全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊缘冤院园愿源猿 耀 园愿源愿允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园源鄄圆源摇 接受日期院圆园员源鄄员员鄄员园
基金项目院现代农业产业技术体系建设专项资金 渊 悦粤砸杂 原 圆源 冤袁黑龙江省杰出青年科学基金 渊 允悦圆园员猿员远 冤袁黑龙江省科学院预研项目
渊再再再员猿在允悦员缘冤
作者简介院韩增华袁女袁高级工程师袁主要从事食用菌菌种保藏尧选育尧分类尧鉴定研究遥 耘鄄皂葬蚤造院澡葬灶扎藻灶早澡怎葬苑苑岳 员圆远援 糟燥皂
通讯作者院张介驰袁男袁研究员袁主要从事食用菌菌株选育尧生理生化尧栽培研究遥 耘鄄皂葬蚤造院蕴贼扎躁糟岳 泽蚤灶葬援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤园缘鄄园愿源猿鄄园远
黑木耳单核杂交菌株遗传分析
韩增华员袁圆 摇 张介驰员袁圆 摇 张丕奇员袁圆 摇 马银鹏员 摇 刘佳宁员袁圆
渊员 黑龙江省科学院微生物研究所袁黑龙江 哈尔滨摇 员缘园园员园曰圆 黑龙江省科学院高技术研究院袁黑龙江 哈尔滨摇 员缘园园怨园冤
摘摇 要院为实现黑木耳菌株快速鉴定和栽培性状定向育种袁研究通过荧光核染色筛选袁酯酶同工酶酶谱比
较及 砸粤孕阅分子鉴定袁筛选出了黑木耳杂交单核体的交配核型及杂交新种袁并对杂交新种进行了遗传分
析和栽培比较遥 结果显示袁圆 个亲本筛选出 源 种不同类型原生质体单核体袁愿愿园愿 亲本单核体为 粤员尧粤圆
型袁怨愿员 亲本单核体为 月员尧月圆 型遥 单核体单 原单杂交获得核型为 粤员月圆 的杂交菌株袁命名为 在员遥 酯酶同
工酶谱及 砸粤孕阅图谱结果显示 在员 菌株含有来源单核的互补型条带和亲本条带遥 聚类分析将被试菌株
分为 猿 类袁在员 菌株与 怨愿员 相似度高于 愿愿园愿 菌株遥 栽培试验显示 在员 与 怨愿员 栽培性状更近似而又集合了
双亲的性状优势遥 研究的开展可为将来黑木耳菌株鉴定及杂交子遗传分析等提供快速尧可靠检测方法遥
关键词院黑木耳曰原生质体单核体曰砸粤孕阅曰单 原单杂交曰栽培性状
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 园缘援 园愿源猿
摇 摇 黑木耳咱粤怎则蚤糟怎造葬则蚤葬 葬怎则蚤糟怎造葬鄄允怎凿葬藻渊月怎造造援 冤 匝怎侉造援 暂
又名木耳尧细木耳袁真菌学分类属担子菌纲袁木耳目袁木
耳科袁木耳属遥 黑木耳产业发展菌种是最重要的基础
生产资料袁原生质体单核杂交育种可改良菌种袁完成 圆
个亲本优良栽培性状的快速转移袁但杂交种的鉴别与
杂交优势判定是育种研究工作中的关键问题遥 应用酯
酶同工酶对黑木耳菌种分类鉴定的研究较多咱员 原 源暂 袁但
对黑木耳杂交种鉴定的报道很少咱缘 原 远暂 遥 黑木耳菌种鉴
别近年来多集中在基于 孕悦砸反映的 阅晕粤分子标记技
术袁如利用 陨杂杂砸技术等开展黑木耳栽培菌株 阅晕粤 指
纹分析咱苑 原 怨暂 袁源园 个黑木耳栽培菌株 砸粤孕阅 分析与鉴
别咱员园暂 袁陨杂杂砸技术对野生木耳菌株的可靠性验证咱员员暂等
研究遥 随着分子标记技术在菌种鉴定的研究开展袁
陨杂杂砸技术在食用菌杂合子真伪的鉴别和亲本检测上
也开始应用袁这可推动杂交育种工作的进程袁如香菇亲
本菌株和真正的杂合子鉴定咱员圆暂 袁金针菇双单杂交种尧
单核原生质体和亲本亲缘关系判定咱员猿暂 袁草菇单孢杂交
种 砸粤孕阅标记指纹鉴定咱员源暂等袁但对黑木耳杂交育种的
分子鉴定研究报道很少咱员缘 原 员远暂 袁应用分子标记并结合栽
培试验进行黑木耳杂交新种的种质遗传分析和杂交菌
株优势判定未见报道遥 本研究在前期工作的基础上对
筛选出的黑木耳 圆 个亲本尧源 个原生质体单核体及 员
个杂交菌株袁利用荧光核染色核鉴定技术袁酯酶同工酶
技术和 砸粤孕阅技术在蛋白尧分子水平进一步判定杂交
新种的种质遗传性和杂交优势遥 与亲本菌株栽培比较
显示杂交菌株集合了双亲的栽培性状袁试验最终获得
远源杂交优势菌株 员 株遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 供试菌株
亲本菌株 愿愿园愿尧怨愿员渊国认品种冤袁由黑龙江省科学
院微生物研究所菌种保藏中心提供遥 原生质体单核体
愿愿园愿猿尧愿愿园愿愿尧怨愿员员尧怨愿员圆 遭袁由 愿愿园愿尧怨愿员 菌丝原生质体
单核化制备而来遥 杂交菌株 在员袁由 愿愿园愿猿 与 怨愿员圆遭原生
质体单核体单 原单杂交获得遥
员郾 圆摇 培养基
员郾 圆郾 员摇 菌株培养基渊 糟孕阅粤冤 摇 马铃薯 圆园园 早渊煮汁冤曰
琼脂粉 员源郾 园 早曰葡萄糖 圆园郾 园 早曰磷酸二氢钾 猿郾 园 早曰硫酸
镁 员郾 缘 早曰蛋白胨 园郾 缘 早曰维生素 月员 园郾 园员 早曰配制
猿源愿
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
员 园园园 皂蕴培养基遥
员郾 圆郾 圆摇 同工酶样品制备培养基渊韵杂云冤 摇 洋葱 圆园园 早
渊煮汁冤曰蔗糖 员园 早曰阿魏酸 园郾 园远 早曰配制 员 园园园 皂蕴培养
基遥
员郾 圆郾 猿摇 糟孕阅 培养基 摇 马铃薯 圆园园 早渊煮汁冤曰葡萄糖
圆园郾 园 早曰磷酸二氢钾 猿郾 园 早曰硫酸镁 员郾 缘 早曰蛋白胨 园郾 缘 早曰
维生素 月员 园郾 园员 早曰配制 员 园园园 皂蕴培养基遥员郾 圆郾 源摇 栽培种培养基摇 硬杂木屑 苑愿 豫 袁麦麸 圆园 豫 袁
石膏 员 豫 袁石灰 员 豫 袁含水量 远园 豫 遥
员郾 猿摇 主要试剂
基因组 阅晕粤提取试剂盒尧孕悦砸扩增试剂盒由北京
全式金生物技术服务有限公司提供袁砸粤孕阅 引物由上
海生物工程技术服务有限公司合成遥
表 员摇 砸粤孕阅引物序列
栽葬遭造藻 员摇 杂藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 砸粤孕阅 责则蚤皂藻则泽
引物编号
悦燥凿藻 燥枣 责则蚤皂藻则
碱基序列渊缘忆寅猿忆冤孕则蚤皂藻则 泽藻择怎藻灶糟藻渊缘忆寅猿忆冤
引物编号
悦燥凿藻 燥枣 责则蚤皂藻则
碱基序列渊缘忆寅猿忆冤孕则蚤皂藻则 泽藻择怎藻灶糟藻渊缘忆寅猿忆冤
引物编号
悦燥凿藻 燥枣 责则蚤皂藻则
碱基序列渊缘忆寅猿忆冤孕则蚤皂藻则 泽藻择怎藻灶糟藻渊缘忆寅猿忆冤
杂员 郧郧粤悦栽郧郧粤郧栽 杂苑 栽郧悦郧悦悦悦栽栽悦 杂员猿 栽郧郧粤悦悦郧郧栽郧
杂圆 栽郧悦栽悦栽郧悦悦悦 杂愿 郧郧栽郧粤悦郧悦粤郧 杂员源 栽郧粤郧栽郧郧郧栽郧
杂猿 悦栽郧悦栽郧郧郧粤悦 杂怨 郧栽粤郧粤悦悦悦郧栽 杂员缘 悦粤郧郧悦悦悦栽栽悦
杂源 悦悦栽栽郧粤悦郧悦粤 杂员园 郧郧郧粤粤栽栽悦郧郧 杂员远 悦悦郧粤栽粤栽悦悦悦
杂缘 栽悦粤悦悦粤悦郧郧栽 杂员员 粤悦悦悦悦悦郧粤粤郧 杂员苑 悦悦粤粤郧悦栽栽悦悦
杂远 粤郧郧郧郧栽悦栽栽郧 杂员圆 悦粤粤栽悦郧悦悦郧栽 杂员愿 悦悦粤悦粤郧悦粤郧栽
员郾 源摇 荧光核相检测
采用罗信昌等咱员苑暂 和 酝燥早枣燥则凿 咱员愿暂的方法进行院
糟孕阅粤平板培养基渊愿郾 愿 糟皂冤分别接种待测菌株袁距接
种点 员郾 缘 糟皂 处插片袁待菌丝爬至 圆 辕 缘 插片时袁取已爬
壁的菌丝插片袁扣于已滴荧光核染色液的载玻片上袁菌
丝面向下袁匀燥藻糟澡泽贼 猿猿圆缘愿 染料渊德国袁杂蚤早皂葬公司冤染色
猿 皂蚤灶袁荧光显微镜下观察菌丝核相袁筛选单尧双核菌
株遥
员郾 缘摇 酯酶同工酶鉴定
按韩增华等咱缘暂方法鉴定遥
员郾 缘郾 员摇 同工酶样品制备 摇 分别接种被试菌株于 愿园
皂蕴的 韵杂云液体培养基中袁圆缘 益静止培养 员缘 凿袁员圆园 目
尼龙网过滤菌丝体袁蒸馏水冲洗干净袁加入 园郾 员
皂燥造窑蕴 原员 栽月耘缓冲液袁 原 圆园 益下冰冻 圆源 澡遥 冰浴研磨
成糊状袁源 益下 员园 园园园 则窑皂蚤灶 原员离心 员园 皂蚤灶袁取上清为
同工酶试样袁置﹣ 圆园 益冰箱保存备用遥
员郾 缘郾 圆摇 电泳摇 垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳袁分离胶浓
度 苑郾 缘 豫 尧责匀值 愿郾 怨曰浓缩胶浓度 圆郾 缘 豫 尧责匀 值 远郾 苑曰
电极缓冲液 栽则蚤泽鄄郧造赠糟蚤灶藻系统袁责匀值 愿郾 猿曰点样 源园 滋蕴袁
溴酚兰指示剂袁源 益下电泳遥 浓缩胶电压 员圆园 灾袁分离
胶电压 圆园园 灾袁电泳 源郾 园 澡遥
员郾 缘郾 猿摇 染色摇 醋酸 原 琢 原萘酯和坚牢兰染色袁缓冲液
为 园郾 员 皂燥造窑蕴 原员 责匀值 远郾 源 的磷酸盐缓冲液遥
员郾 远摇 砸粤孕阅扩增体系及产物检测
员郾 远郾 员摇 引物摇 砸粤孕阅引物序列见表 员遥
员郾 远郾 圆摇 砸粤孕阅扩增体系 摇 圆缘 滋蕴 孕悦砸 反应体系院员 伊
孕悦砸缓冲液袁园郾 圆 皂皂燥造窑蕴 原员 凿晕栽孕袁园郾 缘 滋皂燥造窑蕴 原员的引
物袁员郾 缘 哉 栽葬择 阅晕粤 孕燥造赠皂藻则葬泽藻袁员缘 灶早 阅晕粤 模板袁无菌
双蒸水补齐至 圆缘 滋蕴袁无菌双蒸水代替模板为阴性对
照遥 孕悦砸仪中扩增程序院怨源益预变性 圆 皂蚤灶曰怨源 益变性
远园 泽袁猿缘 益复性 远园 泽袁苑圆 益延伸 怨园 泽袁猿缘 个循环曰最后
苑圆 益补平 员园 皂蚤灶袁源 益保存遥
员郾 远郾 猿摇 砸粤孕阅 产物电泳 摇 取 砸粤孕阅 产物 圆园 滋蕴 与 圆
滋蕴溴酚蓝指试剂混合后袁点样于含 郧藻造砸藻凿 染色剂的
员郾 园 豫琼脂糖凝胶上袁电压 缘 灾窑糟皂 原员袁电泳结束后用
凝胶成像系统分析遥
员郾 远郾 源摇 数据分析摇 琼脂糖凝胶电泳出现的扩增产物
阅晕粤片段袁按照出现记为 员袁未出现的记为 园 进行统
计遥 以 酝葬噪藻则为对照袁郧耘蕴软件计算每条 阅晕粤带的大
小渊遭责冤袁用 晕栽杂赠泽鄄孕悦 软件中的类平均法渊哉孕郧酝粤冤进
行聚类分析袁构建黑木耳菌株相似系数树状图谱遥
员郾 苑摇 菌丝长势及生长速度
用打孔器取直径 园郾 缘 糟皂的相同菌龄菌丝块袁接种
于 愿郾 愿 糟皂平板培养基中部袁圆缘 益暗培养 苑 凿测量菌落
直径袁记录菌丝生长势袁每个处理设 猿 次重复袁采用统
计软件 阅孕杂完全随机单因素 阅怎灶糟葬灶 新复极差分析差
异显著性遥
员郾 愿摇 栽培出耳
员远郾 缘 伊 猿猿 糟皂聚丙烯折角袋每袋装入培养料合干
料 猿缘园 早渊湿重 员 园园园 早冤袁员园园 益灭菌 愿 澡袁以 员 辕 猿园 的接
种量接入原种袁圆缘 益培养至满袋袁继续放置 员园 凿后袁于
源源愿
摇 缘 期 黑木耳单核杂交菌株遗传分析
员园 耀 员缘 益贮存室中放置至开口遥 每个品种取 缘园 袋袁
于 源 月 圆园 日开 怨远 个大小为 园郾 缘 糟皂 的野再冶型口袁室内
放置 苑 凿后于蕈菌基地试验场排场袁袋间距 缘 糟皂袁按全
光照地摆出耳管理进行咱员怨暂 袁耳片 愿 分成熟时采收遥 记
录出耳性状袁阅孕杂完全随机单因素 阅怎灶糟葬灶新复极差法
分析产量差异性遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 供试黑木耳菌株的荧光显微镜核相
荧光显微镜镜检核相观察可知袁试验菌株单尧双核
清晰可辨袁单核菌株 愿愿园愿猿尧怨愿员圆遭菌丝细弱袁分枝较少袁
核距远袁而 在员 菌株菌丝粗壮尧分枝多袁双核核距近渊图
员冤遥
注院粤院在员 杂交菌株曰月院怨愿员圆 遭单核菌株曰悦院愿愿园愿猿 单核菌株曰源园 伊放大倍数遥
晕燥贼藻院粤院 澡赠遭则蚤凿 泽贼则葬蚤灶 在员援 月院 皂燥灶燥糟葬则赠燥灶 泽贼则葬蚤灶 怨愿员圆 遭 援 悦院 皂燥灶燥糟葬则赠燥灶 泽贼则葬蚤灶 愿愿园愿猿 援 源园 伊 贼蚤皂藻泽援
图 员摇 供试黑木耳菌株菌丝核相
云蚤早援 员摇 杂贼葬蚤灶藻凿 糟藻造造 灶怎糟造藻怎泽 燥枣 皂燥灶燥糟葬则赠燥贼蚤糟 葬灶凿 澡赠遭则蚤凿蚤扎藻凿 皂赠糟藻造蚤葬 燥枣 粤援 葬怎则蚤糟怎造葬
注院粤院愿愿园愿 亲本及单核菌株曰月院怨愿员 亲本及单核菌株曰悦院单核及杂交菌株曰员 原 员园院愿愿园愿尧愿愿园愿猿 尧愿愿园愿愿 尧怨愿员员 尧
怨愿员圆葬尧怨愿员圆遭尧怨愿员尧愿愿园愿猿 尧在员尧怨愿员圆遭遥
晕燥贼藻院粤院 责葬则藻灶贼 葬灶凿 皂燥灶燥糟葬则赠燥灶 泽贼则葬蚤灶泽 枣则燥皂 愿愿园愿援 月院 责葬则藻灶贼 葬灶凿 皂燥灶燥糟葬则赠燥灶 泽贼则葬蚤灶泽 枣则燥皂 怨愿员援
悦院 皂燥灶燥糟葬则赠燥灶 葬灶凿 澡赠遭则蚤凿 泽贼则葬蚤灶泽曰员 原 员园院 泽贼则葬蚤灶 愿愿园愿袁愿愿园愿猿 袁愿愿园愿愿 袁怨愿员员 袁怨愿员圆葬袁怨愿员圆遭袁怨愿员袁愿愿园愿猿 袁在员 葬灶凿 怨愿员圆遭 援
图 圆摇 供试黑木耳菌株酯酶同工酶谱
云蚤早援 圆摇 耘泽贼藻则葬泽藻 蚤泽燥扎赠皂藻 扎赠皂燥早则葬皂 燥枣 贼藻泽贼 泽则贼葬蚤灶泽 燥枣 粤援 葬怎则蚤糟怎造葬援
圆郾 圆摇 亲本尧单核及杂交菌株酯酶同工酶核型鉴定
如图 圆 原 粤所示袁与 员 号 愿愿园愿 亲本菌株比较袁圆 号
愿愿园愿猿 缺失 砸枣圆尧砸枣愿 酶带袁为 粤员 交配型单核菌株袁猿 号愿愿园愿愿 缺失 砸枣猿 酶带而在 砸枣圆 酶带处活性增强袁为 粤圆
交配型单核菌株遥 苑 号为 怨愿员 亲本菌株袁源 号 怨愿员员 缺
失 砸枣员尧砸枣愿 酶带袁砸枣圆 酶带活性减弱袁为 月员 交配型单
核菌株袁缘尧远 号 怨愿员圆葬尧怨愿员圆遭缺失 砸枣员尧砸枣猿尧砸枣苑 酶带袁为月圆 交配型单核菌株渊图 圆 原 月冤遥 图 圆 原 悦中 愿 号为 粤员
交配型单核袁员园 号为 月圆 交配型单核袁怨 号为 粤员月圆 杂
交菌株袁命名为 在员 杂交菌株袁在员 含有 圆 个杂交单核菌
株的互补型条带袁砸枣猿 酶带活性增强袁砸枣缘 酶带活性减
弱袁缺失亲本 砸枣员 酶带遥
圆郾 猿摇 砸粤孕阅分子鉴定及遗传分析
亲本尧单核及杂交菌株通过镜检和酯酶分析后得
到 苑 个供试菌株袁用 员愿 条引物对供试菌株进行扩增袁
其中 杂员缘和 杂员愿引物扩增出条带清晰且多态性好袁结果
见图 猿遥 不同菌株扩增的 阅晕粤 片段数不同袁最少为 圆
条袁最多达 员员 条袁扩增片段大小在 猿圆园 耀 圆 愿远园 遭责 之
缘源愿
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
间遥 苑 个菌株 圆 种引物共扩增出 苑员 条谱带袁多态性片
段占总数的 苑园郾 愿 豫 袁菌株谱带丰富袁差异显著遥 图 猿
原 粤为引物 杂员缘扩增结果袁杂交菌株 在员 同时具有 愿愿园愿猿
和 怨愿员圆 遭杂交单核的 员员 条谱带袁并在 员郾 圆远 噪遭 处扩增
谱带加重遥 在员 菌株与 圆 亲本菌株比较在 圆郾 源缘尧圆郾 圆圆尧
员郾 远怨尧员郾 源远 噪遭处多 源 条谱带袁遗传差异显著遥 图 猿 原 月
为引物 杂员愿扩增结果袁在员 菌株同时具有 愿愿园愿猿 和 怨愿员圆 遭
的 猿 条谱带袁并具有亲本的 圆郾 愿远尧员郾 圆源尧员郾 员远 噪遭 谱带遥
与亲本菌株比较袁杂交菌株在 圆郾 愿远尧员郾 怨员 噪遭 处谱带加
重袁缺失亲本的 员郾 园猿尧园郾 怨源尧园郾 远猿 噪遭谱带遥 砸粤孕阅结果
显示 在员 菌株含有来源杂交单核的互补型条带和部分
亲本谱带遥
注院粤院杂员缘引物曰月院杂员愿引物曰酝院姿阅晕粤 匀蚤灶凿 芋 垣 耘糟燥砸玉酝葬则噪藻则曰员 原 苑院愿愿园愿尧怨愿员尧愿愿园愿愿 尧怨愿员员 尧愿愿园愿猿 尧在员尧怨愿员圆遭菌株曰园院阴性对照遥
晕燥贼藻院粤院 责则蚤皂藻则 杂员缘援 月院 责则蚤皂藻则 杂员愿援 酝院 酝葬则噪藻则 姿阅晕粤 匀蚤灶凿芋 垣 耘糟燥砸援 员 原 苑院 泽贼则葬蚤灶 愿愿园愿袁 怨愿员袁 愿愿园愿愿 袁 怨愿员员 袁愿愿园愿猿 袁 在员 葬灶凿
摇 摇 摇 摇 怨愿员圆 遭 援 园院 晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造援
图 猿摇 供试黑木耳菌株的 砸粤孕阅扩增图谱
云蚤早援 猿摇 栽澡藻 砸粤孕阅 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 皂葬责 燥枣 贼藻泽贼 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣 粤援 葬怎则蚤糟怎造葬
表 圆摇 愿愿园愿尧怨愿员尧在员 菌株形态尧栽培特性
栽葬遭造藻 圆摇 酝燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 葬灶凿 糟怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 泽贼则葬蚤灶 愿愿园愿袁 怨愿员 葬灶凿 在员
菌株
杂贼则葬蚤灶
母种 杂贼燥糟噪 糟怎造贼怎则藻 栽培种 杂责葬憎灶 栽培性状 悦怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟
菌丝生长势
郧则燥憎贼澡 增蚤早燥则
燥枣 皂赠糟藻造蚤葬
生长速率
郧则燥憎贼澡 则葬贼藻 辕
渊糟皂窑凿 原员 冤
颜色
悦燥造燥则
疏密度
杂责葬则泽藻 燥则
凿藻灶泽蚤贼赠
生长速率
郧则燥憎贼澡 则葬贼藻 辕
渊糟皂窑凿 原员 冤
现耳时间
栽蚤皂藻 燥枣
葬责责藻葬则 藻葬则 辕 凿
采收时间
匀葬则增藻泽贼
贼蚤皂藻 辕 凿
耳形
耘葬则 泽澡葬责藻
厚度
耘葬则 贼澡蚤糟噪灶藻泽泽 辕
皂皂
平均产量
再蚤藻造凿 辕
渊早窑遭葬早 原员 冤
愿愿园愿 垣 垣 垣 园郾 源愿 葬粤 白 极浓密 园郾 源员 葬粤 员园 遭月 猿缘 遭月 菊花 云造 燥憎藻则 员郾 园 葬粤 缘园郾 源 葬粤
怨愿员 垣 垣 园郾 猿缘 遭月 灰白 稀疏 园郾 猿愿 葬粤 员远 葬粤 缘园 葬粤 单片 杂造蚤糟藻 员郾 源 葬粤 源缘郾 缘 葬粤
在员 垣 垣 垣 园郾 源怨 葬粤 灰白 浓密 园郾 源猿 葬粤 员圆 遭粤月 源猿 葬粤月 单片 杂造蚤糟藻 员郾 源 葬粤 缘园郾 远 葬粤
摇 摇 注院 垣 垣 垣 袁 垣 垣 袁 垣分别表示菌丝体生长势强袁较强和弱遥 表中小写字母代表 园郾 园缘 水平差异显著性袁大写字母代表 园郾 园员 水平差异显著性遥
晕燥贼藻院 垣 垣 垣 袁 垣 垣 袁 垣 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 贼澡葬贼 贼澡藻 皂赠糟藻造蚤葬 早则燥憎 增蚤早燥则燥怎泽造赠袁燥则凿蚤灶葬则蚤造赠 葬灶凿 憎藻葬噪造赠袁则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 栽澡藻 凿葬贼葬 枣燥造造燥憎藻凿 遭赠 泽皂葬造造 燥则 遭蚤早 造藻贼贼藻则泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿
泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 园郾 园缘 燥则 园郾 园员 造藻增藻造援
摇 摇 杂员缘和 杂员愿 圆 个引物扩增聚类分析结果见图 源袁供试
菌株在遗传相似水平为 远园豫时聚为 猿 类袁第 员 类包括
愿愿园愿 和 愿愿园愿愿曰第 圆 类院怨愿员尧愿愿园愿猿尧在员曰第 猿 类是 怨愿员员
和 怨愿员圆遭遥 分析结果显示同一亲本的 圆 个不同交配型袁
其相似性差异很大袁愿愿园愿 菌株的 圆 个单核相似性仅为
源愿豫 袁而 怨愿员 的 圆 个单核相似性达 苑怨豫 遥 杂交菌株与
来源的单核相似性存在差异袁与单核 愿愿园愿猿 相似性愿圆豫 袁而与单核 怨愿员圆遭相似度为 远园豫 遥 在员 菌株与亲本
聚类分析显示院在员 与 怨愿员 相似性为 远愿豫 袁与 愿愿园愿 相似
性为 源愿豫 袁杂交菌株与 愿愿园愿 遗传距离较 怨愿员 远遥
圆郾 源摇 形态尧栽培比较
杂交菌株与 圆 亲本菌株形态尧栽培特性比较见表
圆袁亲本 愿愿园愿 菌丝长势旺袁长速快袁现耳早袁子实体生长
期短袁产量较高袁为早熟尧高产菊花状品种袁但耳片薄尧
展片差尧耳根大袁高温高湿天气极易流耳遥 亲本 怨愿员 菌
丝长势弱袁生长速度缓慢袁子实体现耳芽和生长期均较
长袁晚熟尧单片尧耳片厚尧耳根小袁高温高湿不宜流耳袁但
产量较另一亲本低 怨郾 苑豫 遥 在员 菌株菌丝长势与亲本
愿愿园愿 相似袁出耳性状和抗性表现则与 怨愿员 相似袁但比
怨愿员 出耳期尧采收期分别提前 源尧苑 凿袁差异显著袁产量超
远源愿
摇 缘 期 黑木耳单核杂交菌株遗传分析
图 源摇 供试黑木耳菌株 哉孕郧酝粤聚类图
云蚤早援 源摇 哉孕郧酝粤 凿藻灶凿则燥早则葬皂 燥枣 贼藻泽贼 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣 粤援 葬怎则蚤糟怎造葬援
圆 亲本袁较 怨愿员 产量提高 员员郾 圆豫 袁在员 菌株可满足现阶
段市场对黑木耳栽培性状的需求遥
猿摇 讨论
杂交育种可使种内不同品种间遗传基因重新组
合袁并可在杂交后代中筛选出优良新品种遥 杂交育种
着眼于双亲性状的优势互补袁方向性和目的性明确遥
徐珍等咱圆园暂以金针菇菌株 云 猿 原 猿员 和 云酝 原 愿猿 为亲本袁
经过单单杂交选育出双亲优势互补袁适宜金针菇工厂
化栽培的早熟白色优良菌株遥 林俊华等咱圆员暂完成了灵
芝原生质体单核化杂交试验袁获得了产量尧出菇期等均
优于亲本的杂交子袁证实了灵芝原生质体单核化杂交
育种的实用价值遥 在双亲选择上充分考虑性状优势互
补原则袁本研究选用 圆 株通过全国食用菌品种认定袁栽
培性状稳定袁亲本性状差异显著的早熟尧朵状尧产量高尧
抗性差的菊花状品种代表 愿愿园愿袁晚熟尧单片尧产量低尧
抗性强的单片品种代表 怨愿员袁二者杂交符合亲本优势
互补袁育种目的就是获得单片尧高产尧抗性强袁适应市场
需求的品种袁方向性和目的性明确袁试验得到了预期效
果袁杂交菌株达到了市场期望的商品性状要求遥
黑木耳菌丝细弱袁锁状联合不明显袁肉眼及普通显
微镜很难准确判断单尧双核型遥 常规的单核杂交试验
是将单核菌丝两两配对袁通过菌丝拮抗和栽培试验只
能初步判断杂交子的真伪袁杂交菌株优势更加无法判
定袁制约了黑木耳杂交优势菌种选育和真实性鉴定的
发展遥 近年来利用同工酶尧分子鉴定进行食用菌杂交
子或诱变菌株鉴定和亲缘关系分析的研究较多咱圆圆 原 圆源暂 袁
而对菌株特性预测和杂交优势判定很少报道咱圆缘暂 遥 本
研究结合 猿 种菌株鉴定方法袁验证了试验菌株的真实
性袁结合聚类分析判定了单核尧亲本尧杂合子的亲源性
和遗传特性袁希望利用分子标记来预测杂交后代的农
艺性状遥 菌丝形态尧栽培性状分析表明杂交菌株农艺
性状与预测期望的结果表现一致袁杂交优势显著遥
真菌杂交双核菌丝的 阅晕粤 应为 圆 个单核体 阅晕粤
的总和袁其扩增图谱中既应含有 圆 个单核的 阅晕粤扩增
带袁也应含有 圆 个亲本特有的 阅晕粤 条带遥 研究从 员愿
个引物中筛选出 圆 个扩增效果好的引物进行 砸粤孕阅检
测袁发现杂交子谱带较亲本改变很大袁其后代即包含了
杂交单核体的所有扩增谱带袁也产生了杂交单核体没
有的新条带袁这是菌株杂交过程中大量相关基因间的
组合与互作的结果遥 同时亲本的一部分谱带在 在员 中
的缺失袁可能与单核体融合时部分基因发生了转移或
互换产生有关袁抑或是随机引物不完全扩增造成的袁筛
选更多的引物使其覆盖整个基因组袁可提高扩增标记
鉴定亲本尧单核尧杂交菌株的准确性遥
源摇 结论
本研究利用 圆 个优势互补亲本进行了目的性明确
的单核杂交育种袁荧光核染色尧酯酶同工酶酶谱及
砸粤孕阅分子鉴定快速检出了杂交单核体的交配核型和
杂交新种袁遗传亲缘性分析和栽培比较确立了杂交后
代的优势袁为将来黑木耳菌株鉴定提供快速尧可靠检测
方法袁为杂交育种应用提供了有效途径遥
参考文献院
咱 员 暂摇 唐利华袁郭倩袁王瑞娟袁边银丙援中国黑木耳主要栽培菌株酯酶同
工酶的研究咱允暂 援 食用菌学报袁 圆园园苑袁 员源渊源冤院 猿苑 原 源园
咱 圆 暂摇 韩增华袁张介弛袁戴肖东袁高娃袁张欣袁张丕奇袁孔祥辉袁马庆芳袁朴
万华援六株黑木耳两种同工酶的研究咱 允暂 援 中国食用菌袁 圆园园圆袁
圆员渊远冤院 源圆 原 源缘
咱 猿 暂 摇 边银丙袁罗信昌袁周启援木耳栽培菌株酯酶同工酶的酶谱多样性
研究咱允暂 援 菌物学报袁 圆园园园袁 员怨渊员冤院 愿苑 原 怨园
咱 源 暂摇 吴康云袁边银丙援培养时间对黑木耳单核菌株同工酶酶谱的影响
咱允暂 援 食用菌学报袁 圆园园员袁 怨渊员冤院 员猿 原 员苑
咱 缘 暂 摇 韩增华袁张丕奇袁戴肖东袁孔祥辉袁马庆芳袁张介驰援 黑木耳亲本尧
单核尧杂交菌株鉴定的研究咱 允暂 援 菌物研究袁 圆园园怨袁 苑渊圆冤院 怨怨 原
员园猿
咱 远 暂 摇 吴康云袁边银丙援黑木耳种内杂交子的鉴定技术咱 允暂 援 菌物系统袁
圆园园圆袁 圆员渊圆冤院 圆员园 原 圆员源
咱 苑 暂摇 唐利华袁肖扬袁边银丙援中国黑木耳主要栽培菌株 陨杂杂砸指纹分析
及 杂悦粤砸标记咱允暂 援 菌物学报袁 圆园园愿袁 圆苑渊圆冤院 圆源猿 原 圆缘员
咱 愿 暂 摇 栽葬灶早 蕴 匀袁 载蚤葬燥 再袁 蕴蚤 蕴援 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 早藻灶藻贼蚤藻 凿蚤增藻则泽蚤贼赠 葬皂燥灶早
糟澡蚤灶藻泽藻 粤怎则蚤藻怎造葬则蚤葬 葬怎则蚤藻怎造葬 糟怎造贼蚤增葬则泽 怎泽蚤灶早 糟燥皂遭蚤灶藻凿 陨杂杂砸 葬灶凿
杂砸粤孕 皂葬则噪藻则泽 糟怎则则藻灶贼咱允暂 援 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 圆园员园袁 远员渊圆冤院 员猿圆 原 员源园
咱 怨 暂 摇 李辉平袁黄晨阳袁陈强袁张金霞援 黑木耳栽培菌株的 陨杂杂砸 分析
咱允暂 援 园艺学报袁 圆园园苑袁 猿源渊源冤院 怨猿缘 原 怨源园
咱员园暂摇 赵丽袁陈艳秋援黑木耳栽培菌株亲缘关系的 砸粤孕阅 分析咱 允暂 援 食
用菌袁 圆园园怨袁 猿员渊源冤院 员源 原 员缘袁 圆猿
咱员员暂摇 贾定洪袁郑林用袁王波袁郭勇袁甘炳成袁黄忠乾袁彭卫红援 五个野生
苑源愿
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员缘袁圆怨渊缘冤院园愿源猿 耀 园愿源愿
木耳属菌株的 陨杂杂砸分析咱允暂 援 食用菌学报袁 圆园园愿袁 员缘渊猿冤院 苑 原 员圆
咱员圆暂 摇 陈世通袁白建波袁蒲敏袁李梦杰袁张玉金袁李荣春援香菇单孢杂交及
杂交菌株分子鉴定咱允暂 援 食用菌学报袁 圆园员猿袁 圆园渊员冤院 员 原 源
咱员猿暂摇 王波袁祁丽萍袁鲜灵援金针菇双单杂交的遗传分析咱 允暂 援 西南农业
学报袁 圆园员圆袁 圆缘渊缘冤院 员愿园缘 原 员愿员园
咱员源暂 摇 傅俊生袁朱坚袁谢宝贵援 草始杂交菌株 圆远圆愿 的鉴定与品比试验
咱允暂 援 中国农学通报袁 圆园员园袁 圆远渊员源冤 院 源愿 原 缘猿
咱员缘暂摇 宋小亚袁肖扬袁边银丙援 陨杂杂砸标记在黑木耳单核体遗传分析中的
应用咱允暂 援 菌物学报袁 圆园园苑袁 圆远渊源冤院 缘圆愿 原 缘猿猿
咱员远暂摇 张红袁曹晖袁潘迎捷袁曹娟援黑木耳交配型的研究咱 允暂 援 菌物学报袁
圆园园苑袁 圆员渊源冤院 缘缘怨 原 缘远源
咱员苑暂 摇 罗信昌袁陈大年援 食用真菌核荧光染色技术的研究咱 允暂 援 真菌学
报袁 员怨怨园袁 怨渊员冤院 远源 原 远愿
咱员愿暂 摇 酝燥早枣燥则凿 阅 允援 粤 贼藻糟澡灶蚤择怎藻 枣燥则 贼澡藻 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 泽贼葬蚤灶蚤灶早 燥枣 枣怎灶早葬造
灶怎糟造藻蚤咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 杂燥怎贼澡 粤枣则蚤糟葬灶 月燥贼葬灶赠袁员怨苑怨袁 源缘渊圆冤院 圆远猿 原
圆远缘
咱员怨暂 摇 韩增华袁张介驰袁刘佳宁袁党阿丽袁戴肖东袁马庆芳袁孔祥辉袁张丕
奇援不同催芽方式对北方黑木耳栽培出耳影响咱 允暂 援 食药用菌袁
圆园员圆袁 圆园渊远冤院 猿源源 原 猿源远
咱圆园暂摇 徐珍袁尚晓冬袁郭倩袁王瑞娟袁李玉袁谭琦援早熟金针菇新品种 郧员
的杂交选育咱允暂 援 食用菌学报袁 圆园园怨袁 员远渊源冤院 圆园 原 圆圆
咱圆员暂摇 林俊华袁邓优锦袁谢宝贵援 灵芝原生质体单核化杂交子的评价
咱允暂 援 福建农林大学学报院 自然科学版袁 圆园员园袁 猿怨渊缘冤院 缘猿源 原 缘猿苑
咱圆圆暂摇 刘海英袁张运峰袁范永山袁李科南袁刘先拉援 紫外线对杏鲍菇原生
质体的诱变作用咱允暂 援 核农学报袁 圆园员员袁 圆缘渊源冤院 苑员怨 原 苑圆猿
咱圆猿暂摇 叶明袁叶生梅袁戚中田袁谭琦袁潘迎捷援 香菇双单杂交后代不同发
育阶段酯酶同工酶研究咱允暂 援微生物学杂志袁 圆园园缘袁 圆缘渊员冤院 缘源 原
缘远
咱圆源暂摇 郧燥贼贼造藻遭 粤 酝袁 杂葬蚤凿皂葬灶 月 韵袁宰则蚤早澡贼 允 耘援 陨泽燥扎赠皂藻 燥枣 郧葬灶燥凿藻则皂葬
泽责藻糟蚤藻泽 枣则燥皂 泽燥怎贼澡藻则灶 杂燥怎贼澡 粤皂藻则蚤糟葬 咱 允暂 援 酝赠糟燥造燥早蚤糟葬造 砸藻泽藻葬则糟澡袁
员怨怨愿袁 员园圆渊源冤院 源员缘 原 源圆远
咱圆缘暂摇 冯伟林袁蔡为明袁金群力袁沈颖越袁范丽军袁刘晓红援杏鲍菇单核体
菌株及其杂交后代筛选和鉴定咱 允暂 援 核农学报袁 圆园员圆袁 圆远渊圆冤院
圆苑缘 原 圆苑怨
郧藻灶藻贼蚤糟 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 酝燥灶燥糟葬则赠燥灶 匀赠遭则蚤凿 杂贼则葬蚤灶 蚤灶 粤怎则蚤糟怎造葬则蚤葬
葬怎则蚤糟怎造葬鄄躁怎凿葬藻
匀粤晕 在藻灶早澡怎葬员袁圆 摇 在匀粤晕郧 允蚤藻糟澡蚤员袁圆 摇 在匀粤晕郧 孕蚤择蚤员袁圆 摇 酝粤 再蚤灶责藻灶早员 摇 蕴陨哉 允蚤葬灶蚤灶早员袁圆
渊员 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早袁匀藻蚤造燥灶早躁蚤葬灶早 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁匀葬则遭蚤灶袁匀藻蚤造燥灶早躁蚤葬灶早摇 员缘园园员园曰
圆 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 粤凿增葬灶糟藻凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁匀藻蚤造燥灶早躁蚤葬灶早 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁匀葬则遭蚤灶袁匀藻蚤造燥灶早躁蚤葬灶早摇 员缘园园怨园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院云燥则 贼澡藻 则藻葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 择怎蚤糟噪 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 凿蚤则藻糟贼蚤增藻 遭则藻藻凿蚤灶早 燥枣 粤怎则蚤糟怎造葬则蚤葬 葬怎则蚤糟怎造葬鄄躁怎凿葬藻袁 澡赠遭则蚤凿
皂燥灶燥灶怎糟造藻葬则 皂葬贼蚤灶早 噪葬则赠燥贼赠责藻 葬灶凿 灶藻憎 澡赠遭则蚤凿 泽责藻糟蚤藻泽 憎藻则藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿 憎蚤贼澡 泽藻造藻糟贼蚤燥灶 燥枣 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 灶怎糟造藻葬则 泽贼葬蚤灶蚤灶早袁
糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 藻泽贼藻则葬泽藻 蚤泽燥扎赠皂藻 葬灶凿 皂燥造藻糟怎造葬则 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 砸粤孕阅袁 葬灶凿 早藻灶藻贼蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽 葬灶凿 糟怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 枣燥则
灶藻憎 澡赠遭则蚤凿 泽责藻糟蚤藻泽 憎藻则藻 葬造泽燥 糟燥灶凿怎糟贼藻凿援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 枣燥怎则 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼赠责藻泽 燥枣 责则燥贼燥责造葬泽贼 皂燥灶燥噪葬则赠燥灶泽 憎藻则藻
泽藻造藻糟贼藻凿 枣则燥皂 贼憎燥 责葬则藻灶贼 皂燥灶燥噪葬则赠燥灶泽 泽贼则葬蚤灶泽袁 憎澡蚤糟澡 蚤灶糟造怎凿藻凿 粤员袁 粤圆 贼赠责藻 枣则燥皂 耶愿愿园愿爷 葬灶凿 月员袁 月圆 贼赠责藻 枣则燥皂 耶怨愿员爷
援 栽澡藻 澡赠遭则蚤凿 泽贼则葬蚤灶 燥枣 粤员月圆 憎葬泽 灶葬皂藻凿 耶在员爷援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 燥枣 藻泽贼藻则葬泽藻 蚤泽燥扎赠皂藻 扎赠皂燥早则葬皂 葬灶凿 砸粤孕阅 皂燥造藻糟怎造葬则 皂葬责泽
泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 澡赠遭则蚤凿 泽贼则葬蚤灶 耶在员爷 糟燥灶贼葬蚤灶藻凿 贼澡藻 糟燥皂责造藻皂藻灶贼葬则赠 遭葬灶凿泽 燥枣 皂燥灶燥糟葬则赠燥灶 葬灶凿 贼澡藻 责葬则藻灶贼 遭葬灶凿泽援 栽澡藻 贼藻泽贼藻凿
泽贼则葬蚤灶泽 憎藻则藻 凿蚤增蚤凿藻凿 蚤灶贼燥 贼澡则藻藻 贼赠责藻泽 遭赠 糟造怎泽贼藻则 葬灶葬造赠泽蚤泽援 栽澡藻 泽蚤皂蚤造葬则蚤贼赠 燥枣 泽贼则葬蚤灶 耶在员爷 葬灶凿 泽贼则葬蚤灶 耶怨愿员爷 蚤泽 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶
贼澡葬贼 燥枣 泽贼则葬蚤灶 耶在员爷 葬灶凿 耶愿愿园愿爷援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 燥枣 糟怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 糟怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 糟澡葬则葬糟贼藻则泽 燥枣 耶在员爷 憎葬泽
泽蚤皂蚤造葬则 贼燥 贼澡葬贼 燥枣 耶怨愿员爷 葬灶凿 葬造泽燥 早葬贼澡藻则藻凿 贼澡藻 葬凿增葬灶贼葬早藻泽 燥枣 遭燥贼澡 责葬则藻灶贼泽援 栽澡藻 则藻泽藻葬则糟澡 憎蚤造造 责则燥增蚤凿藻 葬 则葬责蚤凿 葬灶凿 则藻造蚤葬遭造藻
凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿 枣燥则 贼澡藻 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 澡赠遭则蚤凿鄄燥枣枣泽责则蚤灶早 早藻灶藻贼蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 粤怎则蚤糟怎造葬则蚤葬 葬怎则蚤糟怎造葬鄄躁怎凿葬藻 蚤灶 贼澡藻 枣怎贼怎则藻援
运藻赠憎燥则凿泽院 粤怎则蚤糟怎造葬则蚤葬 葬怎则蚤糟怎造葬鄄躁怎凿葬藻袁 责则燥贼燥责造葬泽贼 皂燥灶燥噪葬则赠燥灶袁 砸粤孕阅 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂袁 皂燥灶鄄皂燥灶 皂葬贼蚤灶早袁 糟怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶
糟澡葬则葬糟贼藻则
愿源愿