为挖掘花生茎中重要的功能基因,了解花生茎生长发育的分子机理,以闽花6号为材料,利用SMART技术成功构建了花生茎不同生育时期混合的全长cDNA文库,并对文库的部分序列进行了测序及分析.结果表明,该文库原始库容为1.25×106 cfu·mL-1,重组率达100%,插入片段大小为750~2 000 bp,平均插入片段大小为1 000bp,达到文库质量要求.随机挑选50个单克隆进行5‘端测序,共获得50条有效序列.通过与NCBI 非冗余蛋白质数据库进行比对和注释,获得已知功能基因或具推测功能的基因29个,未知功能基因9个,新基因12个,其中47个(94%)基因为花生未报道的基因.因此,该文库的构建为克隆和研究花生茎部重要表达基因,从分子水平上揭示花生茎的生长发育规律提供了基础.
全 文 ：!核 农 学 报!"#$%!"&"$## $$’H. )$’’"
!"#$%&’"()#*’+&$,-$.*#’/#$&’0*.+%*+1
收稿日期!"#$(*$$*".!接受日期!"#$%*#.*#’
基金项目!科技部国际科技合作计划项目""##&-D,($%.## !国家+&H(,计划项目""#$(,,$#"H#" @.# !福建省科技厅高校产学合作科技重大项
目""#$$E.$#$##H%#
作者简介!陈华!女!助理研究员!主要从事花生功能基因组学研究% /*0123$U;U95"#$(4$H(8;J0
通讯作者!庄伟建!男!教授!主要从事花生遗传育种和生物技术研究% /*0123$e926215l$4$H(8;J0
文章编号!$###*&..$""#$%#$#*$’H.*#&
花生茎全长 ;-E,文库的构建与分析
陈!华$!邓!烨$!张!冲$!蔡铁城$!熊发前"!唐荣华"!周双彪$!庄伟建$
" $ 福建省作物分子与细胞生物学重点实验室!福建 福州!(.###"* "广西农业科学院经济作物研究所!广西 南宁!.$#"".#
摘!要!为挖掘花生茎中重要的功能基因!了解花生茎生长发育的分子机理!以闽花 H 号为材料!利用
?Z,WF技术成功构建了花生茎不同生育时期混合的全长 ;-E,文库!并对文库的部分序列进行了测序
及分析’ 结果表明!该文库原始库容为 $Q". ‘$#H ;f7%0B@$!重组率达 $##R!插入片段大小为 ’.# )
" ###
功能的基因 "A 个!未知功能基因 A 个!新基因 $" 个!其中 %’ 个"A%R#基因为花生未报道的基因’ 因
此!该文库的构建为克隆和研究花生茎部重要表达基因!从分子水平上揭示花生茎的生长发育规律提供
了基础’
关键词!花生&?Z,WF技术&全长 ;-E,文库&茎
-SC$$#Q$$&HAT682PP58$##*&..$Q"#$%Q$#8$’H.
!!花生是以收获种子为主要目的的经济作物% 近年
来!花生茎因其含有多种天然保健成分以及茎的综合
利用价值 &$’ !已引起学者的广泛关注% 花生茎富含膳
食纤维!其中天然水溶性膳食纤维含量可达 HR )
&R!是天然膳食纤维很好的来源 &"’ % 膳食纤维"-D#
有预防肥胖症(心脑血管疾病等富贵病的显著功能%
花生茎中含有白藜芦醇!具有抗氧化(清除自由基(延
缓衰老和保护心血管的功效!是一种极具开发价值的
天然物质% 此外!利用花生茎蔓栽培食用菌也多有报
道 &(’ % 然而!针对花生茎的分子生物学研究甚少!对
于控制花生茎生长发育的基因表达调控的研究也鲜有
报道%
;-E,文库的构建和筛选是基因克隆的重要方法
之一!是发现新基因和研究基因功能的基本工具% 全
长 ;-E,文库是高效(大规模获得基因全序列信息的
一条有效途径!尤其是对基因组庞大!暂时尚不能进行
全基因组测序的生物来说!更是开展功能基因组研究
的重要途径 &%’ % ?Z,WF技术由 I3J5[9;U 公司创建!主
要利用 VX209?;X2Y[WF反转录酶和 ?f2#的特性!能够
在原始 WE,用量较少的情况下!快速(简单的构建全
长 ;-E,文库% 目前!?Z,WF已被广泛应用于各种生
物全长 ;-E,文库的构建% 利用 ?Z,WF技术已有多
个花生全长 ;-E,文库的报道 &. @$#’ !但是以花生茎为
材料!利用 ?Z,WF技术进行全长 ;-E,文库的构建尚
鲜见报道% 本研究利用 ?Z,WF技术在成功构建了多
个花生器官全长 ;-E,文库的基础上!构建了花生茎
全长 ;-E,文库!以期为进一步分离(克隆花生茎组织
特异表达基因提供基础%
!"材料与方法
!#!"材料
$Q$Q$!花生材料!以花生优良品种闽花 H 号为材料!
于福建农林大学油料作物研究所网室内种植!于播种
后 (#(.#(’#($"#: 取花生茎!置 @’#^ 冰箱中保存备
用%
$Q$Q"!主要试剂!VX209X?;X2Y[逆转录酶!WE1P9
C5U2<2[JX!?f2#!/=F1o!:EFV(-B"### 和 -B$.### 分
子标准等购自大连宝生物公司"F,k,W,#!连接酶购
于 E/+!电转化感受态细胞 -].,由本实验室制备!
.H’$
核!农!学!报 "& 卷
胶回收试剂盒购自杭州博日科技有限公司!其他试剂
采用国产分析纯%
$Q$Q(!引物!(nVIWYX209X$.n@,,GI,GFGGF,FI,
,IGI,G,GFGGIIG,GGIGGIIG,*: "F# (#E@$E@
(n*?Z,WFCOS32LJ57;39J[2:9$.n@,,GI,GFGGF,FI
,,IGI,G,GFGGII,FF,IGGIIGGG@(n*.nVIW
YX209X$.n@,,GI,GFGGF,FI,,IGI,G,GF@(n
!#$"方法
$Q"Q$!花生茎总 WE,的提取!参照陈华等 &’’ 的
IF,+法提取花生不同生长发育时期等量混合茎总
WE,!用 E-@"### 型分光光度计﹙美国 FU9X0J公司
﹚检测总 WE,的浓度和纯度!琼脂糖凝胶电泳检测其
完整性%
$Q"Q"!;-E,第一链的合成!在 #Q" 0B的 -/VI处
理过的 VIW管中! 依次加入 ""B"("L#的 WE,! $"B
(rVIWVX209X引物!$"B?Z,WFCOS32LJ57;39J[2:9引
物! $"B::]"S混匀! 瞬间离心! 置于 H.^的水浴锅
中反应 . 025! 迅速置于冰上 " 025! 瞬间离心数秒%
然后! 依次加入以下试剂$ %"B. ‘VX209?;X2Y[+7f9X!
$"B:EFV"$# 00J3)B@$# 混合液!"#752[PWE1P9抑制
剂! $"BVX209?;X2Y[反 转 录 酶! 加 ::]"S补 足 至
$."B!轻轻混匀!瞬间离心后于 VIW仪上 %"^ 反应 $
U 后!’#^加热 $.025! 最后! 冰上冷却%
$Q"Q(!B-*VIW法合成双链!;-E,在 #Q".0B的
VIW管中依次加入以下试剂$ &#"B::]" S! $#"B$#
‘/=F1o +7f9X! " "B:EFVZ2=[7X9"$# 00J3)B@$#!
%"B.nVIW引物! #Q. "B/=F1o 酶! ""B;-E,第一
链8VIW反应条件为 A.^ $ 025* A.^ $. P! H%^ (#
P! ’"^ H 025! $. 个循环% 合成的 :P;-E,即为全长
;-E,文库% 取 " "B的产物! 用 $R 的琼脂糖凝胶电
泳进行检测% 剩余 :P;-E,于 @’#^ 保存%
$Q"Q%!全长 ;-E,文库的构建!取 $## "B双链
;-E,!加入 % "B蛋白酶 k" "#L)B@$#!%. ^温浴反应
"#025!去除蛋白后!溶于 ’A"B去离子水% 加入 $."B
?f2#酶于 .#^ 酶切 "U% 将上述酶切产物经 $Q.R琼
脂糖凝胶电泳!回收 #Q’. ).Q# N< 之间的片段!浓缩
沉淀后溶于 ’ "B去离子水中% 酶切产物在 F% -E,
连接酶作用下!与质粒载体 Y-EW*BC+于 $H^ 下连
接过夜!连接体系为 ."B% 连接产物经电击转化入
%."B大肠杆菌 -].1感受态细胞后迅速加入 A.#"B
B+培养基!于 (’^恒温震荡培养 $U!即得原始文库%
$Q"Q.!文库质量鉴定!以 Z$( 通用引物 "" .n@
GF,,,,IG,IGGII,G @ (n( .n @
I,GG,,,I,GIF,FG,I@(n##对随机选取的单菌落
进行 VIW检测!反应结束后取 ."BVIW产物进行检
测!确定文库插入片段的大小和重组率%
$Q"QH!文库 /?F测序及生物信息学分析!随机挑取
.# 个单克隆分别接种于加氯霉素的 B+液体培养基
上!于 (’^摇床 ".#X)025 @$培养过夜后加甘油保存菌
种!将菌液送至上海国家人类基因组南方研究中心进
行测序!测序引物为F’ 通用引物% 将测序得到的序列
去除载体序列后进行生物信息学分析%
$"结果与分析
$#!"总 VET质量
提取的总 WE,经过凝胶电泳分析表明 "&? 和
$&? 条带清晰!无拖尾"图 $#!两者亮度比约为 "b$!说
明所提取的 WE,完好无降解% 紫外分光光度计测定
S-"H# TS-"&#值为 $QA#!表明获得的 WE,纯度较高!可
以用来进行文库构建%
注$Z$ -B"###Z1XN9X* $$ 总 WE,%
EJ[9$Z$ -B"### Z1XN9X* $$ [J[13WE,8
图 !"花生茎总 VET电泳图
4356!"*)()()82+,.9,+)/3/,02,2&(VET
3/,(&2);0+,:.)&1-2/2):
$#$"双链 8RET扩增
参照 VX209X?;X2Y[逆转录酶说明书!以总 WE,为
模板逆转录得到第一链 ;-E,!经 B-*VIW合成双链
;-E,% 经 $R琼脂糖凝胶电泳检测!:P;-E,弥散分
布于 .## ). ###
$#F"文库质量
对文库随机挑取的单菌落进行菌落 VIW!如图 (
所示!凝胶电泳检测结果显示外源片段大小主要分布
在 ’.# )" ###
!$# 期 花生茎全长 ;-E,文库的构建与分析
注$Z$ -B"###Z1XN9X* $$ 双链 ;-E,%
EJ[9$Z$ -B"### Z1XN9X* $$ :P;-E,8
图 $"花生茎双链 8RET电泳图
4356$"*)()()82+,.9,+)/3/,0;/8RET,0.)&1-2/2):
库容为 $Q". ‘$#H ;f7)0B@$!达到文库的质量要求%
$#K"文库测序与分析
注$Z$ -B"###Z1XN9X* $ @"%$ 扩增产物
EJ[9$Z$ -B"### Z1XN9X* $ @"%$,0Y32f2;1[2J5 YXJ:7;[P
图 F"菌液 >@V验证
4356F"@,(,1N >@VQ&(3;&23,1
随机挑取的 .# 个克隆进行 .n端测序后得到 .#
条高质量的 /?F序列!对这 .# 条 /?F序列用 EI+C
中的 +31P[i程序进行分析!比对结果显示!有 $( 条序
列与大豆相关基因具有较高的同源性!与豆科植物鹰
嘴豆(苜蓿分别有 . 条和 % 条序列具有较高的同源性!
而与花生仅有 ( 条相匹配"表 $#!说明 EI+C数据库中
花生的基因信息还很不全面!相比大豆等豆科植物而
言!花生功能基因组学方面的研究比较薄弱%
+31P[i结果显示!有 $" 条""%R#序列没有找到与
之相匹配的序列!可能为花生新的 /?F序列% 有 (&
条序列"’HR#与 G95+15N 中已公布的序列有较高同
源性"表 $#!其中!功能未知的序列有 A 条!功能已知
的序列有 "A 条"表 $#%
!!将 .# 条序列利用 +31P["LJ软件 &$$’ 进行功能注
释!结果显示在生物过程方面包含参与代谢过程(单生
物过程(细胞过程以及生物调节和应激反应相关基因
"图 % @,#*在分子功能方面!主要包含具有催化活性
与结合活性的相关基因"图 % @+#*在细胞组分方面!
所获得的基因主要在细胞与细胞器上表达"图 % @I#%
F"讨论
目前!人类已完成了拟南芥 &$"’ (水稻 &$(’等多种植
物的全基因组测序!这对新基因的挖掘(基因功能研究
等都具有非常重要的意义% 但是对于一些基因组结构
复杂!近期内又不能进行全基因组测序的物种来说!可
以通过构建 ;-E,文库来挖掘基因% 目前!;-E,文
库是功能基因组学研究的基本方法之一!能快速(高效
地大规模获取基因序列信息% 全长 ;-E,文库是高通
量获得基因全长序列!开展基因功能研究的有效途径%
?Z,WF技术因其所需起始生物材料少!实验简单(快
速等优点!被广泛用于全长 ;-E,文库的构建 &$% @$H’ %
但是目前针对花生茎的分子生物学研究还比较少% 本
研究利用 ?Z,WF技术成功构建了一个花生茎全长
;-E,文库!为深入挖掘花生茎表达基因并进行功能
验证奠定了基础%
目前!关于植物茎 ;-E,文库的构建已有报道!佘
玮等以苎麻茎皮为材料!利用加 /;JW# @?01#接头
定向克隆的方法!构建了苎麻茎皮 ;-E,文库 &$’’ % 郭
晋隆等 &$&’利用改进的 S32LJ*I1YY25L法构建了甘蔗茎
全长 ;-E,文库% 刘金仙等 &$A’对该文库进行了大规
模 /?F测序!获得了一些重要的基因% 蔡铁城等 &"#’利
用 ?Z,WF技术构建了烟草茎全长 ;-E,文库% 本研
究利用 ?Z,WF技术首次构建了花生茎全长 ;-E,文
库!经质量检测!文库外源片段大小主要分布在 ’.# )
" ###
核!农!学!报 "& 卷
!!!! 表 !"与 E@SJ非冗余蛋白 1+库比对结果
%&’()!"V)/-(2/,0-/315 S(&/2[.+,5+&:2, 8,:.&+)1+;&2&’&/),1E@SJ
编号
I3J59EJ8
最高同源性基因及物种来源
FU90JP[P20231XL95915: JX2L25 PY9;29P
最高同源性基因
网上登录号
,;;9PP2J5 570<9X
JfP20231XL959
一致性
C:95[2[MT
R
/值
/O1379
?[90$ IU3JXJY31P[[U2JX9:J=25 Z*[MY9&,X1;U2PUMYJL191’
植物硫氧还蛋白 FWi0&花生’
,+I%H’#’ A& "Q&"/@$"%
?[90" IU3JXJY31P[[U2JX9:J=25 Z*[MY9&,X1;U2PUMYJL191’
植物硫氧还蛋白 FWi0&花生’
,+I%H’#’ A& "Q&"/@$"%
?[90( H#? X2
iVp##%.##’"" AH AQ"&/@"’
?[90% a5;U1X1;[9X2l9: YXJ[925&I2;9X1X29[2570’
未知蛋白&鹰嘴豆’
iVp##%.$H"HA ’’ ’QAA/@(.
?[90. ZMJ*25JP2[J3@$ @YUJPYU1[9PM5[U1P9&,X1<2:JYP2P[U132151’
肌醇 @$ @磷酸合酶&拟南芥’
+,D#$H&H AA (Q&&/@H’
?[90H W2<73JP9@$!. @<2PYUJPYU1[9;1X
,GO#&(’. A& AQ’#/@’&
?[90’ VXJ<1<391;9[M3*IJ,1;9[M3[X15Pf9X1P9! ;M[JPJ32;" @32N92PJfJX0i" &I2;9X1X29[2570’
乙酰辅酶 ,转移酶&鹰嘴豆’
iVp##%.#’.&& A$ "Q.A/@.H
?[90& -2UM:XJ32YJM3:9UM:XJL951P9! 02[J;UJ5:X213*32N9&G3M;25901=’
线粒体二氢硫辛酸脱氢酶&大豆’
iVp##(..#&"$ AA AQ%A/@$%(
?[90A B2PU :J0125*;J5[12525L!YXJ[925 WZ-. UJ0J3JL,*32N9&G3M;25901=’
WZ-. 蛋白&大豆’
iVp##(.$H&&# AH ’Q’&/@.$
?[90$# ]ZG$ YXJ[925 &,X1;U2P:2JLJ2’
]ZG$ 蛋白&花生’
,+c.(.%. AA AQ"(/@.$
?[90$$ ?Y9X0259PM5[U1P9*32N9&G3M;25901=’
精胺合酶&大豆’
iVp##(."HHA& AH $Q"A/@$"A
?[90$" .#PX2
,Dk(%AA# A# ’Q%&/@’.
?[90$( a5;U1X1;[9X2l9: 3J;$#$"$$"’(&G3M;25901=’
未知蛋白&大豆’
EVp##$"(H$#$ &A (QA./@&(
?[90$. ]MYJ[U9[2;13YXJ[925 &VU1P9J37P\73L1X2P’
假定蛋白&菜豆’
,GO.%’HH &’ .Q"H/@"A
?[90$H W2<73JP9<2PYUJPYU1[9;1X
,Ia$&#$$ &A #
?[90$’ a5N5Je5 &Z9:2;1LJ[X75;1[731’
未知蛋白&苜蓿’
,Dk(..#" A& $QA&/@H.
?[90$A G2<<9X9325*X9L731[9: YXJ[925 &Z9:2;1LJ[X75;1[731’
赤霉素调节蛋白&苜蓿’
iVp##(H#(’.A ’. (QA&/@(H
?[90"# VXJ[925 :2P73f2:92PJ09X1P9&G3M;25901=’
蛋白质二硫键异构酶&大豆’
iVp##(."’A%$ &A HQH#/@&$
?[90"$ E,I:J0125*;J5[12525LYXJ[925 "$T"" @32N9&G3M;25901=’
E,I$&大豆’
iVp##(.(HA%" ’" ’Q#A/@(%
?[90"" Z25JX139XL95 ,3[1’ @32N9&G3M;25901=’
过敏原 ,3[1’&大豆’
iVp##(.(’&A% A’ AQ’(/@(#
?[90"( a5N5Je5 &Z9:2;1LJ[X75;1[731’
未知&苜蓿’
,I>&(’&# &A $Q’’/@$.
&H’$
!$# 期 花生茎全长 ;-E,文库的构建与分析
表 !#续$
编号
I3J59EJ8
最高同源性基因及物种来源
FU90JP[P20231XL95915: JX2L25 PY9;29P
最高同源性基因
网上登录号
,;;9PP2J5 570<9X
JfP20231XL959
一致性
C:95[2[MT
R
/值
/O1379
?[90". G37[10259PM5[U9[1P9C&Z9:2;1LJ[X75;1[731’
谷氨酰氨合成酶 $&苜蓿’
I,+H(&%% &A (Q#./@%A
?[90"H I1[2J52;Y9XJ=2:1P9$ @32N9&G3M;25901=’
阳离子过氧化物酶 $&大豆’
iVp##(.%%("’ &H (Q%H/@"H
?[90"’ IJ5P9X\9: UMYJ[U9[2;13YXJ[925 &W2;257P;J00752P’
保守假定蛋白&蓖麻’
iVp##"."H(&A A# "Q’./@(#
?[90"& ]MYJ[U9[2;13YXJ[925 VWaV/pYY1#"H"$&0L&VX757PY9XP2;1’
假定蛋白 VWaV/&碧桃’
/Z>$%.A& HA "Q"%/@.’
?[90"A +9[1*fX7;[Jf7X15JP2:1P9! 25PJ37<392PJ95lM09IdCEO$ @32N9&G3M;25901=’
IdCEO$&大豆’
iVp##(.%%.(A &H (QHH/@$.
?[90(# D31\J5J3P73fJ[X15Pf9X1P9*32N9YXJ[925 &I2;9X1X29[2570’
黄酮素磺基转移酶&鹰嘴豆’
iVp##%%A&#"( ’" $Q’$/@"%
?[90($ ]MYJ[U9[2;13YXJ[925 VWaV/pYY1#$".#%0L&VX757PY9XP2;1’
假定蛋白 VWaV/&碧桃’
/Z>$A’$% &% "Q&./@&&
?[90(% a5;U1X1;[9X2l9: 090
iVp##%$’$HA% &A "QAA/@$#
?[90(’ B1X21[:9
iVp##%.#$’&A &" (Q’(/@$"
?[90(& ]J0JL95[2P1[9YUM[M3YX95M3[X15Pf9X1P9&B1;[7;1P1[2\1’
]Y[$&莴苣’
,IE’&.&. .( "QA%/@"%
?[90(A /=Y15P25 YX9;7XPJX& ?J315703M;JY9XP2;70’
扩张蛋白&番茄’
EVp##$"(%#&. $## "Q%"/@"%
?[90%# ,PY1X[2;YXJ[9251P9,PY$ @32N9&O2[2P\252f9X1’
天冬氨酸蛋白酶 ,PY$&葡萄’
iVp##""&.&H’ .H ’Q(%/@$#
?[90%$ BS+:J0125*;J5[12525LYXJ[925 ($ @32N9&G3M;25901=’
含 BS+蛋白 ($&大豆’
iVp##(.$H%H& A$ $Q%"/@(H
?[90%. ,PY1X[2;YXJ[9251P9,PY$ @32N9&G3M;25901=’
天冬氨酸蛋白酶 ,PY$&葡萄’
iVp##(."HH(’ HA "Q’$/@A$
?[90%’ ]MYJ[U9[2;13YXJ[925 VSVFWp###(P#H$"#L! Y1X[213&VJY737P[X2;UJ;1XY1’
假定蛋白&毛果杨’
/WVH("AA $## (QHH/@"$
?[90%& FX15P090
iVp##%"%".A( ’A ’Q&H/@H(
?[90%A V7[1[2\9a*
iVp##(.((%"# H( $QA’/@H$
原始库容为 $Q". ‘$#H;f7)0B@$!达到高质量 ;-E,的
要求% 随机测序结果表明!所构建的文库中含有多个重
要功能基因!包括生物合成过程(代谢过程(生物过程调
节(胁迫响应(分解代谢(细胞自动调节等相关基因% 其
中!?[90$ 和 ?[90" 编码花生 FWi0蛋白!该蛋白涉及许
多过程的氧化还原调控!具有器官特异性% +1X161P*
BsY9l等用原位杂交证实叶绿体硫氧还蛋白转录体在维
管组织和花等异养组织中存在!表明 FWi0可能参与细
胞分裂(种子萌发和繁殖等过程&"$’ % ?15l*+1XX2J等&""’
研究表明!FWi0在烟草叶片和茎端表达量非常大!此
外在花和种子中也有表达% ?[90. 编码的蛋白与拟南芥
肌醇 @$ @磷酸合酶"CEV?#具有 AAR的同源性!d15L
等&"(’研究结果表明盐地碱蓬"0#&+=& 1&’1&#的 ?PCEV?
在盐胁迫条件下上调表达!由此可见该基因与植物的抗
盐胁迫相关% 可见!我们所构建的花生茎全长 ;-E,文
库的代表性很好!覆盖的基因信息非常丰富%
AH’$
核!农!学!报 "& 卷
注$,8生物过程方面的 GS注释结果*+8分子功能方面的 GS注释结果*I8细胞组分方面的 GS注释结果%
EJ[9$ ,8<2J3JLMYXJ;9PP*+80J39;731Xf75;[2J5*I8;93731X;J0YJ595[8
图 K"文库随机测序结果 S(&/2$*\注释分析
4356K"S(&/2$*\ &11,2&23,1&1&(N/3/,0+&1;,:(N /)X-)18315 +)/-(2/0+,:(3’+&+N
K"结论
本研究利用 ?Z,WF技术首次成功构建了高质量
的花生茎全长 ;-E,文库!并通过随机测序获得了部
分重要基因以及花生上未报道的新基因% 该文库的构
建为克隆和研究花生茎重要表达基因(揭示花生茎生
长发育规律奠定了基础%
参考文献!
& $ ’!周泉城!黄景荣!李全宏8花生壳茎叶等综合利用研究进展&>’8
中国粮油学报!"##A!"%"$## $$%# @$%(
#’’$
!$# 期 花生茎全长 ;-E,文库的构建与分析
& " ’!李红霞!王世清!于丽娜!杨庆利!刘志强!张月婷8微波提取花生
茎中水溶性膳食纤维的工艺优化&>’8食品科学!"#$#!($"""# $
""$ @"".
& ( ’!万鲁长!万书波!张正!郭洪海!高霞!赵金有8花生茎蔓栽培金针
菇品种筛选与优质高产技术研究&>’8中国农业科技导报!"##A!
$$""# $A$ @A’
& % ’!毛新国!景蕊莲!孔秀英!赵光耀!贾继增8几种全长 ;-E,文库
构建方法比较&>’8遗传!"##H!"&"’# $&H. @&’(
& . ’!陈华!姜宝杰!邓烨!曾建斌!张冲!庄伟建8高质量花生花序全长
;-E,文库的构建和鉴定 &>’8豆科基因组学与遗传学!"#$$!"
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