全 文 ：!核 农 学 报!"#$%!"&"#$$#,+ ($#),
!"#$%&"()#*+&$,-$.*#/#$&0*.+%*+1
收稿日期!"#$)*#A*#$!接受日期!"#$)*$"*"$基金项目!国家自然科学基金",$)#$&#A# ! 齐齐哈尔大学青年教师科研启动支持计划项目""#$)N*Z"$# 作者简介!王玉书!女!讲师!主要从事观赏植物遗传育种和分子生物学研究% 0*1234$\289<@$#$&;$">:71 通讯作者!冯辉!男!教授!主要从事蔬菜遗传育种和分子生物学研究% 0*1234$ [X896=3222;",>8XT
文章编号!$###*A%%$""#$%##*$#,+*#+
观赏羽衣甘蓝小孢子培养及再生植株倍性变异
王玉书$!王!欢"!范震宇$!冯!辉,
" $齐齐哈尔大学生命科学与农林学院!黑龙江 齐齐哈尔!$$##&" 齐齐哈尔大学化学 与化学工程学院!黑龙江 齐齐哈尔!$$##& ,沈阳农业大学园艺学院!辽宁 沈阳!$$#$$#> 摘!要!试验以 % 个不同基因型羽衣甘蓝品种为试材进行游离小孢子培养!研究基因型及振荡培养对小 孢子胚发生和发育的影响!并对小孢子再生植株染色体倍性进行鉴定!以期创制多样性的观赏羽衣甘蓝 /Y系!为选育优异羽衣甘蓝品种奠定材料基础# 结果表明%基因型影响羽衣甘蓝供试材料小孢子胚状 体发生!供试材料中只有 ) 个品种 b##+"b##A"b##& 和 b#$# 诱导出了胚状体!平均出胚率分别为
#GA#"$G#,"$G&+ 和 $G)# 胚H蕾!不同基因型间的小孢子胚诱导率差异显著!b#$) 多次重复培养均不能
获得胚状体$# ?&138 B$的低速振荡培养能够促进羽衣甘蓝胚状体的发生!加快胚诱导的速度!有利于
提高子叶形胚发生的比例$染色体倍性鉴定结果表明%羽衣甘蓝小孢子植株中单倍体"二倍体和四倍体 同时存在!不同基因型的倍性变异具有多样性!染色体自然加倍率为 ,G"Q (&"G#Q# 关键词!观赏羽衣甘蓝$ 小孢子培养$胚胎发生$植株再生$倍性鉴定 /EF$$#G$$A&H5>3@@8>$##*A%%$G"#$%G#>$#,+ !!羽衣甘蓝"6$&11.*& "+$&*+& a2?>&*+>5&&#是十字 花科芸薹属甘蓝种的一个变种!" 年生草本植物!原产 地中海至小亚西亚一带!是一种最接近甘蓝野生种的 植物% 观赏羽衣甘蓝叶片形态美观多变!株型紧凑)心 叶绚丽如花!整个植株形如牡丹!被形象地称为-叶牡 丹.% 由于其具有极强的耐寒性!且栽培容易!覆盖地 面的观赏期长达 ) 个多月!在我国观赏植物生产中占 有着重要的地位$( %
我国使用的观赏羽衣甘蓝品种目前主要依赖进
口!大多数为 D$杂种% 优良的杂交种品种要求整齐一 致!其一致性取决于杂交亲本的纯合程度% 杂交亲本 的纯化通常采用自交选择培育自交系来完成% 羽衣甘 蓝属于绿体春化型植物!" 年才能完成$ 个生活周期!
从一个杂合基因型材料起步!培育一个可用于商业制
种的纯合自交系需要 (A 年% 通过培养游离小孢子
进行单倍体育种!可以快速纯化育种材料!加快育种进
程!是一种较为成熟的生物技术育种方法 "( %
羽衣甘蓝游离小孢子培养最早见于 3`:6TX?,(的
报道!随后!U2N262T2等 )( )姜凤英等 %( )冯辉等 ( )
_289等 +(和张振超等 A(对羽衣甘蓝小孢子培养体系
进行了改进和优化!但关于小孢子培养过程中胚胎发
生与再生植株倍性方面的研究较少!这极大程度限制
了小孢子培养技术在实践中的应用% 本文以 % 个不同
基因型羽衣甘蓝品种为试材进行游离小孢子培养!研
究基因型及振荡培养对小孢子胚发生和发育的影响!
并对小孢子再生植株染色体倍性进行鉴定!以期创制
多样性的观赏羽衣甘蓝 /Y系!为选育优异羽衣甘蓝
品种奠定材料基础%
!"材料与方法
!#!"材料
% 个引自日本的羽衣甘蓝 D$杂交种$b##+ "波浪
叶红心#)b##A"波浪叶白心#)b##&"皱叶红心#)b#$# "皱叶白色#和 b#$)"雪球 $号#% !#$"方法
$G"G$!试材种植 !试材于 A 月穴盘育苗!$# 月移栽 至花盆!$$月份移到温室中进行$6 长日照处理!翌
+,#$核!农!学!报 "& 卷 年 " 月份开花取样进行小孢子培养% 常规管理%$G"G"!取材和消毒!在羽衣甘蓝开花期!于晴天上
午 A$## ($#$## 时取供试材料植株主花序及一级侧 枝花序上的饱满花蕾% 用蒸馏水冲洗花蕾 , 次!控 干水分!经 +#Q乙醇表面消毒 ,# @!然后用 #G$Q
Y9K4" 溶液消毒 A 138!最后用无菌水洗涤 , 次!每次
%138%
$G"G,!小孢子的分离纯化和悬浮培养!小孢子分离 纯化方法参照姜凤英 &(的方法% 消毒完成的花蕾放 入无菌小烧杯中!加入少量 -% 液体培养基!用无菌玻 璃棒挤压花蕾!挤出小孢子% 小孢子悬浮液经孔径 )# "1的尼龙网过滤到刻度离心管中!$ ### ?*138 B$下离心 , 138% 弃上清!用 % 1` -% 液体培养基洗涤沉 淀!振荡混匀!A## ?*138 B$下离心 , 138!重复 " 次% 弃
上清!所得沉淀物即为纯净的小孢子%
将纯化的小孢子加入到 M` MB$, 培养基中"蔗糖 浓度为$,Q!SY值 %GA#!调整小孢子悬浮液密度到
$C$#% (" C$#% 个*14B$!分装于直径 # 11的培养
皿中!每皿 % 14!J2?2[341膜封口% 经 ,,O高温热激
")6 后!转至 "%O条件下继续暗培养!用倒置显微镜观
察离体小孢子的发育状况%
$G"G)!振荡培养!以 b##& 和 b#$# 为试材!进行振
荡培养!振荡培养频率 # ?*138 B$!以静止培养作为 对照%$G"G%!胚培养和植株再生!将生长健壮的子叶形胚
状体转接到 -% 固体分化培养基",G#Q蔗糖!$G#Q琼 脂!SY值 %GA#上!置于 "% j$O)光照长度为 $) 6 环 境下培养!诱导胚状体发育形成再生植株% 萌发的幼 苗移至$H" ZI 生根培养基",Q蔗糖 h#G+Q琼脂 h
#G$19*` B$M..! SY值 %GA#诱导生根%
$G"G!再生植株倍性鉴定!采用流式细胞仪"美国 -/公司! D.KIK.43]=?型#测定小孢子再生植株 /M. 含量% 取小孢子植株$ :1" 左右新生叶片置于 # 11
培养皿中!加入 $1` K67SS389]=[X?$% 1174*`B$U?3@* YK$" SY 值 +G%#!A# 117$*`B$ iK$!"# 117$*`B$M2K$!"# 117$*` B$ 0/U.*M2"!$% 117$*` B$巯基乙醇 和 #G#%Q "aHa# U?3T78cB$##(!然后用剪刀快速剪碎
叶片组织! ,## 目的筛网过滤至离心管中!$# ### ?*138 B$离心 $#138!滤液备用% 取$##1` 滤液中加
入 $1` JF染液 "#G#$Z的 J-I 缓冲液!%# "9*14B$L.2@X!%# "9*1` B$ JF# !避光染色 $% 138! %## 目的 筛网过滤至样品管进行测定% 以普通二倍体羽衣甘 蓝嫩叶作对照%$"结果与分析
$#!"小孢子胚发生的细胞学观察 供试材料分离的小孢子在 M` MB$, 培养基中
,,O高温热激 ")6!之后转入 "%O培养!,P 后在倒置
显微镜下可发现部分小孢子开始膨大!直径增至原来
的 " 倍 (, 倍!膨大的小孢子多数呈圆形!也有少数呈
椭圆形% "%O条件下继续暗培养!一些小孢子停止发
育!一些小孢子膨大至细胞壁破裂!一部分小孢子会开
始第一次均等或不均等分裂!+ P 左右细胞经多次分
裂形成多细胞团!大约 "% P 左右可以看到球形胚
"图 $B.#)心形胚"图$ B-#)鱼雷形胚"图 $BK#) 子叶形胚"图$ B/#及一小部分畸形发育的胚% 在小
孢子培养过程中!存在胚胎发育不同步的情况!因此!
在同一培养皿中同时存在不同时期的胚状体%
注$.$球形胚! -$心形胚! K$鱼雷形胚! /$子叶形胚% M7TX$.$R47]=42?X1]?<7! -$YX2?T*@62SXP X1]?<7!
K$U7?SXP7*@62SXP X1]?<7! /$K7T<4XP78*@62SXP X1]?<7>
图 !"羽衣甘蓝小孢子胚状体
/*01!"P*I5-:+-54(845*3484A)57- -;Q6,4
$#$"不同基因型羽衣甘蓝的出胚率
本试验在不添加任何激素的 M` MB$, 培养基中! 经 ,,O热激处理 ") 6 后!) 个品种的出胚率存在明显 差异% 由表$ 可知 b##& 出胚率最高!为 $G&+ 胚H蕾! 其次为 b#$#!出胚率为 $G)# 个H蕾& b##+ 和 b##A 小 孢子出胚情况较差!分别为 #GA# 胚H蕾和$G#, 胚H蕾&
而 b#$) 没有出胚!多次重复培养均不能获得胚状体% 由此可见!在未经任何处理的情况下!供体植株的基因 A,#$
! 期 观赏羽衣甘蓝小孢子培养及再生植株倍性变异
型对小孢子胚状体发生有一定的影响%
表 !"基因型对羽衣甘蓝小孢子胚发生率的影响
L6),4!";;4I.-;049-.7+4:-9;54RG49I7
-;A*I5-:+-54(845*3484A)57-:*9Q6,4
品种名
K=4T3a2?
花蕾数
M7>7[]=P@
总胚数
M7>7[T7T24X1]?<7@
胚诱导率
M7>7[X1]?<7@SX?]=PH
"胚H蕾#
b##+ ,# ") #GA# P/
b##A ,# ,G#, :K
b##& ,# %& $G&+ 2. b#$# ,# )" $G)# ]- b#$) ,# # #G## X0
!!注$表中同列数据后不同小写字母表示差异显著":p#G#%# !不同 大写字母表示差异极显著":p#G#$# %
M7TX$U6X P3[X?X8T@124 4XTX?@38 T6X @21X :74=18 38P3:2TXP @3983[3:28:X2178912TX?324@2T#G#% 4XaX4& T6XP3[X?X8T:2S3T244XTX?@ 38P3:2TXP @3983[3:28:X2178912TX?324@2T#G#$ 4XaX4>
表 $"振荡培养对羽衣甘蓝胚诱导率的影响 L6),4$";;4I.-;:M6Q*90 IG,.G54-9.M4;54RG49I7 -;4A)57-:*9Q6,4
品种
K=4T3a2?
处理
U?X2T1X8T
花蕾数
M7>7[-=P@
诱导胚数
M7>7[T7T2401]?<7@
胚诱导率
M7>7[X1]?<7@SX?]=PH"胚H蕾#
出胚时间
U31X7[X1]?<7@[7?12T378HP
b##& 振荡 ,# ) ">$, "% 对照 ,# %+$>&# ",
b#$# 振荡 ,# )+$>%+ "&
对照 ,# )# $>,, "% 表 %"振荡培养对羽衣甘蓝小孢子胚发育的影响 L6),4%";;4I.-;:M6Q*90 IG,.G54-9.M48434,-+A49.-;4A)57-:*9Q6,4 品种 K=4T3a2? 处理 U?X2T1X8T 胚状体数 M7>7[X1]?<7@ 子叶形胚数 M7>7[:7T<4XP78*@62SXP X1]?<7@ 畸形胚数 M7>7[2]87?124 X1]?<7@ 子叶形胚率 JX?:X8T7[K7T<4XP78*@62SXP X1]?<7@HQ 畸形胚率 JX?:X8T7[2]87?124 X1]?<7@HQ b##& 振荡 ) ) ) +$>&# >"%
静置 %+ "# & ,%>#& $%>+& b#$# 振荡 )+ , , +># >,A
静置 )# $+ A )">%# "#>##$#%"振荡培养对小孢子胚发生$发育的影响 以 b##& 和 b#$# 为试材!比较 " 种培养方式对小
孢子胚发生的影响"表 "#% " 个材料经过振荡培养后
小孢子胚诱导率都有一定幅度的提高!b##& 振荡培养
时胚诱导率为 "G$, 胚H蕾!比静置培养时 "$G&# 胚H
蕾#提高了 #G", 胚H蕾!诱导率提高了 $"G$$Q!b#$#
每花蕾诱导胚数从 $G,, 个提高到$G%+ 个!诱导率提
高了 $AG#%Q% 此外!" 个材料振荡较静置培养诱导形 成小孢子胚的时间缩短 " () P% 这说明一定的低速振 荡培养能够促进胚状体的发生!加快胚诱导的速度% !!本试验还研究了振荡培养对小孢子胚状体发育的 影响"表 ,#% 摇床低速振荡培养能够明显增加子叶形 胚的发生比例!畸形胚发生率减少% " 个供试品种经 振荡培养后!子叶形胚比率分别由 ,%G#&Q和 )"G%#Q 提高 到 +$G&#Q 和 +G#Q! 畸 形 胚 比 率 分 别 由
$%G+&Q和 "#G##Q降低到 G"%Q和 G,AQ%$#<"小孢子胚状体植株再生继代$生根及移栽 将 "%P 胚龄的胚状体转至 -% 固体培养基上"图 " B.#!子叶形胚 " P 后直立生长!上部变为绿色!下部 长出根毛 "图 " B-#!并且逐渐从生长点处抽生出芽 "图 " BK#!再生为小植株& 鱼雷形)心形及球形胚接 种后也能变绿色!长出白色根毛!但其不能直接抽生出 芽!而是通过愈伤组织途径发育成苗"图 " B/#&畸形 胚则不能正常生长!呈现白化)停滞僵化状态!直至死 亡% 将小孢子植株顶芽切下培养在继代培养基中! 每 ,# P 继代$ 次% 继代 ) 次后!将幼苗接种到生根培养
基中! 约 $% P 即可长出粗壮的根系"图 " B0#% 小孢 子植株经继代后!长势强!移入生根培养基后易生根且 根短粗% 将试管苗移栽到自然环境生长前需炼苗$ (
&,#$
! 期 观赏羽衣甘蓝小孢子培养及再生植株倍性变异
!!!! 表 <"羽衣甘蓝不同倍性小孢子植株所占比
L6),4<"S45I49.604:-;8*;;4549.+,-*87 +,69.:;5-A.M4A*I5-:+-54-;Q6,4
品种名
K=4T3a2?
植株数量
M7>7[3PX8T3[3XP
S428T@
单倍体
Y2S473P
二倍体
/3S473P
四倍体
UXT?2S473P
株数
M7>7[S428T
所占比例
U6X[?Xg=X8:株数
M7>7[S428T
所占比例
U6X[?Xg=X8:株数
M7>7[S428T
所占比例
U6X[?Xg=X8:b##+ "# % "%># $, %># "$#>#
b##A $A$# %%> ,,>, " $$>$ b##& ,$ ,# &>A $ ,>" # #G# b#$# "% " A># ", &"># # #G# 比例高达 &GAQ!是 ) 种基因型中单倍体比例最高 的&b##+ 和 b##A 的再生群体中 , 种倍性植株同时存 在!二倍体比例分别为 %G#Q和 ,,G,Q% 由此可知! 不同基因型材料间再生植株的自然加倍率差别很大% %"讨论 小孢子的发育主要通过胚状体或愈伤组织 " 条途 径得到再生植株% 一种是小孢子经历胚发生的各个阶 段!最后子叶展开!形成小孢子植株&另一种是经脱分 化先形成愈伤组织!再分化成植株 $# B$$ ( % 无论是小孢
子途径还是愈伤组织途径!在离体培养条件下要使花
粉改变其正常发育方向形成单倍体植株!均需要多种
因素来共同调节和控制!供试材料的基因型既影响小
孢子胚发生又影响胚产率% 本试验采用 % 个不同基因
型的羽衣甘蓝品种进行游离小孢子培养!有 ) 个成功
获得了小孢子胚!而品种 b#$) 没有得到小孢子胚!诱 导成功率为 A#Q!这说明在羽衣甘蓝小孢子培养中存 在着基因型依赖性问题!这与前人在花椰菜$"( )芥
蓝 $,(和青花菜$)(等甘蓝类作物游离小孢子培养中得
到的结论是一致的&另外!在获得胚状体的基因型中!
胚发生率存在着明显差异!且试验发现羽衣甘蓝胚发
生率明显低于甘蓝型油菜 $% B$( )大白菜 $+( )结球甘 蓝$A(等作物!这可能是由于羽衣甘蓝花粉发育不一
致!同一花药的花粉发育阶段不统一造成的%
采用振荡培养代替静置培养有利于小孢子胚的发
生和发育!这与蒋武生等 $&(和杨红丽等 "#(在大白菜 和甘蓝小孢子培养中所得的试验结果相一致% 一方面 由于振荡培养改善了培养基的通气状况!促进了小孢 子的呼吸作用&另一方面振荡培养可以把小孢子发育 过程中产生的不利于自身生长的物质快速稀释% 然 而!振荡频率不易过高!以免强烈的旋转将幼小的胚状 体溅到培养皿边缘和顶部阻碍其继续发育 "$( % 本研
究采用 # ?*138 B$的转速对 b##& 和 b#$# " 个品种进
行振荡培养也获得了相同的试验效果!振荡培养的小
孢子胚诱导率分别提高了 $"G$$Q和$AG#%Q!胚形成
时间缩短了 " () P!并提高了子叶形胚比例% 除上述
作用外!b289等 ""(在青梗菜小孢子培养中还发现!振
荡培养形成的胚能得到高的植株再生频率%
通过游离小孢子培养获得的植株倍性组成复杂!
往往是双单倍体)单倍体)多倍体以及嵌合体组成的混
合群体!因此有必要对其进行倍性鉴定% 不同作物小
孢子胚发生过程中!染色体自然加倍频率不同% 在白
菜类蔬菜作物的小孢子胚胎发生过程中!染色体自然
加倍率通常在 %#Q (+#Q ", B"( &青花菜小孢子植株
的二倍体率达到 G+Q (++GAQ "+( &而甘蓝型油菜
小孢子植株平均自然加倍率则仅有 "#Q "A( % 本研究
对供试观赏羽衣甘蓝材料小孢子植株的染色体倍性进
行鉴定!结果发现不同基因型材料小孢子植株的自然
加倍率差异较大!其中 b#$# 二倍体率最高达到 &"G#Q&b##& 二倍体率最低!仅有 ,G"Q&b##+ 和 b##A 的再生群体中二倍体比例分别为 %G#Q和 ,,G,Q% 这种自然加倍所得的 /Y植株!省去了用秋 水仙素等方法进行人工加倍的步骤!对于游离小孢子 技术的直接应用十分有利% 而单倍体植株长势弱)存 活率低!对于这些自然加倍率低的基因型有必要在适 宜的时期采用一定浓度的秋水仙素处理!可以起到较 好的加倍效果!从而满足育种工作的需要% <"结论 在供试的 % 份羽衣甘蓝材料中!有 ) 个形成了胚! 分别为 b##+)b##A)b##& 和 b#$#!平均出胚率分别为
#GA#)$G#,)$G&+ 和 $G)# 胚H蕾! b#$) 多次重复培养
均不能获得胚状体% # ?*138 B$的振荡培养能够促进 羽衣甘蓝胚状体的发生!加快胚诱导的速度!有利于提$)#$核!农!学!报 "& 卷 高子叶形胚发生的比例% 小孢子再生植株中单倍体) 二倍体和四倍体同时存在!不同基因型的倍性变异具 有多样性!染色体自然加倍率为 ,G"Q (&"G#Q之间% 参考文献!$ (!王怀名! 杜广岑! 贾翠莹! 谭学文!王贤>羽衣甘蓝的离体繁殖
V(>华北农学报!$&&%!$#"$#$ ) B&
" (!史庆馨>芸薹属作物小孢子技术的发展与应用V(>北方园艺!
"##%! ")# $$) B$% , (! 3`:6TX?LG0[3:3X8T<3X4P 7[X1]?<73P@ ]< :=4T=?X 7[3@742TXP 13:?7@S7?X@7[P3[X?X8T-?2@@3:2:X2X@SX:3X@V(>J428T-?XXP389! $&A&!$#,""#$$ $& B$",
) (!U2N262T2b!iX4X?_ .>Y396 [?Xg=X8:?X9X8X?2T378 38 3@742TXP 13:?7@S7?X:=4T=?X7[-?2@@3:274X?2:X2`
V(>J428TI:3X8:X!$&&$!+)""# $",% B")" % (!姜凤英! 冯辉! 王超楠>羽衣甘蓝的小孢子胚诱导和植株再生 V(>植物生理学通讯! "##%! )$ "# $+"% B+"+ (!冯辉! 姜凤英! 冯建云! 王超楠>羽衣甘蓝游离小孢子培养技术 研究及应用V(>园艺学报! "##+!,)")#$ $#$& B$#"" + (!_289bI! U789b! 3`bD! e6289b! e6289V! DX89Vb! DX89 Y>Y396 [?Xg=X8:< S428T?X9X8X?2T378 [?71 13:?7@S7?X*PX?3aXP X1]?<7@7[7?821X8T24N24X"6$&11.*& "+$&*+& >`a2?>&*+>5&2# V(>I:3X8T32Y7?T3:=4T=?2X!"#$$!$,#"$#$"& B,#"
A (!张振超! 耿鑫鑫! 戴忠良! 潘跃平! 王兵! 许玲! 颜志明! 周伟
军>甘蓝类植物小孢子培养及植株再生研究 V(>核农学报!
"#$,! "+"+#$ &"& B&,+
& (!姜凤英>羽衣甘蓝游离小孢子培养体系的构建及应用 /(>沈
阳$沈阳农业大学!"##$"+
$#(!付文婷>大白菜游离小孢子胚诱导及植株再生技术研究 /(> 杨凌$西北农林科技大学! "#$#$$(!郑祖玲!张承妹!李树林!封莉霞!章振华>甘蓝型油菜 "6$&11.*&
%&>#1` >#花粉培养及植株再生 V(>上海农业学报!$&A! " ",#$& B"(!顾宏辉!唐桂香!张国庆!周伟军>冬性花椰菜的小孢子胚诱导
和植株再生研究V(>浙江大学学报$农业与生命科学版!"##)! ,#"$# $,) B,A$,(!何杭军!王晓武!王炳良G芥蓝游离小孢子培养初报V(>园艺学
报!"##)!,$""#$",& B")#
$)(!曾爱松!华秀红!张云霞!宋立晓!高兵!严继勇>四倍体青花菜小 孢子培养及胚胎发育途径研究 V(>核农学报!"#$)!"A " A # ,%A B$,)$%(!介智靖>甘蓝型油菜小孢子培养及倍性鉴定/(>郑州$郑州大 学! "#$# $$, B$ $(!朱彦涛!李殿荣!杨淑慎>低温预处理和基因型对甘蓝小孢子胚 胎发生的影响V(>西北农林科技大学学报$自然科学版!"##%! ,,"%# $AA B&, $+(!刘凡!李岩!曹鸣庆>培养基水分状况对大白菜小孢子胚成苗的 影响V(>农业生物技术学报!$&&+! %""#$$ ,$B$,
$A(!王五宏!叶国锐!李必元!岳智臣!钟新民>结球甘蓝小孢子胚诱 导与植株再生V(>核农学报!"#$,!"+"# $+$% B+""
$&(!蒋武生!姚秋菊!张晓伟!原玉香!耿建峰>活性炭和振荡培养对 提高大白菜胚诱导率的影响V(>中国瓜菜!"##A!")#$$B, "#(!杨红丽!胡靖锋!徐学忠!和江明!宋爽>影响甘蓝小孢子胚状体 发生的因素研究V(>山东农业科学!"#$%!)+""# $"$ B")
"$(!付颖! 杨硕!包美丽!刘雪利!冯辉>小菘菜游离小孢子培养技术 研究V(>中国蔬菜!"#$$!)"A#$%$B%) ""(!b289I! 3`= c !` D= b! e6289c! 3`bD! 3`= eb! DX89Y>U6X X[X:T7[:=4T=?X@62N38978 13:?7@S7?XX1]?<79X8X@3@28P X1]?<783: PXaX47S1X8T38 J2N:673"6$&11.*& $&>& >`@@S>*5.%+%1.@# V(> I:3X8T32Y7?T3:=4T=?2X! "#$,!$%"$ +# B+,
",(!方淑桂!陈文辉!曾小玲!朱朝辉>不同熟性大白菜小孢子植株
倍性变异及倍性鉴定方法 V(>福建农业学报!"##&!") " ) # $,#) B,#+ ")(!高素燕!侯喜林!李英!单晓政!马成英>不结球白菜小孢子胚植 株再生及倍性研究 V(>西北植物学报! "##&! "& " #$$#&$ B
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