怨园园援 员 怨员圆 原 猿援 愿苑 下调 几丁质酶
郧燥则葬蚤援 园园员郧园猿园源园园援 员 员 猿园苑 原 员援 愿园 下调 几丁质酶 猿
郧燥则葬蚤援 园园圆郧圆园猿缘园园援 员 员 源员怨 原 猿援 猿源 下调 几丁质酶前体
郧燥则葬蚤援 园园愿郧圆苑圆员园园援 员 员 员苑怨 原 员援 远源 下调 酸性几丁质酶
郧燥则葬蚤援 园员员郧员怨愿缘园园援 员 员 源猿苑 原 员援 圆猿 下调 几丁质酶相似蛋白
郧燥则葬蚤援 园园远郧员猿源苑园园援 员 员 猿苑怨 原 员援 愿源 下调 茁鄄员袁猿鄄葡聚糖酶
郧燥则葬蚤援 园园苑郧圆远园园园园援 员 圆 猿苑圆 原 员援 圆源 下调 茁鄄员袁猿鄄葡聚糖酶
郧燥则葬蚤援 园园猿郧园苑苑猿园园援 员 员 苑愿员 猿援 缘缘 上调 内切鄄茁鄄员袁猿鄄葡聚糖酶
郧燥则葬蚤援 园园愿郧园怨怨缘园园援 员 圆 员园怨 员援 缘怨 上调 晕月杂鄄蕴砸砸蛋白
抗病相关的转录因子 郧燥则葬蚤援 园园猿郧园圆远员园园援 员 员 源圆员 员援 源员 上调 粤孕圆 辕 耘砸云转录因子
郧燥则葬蚤援 园员园郧园怨猿缘园园援 员 员 园源远 原 猿援 怨远 下调 粤孕圆 辕 耘砸云转录因子
郧燥则葬蚤援 园员猿郧员远怨缘园园援 员 怨员园 原 猿援 源园 下调 粤孕圆 辕 耘砸云转录因子
郧燥则葬蚤援 园园怨郧猿苑缘苑园园援 员 员 怨愿愿 原 员援 圆园 下调 粤孕圆 辕 耘砸云转录因子
郧燥则葬蚤援 园员园郧园苑园怨园园援 员 员 源缘远 员援 猿员 上调 遭在陨孕
郧燥则葬蚤援 园园远郧园苑怨愿园园援 员 怨猿愿 原 圆援 苑愿 下调 遭在陨孕
郧燥则葬蚤援 园园员郧员源源圆园园援 员 员 圆猿怨 原 员援 圆圆 下调 遭在陨孕
郧燥则葬蚤援 园园苑郧园圆怨圆园园援 员 员 源圆怨 员援 源猿 上调 澡燥皂藻燥凿燥皂葬蚤灶
郧燥则葬蚤援 园园员郧员怨怨圆园园援 员 员 猿怨愿 员援 圆圆 上调 澡燥皂藻燥凿燥皂葬蚤灶
郧燥则葬蚤援 园园远郧园愿苑员园园援 员 苑怨缘 原 猿援 愿圆 下调 匀杂云
郧燥则葬蚤援 园员圆郧园愿缘员园园援 员 愿愿怨 原 圆援 愿愿 下调 宰砸运再
萜类骨干生物合成 郧燥则葬蚤援 园园怨郧猿园远缘园园援 员 员 缘猿怨 原 远援 猿圆 下调 月桂烯合成酶
渊噪燥园园怨园园冤 郧燥则葬蚤援 园园苑郧猿源圆愿园园援 员 圆 园苑猿 原 员援 员怨 下调 甲羟戊酸激酶
郧燥则葬蚤援 园园怨郧员愿源怨园园援 员 员 缘怨猿 原 员援 缘愿 下调 法呢基焦磷酸盐合成酶
郧燥则葬蚤援 园员园郧圆源愿猿园园援 员 员 怨远猿 原 员援 源圆 下调 截短乙酰 悦韵鄄粤乙酰转移酶
郧燥则葬蚤援 园园缘郧圆员缘苑园园援 员 圆 猿猿怨 原 员援 远源 下调 猿 羟甲基戊二酰辅酶 粤还原酶
郧燥则葬蚤援 园园缘郧圆员缘愿园园援 员 圆 圆缘园 原 员援 源源 下调 猿 羟甲基戊二酰辅酶 粤还原酶
郧燥则葬蚤援 园园缘郧圆员缘缘园园援 员 圆 圆苑员 原 员援 猿员 下调 猿 羟甲基戊二酰辅酶 粤还原酶
郧燥则葬蚤援 园园缘郧圆员缘远园园援 员 员 怨园苑 原 员援 圆远 下调 猿 羟甲基戊二酰辅酶 粤还原酶
单萜的生物合成
渊噪燥园园怨园圆冤
郧燥则葬蚤援 园园怨郧猿园远缘园园援 员 员 缘猿怨 原 远援 猿圆 下调 月桂烯合成酶
倍半萜类和三萜类生物
合成渊噪燥园园怨园怨冤
郧燥则葬蚤援 园园圆郧圆猿源远园园援 员 员 怨缘苑 原 猿援 缘苑 下调 驻 原杜松烯合成酶
黄酮类的生物合成 郧燥则葬蚤援 园员猿郧员苑怨园园园援 员 员 远猿圆 原 源援 园远 下调 杂砸郧员 蛋白
渊噪燥园园怨源员冤 郧燥则葬蚤援 园园猿郧员远远员园园援 员 员 远愿苑 原 员援 远圆 下调 孕源缘园 单加氧酶
郧燥则葬蚤援 园园猿郧员远缘愿园园援 员 员 怨苑苑 原 员援 员圆 下调 孕源缘园 单加氧酶
郧燥则葬蚤援 园员员郧员远员猿园园援 员 员 远远愿 员援 园员 上调 查尔酮合成酶
郧燥则葬蚤援 园园怨郧圆猿圆愿园园援 员 员 缘愿圆 原 员援 苑源 下调 黄酮醇合成酶
郧燥则葬蚤援 园园缘郧圆圆怨愿园园援 员 员 猿猿愿 原 猿援 源苑 下调 黄烷酮 猿鄄羟化酶
郧燥则葬蚤援 园员猿郧圆猿怨愿园园援 员 员 圆怨苑 原 员援 员远 下调 赤霉素 猿鄄茁鄄双加氧酶 猿
苑缘远
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
表 远渊续冤
类别
悦葬贼藻早燥则赠
基因信息号
郧藻灶藻 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻则
基因长度
蕴藻灶早贼澡 辕 遭责 造燥早圆砸葬贼蚤燥
上调 辕下调
哉责 燥则 凿燥憎灶
基因名称
郧藻灶藻 灶葬皂藻
郧燥则葬蚤援 园园圆郧圆猿园怨园园援 员 员 远怨远 原 圆援 员怨 下调 责鄄香豆酸 猿鄄羟化酶
郧燥则葬蚤援 园园苑郧园园愿缘园园援 员 员 缘园圆 原 员援 圆苑 下调 类黄酮 猿忆鄄单加氧酶
郧燥则葬蚤援 园园苑郧园园愿苑园园援 员 员 远员怨 原 员援 圆园 下调 类黄酮 猿忆鄄单加氧酶
郧燥则葬蚤援 园员园郧园员缘源园园援 员 员 愿园园 原 员援 缘愿 下调 细胞色素 孕源缘园 愿圆粤猿
郧燥则葬蚤援 园园远郧圆员员员园园援 员 员 缘园猿 原 员援 愿源 下调 细胞色素 孕源缘园 苑远悦源
郧燥则葬蚤援 园园愿郧园源源源园园援 员 员 怨园愿 原 圆援 圆愿 下调 细胞色素 孕源缘园 愿圆糟源
郧燥则葬蚤援 园员园郧园圆员猿园园援 员 员 源怨苑 员援 源圆 上调 未鉴定的乙酰基转移酶
黄酮类的生物合成 郧燥则葬蚤援 园园猿郧员远远员园园援 员 员 远愿苑 原 员援 远圆 下调 孕源缘园 单加氧酶
渊噪燥园园怨源源冤 郧燥则葬蚤援 园园猿郧员远缘愿园园援 员 员 怨苑苑 原 员援 员圆 下调 孕源缘园 单加氧酶
郧燥则葬蚤援 园园圆郧园愿苑圆园园援 员 员 苑园愿 员援 缘猿 上调 哉阅孕葡糖基转移酶
郧燥则葬蚤援 园员员郧圆园圆怨园园援 员 员 源远苑 原 猿援 怨猿 下调 哉阅孕糖基转移酶 苑猿糟圆
郧燥则葬蚤援 园园苑郧园园愿缘园园援 员 员 缘园圆 原 员援 圆苑 下调 类黄酮 猿忆鄄单加氧酶
郧燥则葬蚤援 园园苑郧园园愿苑园园援 员 员 远员怨 原 员援 圆园 下调 类黄酮 猿忆鄄单加氧酶
郧燥则葬蚤援 园园愿郧园源源源园园援 员 员 怨园愿 原 圆援 圆愿 下调 细胞色素 孕源缘园 愿圆糟源
郧燥则葬蚤援 园员园郧园员缘源园园援 员 员 愿园园 原 员援 缘愿 下调 细胞色素 孕源缘园 愿圆粤猿
郧燥则葬蚤援 园园远郧圆员员员园园援 员 员 缘园猿 原 员援 愿源 下调 细胞色素 孕源缘园 苑远悦源
郧燥则葬蚤援 园员员郧圆猿员愿园园援 员 员 圆怨圆 原 圆援 园远 下调 脱氧半棉酚鄄远鄄园鄄甲基转移酶
生物碱的合成渊噪燥园园怨缘园冤 郧燥则葬蚤援 园员园郧圆缘源怨园园援 员 员 苑园源 原 员园援 园猿 下调 多酚氧化酶
郧燥则葬蚤援 园员猿郧员苑员远园园援 员 员 怨猿圆 原 员援 苑源 下调 丙氨酸氨基转移酶家族蛋白
生物碱的合成渊噪燥园园怨远园冤 郧燥则葬蚤援 园员猿郧员苑员远园园援 员 员 怨猿圆 原 员援 苑源 下调 丙氨酸氨基转移酶家族蛋白
植物与病原菌相互作用 郧燥则葬蚤援 园员圆郧园愿缘员园园援 员 愿愿怨 原 圆援 圆愿 下调 宰砸运再
渊噪燥园源远圆远冤 郧燥则葬蚤援 园园圆郧园圆员愿园园援 员 员 圆源苑 原 员援 怨远 下调 栽陨云再 怨
郧燥则葬蚤援 园园远郧园员圆远园园援 员 圆 愿园源 圆援 圆怨 上调 悦晕郧悦圆
郧燥则葬蚤援 园员园郧园怨园远园园援 员 员 苑远园 原 员援 圆源 下调 允粤在员
郧燥则葬蚤援 园园愿郧园园远远园园援 员 员 怨缘源 原 圆援 猿猿 下调 粤栽孕结合蛋白
郧燥则葬蚤援 园园苑郧园愿愿猿园园援 员 圆 圆猿缘 员援 员苑 上调 阅晕粤结合蛋白
郧燥则葬蚤援 园园苑郧圆怨怨缘园园援 员 圆 怨苑怨 原 员援 猿苑 下调 呼吸爆发氧化酶
郧燥则葬蚤援 园园员郧员源源圆园园援 员 员 圆猿怨 原 员援 圆圆 下调 韵悦杂元件结合因子
郧燥则葬蚤援 园园远郧园苑怨愿园园援 员 怨猿愿 原 圆援 苑愿 下调 韵悦杂元件结合因子
郧燥则葬蚤援 园园苑郧园源缘愿园园援 员 猿 员苑怨 原 员援 源源 下调 晕月杂鄄蕴砸砸 抗性蛋白
郧燥则葬蚤援 园园缘郧员圆缘猿园园援 员 怨猿源 原 员援 猿愿 下调 钙结合蛋白
郧燥则葬蚤援 园员园郧园员怨源园园援 员 缘苑远 圆援 缘猿 上调 钙结合蛋白 悦酝蕴员园
郧燥则葬蚤援 园园员郧园愿苑员园园援 员 怨怨源 原 员援 苑愿 下调 钙结合蛋白 悦酝蕴圆猿
郧燥则葬蚤援 园园愿郧圆愿怨远园园援 员 员 园缘园 原 员援 园员 下调 钙结合蛋白 悦酝蕴圆苑
郧燥则葬蚤援 园园苑郧园源圆源园园援 员 苑怨园 原 圆援 员苑 下调 钙结合蛋白 悦酝蕴猿愿
郧燥则葬蚤援 园员猿郧园苑圆远园园援 员 苑愿源 原 员援 苑源 下调 钙结合蛋白 孕月孕员
郧燥则葬蚤援 园员猿郧圆员员员园园援 员 员 源源圆 原 员援 苑苑 下调 富亮氨酸重复的蛋白质 源园
郧燥则葬蚤援 园园愿郧员怨猿缘园园援 员 猿 怨员源 原 员援 缘愿 下调 抗病蛋白 砸郧粤源
郧燥则葬蚤援 园园苑郧猿员怨怨园园援 员 猿 猿怨员 原 员援 愿源 下调 预测院抗病蛋白
愿缘远
摇 源 期 应用 杂燥造藻曾葬测序技术分析棉花不同抗病品种的数字表达谱
表 远渊续冤
类别
悦葬贼藻早燥则赠
基因信息号
郧藻灶藻 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻则
基因长度
蕴藻灶早贼澡 辕 遭责 造燥早圆砸葬贼蚤燥
上调 辕下调
哉责 燥则 凿燥憎灶
基因名称
郧藻灶藻 灶葬皂藻
郧燥则葬蚤援 园园缘郧园圆怨源园园援 员 猿 员猿缘 原 员援 怨源 下调 抗病蛋白 泽造增藻圆 前体
郧燥则葬蚤援 园园怨郧猿园源愿园园援 员 猿 员缘圆 原 员援 缘苑 下调 蛋白激酶
郧燥则葬蚤援 园园愿郧园远园猿园园援 员 圆 园员缘 原 员援 员圆 下调 丝氨酸 辕苏氨酸蛋白激酶
郧燥则葬蚤援 园园怨郧圆员猿苑园园援 员 圆 源缘愿 员援 源缘 上调 丝氨酸 辕苏氨酸蛋白激酶 责遭泽员
郧燥则葬蚤援 园员园郧员远圆苑园园援 员 猿 猿怨园 原 员援 缘苑 下调 丝氨酸 辕苏氨酸蛋白激酶 砸云运员
郧燥则葬蚤援 园园怨郧猿远猿远园园援 员 猿 远愿源 原 圆援 远源 下调 丝氨酸 辕苏氨酸类蛋白激酶
郧燥则葬蚤援 园园苑郧员园员愿园园援 员 圆 猿远怨 员援 园猿 上调 铁螯合还原酶
郧燥则葬蚤援 园园缘郧员苑猿苑园园援 员 员 园园园 原 圆援 员员 下调 硝酸盐诱导蛋白
郧燥则葬蚤援 园园远郧圆员怨源园园援 员 源 园怨员 原 员援 缘员 下调 油菜素甾醇不敏感 员 前体
郧燥则葬蚤援 园员员郧员圆苑园园园援 员 猿 缘苑员 员援 员园 上调 油菜素甾醇 蕴砸砸受体激酶前体
郧燥则葬蚤援 园园苑郧园缘员远园园援 员 圆 源园苑 原 员援 远愿 下调 油菜素甾醇不敏感 员鄄相关受体激酶 员 前体
郧燥则葬蚤援 园园猿郧员猿怨怨园园援 员 员 远园猿 原 员援 员员 下调 有丝分裂激活的蛋白激酶 猿
郧燥则葬蚤援 园园怨郧员园源远园园援 员 员 愿园远 原 员援 远愿 下调 有丝分裂激活的蛋白激酶 猿
图 源摇 杂燥造藻曾葬测序和 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸的表达量比对
云蚤早援 源摇 灾葬造蚤凿葬贼蚤燥灶 燥枣 杂燥造藻曾葬 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早
凿葬贼葬 遭赠 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸
猿摇 讨论
杂燥造藻曾葬测序分析是一种在特定试验条件下研究转
录表达谱的高效且经济的方法咱愿暂 遥 本试验在建立枯
萎病菌诱导不同时期棉花根部基因的表达谱之前袁首
先对高抗枯萎病品种中棉所 员圆 和高感枯萎病品种新
陆早 苑 号进行 杂燥造藻曾葬 测序袁构建标签文库后得到 则葬憎
则藻葬凿泽袁从中筛选出的总的 糟造藻葬灶 则藻葬凿泽都在 猿园园 万以上袁
虽然与参考基因及参考基因组比对后有部分 则藻葬凿泽 无
法与之匹配袁但是研究认为这与 郧藻灶遭葬灶噪 中棉花和相
关物种可用基因序列的缺乏有关咱愿暂 遥 尽管如此仍有
成千上万的 则藻葬凿泽完美匹配或者小于等于 圆遭责匹配袁为
后续差异表达基因的筛选提供了丰富的序列数据遥
植物与病原物在长期的相互作用尧相互适应尧相互
选择乃至协同进化的过程中袁逐渐形成了一系列复杂
的防御机制来保护自己咱圆源暂 遥 植物防御机制分为 圆 种袁
一种是被动防御机制袁主要依赖植物自身的某些结构
特征和特殊化学成分来抵御病原物的侵害袁如细胞壁
的角质尧蜡质尧木质素袁特殊的气孔结构以及小分子抗
病物质等曰另一类是主动防御机制袁即当植物被病原菌
侵染时袁在植物体内产生一系列的生理生化反应袁抑制
或杀死病原体减少对植株的伤害咱圆缘 原 圆远暂 遥 主动防御反
应可分为 圆 种模式院一类是病原生物关联分子模式引
发的免疫反应渊孕栽陨 模式冤袁定位于植物细胞表面的受
体袁识别病原物相关分子后介导的基础抗性袁这种抗病
性具有广谱的非特异性遥 另一类是受效应子激发的免
疫反应 渊耘栽陨模式冤袁是植物细胞内抗病蛋白特异识别
病原菌中的效应分子后袁通过一系列信号转导袁激活或
抑制防卫基因的表达从而抑制病原物的侵入或扩展而
表现为抗病性咱圆苑暂 遥 植物抗病性是许多复杂机制协调
的结果袁涉及到形态尧结构尧生理生化和基因表达调控
等各层次遥
本研究获得 员 园愿园 个显著差异表达基因袁对发挥
核酸结合转录因子活性作用的 员苑 个 怎灶蚤早藻灶藻进行分析
发现袁有 源 个转录因子基因隶属于 粤孕圆 辕 耘砸云 家族袁猿
个转录因子基因隶属于 遭在陨孕家族袁各有 圆 个转录因子
基因 分 别 隶 属 于 杂粤晕栽 家 族尧 晕粤悦 家 族 和
澡燥皂藻燥凿燥皂葬蚤灶 家族袁此外袁 郧砸粤杂 家族袁 宰砸运再 家族袁
怨缘远
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
匀杂云家族和 阅耘载阅家族各有 员 个转录因子基因遥 而大
量的研究表明袁遭在陨孕 家族尧粤孕圆 辕 耘砸云 家族尧宰砸运再 家
族尧澡燥皂藻燥凿燥皂葬蚤灶蛋白以及 匀杂云 蛋白等均与植物的抗
病反应有关袁它们可以与相应基因启动子中的顺式作
用元件发生 阅晕粤鄄蛋白的特异性互作袁从而激活防卫反
应基因的转录表达咱圆愿暂 遥 进一步分析发现有 远 个
怎灶蚤早藻灶藻 与几丁质酶的合成有关袁 猿 个 怎灶蚤早藻灶藻 与
茁鄄员袁猿鄄葡聚糖酶的合成有关袁而几丁质酶和 茁鄄员袁猿鄄葡
聚糖酶是重要的水解酶袁在植物抵御真菌病害的防卫
反应中发挥着重要作用咱圆怨暂 遥 此外袁研究还发现了 员 个
晕月杂鄄蕴砸砸基因渊郧燥则葬蚤援 园园愿郧园怨怨缘园园郾 员冤袁它是植物中最
大类的抗病基因家族之一袁与植物的抗病反应密切相
关咱猿园暂 遥
责葬贼澡憎葬赠分析中虽然存在一些仅仅与植物生长发
育有关的通路袁但仍然可以从中找到萜类尧黄酮类袁生
物碱类等小分子化合物的合成以及通路中参与到的基
因袁这些小分子化合物既可以作为生化壁垒防御病原
物侵染袁也可以作为信号物质参与植物的抗病反
应咱猿员暂 遥 如 愿 个 怎灶蚤早藻灶藻 与 萜 类 骨 干 生 物 合 成
渊噪燥园园怨园园冤 有关袁 圆 个 怎灶蚤早藻灶藻 与单萜的生物合成
渊噪燥园园怨园圆冤有关袁员 个 怎灶蚤早藻灶藻 与倍半萜类和三萜类生
物合成渊噪燥园园怨园怨冤有关袁猿苑 个 怎灶蚤早藻灶藻与黄酮类的生物
合成渊噪燥园园怨源员尧噪燥园园怨源源 等冤有关袁还有 猿 个 怎灶蚤早藻灶藻 与
多种生物碱的合成渊噪燥园园怨缘园尧噪燥园园怨远园冤有关遥 此外袁值
得注意的是本研究中在环境适应和免疫系统中存在着
植物与病原菌相互作用 责葬贼澡憎葬赠渊噪燥园源远圆远冤袁并且注释
了多达 远源 个显著差异表达基因袁这些都可以作为后续
研究的重点遥
植物内源激素在植物受到生物胁迫和非生物胁迫
中发挥重要的作用咱猿圆暂 遥 一般研究认为袁植物激素水杨
酸尧茉莉酸和乙烯是植物抗病信号转导途径中的重要
调控因子咱猿猿暂 遥 此外袁植物激素脱落酸尧生长素尧赤霉
素尧细胞分裂素等也被报道参与调控植物对病原菌的
抗性咱猿源暂 遥 因此在 员员圆 条 责葬贼澡憎葬赠中本研究重点关注植
物激素信号转导代谢通路渊运燥园源园苑缘冤遥
涉及到该 责葬贼澡憎葬赠的 圆远 个已知功能的基因中袁有
源 个基因与 粤孕圆 辕 耘砸云 转录因子有关遥 研究表明它们
是一类与乙烯信号途径相关袁在植物抗病机制中发挥
重要调控作用的转录因子咱猿缘暂 遥 它作为植物特有的一
类转录因子袁其保守的 粤孕圆 辕 耘砸云结构域能够与病程相
关蛋白基因启动子中的 郧悦悦鄄遭燥曾 元件特异识别并稳
定结合咱猿远暂 袁进而启动下游病程相关蛋白基因的表达袁
增强植株的抗病性遥 孕则藻 等咱猿苑暂研究发现袁在拟南芥中
过量表达 粤贼耘砸云圆尧韵砸粤缘怨 或 耘砸云员 后袁植株对枯萎病尧
灰霉病等病害的抗性提高了袁而 韵砸粤缘怨 功能丧失突变
体的抗病性则降低了遥 云蚤泽糟澡藻则 等咱猿愿暂 在过量表达
晕贼耘砸云缘 基因的烟草中发现袁植株中的花叶病毒的复制
得到了限制袁植株的抗病性相因增加遥 何兰兰等咱猿怨暂研
究发现 耘砸云鄄月猿 亚组转录因子基因 郧澡月猿园员渊郧藻灶遭葬灶噪院
运悦圆圆圆园员缘冤袁在受到枯萎病菌诱导后袁在抗病品种根中
的表达量显著高于感病品种袁在乙烯尧水杨酸尧干旱尧低
温及高盐的诱导下表达量均发生变化曰表明该基因可
能参与了棉花对病原菌尧激素及非生物胁迫的应答反
应遥
源 个基因与 蕴砸砸类受体丝氨酸 辕苏氨酸鄄蛋白激酶
渊猿 个基因冤或蛋白激酶渊员 个基因冤有关袁缘 个基因与
蛋白磷酸酶 圆悦有关遥 蛋白激酶和蛋白磷酸酶彼此互
为对立袁但又相辅相成遥 研究表明蛋白激酶对植物鄄病
原菌互作反应起到调节作用袁并且抗病基因与之也存
在着联系咱源园暂 遥 杂燥灶早等咱源员暂曾克隆 员 个水稻抗白叶枯病
基因 载葬圆员袁其位于羧基端的保守序列显示它属于丝氨
酸 辕苏氨酸鄄蛋白激酶家族袁 其结构与拟南芥中的受体
蛋白激酶类似遥 而蛋白质序列分析表明在其氨基端含
有 蕴砸砸 区渊造藻怎糟蚤灶藻鄄 则蚤糟澡 则藻早蚤燥灶冤袁蕴砸砸区参与蛋白质相
互作用袁这似乎表明袁蕴砸砸 蛋白与蛋白激酶在植物抗
病的信号传递过程中相互作用咱源圆暂 曰而蛋白磷酸酶 圆悦
更是可以参与植物的抗病反应咱源猿暂 遥 在该 责葬贼澡憎葬赠中也
发现生长素应答蛋白尧生长素载体蛋白以及吲哚乙酸
酰氨基合成酶 郧匀猿郾 猿尧郧匀猿郾 远 等与生长素相关的基
因袁大量的研究表明生长素能够削弱植物抗病防御反
应袁相反阻断生长素信号通路能增强植物的抗病能力遥
同时生长素早期响应基因 郧匀猿 编码生长素结合酶袁通
过减少游离生长素的水平对生长素起到反馈调节的作
用遥 郧匀猿 基因被认为能够调控植物的生长发育以适
应外界变化咱源源暂 曰水稻 郧匀猿郾 愿 过量表达后能增强水稻
对白叶枯病菌的抗性咱猿圆暂 遥
通过对 员 园愿园 个显著差异表达基因的分析发现了
多个与植物抗病反应相关的基因袁推测这些基因可能
最终与抗感品种对枯萎病表现不同的抗病反应密切相
关袁这将作为后续实验研究的重点内容遥 同时这员 园愿园
个显著差异表达基因中可能存在更多与棉花抗枯萎病
相关的基因袁这为筛选抗枯萎病相关基因提供了丰富
的候选基因袁并为进一步研究棉花抗枯萎病的分子调
控机制奠定了基础遥 另外在显著差异表达基因中有
源源苑 个是没有功能注释尧没有报道的基因袁它们的差异
表达原因及作用机制还不清楚袁有待开展更深入的研
究遥
园远远
摇 源 期 应用 杂燥造藻曾葬测序技术分析棉花不同抗病品种的数字表达谱
源摇 结论
本研究利用 杂燥造藻曾葬 测序技术袁分析棉花高抗枯萎
病品种中棉所 员圆 和高感枯萎病品种新陆早 苑 号幼苗
根系的基因表达情况袁发现 圆怨 苑远园 个差异表达基因袁
其中显著差异表达基因 员 园愿园 个袁这些差异表达基因
广泛涉及糖尧蛋白尧核酸和脂类等生物大分子代谢尧能
量代谢以及次生代谢袁信号转导和遗传信息处理等过
程遥 在植物激素信号转导通路分析中袁涉及到的 圆远 个
已知功能基因中袁有 员猿 个基因都可能参与植物的抗病
反应遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 赵郑华袁徐国强援棉花枯萎病的症状与防治方法咱 允暂 援江西棉花袁
圆园员员袁 猿猿渊猿冤院 远猿 原 远源
咱 圆 暂摇 吴征彬袁杨业华袁刘小丰袁王强援枯萎病对棉花产量和纤维品质的
影响咱允暂 援棉花学报袁 圆园园源袁 员远渊源冤院 圆猿远 原 圆猿怨
咱 猿 暂 摇 王曦袁汪小我袁王立坤袁冯智星袁张学工援新一代高通量 砸晕粤 测序
数据的处理与分析咱 允暂 援 生物化学与生物物理进展袁 圆园员园袁 猿苑
渊愿冤院 愿猿源 原 愿源远
咱 源 暂摇 谢为博援基于表达谱芯片和新一代测序技术的高通量基因分型
方法的开发咱阅暂援武汉院华中农业大学袁 圆园员园
咱 缘 暂 摇 魏利斌袁苗红梅袁张海洋援芝麻发育转录组分析咱 允暂 援中国农业科
学袁 圆园员圆袁 源缘渊苑冤院 员圆源远 原 员圆缘远
咱 远 暂摇 宋雯雯袁李文滨袁韩雪袁高慕娟袁王继安援 干旱胁迫下大豆幼苗根
系基因的表达谱分析咱允暂 援 中国农业科学袁 圆园员园袁 源猿渊圆圆冤院 源缘苑怨
原 源缘愿远
咱 苑 暂摇 孙爱清袁张杰道袁万勇善袁刘风珍袁张昆袁孙利援花生干旱胁迫响应
基因的数字表达谱分析咱 允暂 援 作物学报袁 圆园员猿袁 猿怨渊远冤院 员园源缘 原
员园缘猿
咱 愿 暂 摇 宰葬灶早 郧袁 在澡怎 匝 郧袁 酝藻灶早 匝 宰袁 宰怎 悦 郧援 栽则葬灶泽糟则蚤责贼 责则燥枣蚤造蚤灶早
凿怎则蚤灶早 泽葬造贼 泽贼则藻泽泽 燥枣 赠燥怎灶早 糟燥贼贼燥灶 渊郧燥泽泽赠责蚤怎皂 澡蚤则泽怎贼怎皂冤 泽藻藻凿造蚤灶早泽 增蚤葬
杂燥造藻曾葬 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 咱 允暂 援 粤糟贼葬 孕澡赠泽蚤燥造燥早蚤葬糟 孕造葬灶贼葬则怎皂袁 圆园员圆袁 猿源
渊员冤院 员园苑 原 员员缘
咱 怨 暂 摇 宰怎 允袁 在澡葬灶早 再 蕴袁 在澡葬灶早 匀 匝袁 匀怎葬灶早 匀袁运藻增蚤灶 酝 云袁 蕴怎 允援 宰澡燥造藻
早藻灶燥皂藻 憎蚤凿藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责则燥枣蚤造藻泽 燥枣 灾蚤贼蚤泽 葬皂怎则藻灶泽蚤泽 早则葬责藻 则藻泽责燥灶凿蚤灶早
贼燥 凿燥憎灶赠 皂蚤造凿藻憎 遭赠 怎泽蚤灶早 杂燥造藻曾葬 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 贼藻糟澡灶燥造燥早赠咱 允暂 援 月酝悦
孕造葬灶贼 月蚤燥造燥早赠袁 圆园员园袁 员园渊员冤院 圆猿源
咱员园暂摇 再怎 杂 悦袁 在澡葬灶早 云 蕴袁再怎 再 再袁 在澡葬灶早 阅 杂袁 在澡葬燥 载 再袁 宰葬灶早 宰 匀援
栽则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻 责则燥枣蚤造蚤灶早 燥枣 凿藻澡赠凿则葬贼蚤燥灶 泽贼则藻泽泽 蚤灶 贼澡藻 悦澡蚤灶藻泽藻 糟葬遭遭葬早藻
渊月则葬泽泽蚤糟葬 则葬责葬 蕴援 泽泽责援 责藻噪蚤灶藻灶泽蚤泽冤 遭赠 贼葬早 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 咱 允暂 援 孕造葬灶贼
酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠 砸藻责燥则贼藻则袁 圆园员圆袁 猿园渊员冤院 员苑 原 圆愿
咱员员暂摇 孕葬灶早 栽袁 再藻 悦 再袁 载蚤葬 载 蕴袁 再蚤灶 宰 蕴援 阅藻 灶燥增燥 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 葬灶凿
贼则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 凿藻泽藻则贼 泽澡则怎遭袁 粤皂皂燥责蚤责贼葬灶贼澡怎泽
皂燥灶早燥造蚤糟怎泽袁 凿怎则蚤灶早 糟燥造凿 葬糟糟造蚤皂葬贼蚤燥灶 怎泽蚤灶早 陨造造怎皂蚤灶葬 辕 杂燥造藻曾葬 咱 允 暂 援
月酝悦 早藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园员猿袁 员源渊源冤院 圆园远 原 圆员员
咱员圆暂摇 杂澡葬灶 载 匀袁 蕴蚤 再 阅袁 允蚤葬灶早 再袁 允蚤葬灶早 在 蕴袁 匀葬燥 宰 再袁 再怎葬灶 再 孕援
栽则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻 责则燥枣蚤造藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 皂葬蚤扎藻 泽藻藻凿造蚤灶早泽 蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 澡蚤早澡鄄
泽葬造蚤灶蚤贼赠袁 凿则燥怎早澡贼 葬灶凿 糟燥造凿 泽贼则藻泽泽藻泽 遭赠 凿藻藻责 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 咱 允暂 援 孕造葬灶贼
酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠 砸藻责燥则贼藻则袁 圆园员猿袁 猿员渊远冤院 员源愿缘 原 员源怨员
咱员猿暂摇 粤灶凿则藻憎 允援 悦袁 蕴蚤怎 阅 悦袁 砸葬皂蚤造 酝袁 再怎藻 陨 悦 匀袁 砸葬糟澡蚤凿 杂援
栽则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻 责则燥枣蚤造蚤灶早 燥枣 造藻葬枣 藻造燥灶早葬贼蚤燥灶 扎燥灶藻 怎灶凿藻则 凿则燥怎早澡贼 蚤灶
糟燥灶贼则葬泽贼蚤灶早 则蚤糟藻 糟怎造贼蚤增葬则泽咱允暂 援 孕蕴燥杂 燥灶藻袁 圆园员猿袁 愿渊员冤院 藻缘源缘猿苑
咱员源暂摇 悦澡藻灶 允 匀袁 杂燥灶早 再 孕袁 在澡葬灶早 匀袁 在澡葬灶早 阅 匝援 郧藻灶燥皂藻鄄憎蚤凿藻 葬灶葬造赠泽蚤泽
燥枣 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 凿则燥怎早澡贼 泽贼则藻泽泽 蚤灶 孕燥责怎造怎泽 泽蚤皂燥灶蚤蚤
咱允暂 援 孕造葬灶贼 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠 砸藻责燥则贼藻则袁 圆园员猿袁 猿员渊源冤院 怨源远 原 怨远圆
咱员缘暂摇 杂燥灶早 再 孕袁 悦澡藻灶 匝 匝袁 悦蚤 阅袁 在澡葬灶早 阅 匝援 栽则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻 责则燥枣蚤造蚤灶早
则藻增藻葬造泽 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造 贼则葬灶泽糟则蚤责贼 葬遭怎灶凿葬灶糟藻 蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 糟澡蚤造造蚤灶早 泽贼则藻泽泽
蚤灶 孕燥责怎造怎泽 泽蚤皂燥灶蚤蚤咱允暂 援 孕造葬灶贼 糟藻造造 则藻责燥则贼泽袁 圆园员猿袁 猿圆渊怨冤院 员源园苑 原
员源圆缘
咱员远暂摇 宰葬灶早 再袁 载怎 蕴袁 悦澡藻灶 再 蕴袁 杂澡藻灶 匀袁 郧燥灶早 再 匝袁悦藻糟蚤造蚤葬 蕴袁 蕴蚤怎 蕴
宰援 栽则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻 责则燥枣蚤造蚤灶早 燥枣 则葬凿蚤泽澡 渊砸葬责澡葬灶怎泽 泽葬贼蚤增怎泽 蕴援 冤 则燥燥贼 葬灶凿
蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 早藻灶藻泽 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 造藻葬凿 渊孕遭冤 泽贼则藻泽泽 憎蚤贼澡
灶藻曾贼 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早咱允暂 援 孕蕴韵杂 韵晕耘袁 圆园员猿袁 愿渊远冤院 藻远远缘猿怨
咱员苑暂摇 宰藻 酝 酝袁 杂燥灶早 酝 在袁 云葬灶 杂 蕴袁 再怎 杂 载援 栽则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣
凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻泽 凿怎则蚤灶早 葬灶贼澡藻则 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 蚤灶 早藻灶藻贼蚤糟
皂葬造藻 泽贼藻则蚤造藻 葬灶凿 憎蚤造凿 贼赠责藻 糟燥贼贼燥灶 遭赠 凿蚤早蚤贼葬造 早藻灶藻鄄藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责则燥枣蚤造蚤灶早
咱允暂 援 月酝悦 早藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园员猿袁 员源渊员冤院 怨猿园 原 怨猿愿
咱员愿暂摇 杂澡藻灶 再 韵袁 允蚤葬灶早 在袁 再葬燥 载 阅袁 在澡葬灶早 在 酝袁 蕴蚤灶 匀 允袁 在澡葬燥 酝 允袁 蕴蚤怎
匀 蕴袁 孕藻灶早 匀 宰袁 蕴蚤 杂 允袁 孕葬灶 郧 栽援 郧藻灶燥皂藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责则燥枣蚤造藻
葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 蚤皂皂葬贼怎则藻 皂葬蚤扎藻 藻皂遭则赠燥 凿怎则蚤灶早 凿藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶咱 允暂 援
孕蕴韵杂 韵晕耘袁 圆园员圆袁 苑渊猿冤院 藻猿圆圆猿苑
咱员怨暂摇 彭姗袁吕学莲袁高峰袁李国英袁李晖援一种新的棉花黄袁枯萎病快速
接种方法的研究咱允暂 援棉花学报袁 圆园园愿袁 圆园渊猿冤院 员苑源 原 员苑愿
咱圆园暂摇 酝怎则则葬赠 酝 郧袁 栽澡燥皂责泽燥灶 宰 云援 砸葬责蚤凿 蚤泽燥造葬贼蚤燥灶 燥枣 澡蚤早澡 皂燥造藻糟怎造葬则
憎藻蚤早澡贼 责造葬灶贼 阅晕粤咱 允暂 援 晕怎糟造藻蚤糟 粤糟蚤凿泽 砸藻泽藻葬则糟澡袁 员怨愿园袁 愿 渊员怨冤院
源猿圆员 原 源猿圆远
咱圆员暂摇 酝燥则贼葬扎葬增蚤 粤袁 宰蚤造造蚤葬皂泽 月 粤袁 酝糟悦怎藻 运澡袁 杂糟澡葬藻枣枣藻则 蕴袁 宰燥造凿 月援
酝葬责责蚤灶早 葬灶凿 择怎葬灶贼蚤枣赠蚤灶早 皂葬皂皂葬造蚤葬灶 贼则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻泽 遭赠 砸晕粤鄄杂藻择
咱允暂 援 晕葬贼怎则藻 酝藻贼澡燥凿泽袁 圆园园愿袁 缘渊苑冤院 远圆员 原 远圆愿
咱圆圆暂摇 粤怎凿蚤糟 杂袁 悦造葬增藻则蚤藻 允 酝援 栽澡藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻 燥枣 凿蚤早蚤贼葬造 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
责则燥枣蚤造藻泽咱允暂 援 郧藻灶燥皂藻 砸藻泽藻葬则糟澡袁 员怨怨苑袁 苑渊员园冤院 怨愿远 原 怨怨缘
咱圆猿暂摇 再燥葬增 月蚤袁 阅葬灶 阅袁 郧则藻早 耘袁 晕藻则蚤 运袁 陨造葬灶 郧援 悦燥灶贼则燥造造蚤灶早 贼澡藻 枣葬造泽藻
凿蚤泽糟燥增藻则赠 则葬贼藻 蚤灶 遭藻澡葬增蚤燥则 早藻灶藻贼蚤糟泽 则藻泽藻葬则糟澡咱 允暂 援 月藻澡葬增蚤燥怎则葬造 月则葬蚤灶
砸藻泽藻葬则糟澡袁 圆园园员袁 员圆缘渊员冤院 圆苑怨 原 圆愿源
咱圆源暂摇 董继新袁董海涛袁李德葆援植物抗病基因研究进展咱 允暂 援植物病理
学报袁 圆园园员袁猿员 渊员冤院 员 原 愿园
咱圆缘暂摇 杂贼藻责澡藻灶 栽 悦袁 郧蚤贼贼葬 悦袁 月则葬凿 阅袁 月则蚤葬灶 允 杂援 匀燥泽贼鄄皂蚤糟则燥遭藻
蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽院 泽澡葬责蚤灶早 贼澡藻 藻增燥造怎贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 责造葬灶贼 蚤皂皂怎灶藻 则藻泽责燥灶泽藻
咱允暂 援 悦藻造造袁 圆园园远袁 员圆源渊源冤院愿园猿 原 愿员源
咱圆远暂摇 孕蚤藻贼藻则泽藻 悦 酝 允袁 蕴藻燥灶鄄砸 粤袁 灾葬灶凿藻则 耘 杂袁 灾葬灶 宰 杂 悦 酝援 晕藻贼憎燥则噪蚤灶早
遭赠 泽皂葬造造鄄皂燥造藻糟怎造藻 澡燥则皂燥灶藻泽 蚤灶 责造葬灶贼 蚤皂皂怎灶蚤贼赠咱允暂 援 晕葬贼怎则藻 悦澡藻皂蚤糟葬造
月蚤燥造燥早赠袁 圆园园怨袁缘渊缘冤院猿园愿 原 猿员远
咱圆苑暂摇 允燥灶藻泽 允 阅 郧袁 阅葬灶早造 允 蕴援 栽澡藻 责造葬灶贼 蚤皂皂怎灶藻 泽赠泽贼藻皂 咱 允暂 援 晕葬贼怎则藻袁
圆园园远袁源源源渊苑员员苑冤院猿圆猿 原 猿圆怨
咱圆愿暂摇 罗红丽袁陈银华援植物抗病反应相关转录因子的研究进展咱允暂 援热
带生物学报袁 圆园员员袁 圆渊员冤院 愿猿 原 愿愿
咱圆怨暂摇 简桂良袁倪万潮袁杨红华袁王志兴袁孙文姬袁张保龙袁王晓峰袁马存袁
贾士荣援转几丁质酶和 茁 原员袁猿 原葡聚糖酶基因提高棉花对枯萎
病和黄萎病的抗性咱允暂 援中国农业科学袁圆园园缘袁猿愿渊远冤院员员远园 原 员员远远
咱猿园暂摇 刘云飞袁万红建袁韦艳萍袁李志邈袁叶青静袁王荣青袁阮美颖袁姚祝
员远远
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员缘袁圆怨渊源冤院园远缘员 耀 园远远圆
平袁周国治袁杨悦俭援番茄 晕月杂鄄蕴砸砸抗病基因家族全基因组分析
咱允暂 援核农学报袁圆园员源袁圆愿渊缘冤院苑怨园 原 苑怨怨
咱猿员暂摇 郭艳玲袁张鹏英袁郭默然袁陈靠山援次生代谢产物与植物抗病防御
反应咱允暂 援植物生理学报袁 圆园员圆袁 源愿渊缘冤院 源圆怨 原 源猿源援
咱猿圆暂摇 骆琰妍袁李魏袁戴良英援 不同激素信号途径在植物抗病中的相互
作用研究进展咱允暂 援中国农学通报袁 圆园员猿袁 圆怨渊员愿冤院 员缘猿 原 员缘苑
咱猿猿暂摇 李小白袁王雪艳袁舒小丽袁吴殿星援植物类病斑突变体的信号途径
与抗病性研究进展咱允暂 援核农学报袁 圆园园怨袁 圆猿渊源冤院 远猿员 原 远猿愿
咱猿源暂摇 杂贼藻增藻灶 匀 杂袁 阅燥灶早 载 晕援 酝葬噪蚤灶早 泽藻灶泽藻 燥枣 澡燥则皂燥灶藻 糟则燥泽泽贼葬造噪 凿怎则蚤灶早
责造葬灶贼 蚤皂皂怎灶藻 则藻泽责燥灶泽藻泽咱 允暂 援 悦藻造造 匀燥泽贼 驭 酝蚤糟则燥遭藻袁 圆园园愿袁 猿渊远冤院
猿源愿 原 猿缘员
咱猿缘暂摇 孟宪鹏援海岛棉抗病相关 耘砸云 转录因子的克隆与鉴定咱阅暂援 北
京院中国农业科学院袁 圆园园怨
咱猿远暂摇 庄静袁彭日荷袁高峰袁付晓燕援 沪油 员缘 中两个 粤孕圆 辕 耘砸云鄄月员 亚族
转录因子的克隆与分析咱允暂 援核农学报袁圆园园怨袁圆猿渊猿冤院源猿缘 原 源源员
咱猿苑暂摇 孕则佴 酝袁 粤贼葬造造葬澡 酝袁 悦澡葬皂责蚤燥灶 粤袁 阅藻 灾燥泽 酝袁 孕蚤藻贼藻则泽藻 悦 酝 允袁
酝藻皂藻造蚤灶噪 允援 栽澡藻 粤孕圆 辕 耘砸云 凿燥皂葬蚤灶 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则 韵砸粤缘怨
蚤灶贼藻早则葬贼藻泽 躁葬泽皂燥灶蚤糟 葬糟蚤凿 葬灶凿 藻贼澡赠造藻灶藻 泽蚤早灶葬造泽 蚤灶 责造葬灶贼 凿藻枣藻灶泽藻咱 允暂 援
孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园愿袁 员源苑渊猿冤院 员猿源苑 原 员猿缘苑
咱猿愿暂摇 云蚤泽糟澡藻则 哉袁 阅则觟早藻 蕴 宰援 韵增藻则藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 晕贼耘砸云缘袁 葬 灶藻憎 皂藻皂遭藻则
燥枣 贼澡藻 贼燥遭葬糟糟燥 藻贼澡赠造藻灶藻 则藻泽责燥灶泽藻 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则 枣葬皂蚤造赠 藻灶澡葬灶糟藻泽
则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 贼燥遭葬糟糟燥 皂燥泽葬蚤糟 增蚤则怎泽 咱 允暂 援 酝燥造藻糟怎造葬则 孕造葬灶贼鄄酝蚤糟则燥遭藻
陨灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽袁 圆园园源袁 员苑渊员园冤院 员员远圆 原 员员苑员
咱猿怨暂摇 何兰兰袁柴蒙亮袁韩泽刚袁赵增强袁张薇援棉花抗枯萎病相关 耘砸云鄄
月猿 亚组转录因子的克隆与表达咱 允暂 援 西北植物学报袁圆园员猿袁猿猿
渊员圆冤院圆猿苑缘 原 圆猿愿员
咱源园暂摇 张春宝袁赵丽梅袁赵洪锟袁董英山援植物蛋白激酶研究进展咱允暂 援生
物技术通报袁 圆园员员 渊员园冤院 员苑 原 圆猿
咱源员暂摇 杂燥灶早 宰 再袁 宰葬灶早 郧 蕴袁 悦澡藻灶 蕴 蕴袁匀葬灶杂怎噪 运袁 孕蚤 蕴 再袁栽燥皂 匀袁
郧葬则凿灶藻则允袁 宰葬灶早 月袁 在澡葬蚤 宰 载袁 在澡怎 蕴 匀袁 悦造葬怎凿藻 云袁孕葬皂藻造葬 砸援 粤
则藻糟藻责贼燥则 噪蚤灶葬泽藻鄄造蚤噪藻 责则燥贼藻蚤灶 藻灶糟燥凿藻凿 遭赠 贼澡藻 则蚤糟藻 凿蚤泽藻葬泽藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻
早藻灶藻袁 载葬圆员咱允暂 援 杂糟蚤藻灶糟藻袁 员怨怨缘袁 圆苑园渊缘圆源猿冤院 员愿园源 原 员愿园远
咱源圆暂摇 周庆红袁李成琼袁匡全援植物蛋白激酶研究进展咱允暂 援生物学杂志袁
圆园园猿袁 圆园渊猿冤院 员 原 源
咱源猿暂摇 胡学博袁宋凤鸣袁郑重援高等植物中蛋白磷酸酶 圆悦的结构与功能
咱允暂 援细胞生物学杂志袁 圆园园缘袁 圆苑渊员冤院 圆怨 原 猿源
咱源源暂摇 温小杰袁张学勇袁郝晨阳袁蒲文袁刘旭援 植物激素信号传导途径研
究进展咱允暂 援中国农业科技导报袁 圆园员园袁 员圆渊远冤院 员园 原 员苑
阅蚤早蚤贼葬造 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 孕则燥枣蚤造藻 燥枣 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 悦燥贼贼燥灶 渊郧燥泽泽赠责蚤怎皂 澡蚤则泽怎贼怎皂冤
悦怎造贼蚤增葬则泽 砸藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 云怎泽葬则蚤怎皂 宰蚤造贼 阅蚤泽藻葬泽藻 遭赠 杂燥造藻曾葬 杂藻择怎藻灶糟蚤灶早
匀粤晕 在藻早葬灶早员 摇 在匀粤韵 在藻灶早择蚤葬灶早员 摇 匀耘 蕴葬灶造葬灶员 摇 悦匀粤陨 酝藻灶早造蚤葬灶早圆 摇 蕴陨 匀怎蚤澡怎蚤员 摇 在匀粤晕郧 宰藻蚤员
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粤遭泽贼则葬糟贼院云怎泽葬则蚤怎皂 憎蚤造贼 蚤泽 葬 憎燥则造凿憎蚤凿藻 泽藻则蚤燥怎泽 凿蚤泽藻葬泽藻 葬灶凿 糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤灶早 凿蚤早蚤贼葬造 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责则燥枣蚤造藻泽 燥枣 增葬则蚤燥怎泽
增葬则蚤藻贼蚤藻泽 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 贼燥 枣怎泽葬则蚤怎皂 憎蚤造贼 凿蚤泽藻葬泽藻 憎蚤造造 责则燥增蚤凿藻 葬 贼澡藻燥则藻贼蚤糟葬造 遭葬泽蚤泽 枣燥则 枣怎则贼澡藻则 泽贼怎凿赠 燥灶 皂燥造藻糟怎造葬则 则藻早怎造葬贼蚤燥灶
皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 葬灶凿 泽糟则藻藻灶蚤灶早 则藻造葬贼藻凿 早藻灶藻泽 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 贼燥 贼澡藻 凿蚤泽藻葬泽藻 匀蚤早澡 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 枣怎泽葬则蚤怎皂 憎蚤造贼 凿蚤泽藻葬泽藻 怎责造葬灶凿 糟燥贼贼燥灶
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藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 糟燥贼贼燥灶 泽藻藻凿造蚤灶早 则燥燥贼 贼蚤泽泽怎藻 遭赠 杂燥造藻曾葬 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 贼藻糟澡灶燥造燥早赠援 粤枣贼藻则 杂燥造藻曾葬 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早袁 憎藻 遭怎蚤造贼 葬 贼葬早 造蚤遭则葬则赠
葬泽 皂葬灶赠 葬泽 猿援 缘 皂蚤造造蚤燥灶 则藻葬凿泽袁 贼澡藻灶 泽藻造藻糟贼藻凿 葬灶凿 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 员 园愿园 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻泽袁 憎澡蚤糟澡
蚤灶糟造怎凿藻凿 猿园圆 怎责鄄则藻早怎造葬贼藻凿 早藻灶藻泽 葬灶凿 苑苑愿 凿燥憎灶鄄则藻早怎造葬贼藻凿 早藻灶藻泽援 栽澡藻 早藻灶藻 枣怎灶糟贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻泽藻 葬灶灶燥贼葬贼藻凿
早藻灶藻泽 糟燥怎造凿 遭藻 凿蚤增蚤凿藻凿 蚤灶贼燥 贼澡则藻藻 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 葬灶灶燥贼葬贼蚤燥灶 燥灶则燥造燥早赠袁 皂燥造藻糟怎造葬则 枣怎灶糟贼蚤燥灶袁 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 责则燥糟藻泽泽藻泽袁 葬灶凿 糟藻造造怎造葬则
糟燥皂责燥灶藻灶贼泽袁 葬灶凿 贼澡藻灶 枣怎则贼澡藻则 遭藻 泽怎遭凿蚤增蚤凿藻凿 蚤灶贼燥 猿苑 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 糟葬贼藻早燥则蚤藻泽援 员员圆 皂藻贼葬遭燥造蚤糟 责葬贼澡憎葬赠泽 葬灶凿 葬灶灶燥贼葬贼藻凿 员 圆猿愿
泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻泽 憎藻则藻 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿袁 憎澡蚤糟澡 蚤灶增燥造增藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂袁 早造赠糟葬灶 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽
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早藻灶藻泽 蚤灶增燥造增蚤灶早 蚤灶 责造葬灶贼 澡燥则皂燥灶藻 泽蚤早灶葬造 贼则葬灶泽凿怎糟贼蚤燥灶 责葬贼澡憎葬赠袁 葬灶凿 源 早藻灶藻泽 藻灶糟燥凿蚤灶早 粤孕圆 辕 耘砸云 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则泽袁 源
早藻灶藻泽 则藻造葬贼蚤灶早 贼燥 蕴砸砸 则藻糟藻责贼燥则鄄造蚤噪藻 泽藻则蚤灶藻 辕 贼澡则藻燥灶蚤灶藻鄄责则燥贼藻蚤灶 噪蚤灶葬泽藻 燥则 责则燥贼藻蚤灶 噪蚤灶葬泽藻袁 缘 早藻灶藻泽 葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 憎蚤贼澡 责则燥贼藻蚤灶
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云怎泽葬则蚤怎皂 憎蚤造贼 葬贼 贼澡藻 贼则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻 造藻增藻造袁 葬灶凿 澡藻灶 葬 造葬则早藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻泽 憎藻则藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿 枣燥则 葬
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