全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊苑冤院园怨圆怨 耀 园怨猿苑允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员圆鄄员员鄄圆怨摇 接受日期院圆园员猿鄄园猿鄄圆园
基金项目院江苏丘陵地区镇江农科所与浙江大学合作项目渊扎躁泽圆园园怨园园员冤袁国家自然科学基金渊猿员园园园远苑愿冤袁江苏省自主创新项目渊 糟曾渊员园冤源远猿冤袁江
苏省科技支撑计划渊月耘圆园员圆猿源愿冤袁江苏省农业自主创新项目渊悦载渊员圆冤圆园园源冤袁中国博士后基金渊圆园员圆栽缘园缘缘缘冤
作者简介院张振超袁男袁助理研究员袁主要从事蔬菜遗传育种与栽培技术研究遥
通讯作者院周伟军袁男袁教授袁从事作物生理调控与遗传育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 憎躁扎澡燥怎岳 扎躁怎援 藻凿怎援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤园苑鄄园怨圆怨鄄园怨
甘蓝类植物小孢子培养及植株再生研究
张振超员袁圆 摇 耿鑫鑫员 摇 戴忠良圆 摇 潘跃平圆 摇 王摇 兵员
许摇 玲员 摇 颜志明猿 摇 周伟军员
渊员 浙江大学作物科学研究所袁浙江 杭州摇 猿员园园缘愿曰圆 江苏丘陵地区镇江农业科学研究所袁
江苏 句容摇 圆员圆源园园曰猿 江苏农林职业技术学院袁江苏 句容摇 圆员圆源园园冤
摘摇 要院对 猿 个甘蓝类植物渊甘蓝尧青花菜尧羽衣甘蓝冤员怨 个品种小孢子胚胎发生和植株再生的影响因素
进行了研究袁结果表明袁基因型不仅影响供试材料的小孢子胚状体发生频率袁也影响胚状体的质量曰源益
低温预处理 园 耀 圆凿 结合 猿圆郾 缘益热激 员凿袁能显著提高供试基因型小孢子出胚率遥 胚状体先在 晕蕴晕鄄员猿 液
体培养基中培养 圆缘凿袁有利于胚状体分化成苗曰后在 月缘 固体分化培养基中添加 员豫 耀员郾 圆豫琼脂袁可有效
促进胚状体萌发和植株再生遥 小孢子再生植株先使用流式细胞仪在生长初期鉴定倍性袁后对单倍体植
株采用 圆园园皂早窑蕴 原员秋水仙碱浸根处理 圆园澡袁并用流式细胞仪鉴定袁此方法可快速尧有效地获得双单倍体
植株遥
关键词院甘蓝类植物曰小孢子培养曰胚胎发生曰植株再生曰倍性鉴定
摇 摇 甘蓝类植物具有明显的杂种优势袁目前生产上应
用的栽培品种多为 云员 杂交种袁杂交育种已成为甘蓝类
植物育种的主要方式咱员暂 遥 但其为异花授粉植物袁纯合
困难遥 通过连续套袋自交的方法获得纯合尧稳定的自
交系一般需 苑 年左右时间袁费工费时袁且长期自交会出
现衰退现象咱圆暂 遥 而通过游离小孢子培养方法袁可在 圆
年内获得稳定的 阅匀渊双单倍体冤系袁从而大大缩短了
育种周期袁提高了育种效率袁而且还可以分离出隐性性
状袁丰富了育种资源咱猿暂 遥 因此袁游离小孢子培养技术
在甘蓝类作物育种中不失为一条有效的途径遥
自从 员怨愿圆 年袁蕴蚤糟澡贼藻则首次采用游离小孢子培养技
术成功获得甘蓝型油菜胚状体以来袁球茎甘蓝咱源暂 尧花
椰菜咱缘暂 尧芥蓝咱远暂 尧羽衣甘蓝咱苑暂 尧结球甘蓝和青花菜咱猿暂等
甘蓝类植物均成功获得了小孢子再生植株遥 但在实际
应用中袁由于受基因型依赖性尧培养条件等因素的影
响袁小孢子培养试验的可重复性差袁出胚率低袁对制约
小孢子培养技术应用的关键因素还不能有效解决遥 本
研究对甘蓝尧青花菜和羽衣甘蓝小孢子培养过程中的
若干关键影响因素进行探讨袁以期为甘蓝类植物小孢
子培养技术应用提供借鉴遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
以镇江农科所蔬菜花卉研究室现有及市销的结球
甘蓝尧青花菜和羽衣甘蓝 员怨 个品种渊基因型冤为试材
渊各品种来源及编号见表 员冤遥 试材播种于浙江大学华
家池校区试验田遥 甘蓝尧青花菜和羽衣甘蓝分别于
圆园园怨 年 愿 月底和 圆园员园 年 愿 月底在温室内采用穴盘 垣
基质育苗袁同年 怨 月下旬优选生长旺盛尧无病虫害的植
株定植于大田遥 翌年 猿 耀 源 月袁室外平均温度在 员园 耀
员缘益时袁取单核晚期至双核早期的花蕾进行游离小孢
子培养遥
员郾 圆摇 小孢子分离与培养
小孢子游离与培养方法参照 在澡燥怎 等咱愿暂方法并稍
作改进遥 在开花时袁从植株主花序上选取 愿园豫处于单
核晚期至双核早期的花蕾袁无菌条件下袁用 缘郾 远豫次氯
酸钠溶液消毒 员缘 耀 圆园皂蚤灶袁后用无菌水冲洗 猿 耀 缘 次遥
怨圆怨
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
无菌花蕾在 员园皂蕴 晕蕴晕鄄员猿 培养液渊含 晕蕴晕 大量尧微
量尧铁盐和有机成分尧员猿豫蔗糖袁责匀 远郾 园冤中匀浆袁并经
源园滋皂尼龙网过滤袁滤液用 苑园园则窑皂蚤灶 原员离心 缘皂蚤灶袁去上
清后加入 源园皂蕴 晕蕴晕鄄员猿 液体培养基袁并加入 员园 滴活
性炭袁混匀遥 用移液器吸取 源皂蕴小孢子悬浮液加入到
员园 个直径为 远园皂皂培养皿中袁孕葬则葬枣蚤造皂 密封后袁放入到
恒温培养箱中黑暗尧猿圆郾 缘益热激处理袁后转至 圆缘 依
员益尧黑暗下静置培养遥 员缘凿左右出现肉眼可见胚状体
时移至摇床上振荡培养渊远园则窑皂蚤灶 原员冤遥
员郾 猿摇 基因型影响
以不同基因型植株为试材袁在相同条件下进行游
离小孢子培养袁猿 周后统计胚胎发生率遥 试验设 猿 次
重复袁每次 员缘 个花蕾遥
员郾 源摇 热激处理
分离出来的小孢子分装后用 猿圆郾 缘益热激 园 耀 猿凿袁
后置于 圆缘 依 员益条件下继续暗培养袁猿 周后统计出胚
率遥 试验设 猿 次重复袁每次 员缘 个花蕾遥
员郾 缘摇 低温预处理
从田间摘取供试材料花序袁在适当保湿的条件下
放置在 源益冰箱中保存 员尧圆尧猿尧源凿袁后用来进行游离小
孢子培养遥 小孢子分离后经 猿圆郾 缘益热激处理 员凿袁然后
于 圆缘益暗培养遥 以未经 源益预处理尧猿圆郾 缘益热激处理
员凿为对照遥 试验设 猿 次重复袁每次 员缘 个花蕾遥
员郾 远摇 小孢子胚诱导和再生植株的获得
小孢子胚在 晕蕴晕鄄员猿 液体培养基中培养 圆缘凿 后袁
将生长健康的胚状体转接到 月缘 固体分化培养基渊月缘
培养基袁圆郾 缘豫蔗糖袁员郾 圆豫琼脂袁责匀 远郾 园冤上袁圆缘 凿 后统
计增殖情况遥 后将生长良好的再生苗转接到 员 辕 圆 酝杂
固体生根培养基渊酝杂 培养基袁圆郾 园豫蔗糖袁园郾 苑豫琼脂袁
责匀 远郾 园冤中袁于 员缘益 辕 员源 澡 光照尧愿益 辕 员园澡 黑暗条件下
培养袁圆缘 耀 猿园 凿后进行驯化尧移栽遥
员郾 苑摇 秋水仙碱加倍处理
将生长较好的再生植株从培养基中取出袁清洗干
净后袁先移栽到营养土中袁用塑料布遮盖保湿袁置于温
室中生长曰员 周后袁取出小苗袁用自来水洗净根部表面
的营养土袁后把植株根部浸入到浓度为 员园园皂早窑蕴 原员和
圆园园皂早窑蕴 原员的秋水仙碱溶液中处理 员园尧圆园 和 猿园澡曰自来
水冲洗干净后栽入到营养土中适应生长袁员园凿 后移栽
入大田遥
员郾 愿摇 流式细胞仪倍性分析
流式细胞仪 云悦酝渊月阅 云粤悦杂悦粤造蚤遭怎则冤检测倍性参
照张振超等咱怨暂的方法遥 用剃须刀片将 员糟皂圆 左右的
嫩叶在装有 员皂蕴 提取缓冲液渊员缘皂皂燥造窑蕴 原员 栽则蚤泽鄄匀悦员
渊责匀 苑郾 缘 冤袁愿园皂皂燥员窑蕴 原员 运悦员袁圆园皂皂燥员窑蕴 原员 晕葬悦员袁
摇 摇 摇 摇 摇 表 员摇 供试品种基因型代号及来源
栽葬遭造藻 员摇 悦燥凿藻 葬灶凿 燥则蚤早蚤灶 燥枣 凿燥灶燥则 糟怎造贼蚤增葬则泽 渊早藻灶燥贼赠责藻泽冤
种
杂责藻糟蚤藻泽
代号
悦燥凿藻
品种
灾葬则蚤藻贼赠
来源
韵则蚤早蚤灶
甘蓝 悦葬遭遭葬早藻 郧圆 寒美 匀葬灶皂藻蚤 日本 允葬责葬灶
郧猿 迎风 再蚤灶早枣藻灶早 日本 允葬责葬灶
郧源 东升 阅燥灶早泽澡藻灶早 日本 允葬责葬灶
郧缘 园远员愿怨 日本 允葬责葬灶
郧远 园缘缘猿 日本 允葬责葬灶
郧苑 园源远缘 日本 允葬责葬灶
郧愿 员缘缘 日本 允葬责葬灶
郧员圆 员源圆 伊 砸阅 江苏 允蚤葬灶早泽怎
郧员猿 员源圆 伊 员苑圆 江苏 允蚤葬灶早泽怎
郧圆苑 员源远 伊 砸阅 江苏 允蚤葬灶早泽怎
青花菜 月则燥糟糟燥造蚤 匝源 马拉松 酝葬则葬贼澡燥灶 日本 允葬责葬灶
匝缘 美绿 源员园 酝藻蚤造增 源员园 日本 允葬责葬灶
匝远 绿雄 怨园 蕴增曾蚤燥灶早 怨园 日本 允葬责葬灶
匝员员 里绿 蕴蚤造增 日本 允葬责葬灶
羽衣甘蓝 运葬造藻 再怨 砸园怨 日本 允葬责葬灶
再员园 砸员园 日本 允葬责葬灶
再员员 砸员员 日本 允葬责葬灶
再员圆 砸员圆 日本 允葬责葬灶
再员猿 砸园猿 日本 允葬责葬灶
圆园皂皂燥员窑蕴 原员 耘阅栽粤鄄晕葬圆袁 员缘皂皂燥员窑蕴 原员 巯基乙醇和园郾 园缘豫 渊增 辕 增冤 栽则蚤贼燥灶载 原 员园园冤的培养皿中切碎袁猿园园 目
尼龙网过滤尧备用遥 上机前袁取 员园园皂蕴 滤液加入 缘园 耀
员园园皂蕴染色液 渊园郾 园员皂燥员窑蕴 原员的 孕月杂 缓冲液袁缘园滋早窑
皂蕴 原员 砸粤葬泽藻袁缘园滋早窑皂蕴 原员 孕陨冤袁混匀遥 以普通二倍体嫩
叶作对照遥
员郾 怨摇 数据分析
所得数据采用 杂粤杂渊杂贼葬贼蚤泽贼蚤糟葬造 粤灶葬造赠泽蚤泽 杂赠泽贼藻皂冤软
件进行差异显著性分析袁在 园郾 园缘 水平上进行 阅怎灶糟葬灶
多重比较分析遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 基因型对小孢子胚胎发生的影响
不同材料小孢子出胚情况见表 圆遥 在 员怨 个供试
材料中袁除基因型 郧缘 和 再员园 没有获得胚状体外袁其它
基因型在热激处理后均获得了胚状体袁但不同基因型
间小孢子出胚率存在差异遥 在甘蓝中袁郧愿 出胚率最
高袁为 员圆郾 远圆 个 辕蕾袁其次是 郧苑袁为 员员郾 缘愿 个 辕蕾曰郧圆苑
出胚率居中曰郧猿尧郧源 和 郧远 出胚率偏低袁郧员猿 和 郧圆 较
园猿怨
摇 苑 期 甘蓝类植物小孢子培养及植株再生研究
少遥 源 个青花菜品种出胚率均较好遥 其中 匝员员 出胚率
最高袁为 员怨郾 圆愿 个 辕蕾袁其次为 匝缘 渊员员郾 远员 个 辕蕾冤曰匝源
和 匝远 出胚率较低曰羽衣甘蓝基因型中袁再员猿 的出胚率
最高袁为 员员郾 缘员 个 辕蕾袁其次是 再怨 渊苑郾 愿源 个 辕蕾冤袁再员员
出胚率较低遥
圆郾 圆摇 热激处理时间对小孢子出胚率的影响
选择有代表性的 源 个甘蓝渊郧源尧郧苑尧郧愿尧郧圆苑冤尧圆 个
青花菜渊匝缘尧匝员员冤和 圆 个羽衣甘蓝渊再员猿尧再怨冤供试基因
型进行热激诱导试验遥 由表 猿可以发现袁在 愿个供试材
料中袁热激处理 园 耀 猿凿袁均获得了胚状体袁但不同处理出
胚率差异明显遥 对照中袁只有 郧苑尧郧愿 和 匝员员 得到了胚
状体袁但出胚率明显低于热激处理遥 对甘蓝来说袁热激
处理 员 耀猿凿均能获得胚状体遥 郧愿 处理 员凿 的出胚率最
高为 圆员郾 员怨个 辕蕾袁其次是 郧苑渊员苑郾 缘猿 个 辕蕾冤曰除基因型
郧圆苑热激 圆凿的小孢子出胚率最高外袁其它 猿 个均为热
激处理 员凿遥 圆 个青花菜品种热激处理 员凿 的效果均最
好遥 圆个羽衣甘蓝热激处理 员凿 的效果均优于其它处
理遥 热激处理 猿凿 的效果均比热激 员凿 和 圆凿 的效果差遥
试验发现袁猿圆郾 缘益热激处理 员凿适宜于大部分的甘蓝尧青
花菜和羽衣甘蓝小孢子胚胎发生遥
圆郾 猿摇 低温预处理与热激组合对小孢子出胚率的影响
根据 圆郾 员 的试验结果袁选取具有出胚代表性的甘
蓝和青花菜基因型渊甘蓝院郧苑尧郧员猿尧郧圆苑曰青花菜院匝缘尧
匝远尧匝员员冤进行 源益低温预处理结合 猿圆郾 缘益热激处理 员凿
试验遥 结果渊表 源冤发现供试基因型在低温预处理 员尧
圆尧猿尧源凿并结合 猿圆郾 缘益热激 员凿袁小孢子出胚数存在差
异遥 在 猿 个甘蓝品种中袁郧苑 低温处理 园凿 的出胚率最
高袁为 员苑郾 圆苑 个 辕蕾袁而低温处理 员凿 的效果优于处理 圆
耀 源凿曰郧员猿 和 郧圆苑 在低温处理 圆凿时效果最好遥 青花菜
供试材料中袁匝缘 和 匝远 低温诱导 员凿 效果较好袁出胚率
高于其它处理曰易出胚的 匝员员袁低温处理 园 耀 员凿 的出胚
率高于其它处理袁两者无明显差异遥 另外袁从表 猿 中可
看出袁小孢子出胚率随低温处理时间延长而降低袁说明
低温时间对小孢子胚胎发生有一定的影响遥
表 圆摇 不同基因型小孢子出胚的差异
栽葬遭造藻 圆摇 栽澡藻 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 燥枣 皂蚤糟则燥泽责燥则藻 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 蚤灶 增葬则蚤燥怎泽 早藻灶燥贼赠责藻泽援
基因型
郧藻灶燥贼赠责藻
小孢子出胚数 辕 渊个 辕蕾冤
晕燥援 燥枣 藻皂遭则赠燥泽 责藻则 遭怎凿 辕
渊晕燥援 辕 遭怎凿冤
基因型
郧藻灶燥贼赠责藻
小孢子出胚数 辕 渊个 辕蕾冤
晕燥援 燥枣 藻皂遭则赠燥泽 责藻则 遭怎凿 辕
渊晕燥援 辕 遭怎凿冤
基因型
郧藻灶燥贼赠责藻
小孢子出胚数 辕 渊个 辕蕾冤
晕燥援 燥枣 藻皂遭则赠燥泽 责藻则 遭怎凿 辕 渊晕燥援 辕 遭怎凿冤
郧圆 员郾 远源 依 园郾 员猿凿 郧员圆 苑郾 圆苑 依 园郾 源员糟 再怨 苑郾 愿源 依 园郾 源远遭
郧猿 源郾 愿员 依 园郾 猿圆糟 郧员猿 圆郾 猿远 依 园郾 圆猿凿 再员园 园 依 园藻
郧源 缘郾 愿缘 依 园郾 猿源糟 郧圆苑 愿郾 缘猿 依 园郾 缘苑遭 再员员 员郾 员圆 依 园郾 员员糟
郧缘 园 依 园藻 匝源 缘郾 源圆 依 园郾 源猿糟 再员圆 园郾 远苑 依 园郾 园苑凿
郧远 远郾 苑圆 依 园郾 远远糟 匝缘 员员郾 远员 依 园郾 愿源遭 再员猿 员员郾 缘员 依 园郾 愿缘葬
郧苑 员员郾 缘愿 依 园郾 愿圆葬 匝远 源郾 苑猿 依 园郾 猿苑糟
郧愿 员圆郾 远圆 依 园郾 苑怨葬 匝员员 员怨郾 圆愿 依 员郾 员远葬
摇 摇 注院根据 阅怎灶糟葬灶测验袁同列中各不同小写字母表示差异显著渊责臆园郾 园缘冤袁下同遥
晕燥贼藻院 宰蚤贼澡蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶袁 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 皂藻葬灶 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 葬贼 贼澡藻 园郾 园缘 造藻增藻造 燥枣 责则燥遭葬遭蚤造蚤贼赠 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 贼藻泽贼袁贼澡藻 泽葬皂藻 葬泽 遭藻造燥憎援
表 猿摇 猿圆郾 缘益热激处理时间对胚胎发生率的影响
栽葬遭造藻 猿摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 渊猿圆郾 缘益冤 凿怎则葬贼蚤燥灶泽 燥灶 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 早藻灶燥贼赠责藻泽
种
杂责藻糟蚤藻泽
基因型
郧藻灶燥贼赠责藻
小孢子出胚数 辕 渊个 辕蕾冤晕燥援 燥枣 藻皂遭则赠燥泽 责藻则 遭怎凿 辕 渊晕燥援 辕 遭怎凿冤
园 凿 员 凿 圆 凿 猿 凿
甘蓝 悦葬遭遭葬早藻 郧源 园 依 园凿 怨郾 圆苑 依 园郾 源猿葬 远郾 苑愿 依 园郾 猿远遭 员郾 愿源 依 园郾 员苑糟
郧苑 园郾 猿员 依 园郾 园苑凿 员苑郾 缘猿 依 员郾 猿缘葬 员圆郾 苑员 依 员郾 园圆遭 远郾 猿愿 依 园郾 圆愿糟
郧愿 园郾 猿愿 依 园郾 员员凿 圆员郾 员怨 依 员郾 猿远葬 员圆郾 猿源 依 员郾 员愿遭 苑郾 愿圆 依 园郾 缘源糟
郧圆苑 园 依 园凿 愿郾 猿缘 依 园郾 源怨遭 员员郾 员远 依 园郾 愿猿葬 源郾 源猿 依 园郾 圆怨糟
青花菜 月则燥糟糟燥造蚤 匝缘 园 依 园凿 怨郾 员远 依 园郾 源愿葬 远郾 源圆 依 园郾 猿怨遭 员郾 圆猿 依 园郾 园愿糟
匝员员 员郾 圆缘 依 园郾 员圆凿 圆圆郾 苑远 依 员郾 猿源葬 员缘郾 缘愿 依 员郾 员怨遭 远郾 猿员 依 园郾 圆缘糟
羽衣甘蓝 运葬造藻 再怨 园 依 园凿 员园郾 员苑 依 园郾 苑圆葬 苑郾 猿源 依 园郾 猿缘遭 圆郾 员怨 依 园郾 员苑糟
再员猿 园 依 园糟 员圆郾 远苑 依 园郾 怨苑葬 愿郾 圆缘 依 园郾 缘源遭 远郾 愿源 依 园郾 猿圆遭
员猿怨
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
圆郾 源摇 小孢子胚在 晕蕴晕鄄员猿 培养基中滞留时间对胚再
生率的影响
小孢子胚在 晕蕴晕鄄员猿 液体培养基中滞留的时间对
胚状体再生有显著影响渊表 缘冤遥 郧愿 和 匝员员 的小孢子
胚在培养基中培养 员缘 耀 猿园凿 的时间内袁随滞留时间延
长袁胚再生率先升高再降低遥 培养 员缘凿 时接种到固体
培养基中袁小孢子胚再生率最低袁分别为 源圆郾 愿豫 和
源苑郾 源豫 袁而在 圆缘凿 时的再生率最高袁分别为 怨猿豫 和
怨源郾 远豫 袁培养 圆缘凿后袁小孢子胚再生率逐渐降低遥 小孢
子胚在 晕蕴晕鄄员猿 液体培养基中滞留的时间不能过短也
不能过长遥 过短袁小孢子胚发育不够成熟袁过长则生长
势衰落袁均会影响进一步生长发育袁因而袁选择最佳的
胚接种时期非常重要遥
圆郾 缘摇 琼脂浓度对胚状体再生的影响
以出胚较好的甘蓝 郧愿 和青花菜 匝员员 的小孢子胚
状体为试材袁研究 月缘 固体分化培养基琼脂浓度对胚
成苗效果的影响袁结果见表 远遥 园郾 远豫琼脂浓度对 郧愿
和 匝员员 胚再生影响较大袁萌发率分别为 圆员郾 圆豫 和
圆猿郾 源豫 袁显著低于其它处理遥 随琼脂浓度增加袁圆 个基
因型的小孢子胚再生率也随之增加袁在浓度为 员郾 圆豫
时达到最大值袁分别为 愿远郾 圆豫和 愿源郾 愿豫 遥 当琼脂浓度
为 员郾 园豫和 员郾 圆豫时袁小孢子胚再生率没有明显差异袁
但均优于浓度为 园郾 愿豫和 园郾 远豫时的再生率遥
试验中观察到袁转接在 园郾 远豫和 园郾 愿豫琼脂浓度培
养基上的胚状体玻璃化现象严重袁培养过程中易死亡
渊图 员 原 粤冤曰而在 员郾 园豫和 员郾 圆豫琼脂浓度培养基中培
养 缘凿时变为绿色袁并且开始直立生长袁长出根毛袁并从
胚顶端生长点长出小芽袁圆园 耀 猿园凿 后即可长成幼苗渊图
员 原 阅冤曰部分胚状体先形成愈伤组织袁再抽生出幼苗袁
最后形成植株渊图 员 原 月 和图 员鄄悦冤遥 培养基中较高浓
度的琼脂可以减少培养基中水分含量袁为胚状体萌发
创造相对干燥的环境袁从而减少玻璃化苗的产生袁提高
再生率遥
表 源摇 低温渊源益冤预处理与 猿圆郾 缘益热激 员凿组合对小孢子出胚率的影响
栽葬遭造藻 源摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶泽 燥枣 糟燥造凿 责则藻贼则藻葬贼皂藻灶贼 渊源益冤 葬灶凿 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 渊猿圆郾 缘益冤 枣燥则 员凿 燥灶
皂蚤糟则燥泽责燥则藻 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 早藻灶燥贼赠责藻泽
处理
栽则藻葬贼皂藻灶贼 辕 凿
小孢子出胚数 辕 渊个 辕蕾冤孕藻则糟藻灶贼 燥枣 藻皂遭则赠燥泽 责藻则 遭怎凿 辕 渊晕燥援 辕 遭怎凿冤
郧苑 郧员猿 郧圆苑 匝缘 匝远 匝员员
园 员苑郾 圆苑 依 员郾 猿猿葬 员郾 怨愿 依 园郾 园苑 远郾 猿愿 依 园郾 猿远糟 愿郾 远圆 依 园郾 缘苑遭 源郾 员缘 依 园郾 员圆遭 圆园郾 缘远 依 员郾 远源葬
员 员员郾 员怨 依 员郾 园远遭 圆郾 远远 依 园郾 圆员葬 愿郾 猿源 依 园郾 源猿遭 员圆郾 圆怨 依 员郾 园源葬 缘郾 圆源 依 园郾 圆员葬 员怨郾 愿苑 依 员郾 缘愿葬
圆 愿郾 猿缘 依 园郾 源怨糟 圆郾 员源 依 园郾 员员葬 员园郾 员怨 依 园郾 怨苑葬 苑郾 愿员 依 园郾 源缘遭 缘郾 园源 依 园郾 员愿葬 员远郾 源员 依 员郾 猿苑遭
猿 源郾 员远 依 园郾 圆愿凿 员郾 园源 依 园郾 园圆葬 缘郾 缘苑 依 园郾 猿员凿 圆郾 缘缘 依 园郾 园愿糟 圆郾 员苑 依 园郾 员缘糟 员园郾 远猿 依 员郾 园圆糟
源 员郾 园愿 依 园郾 员源藻 园 依 园葬 园 依 园藻 园 依 园凿 园 依 园凿 源郾 缘源 依 园郾 员怨凿
表 缘摇 小孢子胚在 晕蕴晕鄄员猿 液体培养基中滞留时间对胚再生率的影响
栽葬遭造藻 缘摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 糟怎造贼怎则蚤灶早 贼蚤皂藻 蚤灶 晕蕴晕鄄员猿 造蚤择怎蚤凿 皂藻凿蚤怎皂 燥灶 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠 燥枣 藻皂遭则赠燥泽
基因型
郧藻灶燥贼赠责藻
胚滞留时间
悦怎造贼怎则蚤灶早 贼蚤皂藻
蚤灶 皂藻凿蚤怎皂 辕 凿
接种胚数
晕燥援 燥枣 藻皂遭则赠燥泽
平均出苗数
晕燥援 燥枣 责造葬灶贼造藻贼泽
再生率
云则藻择怎藻灶糟赠 燥枣 责造葬灶贼
则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 辕 豫
郧愿 员缘 缘园 圆员郾 源 源圆郾 愿凿
圆园 缘园 源猿郾 远 愿苑郾 圆遭
圆缘 缘园 源远郾 缘 怨猿郾 园葬
猿园 缘园 猿源郾 员 远愿郾 圆糟
匝员员 员缘 缘园 圆猿郾 苑 源苑郾 源凿
圆园 缘园 源圆郾 愿 愿缘郾 远遭
圆缘 缘园 源苑郾 猿 怨源郾 远葬
猿园 缘园 猿圆郾 远 远缘郾 圆糟
圆猿怨
摇 苑 期 甘蓝类植物小孢子培养及植株再生研究
表 远摇 不同 月缘 固体分化培养基琼脂浓度对小孢子胚再生植株频率的影响
栽葬遭造藻 远摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 葬早葬则 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 蚤灶 月缘 泽燥造蚤凿 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 皂藻凿蚤怎皂 燥灶 贼澡藻 枣则藻择怎藻灶糟赠 燥枣 藻皂遭则赠燥 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶
基因型
郧藻灶燥贼赠责藻
琼脂浓度
悦燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 葬早葬则 辕 豫
胚状体数
晕燥援 燥枣 藻皂遭则赠燥泽
平均出苗数
晕燥援 燥枣 责造葬灶贼造藻贼泽
再生率
云则藻择怎藻灶糟赠 燥枣 责造葬灶贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 辕 豫
郧愿 园郾 远 缘园 员园郾 远 圆员郾 圆糟
园郾 愿 缘园 圆苑郾 源 缘源郾 愿遭
员郾 园 缘园 源员郾 缘 愿猿郾 园葬
员郾 圆 缘园 源猿郾 员 愿远郾 圆葬
匝员员 园郾 远 缘园 员员郾 苑 圆猿郾 源糟
园郾 愿 缘园 圆怨郾 圆 缘愿郾 源遭
员郾 园 缘园 源园郾 愿 愿员郾 远葬
员郾 圆 缘园 源圆郾 源 愿源郾 愿葬
粤玻璃化甘蓝植株曰月正常甘蓝植株曰悦青花菜胚状体转化为愈伤组织曰阅青花菜胚状体直接转化为植株遥
粤袁 粤遭灶燥则皂葬造 责造葬灶贼造藻贼泽 燥枣 糟葬遭遭葬早藻曰 月 晕燥则皂葬造 责造葬灶贼造藻贼泽 燥枣 糟葬遭遭葬早藻曰 悦 耘皂遭则赠燥泽 燥枣 遭则燥糟糟燥造蚤 糟燥灶增藻则贼 蚤灶贼燥 糟葬造造怎泽曰
阅 耘皂遭则赠燥泽 燥枣 遭则燥糟糟燥造蚤 糟燥灶增藻则贼 蚤灶贼燥 责造葬灶贼造藻贼泽 凿蚤则藻糟贼造赠援
图 员摇 甘蓝渊粤和 月冤和青花菜渊悦和 阅冤小孢子胚在固体分化培养基中的萌发情况
云蚤早援 员摇 栽澡藻 藻皂遭则赠燥 早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 糟葬遭遭葬早藻 渊粤 葬灶凿 月冤 葬灶凿 遭则燥糟糟燥造蚤 渊悦 葬灶凿 阅冤 蚤灶 泽燥造蚤凿 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 皂藻凿蚤怎皂
圆郾 远摇 流式细胞仪鉴定再生植株自然加倍情况
选用甘蓝 郧愿渊员缘缘冤尧青花菜 匝员员渊里绿冤和羽衣甘
蓝 再员猿 猿 个基因型作为供体材料进行倍性鉴定袁流式
细胞仪可清楚地鉴定出植株倍性水平渊表 苑冤遥 在供试
再生植株群体中袁单倍体和二倍体所占比例最大遥
再员猿 所含单倍体数量最多袁为 缘缘郾 远豫 袁其次是 郧愿袁为
缘园豫 袁匝员员 最少渊图 圆 原 粤冤曰猿 个供试材料二倍体渊图 圆
原 月冤加倍率分别为 源猿郾 远豫 尧源猿郾 愿豫和 源圆郾 缘豫 袁四倍体
渊图 圆鄄悦冤加倍率分别为 圆郾 远豫 尧远郾 猿豫和 员郾 怨豫 袁另外还
包括其它倍性多倍体渊分别为 猿郾 愿豫 尧缘郾 圆豫和 园郾 园豫 遥
猿猿怨
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
圆郾 苑摇 秋水仙碱诱导加倍的效果
初步倍性鉴定后袁把未发生加倍的单倍体植株挑
出来袁研究不同秋水仙碱浓度尧不同处理时间对加倍效
果的影响遥 结果如表 愿 所示袁秋水仙碱浓度为 圆园园皂早窑
蕴 原员尧处理 圆园澡 时的诱导效果最好袁猿 个基因型存活率
分别为 愿园豫 尧怨园豫 和 缘愿郾 猿豫 袁二倍体诱导率分别为
远远郾 苑豫 尧苑缘豫和 缘愿郾 猿豫 遥 不同秋水仙碱浓度和处理时
间的二倍体诱导率存在差异遥 秋水仙碱浓度高及处理
时间长时袁都会显著促进二倍体加倍袁然而由于秋水仙
碱有致死效应袁所以秋水仙碱浓度和处理时间要适当袁
才能取得更好的诱导效果遥
表 苑摇 不同甘蓝类植物基因型小孢子再生植株倍性水平
栽葬遭造藻 苑摇 孕造燥蚤凿赠 造藻增藻造泽 燥枣 则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 责造葬灶贼泽 凿藻则蚤增藻凿 枣则燥皂 皂蚤糟则燥泽责燥则藻 糟怎造贼怎则藻 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 月援 燥造藻则葬糟藻葬 早藻灶燥贼赠责藻泽援
基因型
郧藻灶燥贼赠责藻
检测株数
晕燥援 燥枣 责造葬灶贼泽
单倍体
晕燥援 燥枣 澡葬责造燥蚤凿 辕 渊晕燥援 袁豫 冤
二倍体
晕燥援 燥枣 凿蚤责造燥蚤凿泽 辕 渊 晕燥援 袁豫 冤
四倍体
晕燥援 燥枣 贼藻贼则葬责造燥蚤凿泽 辕 渊晕燥援 袁豫 冤
甘蓝 郧愿渊员缘缘冤
悦葬遭遭葬早藻 郧愿渊员缘缘冤
苑愿
摇
猿怨渊缘园郾 园冤
摇
猿源渊源猿郾 远冤
摇
圆渊圆郾 远冤
摇
青花菜 匝员员渊里绿冤
月则燥糟糟燥造蚤 匝员员渊蕴蚤造增冤
怨远
摇
源猿渊源源郾 愿冤
摇
源圆渊源猿郾 愿冤
摇
远渊远郾 猿冤
摇
羽衣甘蓝 再员猿
运葬造藻 再员猿
缘源
摇
猿园渊缘缘郾 远冤
摇
圆猿渊源圆郾 缘冤
摇
员渊员郾 怨冤
摇
表 愿摇 秋水仙碱浓度与处理时间组合对再生植株诱导效果的影响
栽葬遭造藻 愿摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥造糟澡蚤糟蚤灶藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 葬灶凿 贼则藻葬贼皂藻灶贼 贼蚤皂藻泽 燥灶 皂蚤糟则燥泽责燥则藻鄄凿藻则蚤增藻凿 则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 责造葬灶贼泽援
品种
悦怎造贼蚤增葬则
秋水仙碱浓度
悦燥造糟澡蚤糟蚤灶藻
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 辕 渊皂早窑蕴 原员 冤
处理时间
栽则藻葬贼皂藻灶贼
贼蚤皂藻 辕 澡
处理株数
晕燥援 燥枣 贼则藻葬贼藻凿
责造葬灶贼泽
存活率
杂怎则增蚤增葬造 则葬贼藻 辕
渊晕燥援 袁豫 冤
单倍体率
匀葬责造燥蚤凿
枣则藻择怎藻灶糟赠 辕
渊晕燥援 袁豫 冤
二倍体率
阅蚤责造燥蚤凿
枣则藻择怎藻灶糟赠 辕
渊晕燥援 袁豫 冤
甘蓝 郧愿渊员缘缘冤 员园园 员园 员缘 员园园渊员缘冤葬 远园郾 园 渊怨冤葬 源园郾 园 渊缘冤糟
悦葬遭遭葬早藻 郧愿渊员缘缘冤 圆园 员缘 怨猿郾 猿渊员源冤遭 源远郾 苑渊苑冤遭 源远郾 苑渊苑冤糟
猿园 员缘 愿远郾 苑渊员猿冤糟 圆园郾 园渊猿冤糟 远园郾 园渊怨冤葬
圆园园 员园 员缘 员园园渊员缘冤葬 源远郾 苑 渊苑冤遭 缘猿郾 猿渊愿冤遭
圆园 员缘 愿园郾 园渊员圆冤糟 远郾 苑渊员冤凿 远远郾 苑渊员园冤葬
猿园 员缘 远远郾 苑渊员园冤凿 园渊园冤藻 缘猿郾 猿渊愿冤遭
青花菜 匝员员渊里绿冤 员园园 员园 圆园 员园园渊圆园冤葬 远园郾 园渊员圆冤葬 源园郾 园渊愿冤凿
月则燥糟糟燥造蚤 匝员员 渊蕴蚤造增冤 圆园 圆园 员园园渊圆园冤葬 源缘郾 园渊怨冤糟 缘缘郾 园渊员员冤糟
猿园 圆园 怨缘郾 园渊员怨冤遭 圆园郾 园渊源冤凿 苑园郾 园渊员源冤葬
圆园园 员园 圆园 员园园渊圆园冤葬 缘缘郾 园渊员员冤遭 源缘郾 园渊怨冤凿
圆园 圆园 怨园郾 园渊员愿冤遭 员园郾 园渊圆冤藻 苑缘郾 园渊员缘冤葬
猿园 圆园 苑园郾 园渊员源冤糟 园郾 园渊园冤枣 远缘郾 园渊员猿冤遭
羽衣甘蓝 再员猿 员园园 员园 员圆 怨员郾 苑渊员员冤葬 猿猿郾 猿渊源冤葬 缘愿郾 猿渊苑冤遭
运葬造藻 再员猿 圆园 员圆 怨员郾 苑渊员员冤葬 员远郾 苑渊圆冤遭 远远郾 苑渊愿冤葬
猿园 员圆 苑缘郾 园渊怨冤糟 园郾 园渊园冤糟 缘愿郾 猿渊苑冤遭
圆园园 员园 员圆 愿猿郾 猿渊员园冤遭 员远郾 苑渊圆冤遭 缘愿郾 猿渊苑冤遭
圆园 员圆 缘愿郾 猿渊苑冤凿 园郾 园渊园冤糟 缘愿郾 猿渊苑冤遭
猿园 员圆 源员郾 苑渊缘冤藻 园郾 园渊园冤糟 猿猿郾 猿渊源冤糟
源猿怨
摇 苑 期 甘蓝类植物小孢子培养及植株再生研究
粤单倍体曰月二倍体曰悦四倍体渊横坐标表示 云蕴圆鄄粤则藻葬袁纵坐标表示细胞数 悦燥怎灶贼冤遥
粤 匀葬责造燥蚤凿曰 月 阅蚤责造燥蚤凿曰 葬灶凿 悦 栽藻贼则葬责造燥蚤凿 渊栽澡藻 葬遭泽糟蚤泽泽葬 则藻责则藻泽藻灶贼泽 云蕴圆鄄粤则藻葬 葬灶凿 贼澡藻 增藻则贼蚤糟葬造 葬曾蚤泽 则藻责则藻泽藻灶贼泽 贼澡藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 糟藻造造泽冤 援
图 圆摇 小孢子再生植株不同倍性水平流式细胞仪分析矩形图
云蚤早援 圆摇 云造燥憎 糟赠贼燥皂藻贼则蚤糟 澡蚤泽贼燥早则葬皂泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责造燥蚤凿赠 造藻增藻造泽 蚤灶 皂蚤糟则燥泽责燥则藻鄄凿藻则蚤增藻凿 责造葬灶贼泽
猿摇 结论和讨论
近年来袁甘蓝类植物的游离小孢子培养技术应用
取得了长足进步袁在生产中应用越来越广泛遥 然而袁其
重要难点要基因型依赖性还没有有效的解决方法遥 本
试验选用 员园 个甘蓝尧源 个青花菜和 缘 个羽衣甘蓝不同
品种作为供试材料袁进行游离小孢子培养袁发现也存在
基因型依赖性问题遥 在不同基因型中袁甘蓝 郧缘 和羽
衣甘蓝 再员园 没有得到胚状体袁而在已得到胚状体的基
因型中袁胚状体发生频率普遍较低袁且不同基因型的出
胚率存在明显差异遥 此外也发现袁基因型障碍不仅影
响小孢子胚状体发生频率袁也影响胚的质量袁这与前
人咱员园 原 员猿暂的研究结果一致遥
适当逆境预处理能改变小孢子发育途径袁阻止小
孢子形成花粉粒袁促使其沿孢子体胚胎发育途径发展袁
形成小孢子胚咱员源 原 员远暂 遥 广泛使用的预处理方法为温度
处理渊低温预处理和热激诱导冤遥 热激诱导的效果显
著袁使用方便袁在小孢子培养中广泛应用咱愿袁员苑 原 员愿暂 遥 而
低温预处理所起到的效果存在争议咱员愿 原 圆园暂 遥 把低温预
处理与高温热激结合使用袁则可以很好的促进小孢子
胚胎发生咱圆员暂 遥 本试验采用 源益低温预处理 园 耀 圆凿 与
猿圆郾 缘益热激相结合袁显著促进了小孢子胚胎发生遥
小孢子胚状体在 晕蕴晕鄄员猿 液体培养基中的滞留时
间尧固体转化培养基的种类及琼脂浓度对再生率有显
著影响遥 滞留时间过短或过长均会对小孢子胚萌发产
生影响曰而琼脂浓度主要是通过改变胚生长环境中的
湿度来降低玻璃化损害袁促进胚萌发咱猿袁员猿暂 遥 另外袁胚的
类型对胚发育成苗也有重要影响遥 研究发现子叶型胚
的再生能力最好袁可以顺利的转化为植株咱员猿袁圆圆 原 圆猿暂 遥 本
试验中观察到袁在出胚率低的基因型中袁胚的类型多为
圆球形和畸形胚袁子叶型胚数量较少袁从而影响了胚转
化成苗的效果遥
小孢子再生植株倍性操作及倍性鉴定是小孢子培
养技术应用的重要环节遥 秋水仙碱处理在植物倍性操
作中被广泛应用咱愿袁员愿暂 遥 在小孢子培养中袁秋水仙碱诱
导加倍方式有 猿 种院一是在液体培养基或固体培养基
中添加秋水仙碱处理小孢子咱愿袁圆源暂 曰二是采用秋水仙碱
溶液处理小孢子再生植株生长点咱怨袁圆缘暂 曰三是在移栽或
田间生长时浸泡植株根部咱圆远 原 圆苑暂 遥 由于秋水仙碱具有
致死效应袁在实际操作中需选用适当的方法袁优化最佳
处理浓度和处理时间袁以得到最佳的处理效果遥 流式
细胞仪鉴定植株倍性的可靠性已得到大部分研究者的
认可咱圆愿 原 猿园暂 遥 由于小孢子培养得到的再生植株群体中
倍性混杂袁在植株生长发育早期阶段取植株少量幼嫩
叶片袁采用流式细胞仪分析其 阅晕粤含量袁可快速尧准确
的判断出倍性水平袁从而节约培养时间袁提高育种效
率遥
参考文献院
咱 员 暂摇 陈秋芳袁贾宏汝援十字花科植物的研究价值及开发利用前景咱允暂 援
安徽农业科学袁圆园园苑袁猿缘渊猿源冤院员愿猿 原 员愿缘
咱 圆 暂摇 王国槐袁官春云袁陈社员袁刘本坤袁刘忠松援 十字花科芸薹属种间
杂种营养优势的利用研究咱允暂 援作物学报袁圆园园猿袁圆怨渊员冤院缘源 原 缘愿
咱 猿 暂摇 袁素霞袁刘玉梅袁方智远袁杨丽梅袁庄木袁张扬勇袁孙培田援 结球甘
蓝和青花菜小孢子胚植株再生咱 允暂 援 植物学报袁圆园员园袁源缘渊圆冤院圆圆远
原 圆猿圆
缘猿怨
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
咱 源 暂 摇 严准袁田志宏袁孟金陵援甘蓝游离小孢子培养的初步研究咱 允暂 援 华
中农业大学学报袁员怨怨怨袁员愿渊员冤院缘 原 苑
咱 缘 暂 摇 顾宏辉袁张冬青袁周伟军援 换培养液和秋水仙碱处理对白菜型油
菜小孢子胚胎发生的影响咱允暂 援作物学报袁圆园园源袁猿园渊员冤院苑愿 原 愿员
咱 远 暂 摇 何杭军袁王晓武袁王炳良援芥蓝游离小孢子培养初报咱 允暂 援园艺学
报袁圆园园源袁猿员渊圆冤院圆猿怨 原 圆源园
咱 苑 暂 摇 姜凤英袁 冯辉援 羽衣甘蓝游离小孢子培养初报咱 允暂 援 园艺学报袁
圆园园缘袁猿圆渊缘冤院愿愿源
咱 愿 暂 摇 在澡燥怎 宰 允袁 匀葬早遭藻则早 孕袁 栽葬灶早 郧 载援 陨灶糟则藻葬泽蚤灶早 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 葬灶凿
凿燥怎遭造蚤灶早 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 遭赠 蚤皂皂藻凿蚤葬贼藻 糟燥造糟澡蚤糟蚤灶藻泽 贼则藻葬贼皂藻灶贼 燥枣 蚤泽燥造葬贼藻凿
皂蚤糟则燥泽责燥则藻泽 蚤灶 泽责则蚤灶早 月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽 咱 允暂 援 耘怎责澡赠贼蚤糟葬袁 圆园园圆袁 员圆愿院
圆苑 原 猿源
咱 怨 暂摇 张振超袁张蜀宁袁张伟袁张红亮援四倍体不结球白菜的诱导及染色
体倍性鉴定咱允暂 援西北植物学报袁圆园园苑袁圆苑渊员冤院圆愿 原 猿圆
咱员园暂摇 张延国袁王晓武援小孢子培养技术在青花菜上的应用咱允暂 援中国蔬
菜袁 圆园园缘袁员渊远冤院苑 原 愿
咱员员暂摇 陈文辉袁方淑桂袁曾小玲袁朱朝辉袁廖晓珍援 甘蓝和青花菜杂种小
孢子培养咱允暂 援热带亚热带植物学报袁圆园园远袁员源渊源冤院猿圆员 原 猿圆远
咱员圆暂摇 赵前程袁吉立柱袁蔡荣旗袁刘莉莉袁佟志强袁孙德岭援花椰菜游离小
孢子培养及植株再生研究咱允暂 援华北农学报袁圆园园苑袁圆圆渊远冤院远缘 原 远愿
咱员猿暂摇 周志国袁龚义勤袁王晓武袁柳李旺袁张延国援 不同萝卜品种游离小
孢子的诱导及培养体系优化研究咱 允暂 援 西北植物学报袁圆园园苑袁圆苑
渊员冤院猿猿 原 猿愿
咱员源暂摇 栽燥怎则葬藻增 粤袁 陨灶凿则蚤葬灶贼燥 粤袁 宰则葬贼泽糟澡噪燥 陨袁 灾蚤糟藻灶贼藻 韵袁 匀藻遭藻则造藻鄄月燥则泽 耘援
耘枣枣蚤糟蚤藻灶贼 皂蚤糟则燥泽责燥则藻 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 蚤灶 憎澡藻葬贼 渊 栽则蚤贼蚤糟怎皂 葬藻泽贼蚤增怎皂
蕴援 冤袁 蚤灶凿怎糟藻凿 遭赠 泽贼葬则增葬贼蚤燥灶 葬贼 澡蚤早澡 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 咱 允暂 援 杂藻曾 孕造葬灶贼
砸藻责则燥凿袁 员怨怨远袁 怨院 圆园怨 原 圆员缘
咱员缘暂摇 栗根义袁高睦枪袁赵秀山援大白菜游离小孢子培养咱允暂 援园艺学报袁
员怨怨猿袁圆园渊圆冤院员远苑 原 员苑园
咱员远暂摇 刘公社袁李岩袁刘凡援高温对大白菜小孢子培养的影响咱 允暂 援植物
学报袁员怨怨缘袁猿苑渊圆冤院员源园 原 员源远
咱员苑暂摇 悦怎泽贼藻则泽 允 月 酝袁 悦燥则凿藻憎藻灶藻则 允 匀 郧袁 晕燥造造藻灶 再袁 阅燥灶泽 匀 允 酝袁
悦葬皂责葬早灶藻 酝 酝 灾援 栽藻皂责藻则葬贼怎则藻 糟燥灶贼则燥造泽 遭燥贼澡 早葬皂藻贼燥责澡赠贼蚤糟 葬灶凿
泽责燥则燥责澡赠贼蚤糟 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 蚤灶 皂蚤糟则燥泽责燥则藻 糟怎造贼怎则藻泽 燥枣 月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽
咱允暂 援 孕造葬灶贼 悦藻造造 砸藻责燥则贼泽袁 员怨怨源袁 员猿院 圆远苑 原 圆苑员
咱员愿暂摇 郧怎 匀 匀袁 匀葬早遭藻则早 孕袁 在澡燥怎 宰 允援 悦燥造凿 责则藻贼则藻葬贼皂藻灶贼 藻灶澡葬灶糟藻泽
皂蚤糟则燥泽责燥则藻 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 蚤灶 燥蚤造泽藻藻凿 则葬责藻 渊月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽 蕴援 冤 咱允暂 援
孕造葬灶贼 郧则燥憎贼澡 砸藻早怎造葬贼蚤燥灶袁 圆园园源袁 源圆院 员猿苑 原 员源猿
咱员怨暂摇 杂燥责燥则赠 杂 运袁 酝怎灶糟澡蚤 酝援 粤灶贼澡藻则 糟怎造贼怎则藻援 陨灶院 酝燥灶澡葬灶躁葬蚤灶 杂酝袁
杂燥责燥则赠 杂运袁 灾藻蚤造造藻怎曾 砸耘 渊 藻凿泽冤 援 陨灶 增蚤贼则燥 澡葬责造燥蚤凿 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 蚤灶
澡蚤早澡藻则 责造葬灶贼泽 咱酝暂援 阅燥则凿则藻糟澡贼院 运造怎憎藻则 粤糟葬凿藻皂蚤糟 孕怎遭造蚤泽澡藻则泽袁 员怨怨远院
员源缘 原 员苑远
咱圆园暂摇 杂葬贼燥 栽袁 晕蚤泽澡蚤燥 栽袁 匀蚤则葬蚤 酝援 孕造葬灶贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 枣则燥皂 蚤泽燥造葬贼藻凿
皂蚤糟则燥泽责燥则藻 糟怎造贼怎则藻泽 燥枣 悦澡蚤灶藻泽藻 糟葬遭遭葬早藻 渊 月则葬泽泽蚤糟葬 糟葬皂责藻泽贼则蚤泽 泽泽责援
孕藻噪蚤灶藻灶泽蚤泽冤 咱允暂 援 孕造葬灶贼 悦藻造造 砸藻责燥则贼泽袁 员怨愿怨袁 愿院 源愿远 原 源愿愿
咱圆员暂摇 孕藻糟澡葬灶 孕 酝袁 月葬则贼藻造泽 阅袁 月则燥憎灶 阅 悦 宰袁 杂糟澡藻造造 允援 酝藻泽泽藻灶早藻则鄄砸晕粤
葬灶凿 责则燥贼藻蚤灶 糟澡葬灶早藻泽 葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 憎蚤贼澡 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 月葬泽泽蚤糟葬 皂蚤糟则燥泽责燥则藻
藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 咱允暂 援 孕造葬灶贼葬袁 员怨怨员袁 员愿源院 员远员 原 员远缘
咱圆圆暂摇 余凤群袁刘后利援供体材料和培养基成分对甘蓝型油菜小孢子胚
状体产量的影响咱允暂 援华中农业大学袁员怨怨缘袁 员源渊源冤院猿圆苑 原 猿猿员
咱圆猿暂摇 运燥贼贼 蕴 杂袁 孕燥造泽燥灶蚤 蕴袁 耘造造蚤泽 月袁 月藻增藻则泽凿燥则枣 宰 阅援 粤怎贼燥贼燥曾蚤糟蚤贼赠 蚤灶
蚤泽燥造葬贼藻凿 皂蚤糟则燥泽责燥则藻泽 燥枣 月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽 咱 允暂 援 悦葬灶葬凿蚤葬灶 允燥怎则灶葬造 燥枣
月燥贼葬灶赠袁 员怨愿愿袁 远远院 员远远缘 原 员远苑园
咱圆源暂摇 在葬噪蚤 酝援 酝燥凿蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 糟藻造造 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 蚤灶 增蚤贼则燥院 栽澡藻 藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼 燥枣
糟燥造糟澡蚤糟蚤灶藻泽 燥灶 葬灶贼澡藻则 葬灶凿 蚤泽燥造葬贼藻凿 皂蚤糟则燥泽责燥则藻 糟怎造贼怎则藻 蚤灶 月则葬泽泽蚤糟葬
灶葬责怎泽 咱允暂 援 孕造葬灶贼 悦藻造造 栽蚤泽泽怎藻 葬灶凿 韵则早葬灶 悦怎造贼怎则藻袁 员怨怨缘袁 源园院 圆缘缘 原
圆苑园
咱圆缘暂摇 蕴蚤糟澡贼藻则 砸援 耘枣枣蚤糟蚤藻灶贼 赠蚤藻造凿 燥枣 藻皂遭则赠燥蚤凿泽 遭赠 糟怎造贼怎则藻 燥枣 蚤泽燥造葬贼藻凿
皂蚤糟则燥泽责燥则藻泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 月则葬泽泽蚤糟葬糟藻葬藻 泽责藻糟蚤藻泽 咱 允暂 援 孕造葬灶贼 月则藻藻凿蚤灶早袁
员怨愿怨袁 员园猿院 员员怨 原 员圆猿
咱圆远暂摇 悦澡藻灶 匝袁 粤则皂泽贼则燥灶早 运援 郧藻灶燥皂蚤糟 蚤灶 泽蚤贼怎 澡赠遭则蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶 蚤灶 粤增藻灶葬 泽葬贼蚤增葬
咱允暂 援 郧藻灶燥皂藻袁 员怨怨源袁 猿苑院 远园苑 原 远员圆
咱圆苑暂摇 周伟军袁 唐桂香袁 张国庆袁 匀葬早遭藻则早 孕援甘蓝型油菜小孢子秋水仙
素处理提高双单倍体频率研究咱 允暂 援 中国农业科学袁圆园园圆袁猿缘
渊源冤院源员园 原 源员源
咱圆愿暂摇 砸燥怎曾 晕袁 栽燥造燥扎葬 粤袁 砸葬凿藻糟噪蚤 在袁 在葬责葬贼葬鄄粤则蚤葬泽 云允袁 阅燥造藻觩藻造 允援 砸葬责蚤凿
凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 葬灶藻怎责造燥蚤凿赠 蚤灶 酝怎泽葬 怎泽蚤灶早 枣造燥憎 糟赠贼燥皂藻贼则赠 咱允暂 援 孕造葬灶贼 悦藻造造
砸藻责燥则贼泽袁 圆园园猿袁 圆员院 源愿猿 原 源怨园
咱圆怨暂摇 郧则藻蚤造澡怎遭藻则 允袁 栽藻皂泽糟澡 耘 酝袁 蕴燥怎则藻蚤则燥 允 悦 酝援 晕怎糟造藻葬则 阅晕粤 糟燥灶贼藻灶贼
皂藻葬泽怎则藻皂藻灶贼 蚤灶 枣造燥憎 糟赠贼燥皂藻贼则赠 憎蚤贼澡 责造葬灶贼 糟藻造造泽 咱 酝暂援 宰藻蚤灶澡藻蚤皂院
宰蚤造藻赠 灾悦匀袁 圆园园苑院 远苑 原 员园员
咱猿园暂摇 阅蚤葬泽 允 杂援 耘枣枣藻糟贼 燥枣 蚤灶糟怎遭葬贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 则藻早蚤皂藻泽 葬灶凿 糟怎造贼怎则藻
皂藻凿蚤怎皂 燥灶 遭则燥糟糟燥造蚤 皂蚤糟则燥泽责燥则藻 糟怎造贼怎则藻 藻皂遭则燥早藻灶藻泽蚤泽 咱 允 暂 援
耘怎责澡赠贼蚤糟葬袁 圆园园员袁 员员怨院 猿愿怨 原 猿怨源
远猿怨
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员猿袁圆苑渊苑冤院园怨圆怨 耀 园怨猿苑
酝蚤糟则燥泽责燥则藻 耘皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 葬灶凿 孕造葬灶贼 砸藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 月则葬泽泽蚤糟葬 孕造葬灶贼泽
在匀粤晕郧 在澡藻灶鄄糟澡葬燥员袁 圆 摇 郧耘晕郧 载蚤灶鄄曾蚤灶员 摇 阅粤陨 在澡燥灶早鄄造蚤葬灶早圆 摇 孕粤晕 再怎藻鄄责蚤灶早圆
宰粤晕郧 月蚤灶早员 摇 载哉 蕴蚤灶早员 摇 再粤晕 在澡蚤鄄皂蚤灶早猿 摇 在匀韵哉 宰藻蚤鄄躁怎灶圆
渊员 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 悦则燥责 杂糟蚤藻灶糟藻袁 在澡藻躁蚤葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匀葬灶早扎澡燥怎袁在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿员园园缘愿曰圆在澡藻灶躁蚤葬灶早 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造
砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻袁 允怎则燥灶早袁允蚤葬灶早泽怎摇 圆员圆源园园曰猿 允蚤葬灶早泽怎 孕燥造赠贼藻糟澡灶蚤糟 悦燥造造藻早藻 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 葬灶凿 云燥则藻泽贼则赠袁 允怎则燥灶早袁 允蚤葬灶早泽怎摇 圆员圆源园园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院栽澡藻 枣葬糟贼燥则泽 贼澡葬贼 葬枣枣藻糟贼 皂蚤糟则燥泽责燥则藻 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 葬灶凿 责造葬灶贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 员怨 糟怎造贼蚤增葬则泽 燥枣 月则葬泽泽蚤糟葬 责造葬灶贼泽
渊糟葬遭遭葬早藻袁 遭则燥糟糟燥造蚤 葬灶凿 噪葬造藻冤 憎藻则藻 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻凿 蚤灶 贼澡藻 责则藻泽藻灶贼 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 早藻灶燥贼赠责藻
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