全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员圆袁圆远渊员冤院园园源猿 耀 园园源愿允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员员鄄园源鄄园愿摇 接受日期院圆园员员鄄园苑鄄园远
基金项目院国家自然科学基金 渊猿员园园园苑圆园 冤袁山东省优秀中青年科学家奖励基金 渊 圆园园远月杂园远园园愿 冤袁山东省自然科学基金 渊 再圆园园愿阅源源袁
在砸圆园员园悦在园园圆冤袁山东省泰山学者岗位基金
作者简介院马摇 敬渊员怨愿缘鄄冤袁女袁山东青州人袁硕士研究生袁主要从事植物发育生物学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院憎枣赃躁蚤灶早躁蚤灶早圆园园愿岳 赠葬澡燥燥援 糟燥皂援 糟灶
通讯作者院王兴军渊员怨远远鄄冤袁男袁山东青州人袁研究员袁主要从事植物发育生物学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院曾蚤灶早躁怎灶憎岳 澡燥贼皂葬蚤造援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员圆冤园员鄄园园源愿鄄园远
花生 悦源匀和 粤晕砸基因的克隆与表达研究
马摇 敬员袁圆袁猿 摇 苏摇 磊员袁圆袁猿 摇 袁摇 美源 摇 纪鸿飞员袁圆袁猿 摇 李爱芹圆袁猿 摇 王兴军员袁圆袁猿
渊员郾 山东省农业科学院高新技术研究中心 辕山东省作物与畜禽品种改良生物技术重点实验室袁山东 济南摇 圆缘园员园园曰
圆郾 山东师范大学生命科学学院袁山东 济南摇 圆缘园园员源曰猿郾 农业部黄淮海作物遗传改良与生物技术重点
开放实验室袁山东 济南摇 圆缘园员园园曰源郾 山东省花生研究所袁山东 青岛摇 圆远远员园园冤
摘摇 要院通过构建花生未成熟种子 糟阅晕粤文库袁结合大规模 耘杂栽测序袁首次从花生中克隆了原花青素代谢
途径上的 圆 个关键酶咱肉桂酸 原 源 原羟化酶渊悦源匀冤和花青素还原酶渊粤晕砸冤暂基因的全长编码序列遥 序列
分析表明袁与其他植物的 悦源匀相比袁花生 悦源匀整个编码区高度保守袁开放阅读框长度 员缘员愿遭责袁编码蛋白
长度 缘园缘 个氨基酸袁预测的蛋白分子量为 缘苑郾 怨噪阅葬袁等电点为 怨郾 园源遥 花生中 粤晕砸 开放阅读框长度
怨远远遭责袁编码蛋白长度 猿圆员 个氨基酸袁预测的蛋白分子量为 猿缘噪阅葬袁等电点为 愿郾 猿员遥 亚细胞定位预测分析
表明袁悦源匀定位在线粒体中袁粤晕砸 则定位在胞外遥 半定量 砸栽 原 孕悦砸 结果表明袁悦源匀 在花生根尧茎尧叶尧
花尧果针尧种子中均有表达袁但在茎尧叶中表达相对较低袁而原花青素合成途径中的关键酶 粤晕砸在各个组
织中均有表达袁其中在果针中表达最强遥
关键词院花生曰 糟阅晕粤文库曰 基因克隆曰 基因表达
悦蕴韵晕陨晕郧 粤晕阅 耘载孕砸耘杂杂陨韵晕 粤晕粤蕴再杂陨杂 韵云 悦源匀 粤晕阅 粤晕砸
郧耘晕耘杂 陨晕 孕耘粤晕哉栽 渊粤则葬糟澡蚤泽 澡赠责燥早葬藻葬 蕴援 冤
酝粤 允蚤灶早员袁圆袁猿 摇 杂哉 蕴藻蚤员袁圆袁猿 摇 再哉粤晕 酝藻蚤源 摇 允陨 匀燥灶早鄄枣藻蚤员袁圆袁猿 蕴陨 粤蚤鄄择蚤灶圆袁猿 摇 宰粤晕郧 载蚤灶早鄄躁怎灶员袁圆袁猿
渊员郾 匀蚤早澡鄄栽藻糟澡 砸藻泽藻葬则糟澡 悦藻灶贼藻则袁 杂澡葬灶凿燥灶早 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻袁 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 枣燥则 郧藻灶藻贼蚤糟
陨皂责则燥增藻皂藻灶贼 燥枣 悦则燥责袁 粤灶蚤皂葬造 葬灶凿 孕燥怎造贼则赠 燥枣 杂澡葬灶凿燥灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁 允蚤爷灶葬灶袁 杂澡葬灶凿燥灶早摇 圆缘园员园园曰
圆郾 悦燥造造藻早藻 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻袁 杂澡葬灶凿燥灶早 晕燥则皂葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 允蚤爷灶葬灶袁泽澡葬灶凿燥灶早摇 圆缘园园员源曰
猿郾 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 悦则燥责 郧藻灶藻贼蚤糟 陨皂责则燥增藻皂藻灶贼 葬灶凿 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 匀怎葬灶早澡怎葬蚤澡葬蚤袁 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻袁
悦澡蚤灶葬袁 允蚤爷灶葬灶袁 杂澡葬灶凿燥灶早摇 圆缘园员园园曰 源郾 杂澡葬灶凿燥灶早 孕藻葬灶怎贼 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻袁 匝蚤灶早凿葬燥袁 泽澡葬灶凿燥灶早摇 圆远远员园园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院月赠 糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤灶早 葬 糟阅晕粤 造蚤遭则葬则赠 燥枣 责藻葬灶怎贼 蚤皂皂葬贼怎则藻 泽藻藻凿 葬灶凿 造葬则早藻 泽糟葬造藻 耘杂栽 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早袁 枣怎造造 造藻灶早贼澡 燥责藻灶
则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻 燥枣 责藻葬灶怎贼 糟蚤灶灶葬皂葬贼藻 源鄄澡赠凿则燥曾赠造葬泽藻 渊悦源匀冤 葬灶凿 葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤凿蚤灶 则藻凿怎糟贼葬泽藻 渊粤晕砸冤 憎藻则藻 糟造燥灶藻凿援 杂藻择怎藻灶糟藻
葬造蚤早灶皂藻灶贼 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 憎澡燥造藻 糟燥凿蚤灶早 则藻早蚤燥灶 燥枣 悦源匀 憎葬泽 澡蚤早澡造赠 糟燥灶泽藻则增藻凿 葬皂燥灶早 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责造葬灶贼 泽责藻糟蚤藻泽援 栽澡藻
韵砸云 燥枣 粤澡悦源匀 憎葬泽 员缘员愿遭责袁 憎澡蚤糟澡 藻灶糟燥凿藻凿 葬 责则燥贼藻蚤灶 燥枣 缘园缘 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽 憎蚤贼澡 葬 责则藻凿蚤糟贼藻凿 皂燥造藻糟怎造葬则 憎藻蚤早澡贼 燥枣 缘苑郾 怨噪阅葬
葬灶凿 葬灶 蚤泽燥藻造藻糟贼则蚤糟 责燥蚤灶贼 燥枣 怨郾 园源郾 粤澡粤晕砸 憎蚤贼澡 葬灶 韵砸云 燥枣 怨远远遭责 藻灶糟燥凿藻凿 葬 责则燥贼藻蚤灶 燥枣 猿圆员 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽 憎澡蚤糟澡 澡葬凿 葬
责则藻凿蚤糟贼藻凿 皂燥造藻糟怎造葬则 憎藻蚤早澡贼 燥枣 猿缘噪阅葬 葬灶凿 葬灶 蚤泽燥藻造藻糟贼则蚤糟 责燥蚤灶贼 燥枣 愿郾 猿员郾 杂怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼
粤澡悦源匀 憎葬泽 造燥糟葬贼藻凿 蚤灶 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬 葬灶凿 粤澡粤晕砸 蚤灶 藻曾贼则葬糟藻造造怎造葬则援 杂藻皂蚤鄄择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 孕悦砸 则藻泽怎造贼泽 凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻凿 贼澡葬贼
粤澡悦源匀 葬灶凿 粤澡粤晕砸 憎藻则藻 怎遭蚤择怎蚤贼燥怎泽造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 则燥燥贼袁 泽贼藻皂袁 造藻葬枣袁 枣造燥憎藻则袁 早赠灶燥责澡燥则藻 葬灶凿 泽藻藻凿援 栽澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣
粤澡粤晕砸 憎葬泽 泽贼则燥灶早 葬灶凿 澡蚤早澡藻则 蚤灶 早赠灶燥则责澡燥则藻 贼澡葬灶 蚤灶 燥贼澡藻则 贼蚤泽泽怎藻泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院责藻葬灶怎贼曰 糟阅晕粤 造蚤遭则葬则赠曰 早藻灶藻 糟造燥灶蚤灶早曰 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
猿源
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
摇 摇 苯丙素类物质代谢途径对植物的整个生长过程有
重要作用袁代谢产物的积累对作物的品质有重要影响遥
苯丙素类物质代谢途径通过几个重要的支路产生多种
次级代谢产物袁包括木质素合成途径尧黄酮类物质合成
途径和原花青素特异合成途径咱员暂 遥 对苯丙素类物质
代谢途径中的关键酶基因开展研究有助于进一步了解
代谢途径袁为利用基因工程改良奠定基础遥
肉桂酸鄄 源鄄羟化酶渊 糟蚤灶灶葬皂葬贼藻 源鄄澡赠凿则燥曾赠造葬泽藻袁悦源匀冤
是苯丙素类物质公共合成途径上的一个关键酶袁催化
反式肉桂酸向 源鄄香豆酸的转化渊源鄄澡赠凿则燥曾赠糟蚤灶灶葬皂葬贼藻冤遥
源鄄香豆酸在不同酶的催化下进一步向木质素途径尧花
青素途径或原花青素途径等分支途径转化遥 目前已从
苜蓿尧拟南芥等 缘源 种不同植物中分离出 悦源匀基因咱员暂 遥
花青素还原酶渊 葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤凿蚤灶 则藻凿怎糟贼葬泽藻袁粤晕砸冤是
原花青素代谢途径上的关键酶袁催化花青素转化成表
儿茶素渊圆袁猿鄄顺式黄烷 猿鄄醇冤袁进一步向液泡中转运并
聚合成为原花青素遥 原花青素在一些水果和牧草中广
泛存在而且含量不均一袁在葡萄尤其是葡萄籽中最
多咱圆暂 遥 原花青素具有消除自由基尧抗突变尧调整免疫
功能尧防止体内过氧化等功能袁其抗氧化性能比维生素
悦高 圆园 倍袁比维生素 耘高 缘园 倍咱猿袁源暂 遥 但其在对水果的
适口性尧食草动物对牧草的进食量等都有一定的影
响咱缘暂 袁我们可以通过对 粤晕砸基因的研究来均衡原花青
素在植物体内的含量袁而且 粤晕砸 作为花青素代谢途径
上的负调控基因袁其表达对花瓣尧果实等组织的呈色有
重要的影响遥 目前已从拟南芥尧葡萄尧百脉根尧银杏尧茶
叶尧苜蓿等多种植物中克隆出 粤晕砸基因遥
本研究首次对花生的 悦源匀 和 粤晕砸 基因进行克隆
和分析袁以便深入了解花生的苯丙素类物质公共合成
途径和原花青素途径袁为通过基因工程改良花生品质
奠定基础遥
员摇 材料和方法
员郾 员摇 植物材料
鲁花 员源 号尧云在园园员尧云栽园园员 等花生品种为本实验室
保存曰中花 怨 号由中国农业科学院油料作物研究所姜
慧芳研究员惠赠遥 不同花生品种均正常种植在山东省
农业科学院试验田遥 收集根尧茎尧叶尧花尧果针尧种子等
置于液氮中袁然后储存于 原苑园益冰箱中备用遥
员郾 圆摇 文库构建和 耘杂栽测序
不同发育阶段的花生未成熟混合种子用于提取总
砸晕粤袁按照 砸晕粤早藻灶贼 试剂盒 渊 孕则燥皂藻早葬冤 说明进行遥
皂砸晕粤的分离和纯化按照 孕燥造赠粤栽贼则葬糟贼 皂砸晕粤 陨泽燥造葬贼蚤燥灶
杂赠泽贼藻皂泽试剂盒渊孕则燥皂藻早葬冤进行遥 糟阅晕粤 的合成和文库
的构建按 杂贼则葬贼葬早藻灶藻 责月造怎藻泽糟则蚤责贼 陨陨 糟阅晕粤文库构建试剂
盒进行遥 从文库中随机挑取克隆袁制备质粒 阅晕粤遥 纯
化的质粒 阅晕粤 用作模板袁以 栽猿 或 栽苑 通用引物用
月蚤早阅赠藻 栽藻则皂蚤灶葬贼燥则 增猿郾 员 悦赠糟造藻 杂藻择怎藻灶糟蚤灶早 运蚤贼 渊粤月陨冤准
备测序反应袁以 粤月陨 猿苑猿园载蕴测序仪进行测序遥
员郾 猿摇 悦源匀和 粤晕砸序列分析
人工将含有较多不可读碱基的低质量序列尧长度
小于 猿园园遭责的序列尧载体序列以及引物序列去除遥 用
悦葬责猿 软件对 耘杂栽 序列聚类分析遥 将获得的 糟燥灶贼蚤早 和
单个的 耘杂栽序列用 月造葬泽贼载在最新 晕悦月陨数据库中进行
比对注释渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增 辕 月蕴粤杂栽 辕 冤遥
用 阅晕粤杂贼葬则 渊澡贼贼责院 辕 憎憎憎援 阅晕粤杂贼葬则援 糟燥皂冤进行编码序列
的预 测遥 多 序 列 比 较 用 悦造怎泽贼葬造宰员郾 愿猿 泽燥枣贼憎葬则藻
渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 糟澡援 藻皂遭灶藻贼援 燥则早 辕 泽燥枣贼憎葬则藻 辕 悦造怎泽贼葬造宰援
澡贼皂造冤程序进行遥 在不同蛋白序列比较中不同颜色氨
基酸残基的标出用 月燥曾杂澡葬凿藻 责则燥早则葬皂 渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援
糟澡援 藻皂遭灶藻贼援 燥则早 辕 泽燥枣贼憎葬则藻 辕 月韵载赃枣燥则皂援 澡贼皂造冤进行遥 推测
目的基因编码蛋白的分子量和等电点通过 澡贼贼责院 辕 辕
憎憎憎援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 贼燥燥造泽 辕 责蚤赃贼燥燥造援 澡贼皂造 获得曰信号肽预测
通过 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 糟遭泽援 凿贼怎援 凿噪 辕 泽藻则增蚤糟藻泽 辕 栽葬则早藻贼孕 和
澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 糟遭泽援 凿贼怎援 凿噪 辕 泽藻则增蚤糟藻泽 辕 杂蚤早灶葬造孕 完成曰跨膜区
预测利用 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 糟遭泽援 凿贼怎援 凿噪 辕 泽藻则增蚤糟藻泽 辕 栽酝匀酝酝鄄
圆郾 园 分析曰亚细胞定位预测通过 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 遭蚤燥蚤灶枣燥援
贼泽蚤灶早澡怎葬援 藻凿怎援 糟灶 辕 杂怎遭蕴燥糟分析获得遥
员郾 源摇 花生 悦源匀和 粤晕砸基因表达分析
从花生根尧茎尧叶尧花尧果针和种子中提取总 砸晕粤袁
以 缘滋早总 砸晕粤为模板袁用 孕则蚤皂藻杂糟则蚤责贼 员泽贼 杂贼则葬灶凿 糟阅晕粤
杂赠灶贼澡藻泽蚤泽试剂盒渊栽葬运葬砸葬冤合成第 员 链 糟阅晕粤遥 根据花
生 悦源匀 和 粤晕砸 基因序列分别设计基因特异性引物袁
悦源匀 正向引物渊缘忆鄄郧悦郧栽郧郧栽郧郧粤郧郧粤栽郧栽栽鄄猿忆冤袁悦源匀
反向引物渊缘忆鄄郧栽栽郧栽悦栽栽悦郧栽栽郧粤栽栽栽悦郧鄄猿忆冤袁 粤晕砸 正
向引物渊缘忆鄄悦栽郧粤粤郧粤悦悦悦栽郧粤郧粤粤栽郧鄄猿忆冤袁粤晕砸 反向
引物渊缘忆鄄郧郧粤粤粤栽悦郧栽栽郧悦悦栽郧栽栽粤栽鄄猿忆冤袁以花生各组
织 糟阅晕粤 为模板扩增目的基因片段袁 以花生 粤糟贼蚤灶 基
因作为模板加样参考遥 各 圆园滋造 孕悦砸 反应体系院孕枣怎
栽葬择 阅晕粤 孕燥造赠皂藻则葬泽藻 园郾 猿滋造曰 缘 伊 遭怎枣枣藻则 源郾 园滋造曰 凿晕栽孕
员郾 远滋造曰糟阅晕粤模板 员郾 园滋造曰正向引物 云 园郾 缘滋造曰反向引物
砸 园郾 缘滋造曰 凿凿匀圆韵 员圆郾 员滋造遥 扩增条件为 悦源匀院 怨源益
缘皂蚤灶曰怨源益 猿园泽袁缘远益 猿园泽袁苑圆益 源园泽袁圆愿 个循环袁苑圆益
苑皂蚤灶遥 粤晕砸院 怨源益 缘皂蚤灶曰怨源益 猿园泽曰远园益 猿园泽曰苑圆益 源园泽曰
圆愿 个循环袁苑圆益 苑皂蚤灶遥
源源
摇 员 期 花生 悦源匀和 粤晕砸基因的克隆与表达研究
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 花生 耘杂栽测序及 悦源匀和 粤晕砸基因克隆
图 员摇 花生 悦源匀蛋白氨基酸序列与其他植物来源的 悦源匀氨基酸序列比较
云蚤早援 员摇 粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻 葬造蚤早灶皂藻灶贼 燥枣 悦源匀 责则燥贼藻蚤灶泽 枣则燥皂 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责造葬灶贼 泽责藻糟蚤藻泽
粤澡院花生曰蕴造院银合欢渊粤悦在缘源怨园远冤曰悦葬院辣椒渊粤粤郧源猿愿圆源冤曰郧葬院亚洲棉渊粤粤郧员园员怨苑冤曰郧皂院大豆渊粤悦砸源源圆圆苑冤曰
月则院芜菁渊月粤陨苑苑源愿员冤曰郧澡院陆地棉 原 员渊粤悦匀缘远缘圆园冤曰郧遭院银杏渊粤粤宰苑园园圆员冤曰粤贼院拟南芥渊粤粤月缘愿猿缘缘冤遥 下图同遥
粤澡院 责藻葬灶怎贼曰 蕴造院 蕴藻怎糟葬藻灶葬 造藻怎糟燥糟藻责澡葬造葬 渊粤悦在缘源怨园远冤曰 悦葬院 悦葬责泽蚤糟怎皂 葬灶灶怎怎皂 渊粤粤郧源猿愿圆源冤曰 郧葬院 郧燥泽泽赠责蚤怎皂 葬则遭燥则藻怎皂 渊粤粤郧员园员怨苑冤曰
郧皂院 郧燥泽泽赠责蚤怎皂 葬则遭燥则藻怎皂渊粤悦砸源源圆圆苑冤曰 月则院 月则葬泽泽蚤糟葬 则葬责葬渊月粤陨苑苑源愿员冤曰 郧澡院 郧燥泽泽赠责蚤怎皂 澡蚤则泽怎贼怎皂 渊粤悦匀缘远缘圆园冤曰
郧遭院 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 渊粤粤宰苑园园圆员冤曰 粤贼院 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 渊粤粤月缘愿猿缘缘冤援 栽澡藻 泽葬皂藻 葬泽 枣燥造造燥憎蚤灶早 枣蚤早怎则藻泽援
从花生未成熟种子 糟阅晕粤 文库中随机挑选克隆袁
提取质粒 阅晕粤袁以 栽猿 和 栽苑 通用引物进行大规模 耘杂栽
测序遥 对获得的 员苑园园园 条花生 耘杂栽序列进行聚类分析
和功能注释袁目前已经向 晕悦月陨 凿遭耘杂栽提交 愿园园园 多条遥
对花生 糟阅晕粤文库的功能注释结果显示袁有 员 个克隆
渊耘耘员圆缘苑源怨冤编码花生 悦源匀 蛋白遥 对重测序和拼接后
的序列通过 阅晕粤杂栽粤砸分析袁结果显示 悦源匀 基因有完
整的编码框袁编码的蛋白质含有 缘园缘 个氨基酸袁相对分
子量为 缘苑郾 怨噪阅葬袁等电点为 怨郾 园源袁属于 责源缘园 泽怎责藻则枣葬皂蚤造赠
家族遥 通过 栽葬则早藻贼孕和 杂蚤早灶葬造孕分析袁发现花生 悦源匀 蛋
白可能有信号肽袁并推测其可能是分泌蛋白遥 用
栽酝匀酝酝鄄圆郾 园 分析得知袁该蛋白含有 员 个跨膜结构域
渊泽藻择怎藻灶糟藻 责燥泽泽蚤遭造藻 晕鄄贼藻则皂 泽蚤早灶葬造 泽藻择怎藻灶糟藻院 蚤灶泽蚤凿藻员鄄愿袁
栽酝澡藻造蚤曾怨鄄圆远袁燥怎贼泽蚤凿藻圆苑鄄缘园缘冤袁亚细胞定位分析显示该
缘源
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
图 圆摇 花生 粤晕砸蛋白氨基酸序列与其他植物来源的 粤晕砸氨基酸序列比较
云蚤早援 圆摇 粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻 葬造蚤早灶皂藻灶贼 燥枣 粤晕砸 责则燥贼藻蚤灶泽 枣则燥皂 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责造葬灶贼 泽责藻糟蚤藻泽
蕴糟院百脉根渊粤月悦苑员猿猿圆冤曰酝贼院蒺藜苜蓿渊粤粤晕苑苑苑猿缘 冤曰酝泽院紫花苜蓿渊粤阅运怨缘员员远 冤曰灾增院葡萄渊粤粤在愿圆源园怨冤曰悦泽院茶树渊粤阅云源猿苑缘员冤曰
郧澡院陆地棉 原 圆 渊粤悦灾苑圆远源员冤曰孕糟院西洋梨渊粤月月苑苑远怨缘冤曰粤贼院拟南芥渊粤粤云圆猿愿缘怨冤曰月灶院油菜渊粤悦再猿园源圆源冤曰郧皂院大豆渊粤悦哉员怨园缘猿冤遥 下图同遥
蕴糟院 蕴燥贼怎泽 糟燥则灶蚤糟怎造葬贼怎泽 渊粤月悦苑员猿猿圆冤曰 酝贼院 酝藻凿蚤糟葬早燥 贼则怎灶糟葬贼怎造葬 渊粤粤晕苑苑苑猿缘冤曰 酝泽院 酝藻凿蚤糟葬早燥 泽葬贼蚤增葬 渊粤阅运怨缘员员远冤曰 灾增院 灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣藻则葬渊粤粤在愿圆源园怨冤曰 悦泽院
悦葬皂藻造造蚤葬 泽蚤灶藻灶泽蚤泽 渊粤阅云源猿苑缘员冤曰 郧澡院 郧燥泽泽赠责蚤怎皂 澡蚤则泽怎贼怎皂 渊粤悦灾苑圆远源员冤曰 孕糟院 孕赠则怎泽 糟燥皂皂怎灶蚤泽 渊粤月月苑苑远怨缘冤曰 粤贼院 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 渊粤粤云圆猿愿缘怨冤曰
月灶院 月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽 渊粤悦再猿园源圆源冤曰 郧皂院 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 渊粤悦哉员怨园缘猿冤援 栽澡藻 泽葬皂 葬泽 枣燥造造燥蚤灶早 枣蚤早怎则藻泽援
蛋白位于线粒体中遥
从文库中获得 圆 个克隆渊耘郧猿苑圆缘缘源袁耘郧猿苑猿愿缘苑冤
和其他物种的 粤晕砸 基因同源袁挑取克隆进行重新测序
和拼 接袁 得 到 粤晕砸 基 因 的 完 整 编 码 框遥 通 过
阅晕粤杂栽粤砸分析 粤晕砸基因编码的蛋白质含有 猿圆员 个氨
基酸袁预测其相对分子量为 猿缘噪阅葬袁等电点为 愿郾 猿员袁属
于 晕粤阅月赃砸燥泽泽皂葬灶灶 泽怎责藻则枣葬皂蚤造赠 家族遥 通过 栽葬则早藻贼孕 和
杂蚤早灶葬造孕 分析袁发现花生 粤晕砸 蛋白没有信号肽遥 用
栽酝匀酝酝鄄圆郾 园 分析得知袁该蛋白不含跨膜结构域袁属于
膜外蛋白渊杂藻择怎藻灶糟藻 晕怎皂遭藻则 燥枣 责则藻凿蚤糟贼藻凿 栽酝匀泽院园冤遥 亚
细胞定位分析显示该蛋白位于胞外遥
圆郾 圆摇 不同来源的 悦源匀蛋白和 粤晕砸蛋白序列比较
通过 悦源匀 蛋白序列的比对可以看出袁花生 悦源匀
蛋白序列与其他物种来源的 悦源匀 蛋白序列高度保守袁
相似性达到 怨缘豫以上渊图 员冤遥 花生 粤晕砸 蛋白序列和
来源于其他物种的 粤晕砸蛋白序列同源性很高袁氨基酸
序列也高度保守袁但 晕端氨基酸序列变异较大渊图 圆冤遥
进化树分析表明袁花生 悦源匀和 粤晕砸 圆 个基因与豆
科植物渊大豆尧苜蓿尧百脉根冤的 悦源匀和 粤晕砸 的亲缘关
系较近袁与其他属种植物的关系相对较远渊图 猿冤遥
远源
摇 员 期 花生 悦源匀和 粤晕砸基因的克隆与表达研究
图 猿摇 花生 悦源匀和 粤晕砸蛋白与其他来源的 悦源匀
和 粤晕砸蛋白进化树分析云蚤早援 猿摇 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 燥枣 悦源匀 葬灶凿粤晕砸 枣则燥皂 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责造葬灶贼 泽责藻糟蚤藻泽
圆郾 猿摇 花生 悦源匀基因和 粤晕砸基因的表达分析
砸栽鄄孕悦砸结果渊图 源 原 粤冤表明袁鲁花 员源 中 悦源匀 基
因在根尧茎尧叶尧花尧果针和种子中都有表达袁在茎尧叶中
表达量相对较低袁表达量没有明显的组织特异性遥 总
的来说袁悦源匀在各个组织中的表达基本一致遥
图 源摇 花生 悦源匀和 粤晕砸在鲁花 员源 不同组织的表达渊葬冤及 悦源匀和 粤晕砸在不同花生品种种子中的表达渊遭冤
云蚤早援 源摇 栽澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 粤澡悦源匀 葬灶凿 粤澡粤晕砸 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤泽泽怎藻泽 燥枣 蕴怎澡怎葬员源 渊葬冤 葬灶凿 贼澡藻
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 粤澡悦源匀 葬灶凿 粤澡粤晕砸 蚤灶 泽藻藻凿泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责藻葬灶怎贼 糟怎造贼蚤增葬则泽渊遭冤
粤院 员院根曰 圆院茎曰 猿院叶曰 源院花曰 缘院果针曰 远院种子遥 月院 员院鲁花 员源曰圆院云栽园园员曰猿院云在园园员曰源院中花 怨 号
粤院 员院则燥燥贼曰 圆院泽贼藻皂曰 猿院造藻葬枣曰 源院 枣造燥憎藻则曰 缘院 早赠灶燥责澡燥则藻曰 远院 泽藻藻凿援 月院 员院 蕴怎澡怎葬 员源曰 圆院 云栽园园员曰 猿院 云在园园员曰 源院 在澡燥灶早澡怎葬 怨
在鲁花 员源尧云栽园园员渊种皮红色冤尧云在园园员渊种皮白色冤
及中花 怨 号渊种皮黑色冤不同品种的花生种子中 悦源匀
基因的表达情况也基本一致渊图 源 原 月冤遥 而拟南芥中
悦源匀在根尧长角果中的表达较叶和花中强咱远暂 遥
粤晕砸基因在鲁花 员源 的不同组织中都有表达渊图 源
原 粤冤袁其中在果针中高水平表达袁在其他组织尤其是
花和种子中表达量较低遥 由于 粤晕砸 基因在花青素合
成途径中具有负调控作用袁故推测果针在发育过程中
入土生长袁原花青素得到积累袁合成的花青素含量较
少袁因而 粤晕砸表达量较高曰而在花和种子中由于 粤晕砸
表达量低袁间接促进了作用底物向花青素途径的转化袁
从而使得花尧种子种皮呈现出不同的颜色遥
粤晕砸在鲁花 员源尧云栽园园员渊种皮红色冤尧云在园园员渊种皮
白色冤及中花 怨 号渊种皮黑色冤不同品种种子中进行表
达时表达量都很低渊图 源 原 月冤遥 表明 粤晕砸在花青素途
径中没有起到限速酶的作用遥 月燥泽泽 等研究表明袁原花
青素或花青素的代谢途径受多方面因素影响咱愿暂 袁如受
多基因调控或受环境尧责匀值影响等遥
猿摇 讨论
对苯丙素类物质合成途径以及各分支途径代谢调
控的研究袁可为基因工程改良作物次生代谢物质积累
提供有用的信息遥 在拟南芥中发现 悦源匀 突变体能正
常生长发育袁而且种皮能正常积累色素袁但具体机理仍
不清楚咱怨暂 遥 近年来对黄籽油菜的研究较多袁黄籽油菜
本身含油量比黑籽油菜高袁而种子中木质素和种皮色
素含量却减少遥 对代谢途径上相关基因的研究可以增
强对油菜黄色种子性状形成分子机制的了解袁以通过
转基因技术改良得到稳定的黄籽油菜咱员袁员园袁员员暂 遥 在大蒜
中 悦源匀的转录在根中最高袁而在苯丙素类物质富集的
茎中却很低遥 推测大蒜中苯丙素类物质可能在根部合
成后转运到茎中咱员圆暂 袁这与花生中 悦源匀 基因的 砸栽鄄孕悦砸
结果基本一致袁在茎尧叶中的表达量相对较低遥
粤晕砸对种皮色素积累有重要作用遥 拟南芥中
粤晕砸基因又被称为 月粤晕再哉蕴杂渊月粤晕冤袁是调节种皮色泽
的负调控基因袁该基因突变后种皮因积累花青素而显
红色袁但类黄酮含量与正常植株含量相差不多咱员猿袁员源暂 遥
突变体除影响种皮着色外袁还影响植物生长状况等其
苑源
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员圆袁圆远渊员冤院园园源猿 耀 园园源愿
他一些性状咱员缘暂 遥 基因的表达受多因素影响袁研究发现
葡萄中 粤晕砸的表达受转录因子 灾增酝再月孕粤员 的激活袁在
果实和种子中表达丰富咱员远暂 遥
花生中由于原花青素的存在袁食用过多时它们能
与蛋白质和消化酶形成难溶于水的复合物袁影响对其
的消化吸收袁进而影响到品质和口感袁我们可以通过对
粤晕砸的定向调节以改变花生的品质袁增加其口感遥 花
青素作为一种天然色素目前已广泛应用于医药尧食品尧
化工等领域袁 粤晕砸的研究对均衡植物花青素含量袁提
高植物经济附加值有重要意义遥
研究发现 猿缘杂 启动子驱动 灾增粤晕砸 表达的转基因
烟草植株中袁灾增粤晕砸表达增强花瓣的颜色减弱袁花青素
含量减少咱苑暂 遥 故推测袁粤晕砸 在花青素途径和原花青素
途径之间的转化中具有重要作用遥 花生 悦源匀 和 粤晕砸
基因的克隆研究对于提高花生的品质尧增强花生的抗
病性以及在胁迫应答等方面有重要应用价值遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 悦澡藻灶 粤 匀袁 悦澡葬蚤 再 砸袁 蕴蚤 允 晕袁 悦澡藻灶 蕴援 酝燥造藻糟怎造葬则 糟造燥灶蚤灶早 燥枣 贼憎燥
早藻灶藻泽 藻灶糟燥凿蚤灶早 糟蚤灶灶葬皂葬贼藻 源鄄澡赠凿则燥曾赠造葬泽藻 渊悦源匀冤 枣则燥皂 燥蚤造泽藻藻凿 则葬责藻
渊月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽冤 咱允暂 援 允 月蚤燥糟澡藻皂 酝燥造 月蚤燥造袁 圆园园苑袁 源园渊圆冤院 圆源苑 原
圆远园
咱 圆 暂 摇 王 晨袁 房经贵袁 曹 雪袁 杨 光援 葡萄中原花青素的代谢咱 允暂 援 中
国农学通报袁 圆园园怨袁 圆缘渊园怨冤院 员远怨 原 员苑猿
咱 猿 暂 摇 月葬早糟澡蚤 阅袁 月葬早糟澡蚤 酝袁 杂贼燥澡泽 杂 允袁 阅葬泽 阅 运袁 砸葬赠 杂 阅袁 运怎泽扎赠灶泽噪蚤 悦
粤袁 允燥泽澡蚤 杂 杂袁 孕则怎藻泽泽 匀 郧援 云则藻藻 则葬凿蚤糟葬造 葬灶凿 早则葬责藻 泽藻藻凿
责则燥葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤凿蚤灶 藻曾贼则葬糟贼院 蚤皂责燥则贼葬灶糟藻 蚤灶 澡怎皂葬灶 澡藻葬造贼澡 葬灶凿 责则藻增藻灶贼蚤燥灶
咱允暂 援 栽燥曾蚤糟燥造燥早赠袁 圆园园园袁员源愿渊圆 原 猿冤院 员愿苑 原 员怨苑
咱 源 暂 摇 月葬早糟澡蚤 阅袁 郧葬则早 粤袁 运则燥澡灶 砸 蕴袁 月葬早糟澡蚤 酝袁 栽则葬灶 酝 载袁 杂贼燥澡泽 杂 允援
韵曾赠早藻灶 枣则藻藻 则葬凿蚤糟葬造 泽糟葬增藻灶早蚤灶早 葬遭蚤造蚤贼蚤藻泽 燥枣 增蚤贼葬皂蚤灶泽 悦 葬灶凿 耘袁 葬灶凿 葬
早则葬责藻 泽藻藻凿 责则燥葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤凿蚤灶 藻曾贼则葬糟贼 蚤灶 增蚤贼则燥 咱 允暂 援 砸藻泽 悦燥皂皂怎灶 酝燥造
孕葬贼澡燥造 孕澡葬则皂葬糟燥造袁 员怨怨苑袁 怨缘渊圆冤院 员苑怨 原 员愿怨
咱 缘 暂 摇 潘伟彬袁 黄毅斌援植物单宁及其对牧草品质的影响研究进展芋援
单宁对牧草品质和反刍动物养殖的影响 咱 允暂 援 热带农业科学袁
圆园园愿袁 圆愿渊源冤院 愿远 原 怨圆
咱 远 暂 摇 酝蚤扎怎贼葬灶蚤 酝袁 韵澡贼葬 阅袁 杂葬贼燥 砸援 陨泽燥造葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 糟阅晕粤 葬灶凿 葬 早藻灶燥皂蚤糟
糟造燥灶藻 藻灶糟燥凿蚤灶早 糟蚤灶灶葬皂葬贼藻 源鄄澡赠凿则燥曾赠造葬泽藻 枣则燥皂 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 葬灶凿 蚤贼泽
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 皂葬灶灶藻则 蚤灶 责造葬灶贼葬 咱 允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造袁 员怨怨苑袁 员员猿 渊猿冤院
苑缘缘 原 苑远猿
咱 苑 暂摇 月燥早泽 允袁 阅燥憎灶藻赠 酝 韵袁 匀葬则增藻赠 允 杂袁 粤泽澡贼燥灶 粤 砸袁 栽葬灶灶藻则 郧 允袁
砸燥遭蚤灶泽燥灶 杂 孕援 孕则燥葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤凿蚤灶 泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 葬灶凿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 早藻灶藻泽
藻灶糟燥凿蚤灶早 造藻怎糟燥葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤凿蚤灶 则藻凿怎糟贼葬泽藻 葬灶凿 葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤凿蚤灶 则藻凿怎糟贼葬泽藻
蚤灶 凿藻增藻造燥责蚤灶早 早则葬责藻 遭藻则则蚤藻泽 葬灶凿 早则葬责藻增蚤灶藻 造藻葬增藻泽咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造袁
圆园园缘袁员猿怨渊圆冤院 远缘圆 原 远远猿
咱 愿 暂摇 月燥泽泽 孕 运袁 阅葬增蚤藻泽 悦袁 砸燥遭蚤灶泽燥灶 杂 孕援 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣
葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤灶 责葬贼澡憎葬赠 早藻灶藻泽 蚤灶 凿藻增藻造燥责蚤灶早 灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣藻则葬 蕴援 糟增 泽澡蚤则葬扎
早则葬责藻 遭藻则则蚤藻泽 葬灶凿 贼澡藻 蚤皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽 枣燥则 责葬贼澡憎葬赠 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 咱允暂 援 孕造葬灶贼
孕澡赠泽蚤燥造袁 员怨怨远袁员员员渊源冤院员园缘怨 原 员园远远
咱 怨 暂摇 赵文军袁 张 迪袁 马丽娟袁 柴友荣援 原花青素的生物合成途径尧功
能基因和代谢工程 咱允暂 援 植物生理学通讯袁 圆园园怨袁源缘渊缘冤院 缘园怨 原
缘员怨
咱员园暂摇 匀藻灶藻藻灶 宰 运袁 月则蚤泽皂葬则 运援 酝葬贼藻则灶葬造 葬灶凿 藻皂遭则赠燥灶葬造 糟燥灶贼则燥造 燥枣 泽藻藻凿
糟燥造燥怎则 遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 月则葬泽泽蚤糟葬 葬造遭燥早造葬遭则葬 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 咱 允暂 援 孕造葬灶贼
月则藻藻凿蚤灶早袁 圆园园员袁员圆园渊源冤院 猿圆缘 原 猿圆怨
咱员员暂摇 阅藻遭藻葬怎躁燥灶 陨袁 晕藻泽蚤 晕袁 孕藻则藻扎 孕袁 阅藻增蚤糟 酝袁 郧则葬灶凿躁藻葬灶 韵袁 悦葬遭燥糟澡藻
酝袁 蕴藻责蚤灶蚤藻糟 蕴援 孕则燥葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤凿蚤灶鄄葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤灶早 糟藻造造泽 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽
贼藻泽贼葬院 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 葬灶凿 则燥造藻 蚤灶 泽藻藻凿 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 咱允暂 援
孕造葬灶贼 悦藻造造援 袁 圆园园猿袁员缘渊员员冤院 圆缘员源 原 圆缘猿员
咱员圆暂摇 栽怎葬灶 孕 粤袁 孕葬则噪 晕 陨袁 蕴蚤 载袁 载怎 匀袁 运蚤皂 匀 匀袁 孕葬则噪 杂 哉援 酝燥造藻糟怎造葬则
糟造燥灶蚤灶早 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 责澡藻灶赠造葬造葬灶蚤灶藻 葬皂皂燥灶蚤葬鄄造赠葬泽藻 葬灶凿
糟蚤灶灶葬皂葬贼藻 源鄄澡赠凿则燥曾赠造葬泽藻 蚤灶 贼澡藻 责澡藻灶赠造责则燥责葬灶燥蚤凿 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 责葬贼澡憎葬赠
蚤灶 早葬则造蚤糟 渊 粤造造蚤怎皂 泽葬贼蚤增怎皂冤 咱 允暂 援 允 粤早则蚤糟 云燥燥凿 悦澡藻皂袁 圆园员园袁缘愿
渊圆园冤院 员园怨员员 原 员园怨员苑
咱员猿暂摇 载蚤藻 阅 再袁 杂澡葬则皂葬 杂 月袁 阅蚤曾燥灶 砸 粤援 粤灶贼澡燥糟赠葬灶蚤凿蚤灶 则藻凿怎糟贼葬泽藻泽 枣则燥皂
酝藻凿蚤糟葬早燥 贼则怎灶糟葬贼怎造葬 葬灶凿 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 咱 允暂 援 粤则糟澡 月蚤燥糟澡藻皂
月蚤燥责澡赠泽援 袁 圆园园源袁 源圆圆渊员冤院 怨员 原 员园圆
咱员源暂摇 粤造遭藻则贼 杂袁 阅藻造泽藻灶赠 酝袁 阅藻增蚤糟 酝援 月粤晕再哉蕴杂袁 葬 灶燥增藻造 灶藻早葬贼蚤增藻
则藻早怎造葬贼燥则 燥枣 枣造葬增燥灶燥蚤凿 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 蚤灶 贼澡藻 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 泽藻藻凿 糟燥葬贼咱 允暂 援
孕造葬灶贼 允袁 员怨怨苑袁员员渊圆冤院 圆愿怨 原 圆怨怨
咱员缘暂摇 蕴藻责蚤灶蚤藻糟 蕴袁 阅藻遭藻葬怎躁燥灶 陨袁 砸燥怎贼葬遭燥怎造 允 酝袁 月葬怎凿则赠 粤袁 孕燥怎则糟藻造 蕴袁
晕藻泽蚤 晕袁 悦葬遭燥糟澡藻 酝援 郧藻灶藻贼蚤糟泽 葬灶凿 遭蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠 燥枣 泽藻藻凿 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽
咱允暂 援 粤灶灶怎 砸藻增 孕造葬灶贼 月蚤燥造袁 圆园园远袁缘苑院 源园缘 原 源猿园
咱员远暂摇 月燥早泽 允袁 允葬枣枣佴 云 宰袁 栽葬噪燥泽 粤 酝袁 宰葬造噪藻则 粤 砸袁 砸燥遭蚤灶泽燥灶 杂 孕援 栽澡藻
早则葬责藻增蚤灶藻 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则 灾增酝再月孕粤员 则藻早怎造葬贼藻泽 责则燥葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤凿蚤灶
泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 凿怎则蚤灶早 枣则怎蚤贼 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 咱 允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造袁 圆园园苑袁员源猿
渊猿冤院 员猿源苑 原 员猿远员
渊责任编辑摇 王媛媛冤
愿源