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INDUCTION, HIGH FREQUENCY REGENERATION AND ULTRASTRUCTURE OF EMBRYOGENIC CALLUS FROM ORNAMENTAL PINEAPPLE

观赏凤梨胚性愈伤组织的诱导、高频再生及超微结构研究



全 文 :摇 核 农 学 报摇 圆园员员袁圆缘渊远冤院员员缘苑 耀 员员远猿允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员员鄄员员鄄圆源摇 接受日期院圆园员员鄄园怨鄄猿园
基金项目院浙江省科技厅重大科技专项重点农业项目渊圆园园怨悦员圆园怨缘冤
作者简介院张国芳渊员怨愿缘鄄冤袁女袁浙江金华人袁硕士袁研究方向为植物组培与转基因遥 栽藻造院员缘愿远苑圆怨苑怨缘猿曰耘鄄皂葬蚤造院扎澡葬灶早早怎燥枣葬灶早源园员岳 员远猿郾 糟燥皂
通讯作者院毛碧增渊员怨苑圆鄄冤袁女袁浙江杭州人袁副研究员袁硕士生导师袁研究方向为植物组培与基因工程育种遥 栽藻造院园缘苑员鄄愿愿怨愿圆远苑愿曰耘鄄皂葬蚤造院皂葬燥遭扎岳
扎躁怎援 藻凿怎援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员员冤园远鄄员员缘苑鄄园苑
观赏凤梨胚性愈伤组织的诱导尧高频再生
及超微结构研究
张国芳摇 陆广欣摇 陈丽闽摇 毛碧增
渊浙江大学生物技术研究所 辕水稻生物学国家重点实验室袁农业部作物病虫害分子
生物学重点开放实验室袁 浙江 杭州摇 猿员园园圆怨冤
摘摇 要院以观赏凤梨耶名宝剑爷的短缩茎为外植体袁研究了不同激素及浓度组合对愈伤组织诱导和植株分
化的影响袁并通过形态学和组织细胞学观察了不同类型愈伤组织的超微结构和胚性愈伤组织的分化过
程遥 结果表明院晕粤粤对愈伤组织诱导的影响达到极显著水平渊孕 越 园郾 园园员怨冤袁其中 园郾 缘皂早 辕 蕴 晕粤粤 最有利
于提高愈伤组织的诱导率和胚性愈伤组织的比例袁最佳诱导培养基为 酝杂 垣 圆郾 园皂早 辕 蕴 远鄄月粤 垣 园郾 缘皂早 辕 蕴
晕粤粤 垣圆郾 园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅袁诱导率高达 愿园豫 曰远鄄月粤和 晕粤粤组合有利于加快胚性愈伤组织的分化和提高不
定芽分化频率袁胚性愈伤组织在 酝杂 垣园郾 缘皂早 辕 蕴 远鄄月粤 垣园郾 员皂早 辕 蕴 晕粤粤培养基上分化效率达到 员园园豫 遥 电
镜观察发现院胚性愈伤组织结构紧密袁细胞较小袁细胞内含物丰富袁细胞代谢旺盛曰非胚性愈伤组织结构
疏松袁细胞体积巨大袁内含大液泡袁基本无内含物曰胚性愈伤组织在分化过程中细胞形态存在很大差异遥
关键词院观赏凤梨曰短缩茎曰胚性愈伤组织曰再生植株曰超微结构
陨晕阅哉悦栽陨韵晕袁 匀陨郧匀 云砸耘匝哉耘晕悦再 砸耘郧耘晕耘砸粤栽陨韵晕 粤晕阅 哉蕴栽砸粤杂栽砸哉悦栽哉砸耘
韵云 耘酝月砸再韵郧耘晕陨悦 悦粤蕴蕴哉杂 云砸韵酝 韵砸晕粤酝耘晕栽粤蕴 孕陨晕耘粤孕孕蕴耘
在匀粤晕郧 郧怎燥鄄枣葬灶早摇 蕴哉 郧怎葬灶早鄄曾蚤灶摇 悦匀耘晕 蕴蚤鄄皂蚤灶摇 酝粤韵 月蚤鄄扎藻灶早
渊杂贼葬贼藻 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 砸蚤糟藻 月蚤燥造燥早赠袁 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠 燥枣 悦则燥责
孕葬贼澡燥早藻灶泽 葬灶凿 陨灶泽藻糟贼泽袁 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻袁 在澡藻躁蚤葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁匀葬灶早扎澡燥怎袁 在澡藻躁蚤葬灶早 猿员园园圆怨冤
粤遭泽贼则葬糟贼院粤 泽赠泽贼藻皂 枣燥则 藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟葬造造怎泽 渊 耘悦冤 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 葬灶凿 责造葬灶贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 燥则灶葬皂藻灶贼葬造 责蚤灶藻葬责责造藻 渊 灾则蚤藻泽藻葬
耶栽蚤枣枣葬灶赠爷冤 怎泽蚤灶早 泽贼藻皂 葬泽 藻曾责造葬灶贼 憎葬泽 凿藻增藻造燥责藻凿援 悦葬造造怎泽 憎葬泽 蚤灶凿怎糟藻凿 燥灶 酝杂 皂藻凿蚤怎皂 泽怎责责造藻皂藻灶贼藻凿 憎蚤贼澡 增葬则蚤燥怎泽
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 远鄄月粤袁 晕粤粤 葬灶凿 圆郾 园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅援 孕造葬灶贼造藻贼 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 憎葬泽 蚤灶凿怎糟藻凿 燥灶 酝杂 皂藻凿蚤怎皂 泽怎责责造藻皂藻灶贼藻凿
憎蚤贼澡 晕粤粤 葬灶凿 远鄄月粤援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 遭藻泽贼 贼则藻葬贼皂藻灶贼 蚤灶 贼藻则皂泽 燥枣 则藻泽责燥灶泽藻 择怎葬造蚤贼赠 葬灶凿 皂藻葬灶 灶怎皂遭藻则 燥枣 耘悦 枣燥则
藻曾责造葬灶贼泽 憎葬泽 园郾 缘皂早 辕 蕴 晕粤粤 憎蚤贼澡 圆郾 园皂早 辕 蕴 远鄄月粤援 栽澡藻 遭藻泽贼 皂藻凿蚤怎皂 枣燥则 耘悦 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 憎葬泽 酝杂 垣 圆郾 园皂早 辕 蕴 远鄄月粤 垣
园郾 缘皂早 辕 蕴 晕粤粤 垣 圆郾 园皂早 辕 蕴 圆袁 源鄄阅 憎蚤贼澡 贼澡藻 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠 愿园豫 援 栽澡藻 遭藻泽贼 泽澡燥燥贼蚤灶早 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 耘悦 憎葬泽
燥遭贼葬蚤灶藻凿 燥灶 酝杂 泽怎责责造藻皂藻灶贼藻凿 憎蚤贼澡 园郾 员皂早 辕 蕴 晕粤粤 葬灶凿 园郾 缘皂早 辕 蕴 远鄄月粤 憎蚤贼澡 贼澡藻 皂葬曾蚤皂怎皂 则藻葬糟澡蚤灶早 员园园豫 援
酝燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 葬灶凿 怎造贼则葬泽贼则怎糟贼怎则藻 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 遭藻贼憎藻藻灶 耘悦 葬灶凿 晕燥灶鄄藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟葬造造怎泽 渊晕耘悦冤 憎藻则藻 燥遭泽藻则增藻凿 遭赠 藻造藻糟贼则燥灶
皂蚤糟则燥泽糟燥责赠 凿怎则蚤灶早 责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 责澡葬泽藻泽援 杂贼则怎糟贼怎则葬造 糟藻造造 燥则早葬灶藻造造藻泽 葬则藻 葬遭怎灶凿葬灶贼 蚤灶 贼澡藻 耘悦 糟藻造造泽袁
灶藻蚤贼澡藻则 晕耘悦 糟藻造造泽援 栽澡藻 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 贼澡藻 糟葬造造怎泽 憎藻则藻 凿藻泽糟则蚤遭藻凿 蚤灶 贼澡藻 责葬责藻则援
运藻赠 憎燥则凿泽院燥则灶葬皂藻灶贼葬造 责蚤灶藻葬责责造藻曰 泽贼藻皂曰 藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟葬造造怎泽曰 责造葬灶贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 曰 怎造贼则葬泽贼则怎糟贼则怎藻
苑缘员员
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
摇 摇 观赏凤梨为凤梨科多年生草本植物袁原产于中尧南
美洲的热带尧亚热带地区袁是集观花尧观叶于一体的时
尚花卉袁常见的种类主要是凤梨科的珊瑚凤梨属
渊 粤藻糟澡皂藻葬 冤尧 水 塔 花 属 渊 月蚤造造遭藻则早蚤葬 冤尧 果 子 蔓 属
渊郧怎扎皂葬灶蚤葬 冤尧 彩 叶 凤 梨 属 渊 晕藻燥则藻早藻造蚤葬 冤尧 铁 兰 属
渊栽蚤造造葬灶凿泽蚤葬冤和莺歌属渊灾则蚤藻泽藻葬冤遥
上世纪 怨园 年代我国华南地区引进观赏凤梨袁近年
来种植面积逐渐扩大袁而传统种子的萌发力弱尧吸芽分
株繁育系数低袁严重阻碍了优良品种的快速推广应用遥
因此袁培育能保持优良种性尧品质均一的组培苗已成为
观赏凤梨产业的新亮点咱员暂 遥 对于观赏凤梨的组织培
养研究袁国内已有零星报道咱圆暂 袁但对观赏凤梨胚性愈
伤组织的诱导以及显微结构的研究尚未见报道遥 本研
究对不同激素组合所诱导的不同愈伤组织类型进行了
组织细胞学观察袁旨在探索胚性愈伤组织在增殖尧分化
过程中的组织细胞结构变化规律袁进一步明确外源激
素对胚性愈伤诱导及植株高频再生的作用袁从而为调
控愈伤组织培养再生途径和提高体细胞胚诱导效率提
供细胞学依据遥 所建立的高效再生体系可为观赏凤梨
种苗产业化袁以及下一步的基因工程育种研究奠定可
靠基础遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
观赏凤梨莺歌属栽培品种 耶名宝剑爷 渊 灾则蚤藻泽藻葬
耶栽蚤枣枣葬灶赠爷冤组培苗袁由浙江省农业科学院花卉研究所提
供遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 愈伤组织诱导及继代培养摇 用解剖刀轻轻剥
去组培苗外面的老叶鞘袁剥取 园郾 缘糟皂 左右的短缩茎
渊图 员鄄粤冤袁接种于诱导培养基中遥 每培养皿接种 员园
个袁重复 猿 次遥 诱导培养基为 酝杂咱猿暂 垣 圆皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 垣
猿豫 蔗糖 垣 愿早 辕 蕴 琼脂 垣 渊园尧圆尧猿尧源皂早 辕 蕴冤远鄄月粤 垣 渊园尧
园郾 缘尧员郾 园皂早 辕 蕴冤晕粤粤袁责匀 缘郾 愿遥 培养条件为光照 员远澡袁光
照强度 猿园 耀 源园 滋皂燥造 辕 皂圆窑泽袁温度 圆苑益 依 员益曰暗培养
愿澡袁温度 圆员益 依员益遥
诱导培养 员缘凿 后袁统计分析不同激素及浓度组合
的培养基对愈伤组织诱导的影响遥 挑选生长均一尧颜
色鲜黄尧质地紧密的颗粒状愈伤组织渊即胚性愈伤组
织冤渊图 员鄄月冤和颜色泛白尧质地疏松的水渍状愈伤组织
渊非胚性愈伤组织冤渊图 员鄄悦冤接种于 酝杂 垣 圆郾 园皂早 辕 蕴 远鄄
月粤 垣园郾 缘皂早 辕 蕴 晕粤粤 垣圆郾 园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅继代培养遥
员郾 圆郾 圆摇 胚性愈伤组织分化及植株移栽 摇 挑选直径
园郾 圆糟皂以上的胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织分别转
入分化培养基遥 分化培养基为 酝杂 添加不同浓度的
渊园尧园郾 缘皂早 辕 蕴冤远鄄月粤尧渊园尧园郾 员尧园郾 缘皂早 辕 蕴冤 晕粤粤袁猿豫蔗糖
和 愿早 辕 蕴琼脂袁责匀 缘郾 愿遥 每个处理接种 员园 块愈伤组织袁
重复 猿 次遥 培养条件为光照 员远澡袁光照强度 猿园 耀
源园滋皂燥造 辕 皂圆窑泽袁温度 圆苑益 依 员益曰暗培养 愿澡袁温度 圆员益
依员益遥 源 周后统计分析不同激素及浓度组合的培养
基对愈伤组织开始分化时间尧分化效率等的影响遥
将株高 猿糟皂左右的分化苗转接于生根培养基 砸酝
渊大量元素减半袁微量及铁盐尧月缘 有机含量同 酝杂尧蔗糖
猿豫 尧琼脂 愿早 辕 蕴尧责匀 缘郾 愿冤中袁待苗长到 缘 耀 远糟皂袁具有发
达根系时进行移栽遥 培养瓶在室温放置 圆 耀 猿凿袁揭开
封口膜袁轻轻洗去根部琼脂尧晾干袁移栽于泥炭和蛭石
渊猿颐 员冤的基质中袁保温保湿培养遥
员郾 圆郾 猿摇 愈伤组织的超微结构观察摇 取继代培养的愈
伤组织以及分化培养时刚出现绿点的尧全部转绿的和
刚分化出不定芽的愈伤组织进行超微结构观察遥
环境扫描电镜观察院样品依次以 圆郾 缘豫戊二醛和
员豫锇酸固定袁用一系列浓度梯度的酒精溶液脱水后袁
用乙醇与醋酸异戊酯的混合液渊灾 辕 灾 越 员颐 员冤及纯醋酸
异戊酯处理袁临界点干燥袁镀膜袁置于环境扫描电镜
渊载蕴猿园鄄耘杂耘酝袁孕匀陨蕴陨孕杂冤样品台观察遥
透射电镜 渊 允耘酝鄄员圆园园耘载袁 允耘韵蕴蕴陨阅冤超薄切片观
察院样品依次以 圆郾 缘豫戊二醛和 员豫锇酸固定袁用一系
列浓度梯度的酒精溶液脱水袁杂责怎则则 树脂包埋袁制作超
薄切片遥 醋酸双氧轴及柠檬酸铅溶液染色观察遥
员郾 圆郾 源摇 数据处理与统计分析摇 数据处理采用 阅孕杂 统
计分析软件袁用 阅怎灶糟葬灶新复极差法进行多重比较咱源暂 遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 不同激素组合对愈伤组织诱导率和愈伤组织质
量的影响
短缩茎接种于 员圆 种不同激素及浓度组合的 酝杂
培养基中培养 源 周袁不同组合培养基对愈伤组织诱导
的影响见表 员遥
由表 员 可见袁所有的培养基均能诱导出愈伤组织袁
但经统计分析发现不同激素组合的培养基对耶名宝
剑爷短缩茎愈伤组织的诱导能力有显著的差异袁含
园郾 缘皂早 辕 蕴 晕粤粤的培养基诱导出愈伤组织的时间均早
于其他组合袁且诱导率显著高于其他组合袁胚性愈伤组
织比例高袁其中 圆郾 园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 与 圆郾 园皂早 辕 蕴 远鄄月粤 和
园郾 缘皂早 辕 蕴 晕粤粤 组合及与 源郾 园皂早 辕 蕴 远鄄月粤 和 园郾 缘皂早 辕 蕴
晕粤粤组合的诱导培养基诱导愈伤组织能力最强袁平均
愿缘员员
摇 远 期 观赏凤梨胚性愈伤组织的诱导尧高频再生及超微结构研究
诱导率高达 愿园豫 袁与其他组合均存在极显著差异渊孕 约
园郾 园员冤遥
远鄄月粤和 晕粤粤对愈伤组织诱导作用的方差分析发
现 晕粤粤渊孕 越园郾 园园员怨冤浓度的变化对愈伤组织诱导的影
响达到极显著水平曰而 远鄄月粤渊孕 越 园郾 猿园源远冤浓度的变化
对愈伤诱导没有差异曰圆 个激素互作的分析发现 晕粤粤
和 远鄄月粤之间互作不显著渊孕 越园郾 猿远圆怨冤遥
表 员摇 不同激素组合对愈伤组织诱导的影响
栽葬遭造藻 员摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责澡赠贼燥澡燥则皂燥灶藻
糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶 燥灶 糟葬造造怎泽 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶
激素浓度
责澡赠贼燥澡燥则皂燥灶藻
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
渊皂早 辕 蕴冤
圆袁源鄄阅 远鄄月粤 晕粤粤
愈伤诱导
时间
蚤灶凿怎糟藻凿
贼蚤皂藻渊凿冤
愈伤诱导率
糟葬造造怎泽 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶
则葬贼藻渊豫 冤
胚性愈伤比例
则葬贼蚤燥 燥枣 耘悦鄢
责藻则 糟造怎皂责
糟葬造造蚤渊 蚤灶 灾燥造援 冤渊豫 冤
圆郾 园 园 园 圆源 源猿援 猿 依 缘援 愿糟 圆怨郾 愿 依 圆郾 远藻
圆郾 园 园 园郾 缘 员苑 远园援 园 依 园援 园遭 缘猿郾 员 依 员郾 苑糟
圆郾 园 园 员郾 园 圆园 缘猿援 猿 依 员缘援 圆糟 猿缘郾 员 依 圆郾 怨凿
圆郾 园 圆郾 园 园 圆源 缘园援 园 依 员员援 缘糟 猿圆郾 愿 依 员郾 园凿
圆郾 园 圆郾 园 园郾 缘 员苑 愿园援 园 依 员园援 园葬 愿缘郾 圆 依 缘郾 远葬
圆郾 园 圆郾 园 员郾 园 圆圆 源远援 苑 依 员员援 缘糟 源苑郾 员 依 圆郾 园糟
圆郾 园 猿郾 园 园 圆猿 源猿援 猿 依 缘援 愿糟 圆远郾 圆 依 圆郾 远枣
圆郾 园 猿郾 园 园郾 缘 员苑 苑猿援 猿 依 缘援 愿葬遭 远怨郾 愿 依 缘郾 圆遭
圆郾 园 猿郾 园 员郾 园 圆园 源园援 园 依 员园援 园糟 猿怨郾 远 依 圆郾 员凿
圆郾 园 源郾 园 园 圆员 缘猿援 猿 依 缘援 愿糟 猿园郾 源 依 员郾 怨藻
圆郾 园 源郾 园 园郾 缘 员远 愿园援 园 依 员园援 园葬 愿园郾 圆 依 圆郾 远葬
圆郾 园 源郾 园 员郾 园 圆员 缘园援 园 依 员园援 园糟 缘园郾 员 依 源郾 园糟
注院耘悦鄢院胚性愈伤组织曰表中数值为平均值 依标准差遥 字母不同者表
示相互间存在显著性差异渊孕 约 园郾 园员冤遥
晕燥贼藻院 耘悦鄢院 藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟葬造造怎泽曰 阅葬贼葬 葬则藻 藻曾责则藻泽泽藻凿 葬泽 皂藻葬灶泽 依 泽贼葬灶凿葬则凿
凿藻增蚤葬贼蚤燥灶 渊 杂阅 冤援 灾葬造怎藻泽 枣燥造造燥憎藻凿 遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 皂藻葬灶泽 贼澡藻则藻 葬则藻
泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约 园郾 园员援
图 员摇 观赏凤梨的短缩茎及愈伤组织诱导
云蚤早援 员摇 杂贼藻皂 葬灶凿 贼澡藻 糟葬造造怎泽 蚤灶凿怎糟藻凿 枣则燥皂 燥则灶葬皂藻灶贼葬造 责蚤灶藻葬责责造藻
粤院短缩茎曰月院 胚性愈伤组织曰悦院非胚性愈伤组织
粤院 泽贼藻皂曰 月院 藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟葬造造怎泽渊耘悦冤曰 悦院 灶燥灶 原 藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟葬造造怎泽渊晕耘悦冤
另外还发现激素浓度影响愈伤组织的质量袁晕粤粤
浓度为 园皂早 辕 蕴时袁诱导出部分颜色泛白尧质地疏松的
水渍状非胚性愈伤组织袁长时间培养会逐渐褐化渊图
员鄄悦冤曰当 晕粤粤浓度达到 园郾 缘皂早 辕 蕴 时诱导能力最强袁且
诱导出的愈伤组织多为颜色鲜黄尧质地紧密的胚性愈
伤组织渊图 员鄄月冤遥 远鄄月粤浓度为 园皂早 辕 蕴时袁短缩茎的褐
化程度最轻袁但诱导出部分非胚性愈伤组织曰当 远鄄月粤
浓度大于 圆郾 园皂早 辕 蕴袁晕粤粤 浓度为 园郾 缘皂早 辕 蕴 时袁胚性愈
伤组织的诱导率增加不显著袁因此短缩茎的最佳愈伤
组织诱导培养基为院酝杂 垣 圆郾 园皂早 辕 蕴 远鄄月粤 垣 园郾 缘皂早 辕 蕴
晕粤粤 垣圆郾 园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅遥
将直径 园郾 员糟皂 左右的胚性愈伤组织颗粒转接到
诱导培养基渊酝杂 垣 圆郾 园皂早 辕 蕴 远鄄月粤 垣 园郾 缘皂早 辕 蕴 晕粤粤 垣
圆郾 园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅冤上袁生长良好袁胚性愈伤组织增殖较
快遥 但在试验中发现袁胚性愈伤组织继代生长时间超
过 源园凿袁米黄色紧密的胚性愈伤组织慢慢泛白产生粘
性物质袁愈伤组织逐渐变得疏松袁进而呈水渍状即转变
为非胚性愈伤组织袁这可能是长时间培养产生了不利
于胚性愈伤组织生长的代谢产物遥 因此袁为了有效增
殖胚性愈伤组织袁继代培养时间最好控制在 圆园凿左右遥
圆郾 圆摇 不同激素组合对愈伤组织再分化的影响
胚性愈伤组织在 远 组不同激素组合培养基上的分
化情况见表 圆遥
表 圆摇 不同激素组合对胚性愈伤组织分化的影响
栽葬遭造藻 圆摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责澡赠贼燥澡燥则皂燥灶藻 糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶
燥灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 燥枣 藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟葬造造怎泽
激素浓度
责澡赠贼燥澡燥则皂燥灶藻
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
渊皂早 辕 蕴冤
远鄄月粤 晕粤粤
开始出绿
点时间
蚤灶蚤贼蚤葬造
凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤鄄
葬贼蚤燥灶渊凿冤
分化率
凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤鄄
葬贼蚤燥灶 则葬贼藻
渊豫 冤
生长状况
择怎葬造蚤贼赠 燥枣 责造葬灶贼造藻贼
园 园 员缘 员园 纤弱袁黄绿 贼澡蚤灶袁 赠藻造造燥憎鄄早则藻藻灶
园 园郾 员 苑 员园园 纤弱袁嫩绿 贼澡蚤灶袁 造蚤早澡贼 早则藻藻灶
园 园郾 缘 苑 员园园 纤弱袁嫩绿 贼澡蚤灶袁 造蚤早澡贼 早则藻藻灶
园郾 缘 园 苑 员园园 粗壮袁鲜绿 泽贼则燥灶早袁 遭则蚤早澡贼 早则藻藻灶
园郾 缘 园郾 员 远 员园园 粗壮袁浓绿 泽贼则燥灶早袁 澡藻葬增赠 早则藻藻灶
园郾 缘 园郾 缘 远 员园园 纤弱袁部分玻璃化 贼澡蚤灶袁 增蚤贼则藻燥怎泽
摇 摇 由表 圆 可见袁胚性愈伤组织在所有培养基上均能
怨缘员员
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
转绿并分化出不定芽袁其在不同激素组合的培养基上
分化率都为 员园园豫 袁可能是经过诱导产生的胚性愈伤
组织含一定的内源激素袁在各分化培养基中都能发育
为成熟的体细胞胚袁而发育成熟的体细胞胚具有胚根尧
胚轴和胚芽的完整结构袁且有独立的维管系统袁能发育
为完整的植株遥 但不同激素组合的培养基上愈伤组织
的分化时间以及不定芽的质量存在差异遥 在不添加任
何激素的 酝杂培养基中有不定芽分化现象袁但分化率
极低渊员园豫 冤渊图 圆鄄粤冤曰 在不添加 远鄄月粤 的培养基中分
化出的不定芽数量少袁即试验中每块愈伤组织分化出
的苗数量少袁同时也伴随着少量白色根瘤状物的形成遥
在 园郾 缘皂早 辕 蕴 远鄄月粤和 园郾 员皂早 辕 蕴 晕粤粤组合的分化培养基
上袁胚性愈伤组织出现绿点的时间最短袁每块愈伤组织
分化不定芽多而且芽体粗壮袁生长势旺渊图 圆鄄悦冤袁为此
最佳分化培养为 酝杂 垣 园郾 缘皂早 辕 蕴 远鄄月粤 垣 园郾 员皂早 辕 蕴
晕粤粤遥 非胚性愈伤组织在所有的分化培养基中均不能
分化出不定芽袁培养 员缘凿后开始慢慢褐化袁猿园凿 左右逐
渐变黑袁直至最终死亡渊图 圆鄄月袁圆鄄阅冤遥
约 猿糟皂高的小苗在生根培养基 砸酝培养 员缘凿左右
根原基发育袁源园凿后根系发育完全袁取 缘 耀 远糟皂 高尧具有
发达根系的苗进行驯化渊图 圆鄄耘冤袁移栽于泥炭和蛭石
渊猿颐 员冤的基质中袁放置人工气候箱渊砸载在冤中培养袁移栽
成活率达 怨园豫以上渊图 圆鄄云冤遥
图 圆摇 愈伤组织的分化渊培养 源 周冤及植株再生
云蚤早援 圆摇 阅蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 燥枣 糟葬造造怎泽 葬灶凿 责造葬灶贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 燥则灶葬皂藻灶贼葬造 责蚤灶藻葬责责造藻
粤院胚性愈伤组织在 酝杂培养基上的分化曰月院非胚性愈伤组织在 酝杂培养基上的分化曰悦院胚性愈伤组织在
酝杂 垣园援 缘皂早 辕 蕴 远 原 月粤 垣园援 员 辕 皂早 辕 蕴 晕粤粤培养基上的分化曰阅院非胚性愈伤组织在 酝杂 垣园援 缘皂早 辕 蕴 远 原 月粤 垣园援 员皂早 辕 蕴
晕粤粤培养基上的分化曰耘院 生根曰云院移栽苗
粤院 耘悦 凿藻增藻造燥责藻凿 源 憎藻藻噪泽 葬枣贼藻则 责造葬贼藻凿 燥灶 酝杂 皂藻凿蚤怎皂曰 月院 晕耘悦 凿藻增藻造燥责藻凿 源 憎藻藻噪泽 葬枣贼藻则 责造葬贼藻凿 燥灶 酝杂 皂藻凿蚤怎皂曰
悦院 耘悦 凿藻增藻造燥责藻凿 源 憎藻藻噪泽 葬枣贼藻则 责造葬贼藻凿 燥灶 酝杂 垣 园援 缘皂早 辕 蕴 遭鄄月粤 垣 园援 员皂早 辕 蕴 晕粤粤 皂藻凿蚤怎皂曰 阅院 晕耘悦 凿藻增藻造燥责藻凿 源 憎藻藻噪泽
葬枣贼藻则 责造葬贼藻凿 燥灶 酝杂 垣 园援 缘皂早 辕 蕴 遭鄄月粤 垣 园援 员皂早 辕 蕴 晕粤粤 皂藻凿蚤怎皂曰 耘院 悦怎造贼蚤增葬贼藻凿 枣燥则 则燥燥贼蚤灶早曰
云院 杂怎则增蚤增葬造 责造葬灶贼造藻贼 葬枣贼藻则 贼则葬灶泽责造葬灶贼蚤灶早
图 猿摇 愈伤组织扫描电镜观察
云蚤早援 猿摇 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 泽糟葬灶灶蚤灶早 藻造藻糟贼则燥灶 皂蚤糟则燥早则葬责澡 渊耘杂耘酝冤 燥枣 糟葬造造怎泽
粤院 非胚性愈伤组织曰月院胚性愈伤组织曰悦院 分化培养刚现绿点时的愈伤组织曰阅院 刚分化出不定芽的愈伤组织
粤院 晕耘悦曰 月院 耘悦曰 悦院 耘悦 燥枣 燥则蚤早蚤灶葬造 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶曰 阅院糟葬造造怎泽 燥枣 则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 责造葬灶贼造藻贼泽
圆郾 猿摇 胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织的超微结构观

观赏凤梨的胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织在质
地和颜色上具有极大的差异袁胚性愈伤组织多为生长
均一尧颜色鲜黄尧质地致密渊图 员鄄月冤袁而非胚性愈伤组
织为颜色泛白尧质地疏松尧水渍状渊图 员鄄悦冤袁这种形态
上的差异为鉴别胚性愈伤和非胚性组织提供了依据遥
经环境扫描电镜观察发现袁非胚性愈伤组织和胚
性愈伤组织的表面结构有着较大的差异遥 非胚性愈伤
组织表面疏松并向内陷袁呈褶皱状袁有较多的覆盖物袁
园远员员
摇 远 期 观赏凤梨胚性愈伤组织的诱导尧高频再生及超微结构研究
呈片状渊图 猿鄄粤冤曰胚性愈伤组织结构紧密尧可见球形结
构袁即为发育早期的球形胚渊图 猿鄄月冤遥
胚性愈伤组织在不同的分化阶段袁其表面结构也
有着较大的变化遥 刚现绿点的胚性愈伤组织团粒结构
更加明显袁团粒排列更为紧密袁在分化过程中团粒间间
隙逐渐扩大袁细胞表面逐渐光滑渊图 猿鄄悦冤曰刚要形成小
苗的胚性愈伤组织表面结构差异更大袁球形结构更加
明显袁团粒结构顶部呈球状的指状突起袁团粒间间隙形
成沟壑状渊图 猿鄄阅冤遥
超薄切片透射电镜观察显示袁非胚性愈伤组织的
细胞体积较大袁细胞质稀少且被挤压到边缘袁几乎完全
被中央大液泡所占据袁试验中极少观察到细胞核和其
他细胞器渊图 源鄄粤冤遥 胚性愈伤组织细胞体积相对较
小袁排列紧密袁细胞质浓厚袁分布着丰富的线粒体尧质
体尧高尔基体等细胞器袁尤其是线粒体和质体数量众
多袁一些质体内含有淀粉粒袁还发现几个分散的小液泡
渊图 源鄄月袁源鄄悦袁源鄄阅冤曰细胞核大尧核仁明显位于细胞中央
或一侧遥
图 源摇 愈伤组织的透射电镜渊栽耘酝冤观察
云蚤早援 源摇 哉造贼则葬泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 糟葬造造蚤
粤院非胚性愈伤细胞渊缘园园园 伊 冤曰月院胚性愈伤细胞渊缘园园园 伊 冤曰悦院胚性愈伤细胞渊圆缘园园园 伊 冤曰阅院胚性愈伤细胞渊缘园园园园 伊 冤
图中显示 粤院淀粉粒曰郧院高尔基体曰酝院线粒体曰晕院核仁曰孕院质体曰灾院液泡
粤院 晕耘悦 糟藻造造 渊缘园园园 伊 冤曰 月院 耘悦 糟藻造造 渊缘园园园 伊 冤曰 悦院 责葬则贼 燥枣 耘悦 糟藻造造渊圆缘园园园 伊 冤曰 阅院 责葬则贼 燥枣 耘悦 糟藻造造渊缘园园园园 伊 冤
栽澡藻 枣蚤早怎则藻 泽澡燥憎藻凿 粤院 葬皂赠造燥责造葬泽贼曰 郧院 早燥造早蚤 遭燥凿赠曰 酝院 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬曰 晕 院 灶怎糟造藻蚤曰 孕院 责造葬泽贼蚤凿曰 灾 院增葬糟怎燥造藻
图 缘摇 胚性愈伤组织分化过程的透射电镜渊栽耘酝冤观察
云蚤早援 缘摇 哉造贼则葬泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 耘悦 凿怎则蚤灶早 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶
粤 原员院 开始出绿点时胚性愈伤组织细胞渊缘园园园 伊 冤曰粤 原 圆院 开始出绿点时胚性愈伤组织细胞渊圆缘园园园 伊 冤曰
月 原 员院 全变绿的愈伤组织细胞渊缘园园园 伊 冤曰月 原 圆院 全变绿的愈伤组织细胞渊圆缘园园园 伊 冤曰悦 原 员院 分化出不定芽
的愈伤细胞渊缘园园园 伊 冤曰悦 原 圆院 分化出不定芽的愈伤细胞渊圆缘园园园 伊 冤
图中显示 悦院叶绿体曰郧院高尔基体曰酝院线粒体曰晕院核仁曰孕院质体曰灾院液泡
粤 原员院 耘悦 糟藻造造 燥枣 燥则蚤早蚤灶葬造 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 渊缘园园园 伊 冤曰 粤 原 圆院 责葬则贼 燥枣 耘悦 糟藻造造 燥枣 燥则蚤早蚤灶葬造 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 渊圆缘园园园 伊 冤曰 月 原 员院 耘悦 糟藻造造
燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 渊缘园园园 伊 冤曰 月 原 圆院 责葬则贼 燥枣 耘悦 糟藻造造 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶渊圆缘园园园 伊 冤曰 悦 原 员院 糟葬造造怎泽 糟藻造造 憎蚤贼澡 则藻早藻灶藻则葬贼藻凿
责造葬灶贼造藻贼泽渊缘园园园 伊 冤曰 悦 原 圆院 责葬则贼 燥枣 糟葬造造怎泽 糟藻造造 憎蚤贼澡 则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 责造葬灶贼造藻贼泽渊圆缘园园园 伊 冤
栽澡藻 枣蚤早怎则藻 泽澡燥憎藻凿 悦院 糟澡造燥则燥责造葬泽贼曰 郧院 早燥造早蚤 遭燥凿赠曰 酝院 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬曰 晕 院 灶怎糟造藻蚤曰 孕院 责造葬泽贼蚤凿曰 灾 院增葬糟怎燥造藻
摇 摇 胚性愈伤组织分化过程中细胞状态各不相同遥 刚
出绿点时小液泡数量有所增加袁细胞排列更规则整齐袁
细胞器的分化更加明显渊图 缘粤鄄员袁缘粤鄄圆冤曰愈伤全变绿
时袁液泡体积变大袁质体内部形成了褶皱袁出现片层结
构袁一些质体逐渐发育成叶绿体袁线粒体数量增加渊图
缘月鄄员袁缘月鄄圆冤袁图中还明显可见线粒体尧质体集中在细胞
员远员员
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
质的一侧袁这可能与分化过程中极性的建立有关曰刚分
化成小苗的愈伤组织袁细胞体积相对变大袁质体片层结
构清晰袁叶绿体正式形成渊图 缘悦鄄员袁缘悦鄄圆冤遥
猿摇 讨论
从观赏凤梨愈伤组织诱导试验中可见袁当诱导培
养基中只含 圆皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 时袁也能诱导出愈伤组织袁但
其诱导率较低袁这表明 圆袁源鄄阅 在植物愈伤组织的诱导
中具有重要作用遥 杂澡葬则皂葬 等咱缘暂发现 远皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 可
以高效诱导出大麦渊匀燥则凿藻怎皂 增怎造早葬则藻 蕴援 冤 的胚性愈伤
组织曰耘造澡蚤贼蚤等咱远暂在诱导拟南芥的体细胞胚时也发现袁
园郾 苑缘滋皂燥造 辕 蕴 圆袁源鄄阅能诱导体细胞胚形成袁而 源郾 缘滋皂燥造 辕
蕴为最佳诱导浓度曰杂葬灶佴 等咱苑暂发现 圆皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 可以
诱导出枣椰性体愈伤组织遥 上述研究还说明不同外植
体对 圆袁源鄄阅的敏感性有所差异遥 在本课题组的前期试
验中袁同样发现 圆皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 能有效地诱导出观赏凤
梨品种耶名宝剑爷短缩茎的胚性愈伤组织袁这些结果有
效证实了 圆袁源鄄阅可能具有激发信号级联反应袁介导体
细胞胚形成的假设咱愿暂 遥 在进一步的高效诱导培养基
筛选中发现添加 圆郾 园皂早 辕 蕴 远鄄月粤 和 园郾 缘皂早 辕 蕴 晕粤粤袁能
有效提高胚性愈伤组织的诱导率袁而且进一步的统计
分析表明 晕粤粤 对胚性愈伤的诱导作用有显著差异袁
园郾 缘皂早 辕 蕴 晕粤粤为最佳浓度袁而 远鄄月粤和 晕粤粤 对胚性愈
伤的诱导机理未曾报道袁故仍需进一步探索遥
胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织在形态结构尧生
理生化和发育上都有明显差异袁从而决定着它们具有
不同的生理功能袁试验中也证明了只有胚性愈伤组织
才能在分化培养基中分化出植株袁即胚性愈伤组织的
诱导是获得再生植株的保证咱怨暂 遥 因此用愈伤组织作
转基因研究材料必须选用胚性愈伤组织袁 杂澡葬灶早 匀葬蚤鄄
匀燥灶早等咱员园暂研究了棉花胚性愈伤组织与非胚性愈伤组
织农杆菌介导转化后的区别袁表明只有选用胚性愈伤
组织才能分化出转基因再生植株遥 为获得高质量的胚
性愈伤组织袁本试验采取较高频率的继代培养渊圆园凿 左
右一个周期冤袁转接时除去表面的非胚性愈伤组织袁尽
量吸干表面水分袁这有助于胚性愈伤组织的快速增殖
并减少褐化遥 胚性愈伤组织在 远鄄月粤和 晕粤粤不同浓度
组合的培养基以及无激素培养基上都可以分化出植
株袁只是分化频率以及时间有所差异渊表 猿冤袁但本试验
中也发现部分培养基上根状体先于茎叶分化现象袁而
在后期的分化中先分化根状体的胚性愈伤组织仍能分
化出完整植株袁与 月澡葬泽噪葬则葬灶 等咱员员暂 尧崔凯荣等咱员圆暂的研
究结果不同遥 这表明 远鄄月粤尧晕粤粤 等外源激素能有效
调控胚性细胞发育袁使其最终发育成植株袁因此最佳的
激素组合是建立高效的胚性愈伤组织诱导以及再生体
系的基础遥
电镜观察结果显示袁观赏凤梨胚性愈伤组织和非
胚性愈伤组织的外部显微形态和内部结构都存在很大
区别袁与前人在甜菜咱员猿暂等物种中观察到的甚为相似遥
观赏凤梨胚性愈伤组织细胞富含淀粉粒渊图 源鄄悦冤袁而
丰富的淀粉粒为胚性细胞的分化尧发育提供了大量能
量和营养遥 刚现绿点的胚性愈伤组织细胞含有大量内
嵴发达的线粒体及小液泡袁可见此时细胞代谢十分旺
盛渊图 缘鄄粤冤遥 胚性细胞在分化过程中袁细胞体积逐渐
变大袁小液泡和线粒体数量增多袁许多质体转化为叶绿
体遥 分化出植株时袁细胞中央出现大液泡袁细胞质被挤
压到细胞边缘袁此时叶绿体正式形成袁分化正式完成遥
源摇 结论
本研究建立了高效的观赏凤梨品种耶名宝剑爷愈
伤组织诱导及植株再生体系袁即以短缩茎为外植体袁在
酝杂 垣圆郾 园皂早 辕 蕴 远鄄月粤 垣 园郾 缘皂早 辕 蕴 晕粤粤 垣 圆郾 园皂早 辕 蕴 圆袁源鄄
阅培养基上进行诱导袁其愈伤组织诱导率达 愿园豫 袁胚
性愈伤组织在 酝杂 垣园郾 缘皂早 辕 蕴 远鄄月粤 垣 园郾 员皂早 辕 蕴 晕粤粤 上
培养袁分化效率达 员园园豫 遥 分化苗转入 砸酝 培养基中
进行生根培养袁炼苗移栽袁成活率为 怨园豫 遥 通过电镜
观察胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织及胚性愈伤组织
分化过程外部形态和细胞内部结构不同袁为显微水平
鉴定胚性愈伤组织奠定了基础袁根据分化过程中细胞
结构的变化袁可以在短时间内筛选优化分化培养基袁建
议高效的再生体系遥 本研究建立的通过诱导胚性愈伤
组织获得高频植株再生的技术体系袁不仅为观赏凤梨
优质种苗工厂化生产提供了技术保障袁也为观赏凤梨
的生物技术育种奠定可靠的基础遥
致谢院感谢浙江大学分析测试中心黎军英老师和
何黎平老师在透射电镜和扫描电镜试验中的细心指
导浴
参考文献院
咱 员 暂摇 沈晓岚援观赏凤梨优质品种收集以及遗传转化研究咱阅暂援 浙江院
浙江大学袁圆园员园
咱 圆 暂摇 张国芳袁毛碧增援凤梨科植物生物技术研究进展咱 允暂 援 亚热带植
物科学袁 圆园园怨袁猿愿渊员冤院苑源 原 苑苑
咱 猿 暂摇 酝怎则葬泽澡蚤早藻 栽袁 杂噪燥燥早 云援 粤 则藻增蚤泽藻凿 皂藻凿蚤怎皂 枣燥则 则葬责蚤凿 早则燥憎贼澡 葬灶凿
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圆远员员
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圆园员员袁圆缘渊远冤院员员缘苑 耀 员员远猿
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圆园园缘袁缘远渊源员苑冤院 员怨员猿 原 员怨圆圆
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酝 云袁 阅怎增葬造 再袁 月燥则早藻造 粤援 匀蚤泽贼燥糟赠贼燥造燥早蚤糟葬造 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 悦葬造造燥早藻灶藻泽蚤泽
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粤灶灶 月燥贼袁 圆园园远袁怨愿渊圆冤院 猿园员 原 猿园愿
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砸藻灶泽蚤灶早 杂 粤援 蕴葬则早藻 蚤皂责葬糟贼 燥枣 贼澡藻 葬责燥责造葬泽贼 燥灶 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽
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孕造葬灶贼袁 圆园园缘袁源员院 源远缘 原 源远怨
渊责任编辑摇 王媛媛冤
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渊上接第 员园苑远 页冤
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咱员苑暂摇 单提波袁 赵明辉袁 陈温福援 超绿水稻色素含量及其光合特性研
究咱允暂 援 安徽农业科学袁 圆园园怨袁 猿苑渊员怨冤院 愿怨源源 原 愿怨源远袁 愿怨缘圆
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咱员怨暂摇 朱旭东袁 陈红旗袁 罗摇 达袁 张建军袁 方红民袁闵绍楷援 水稻中花
员员 突变体的分离与鉴定咱允暂 援 中国水稻科学袁 圆园园猿袁 员苑渊猿冤院 圆园缘
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咱圆园暂摇 刘建丰袁 袁隆平援 超高产杂交稻产量性状研究咱允暂 援 湖南农业大
学学报袁圆园园圆袁 圆愿 渊远冤院 源缘猿 原 源缘远
咱圆员暂摇 李合生援 植物生理生化实验原理和技术咱酝暂援 北京院高等教育出
版社袁 圆园园园院 员猿园 原 员猿源
咱圆圆暂摇 王丹英袁 钱摇 前袁 徐春梅袁 章秀福袁 邵国胜援 不同叶色水稻叶片
的衰老及对光强的响应咱 允暂 援 中国水稻科学袁 圆园园愿袁 圆圆渊员冤院 苑苑
原 愿员
咱圆猿暂摇 张力科袁 高用明援 水稻叶色突变体及其基因定位和克隆的研究
进展咱允暂 援 作物杂志袁 圆园园怨袁 圆院 员圆 原 员远
咱圆源暂摇 房贤涛袁 马洪丽袁 赵福源袁 章清杞袁 张书标援 水稻白转绿突变体
的特性尧遗传及其育种应用咱允暂 援 核农学报袁 圆园园怨袁 圆猿渊员冤院 员 原 远
咱圆缘暂摇 刘彦卓袁 黄农荣袁 黄秋妹袁 陈钊明袁 刘斌袁 梁祖扬袁 邱润恒袁张
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究初报咱允暂 援 广东农业科学袁 圆园园园袁 员院 圆 原 源
咱圆远暂摇 晕葬早葬贼葬 晕袁 栽葬灶葬噪葬员 砸袁 栽葬灶葬噪葬 粤援 栽澡藻 皂葬躁燥则 则燥怎贼藻 枣燥则 糟澡造燥则燥责澡赠造造
泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 蚤灶糟造怎凿藻泽 咱 猿袁 愿鄄凿蚤增蚤灶赠造 暂鄄糟澡造燥则燥责澡赠造造蚤凿藻 葬 则藻凿怎糟贼蚤燥灶 蚤灶
粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬咱允暂 援 孕造葬灶贼 悦藻造造 孕澡赠泽蚤燥造袁 圆园园苑袁 源愿 渊员圆冤院 员愿园猿
原 员愿园愿
咱圆苑暂摇 祁摇 鲁袁 刘摇 晓袁 陈佳颖袁 林冬枝袁 董彦君袁 徐建龙援 一个新的
水稻温敏感叶色突变体基因定位分析咱允暂 援 核农学报袁 圆园员园袁 圆源
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