全 文 ：© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
　核 农 学 报　2010, 24 (1) : 0181～0186
Journal of N uclear Agricu ltura l Sciences
收稿日期 : 2009205227　接受日期 : 2009208207
基金项目 :国家“十一五科技支撑”课题 (2008BADA7B04).
作者简介 :周传社 (19802) ,男 ,湖南汨罗人 ,博士 ,助理研究员 ,主要从事反刍动物营养与环境安全研究。Tel: 0731284615236;
E2mail: shezhang122@ yahoo. com. cn
通讯作者 :谭支良 (19672) ,男 ,湖南湘乡人 ,研究员 ,博士生导师 ,主要从事农牧复合生态系统研究。E2mail: zltan@ isa. ac. cn
文章编号 : 100028551 (2010) 0120181206
蛋氨酸对山羊内源氮和氨基酸流量影响的测定方法比较
周传社　王久荣　潘亚非　谭支良　汤少勋　孙志洪　韩雪峰　王　敏
(中国科学院亚热带农业生态研究所 ,亚热带农业生态过程重点实验室 ,湖南 长沙　410125)
摘 　要 :采用 3 ×3拉丁方试验设计 ,选用 3头安装有永久性瘤胃、十二指肠近端瘘管和颈静脉插管 ,平均
体重为 20kg ±215kg的健康湘东黑山羊为试验动物 ,饲喂 Met水平分别为 0115%、0125%和 0135%的 3
种试验日粮 ,旨在研究 Met水平对山羊内源氮 ( EN )和内源氨基酸 ( ENAA )流量的影响 ,同时比较差量
法和同位素稀释法测定山羊十二指肠 EN和 ENAA流量的差异。结果显示 :日粮 Met水平对山羊十二
指肠 EN和 ENAA流量没有显著影响 ( P > 0105) ;当日粮 Met水平为 0115%时 ,差量法和同位素稀释法
测定十二指肠 EN和 ENAA流量均最低 ,且 2种测定方法之间无显著差异 ( P > 0105) ;差量法测定 EN
和 ENAA流量均低于同位素稀释法测定结果 ( P > 0105)。结果表明 :山羊十二指肠 EN和 ENAA流量
不受日粮 Met水平影响 ;差量法测定的十二指肠 EN和 ENAA流量低于同位素稀释法。
关键词 :蛋氨酸 ;差量法 ;同位素稀释法 ;内源氮 ;内源氨基酸 ;流通量 ;山羊
COM PAR ISO N O F DETERM ING M ETHOD S FO R M ETH IO N INE EFFECT O N ENDO GENO US
FLOW S O F NITRO GEN AND AM INO AC IDS IN GROW ING GOATS
ZHOU Chuan2she　WANG J iu2rong　PAN Ya2fei　TAN Zhi2liang
TANG Shao2xun　SUN Zhi2hong　HAN Xue2feng　WANG M in
( Key Laboratory of A gro2ecological Processes in Subtropical R egion, Institute of Subtropica l Agriculture,
Chinese A cadem y of Sciences, Changsha, Hunan　410125)
Abstract: To compare the results gained from the difference method and isotope dilution method by feeding normal
p rotein2containing diets, the effects of dietary methionine (Met) levels on the duodenal flows of endogenous N ( EN )
and endogenous am ino acids ( ENAA ) in growing goats were studied. Three tested goats (20kg ±215kg) were fitted
with a rum inal, duodenal cannulae and the jugular catheters, and allocation to three dietary treatments using 3 ×3
Latin Square design. The dietary treatments consisted of a total m ixed ration containing three levels of Met ( 0115% ,
0125% and 0135% ) , respectively. The results showed that the duodenal flows of EN and ENAA was the lowest when
the dietary Met level was 0115% , and there was no significant difference ( P > 0105) in the duodenal flows of EN and
ENAA measured by the difference method and isotope dilution method. The duodenal flows of EN and ENAA determ ined
by the difference method was lower than the data by the isotope dilution method ( P > 0105). It was concluded that the
duodenal flows of EN and ENAA are not affected by the dietary direct supp lementation ofMet, and the duodenal flows of
EN and ENAA determ ined by the difference method were lower than data by the isotope dilution method.
Key words: methionine; difference method; isotope dilution method; endogenous nitrogen; endogenous am ino acids;
flows; goats
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核　农　学　报 24卷
　　即使给动物饲喂无氮 (N )日粮 ,其粪便和尿液中
仍有一定的 N素 ,此类 N即为内源 N ( EN )。粪中 EN
主要来源于动物体内的酶、肠粘膜、肠脱落细胞、血浆
清蛋白、多肽、氨基酸 (AA )、氨基化合物和胺等 ;而尿
中 EN则主要来源于体内 N 代谢产物 (尿素和尿酸
等 ) [ 1, 2 ]。就反刍动物而言 ,经瘤胃进入十二指肠的蛋
白质 ,除瘤胃饲料蛋白和瘤胃微生物蛋白外 ,内源蛋白
质亦是其重要组成部分 [ 3 ] ,占十二指肠总蛋白比例的
16% ～ 56% [ 4 ]。研究证明 , 动物机体内源氨基酸
( ENAA)分泌是其生理代谢过程中不可避免的 , ENAA
主要包括 2个部分 :基础 ENAA和特异性 ENAA。反
刍动物十二指肠 ENAA约占总 AA的 30% [ 4, 5 ]。机体
EN周转对保持动物 AA和能量的平衡与利用具有重
要营养生理作用 ,但 EN的大量损失也会影响动物对
饲料 N或 AA的有效利用。因此 ,准确测定动物消化
道 EN和 ENAA流量对于了解动物蛋白质需要量和日
粮适宜蛋白质供应量 ,进而通过营养生理调控措施提
高日粮 N的利用效率具有重要意义。
随着反刍动物 AA营养研究的不断深入 ,其蛋白
质营养研究的重点逐步转移到研究进入小肠的不同
AA来源与数量、组成模式以及相应的评定方法上来 ,
反刍动物日粮必需氨基酸 ( EAA )限制性顺序和小肠
可消化 AA模式研究引起了人们的浓厚兴趣。而消化
道 EN与 ENAA的准确测定是建立小肠可消化 AA模
式的基础 ,加之反刍动物具有瘤胃这一特殊发酵罐 ,使
得其消化道 EN和 ENAA的测定技术较之单胃动物更
为复杂。Shan等 [ 6 ]研究发现 ,蛋氨酸 (Met)是饲喂以
玉米、豆粕和玉米秸秆为主生长山羊的第一限制性
AA,由此推测动物胃肠道 EN和 ENAA流量很可能与
日粮中限制性 AA含量有关。目前 ,关于动物消化道
EN和 ENAA损失的测定方法主要包括无氮日粮法、
完全可消化蛋白源或静脉灌注平衡氨基酸法、肽营养
超滤技术、回归分析法、高精氨酸法、差量法、氨基酸库
法和同位素稀释法等 [ 7～9, 10～13 ]。这些测定方法中 ,同
位素稀释法可直接标记内源代谢产物 ,是目前公认为
测定 EN或 ENAA损失的最准确方法 ;差量法由于在
实际过程中便于操作且成本低 ,近几年在反刍动物营
养上应用较广。本研究通过调控山羊日粮中第一限制
性 AA2Met水平 ,采用差量法和同位素稀释法测定生
长山羊十二指肠 EN和 ENAA流量 ,探讨日粮 Met对
山羊消化道 EN和 ENAA流量的影响 ,同时比较 2种
方法测定值之间的差异 ,以期为山羊氮代谢及其营养
调控提供理论支撑。
1　材料与方法
111　试验动物及其饲养管理 [ 14 ]
采用 3 ×3拉丁方试验设计 ,进行 3期动物试验。
选择 3头安装有永久性瘤胃、十二指肠瘘管和颈静脉
插管的健康湘东黑山羊 (平均体重为 20kg ±215kg)作
为试验动物。分别于 07: 00和 19: 00按平均自由采食
量的 95%等量饲喂 ,自由饮水。
112　试验日粮
试验羊日粮参照中华人民共和国农业行业标准 -
肉羊饲养标准 (2004)配制。以 114倍维持需要设计
日粮 ,满足 100g日增重的需要。在以前的研究中发
现 ,按 0177g/d通过十二指肠灌注 Met,山羊回肠末端
食糜 AA组成模式接近山羊肌肉 AA组成模式 [ 6 ] ,根
据预先测定的山羊平均自由采食量 ( 500g/d) ,本试验
中 LM日粮 Met水平设为 0115% ,并在此基础上分别
上调 011 和 012 个百分点 , 配制 Met含量分别为
0125% (MM )和 0135% (HM )的 3种日粮水平 (表 1)。
根据饲料原料蛋白质和 Met含量 ,为满足试验日粮总
蛋白和 Met水平 ,在 LM处理日粮中 0162%尿素。
113　样品采集及测定
每期试验 26d,其中预饲期 14d,采样期 12d,共 3
期。每期试验前 3d 分别收集精料和玉米秸秆各
100g,按日粮编号混合并全部粉碎 ,过 40目筛。准确
记录和采集羊只每天的剩料 ,测定精料、玉米秸秆以及
剩料中 DM、N和 AA含量以及 15 N丰度。
11311　尼龙袋试验 　每期试验开始的第 15～17天 ,
称取 5g左右的全混日粮放入大小约为 8 ×12cm尼龙
袋 (尼龙布孔径为 35～50μm)。按“依次投入、同时取
出 ”原则 ,将装有样品的尼龙袋分别在瘤胃内培养 0、
2、6、12、24、36和 48h (其中 0时间点尼龙袋不放入瘤
胃内 ,直接洗涤 )。取出后的尼龙袋直接放入洗衣机
内 ,流水状态下洗涤 3次 ,洗涤过程中切勿挤压尼龙
袋 ,以免人为增大降解率。洗净的尼龙袋放于 65℃烘
箱中烘干至恒重并记录其重量。测定尼龙袋样品中
DM、N和 AA含量。
11312　食糜标记物 　参照卢德勋 [ 15 ]的程序以 Cr2 O3
为食糜标记物。每期试验开始的第 18～24天 , 06: 00、
12: 00、18: 00和 24: 00按 1g/次·头的剂量通过瘤胃瘘
管投放 Cr2 O3 ;分别于每期试验第 22天 05: 00、11: 00、
17: 00、23: 00,第 23天的 07: 00、13: 00、19: 00、01: 00,
第 24天 09: 00、15: 00、21: 00、03: 00采集十二指肠食
糜各 30m l左右。每期试验结束后 ,按羊号和试验期数
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　1期 蛋氨酸对山羊内源氮和氨基酸流量影响的测定方法比较
将十二指肠食糜依照等量原则分别制成混合样 ,烘干
测定食糜中 Cr含量 ,以计算十二指肠 N和 AA流量。
表 1　试验日粮组成及其营养成份 ( DM 基础 )
Table 1　 Ingredients and chem ical composition
of the experimental diets (DM basis) ( % )
项目 item
日粮　 D iets1)
LM MM HM
以干物质为基础 , %DM
玉米秸秆 maize stover 50100 50100 50100
玉米 ground corn 26177 22198 22172
豆粕 soybean meal 14181 19194 19130
蛋氨酸 methionine - 0108 0118
脂肪粉 fat meal 5100 5100 5100
食盐 sodium chloride 0180 0180 0180
尿素 urea 0162 0 0
预混料 2) p rem ix 2100 2100 2100
日粮成份 chem ical composition
蛋氨酸 methionine 0115 0125 0135
消化能 DE (MJ /Kg) 3) 11176 11185 11185
粗蛋白 CP 13120 13120 13120
钙 Ca 0125 0126 0126
磷 P 0124 0126 0126
中性洗涤纤维 NDF 37150 37175 37174
注 : 1) LM: 0115%Met;MM: 0125%Met; HM: 0135%Met; 2)每千克预混料
提供 Prem ix composition (p rem ix/kg) : 24318g MgSO4·H2O, 1518g FeSO4
·7H2O, 313g CuSO4·5H2O, 1310g MnSO4·H2O, 1415g ZnSO4·H2O,
20mg Na2 SeO3 , 60mg KI, 40mg CoCl2·6H2O, 95, 000 IU维生素 A, 17,
500 IU维生素 D, 18, 000 IU维生素 E。3)消化能根据原料组成计算所
得 [ 14 ] ,其余为实测值。DE is calculated value, other nutrient levels are
measured values。
11313　同位素灌注及样品采集程序 　试验期第 18～
26天连续 9d通过颈静脉插管利用蠕动泵 ( TS2260,上
海肯强仪器有限公司 )向山羊灌注 15 N标记的亮氨酸
(15 N2Leu, 98% ,创美伟业科技有限公司 ) ,灌注速率为
010513mmol/h。灌注时将 15 N2Leu溶解在生理盐水中 ,
每天每头羊灌注 500m l。灌注前 1d于 09: 00、15: 00、
21: 00采集羊只血样和十二指肠食糜样品 ,以测定 15 N
本底值。第 24天的 05: 00、11: 00、17: 00、23: 00,第 25
天的 07: 00、13: 00、19: 00、01: 00和第 26天的 09: 00、
15: 00、21: 00、03: 00继续采集血样和十二指肠食糜样
品。每次采集 10m l血样 ,在 3000 r/m in、4℃下离心
5m in,取血浆 (015m l)在 - 20℃保存 ,以备分析 15 N丰
度 ,用于同位素稀释法计算。根据羊号和试验期数将
所采集食糜样品按等量原则制成。分别用以同位素稀
释法和差量法测定计算 DM、N , DM、Cr和 AA含量以
及 15 N丰度。
1. 4　样品的分析测定
参考 Reed等 [ 16 ]梯度离心法分离十二指肠食糜样
品微生物 ,即取约 150m l十二指肠食糜 ,称重并加入等
质量的生理盐水 ,用手拍打并摇匀 5m in,用 2层纱布
挤压过滤。将滤液在 1000 r/m in、4℃下离心 10m in,以
去除原虫和饲料颗粒。收集上清液在 12, 000 r/m in、
4℃下离心 20m in,小心去除上清液 ,用生理盐水洗涤
沉淀并重复离心 1次 ,收集沉淀 (即十二指肠微生物 )
至洁净培养皿中。所分离的微生物样品经冷冻干燥机
( GLZY - 0. 5B ,上海浦东冷冻干燥器厂 )干燥后经冷
冻干燥后根据杨胜 [ 17 ]的方法测定 DM和 N含量 ;采用
全自动氨基酸分析仪 (L - 8800,日本日立 )测定 AA含
量。另取约 100m l十二指肠食糜样品于 65℃烘干 ,用
于分析 DM和 Cr含量以及 15 N丰度 ; 15 N丰度用稳定同
位素质谱仪 (MAT 253,德国 )测定 ,测定前处理分别参
考鲁如坤 [ 18 ]和 Read等 [ 19 ]的方法进行 ; Cr的测定参考
高民和冯宗慈 [ 20 ]方法进行。
115　计算方法
11511　十二指肠流量计算 　按下式进行 :
QD = SSD
　　式中 , QD 为十二指肠 DM 流量 , S指每天投放的
C r的剂量 , SD 指十二指肠食糜中 C r的含量 (DM 为基
础 )。
11512　未降解饲料 N (AA )计算方法 　按下面公式先
计算尼龙袋样品营养物质消失率
P = a + b (1 - e- ct )
　　式中 , P为营养物质在瘤胃中停留 t小时的降解
率 ; a为快速降解部分 ; b为慢速降解部分 ; c为慢速降
解部分 b的降解率常数。
假设饲料的瘤胃外流速度为 k,当时间趋向无穷
大时 ,得到的有效降解率 ( ED )的公式为 : ED = a + bc /
( c + k)
式中 k值参考莫放和冯仰廉 [ 21 ]提出的公式计算
得到 :
K = 0103644 + 010173X
　其中 , X为营养水平 ,本试验为 114倍维持需要营养
水平。根据尼龙袋在瘤胃中停留的时间以及对应的降
解率 ,可以得到全混日粮瘤胃降解的时间曲线 ,按照以
上公式对数据采用非线性回归模型 (NLREG)进行指
数函数拟合分别得到 a、b和 c的值 ,进而求得全混日
粮中营养物质在瘤胃的 ED和未降解 N (AA)的含量。
11513　十二指肠 EN和 ENAA计算方法 　差量法参
考 Larsen等 [ 4 ]提出的公式 :
十二指肠内源氮 /氨基酸 ( EN /ENAA ) =十二指肠总
氮 /氨基酸 ( TN /TAA ) - 十二指肠微生物氮 /氨基酸
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核　农　学　报 24卷
(MN /MAA) -十二指肠未降解饲料氮 /氨基酸 (UFN /
UFAA)
同位素稀释方法计算过程根据 Ouellet等 [ 5 ]提出
的模型推导所得 ,即 :
Fduo, end =
Eduo Fduo - Efeed Fduo, feed - Ebac Fduo, bac
Eend
　　式中 , Eduo、Efeed、Ebac和 Eend分别表示十二指肠食
糜、饲料、十二指肠微生物和前体池 (血浆 ) 15 N丰度 ;
Fduo, end、Fduo、Fduo, feed和 Fduo, bac分别表示十二指肠 EN
( ENAA)、TN ( TAA )、UFN (UFAA)和 MN (MAA)流量。
116　数据分析
试验数据采用 SAS(8102版 )软件 ANOVA程序和
配对 TTEST程序分别进行统计分析 ,差异显著者采
　　　　　
用 Duncan进行多重比较。
2　结果
211　同位素稀释法计算参数
表 2列出了差量法和同位素稀释法计算参数。由
此表可知 ,当 15 N富集达到稳态后 ,采食 3种日粮山羊
前体池 (血浆 ) 15 N丰度平均值为 179121,最高微生物
和食糜样品中 15 N丰度。在饲料原料中也存在自然富
集的 15 N,但其值相对较低 ,含量仅 2%左右。Met水平
对十二指肠 TN、MN和 UFN流量均无显著影响 ( P >
0105)。其中 ,十二指肠 TN和 MN流量呈现随 Met水
平增加而增加的趋势 , UFN以采食 Met水平为 0125%
表 2　同位素稀释法计算参数
Table 2　The calculated parameters of the isotope dilution method
项目 item
日粮 diet
LM MM HM
SEM P
同位素稀释法计算参数 the calculated parameters of the isotope dilution method
15N丰度 15N enrichments (AT% )
十二指肠食糜 duodenal digesta 136114 133174 124146 9176 0171
十二指肠微生物 duodenal m icroorganism 134199 140131 128150 19114 0191
前体池 p recursor pool 193196 175193 167173 16199 0162
饲料 feed 2132 2115 2128 0104 0120
十二指肠流量 duodenal flow ( g/d)
总氮 TN 10175 12118 12162 1102 0152
微生物氮 MN 6199 7124 8109 0193 0172
未降解饲料氮 UFN 3123 3166 3149 0113 0129
注 :十二指肠总氮、微生物氮和未降解饲料氮流量同时用于差量法计算。
Note: The duodenal flow of TN, MN and UFN is used to calculate for the difference method.
(MM ) 日粮的山羊最高 , 分别比采食 Met水平为
0115% (LM ) ,和 0135% (HM )日粮的山羊高 13131%
和 4187% ( P > 0105)。山羊采食 3中 Met水平日粮 ,
十二指肠 EN平均流量为 4127g/kg DM I。
212　同位素稀释法和差量法测定十二指肠 EN和
ENAA流量比较
应用同位素稀释法和差量法测定山羊十二指肠
EN和 ENAA流量结果如表 3所示。由表 3可以看出 ,
同位素稀释法和差量法测定的山羊十二指肠 EN、各单
个内源 EAA和 NEAA、内源 TEAA、TNEAA和 TAA流
量均不受日粮 Met水平的影响 ( P > 0105)。但同位素 稀释法测定结果略高于差量法 ( P > 0105) ,其中山羊十二指肠 EN、内源 TEAA、TNEAA和 TAA分别比差量法测定结果高 39176%、4137%、5139%和 5141%。2种方法测定结果均显示 ,山羊采食 Met水平为 0115%日粮时 ,十二指肠 EN和 ENAA流量均最低。回归分析发现 ,同位素稀释法 ( y)和差量法 ( x)测定十二指肠EN和 ENAA 流量之间的线性相关程度分别为 : y =019509x + 211233 ( R2 = 0194 ) ; y = 110522x - 010041(R2 = 0199)。2种测定结果均显示十二指肠 ENAA流量中谷氨酸和天冬氨酸含量较高。
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　1期 蛋氨酸对山羊内源氮和氨基酸流量影响的测定方法比较
表 3　同位素稀释法和差量法测定十二指肠内源氮 ( EN)和内源氨基酸 ( ENAA)流量比较
Table 3　Comparison of the duodenal flows of EN and ENAA ( g /d) as determ ined by the
difference method (D. M. ) and the isotope dilution method ( I. M. )
项目 item
日粮 diet 方法比较 methods comparison
LM WM HM SEM P LM WM HM SEM P
差量法
D. M.
同位素稀
释法 I. M. SEM P
内源氮流量 EN flow 0153 1128 1104 0139 0151 2166 3141 3101 1101 0188 1166 2132 0191 0155
内源必需氨基酸流量 endogenous EAA flow ( g/d)
精氨酸 A rginine 0149 0147 0154 0120 0161 0159 0158 0161 0116 0199 0153 0156 0101 0125
组氨酸 H istidine 0134 0138 0142 0117 0154 0140 0145 0145 0118 0197 0140 0141 0103 0167
异亮氨酸 Isoleucine 0173 0173 0182 0124 0152 0186 0189 0189 0130 1100 0180 0184 0102 0124
亮氨酸 Leucine 0179 0185 0194 0112 0110 0193 1101 1105 0131 0196 0191 0195 0105 0150
赖氨酸 Lysine 0178 0186 0186 0123 0158 0191 1102 0192 0135 0197 0188 0191 0107 0171
苯丙氨酸 Phenylalanine 0164 0171 0172 0109 0118 0174 0185 0178 0125 0195 0172 0176 0106 0162
蛋氨酸 Methionine 0105 0106 0107 0101 0107 0106 0107 0108 0102 0178 0106 0107 0101 0174
苏氨酸 Threonine 0146 0149 0149 0125 0177 0162 017 016 0133 0197 0153 0159 0108 0157
缬氨酸 Valine 0156 0164 0171 0106 0103 0166 0177 0179 0125 0193 0167 0171 0106 0161
总必需氨基酸 TEAA 5108 5144 5181 0164 0113 5190 6149 6134 2111 0198 5172 5197 0131 0150
内源非必需氨基酸流量 endogenous NEAA flow ( g/d)
丙氨酸 A lanine 0141 0151 015 0124 0149 0148 0164 0155 0125 0190 0150 0153 0107 0166
甘氨酸 Glycin 016 0162 016 0117 0192 0170 0168 0164 0116 0197 0164 0164 0104 1100
酪氨酸 Tyrosine 0131 013 0137 0111 0132 0136 0138 014 0114 0198 0134 0136 0101 0125
天冬氨酸 A spartic acid 1116 1109 1116 0118 0147 1134 1125 1126 0136 0198 1120 1122 0105 0167
半胱氨酸 Cysteine 0101 0102 0102 0101 0130 0102 0102 0102 0101 0197 0102 0102 0101 1100
丝氨酸 Serine 0145 0152 0144 0106 0110 0155 0164 0151 0121 0191 0150 0153 0106 0101
谷氨酸 Glutamate 1144 1141 1143 0124 0187 1179 1176 1165 0150 0198 1154 1162 0114 0165
总非必需氨基酸 TNEAA 4126 4132 4136 0123 0144 5124 5138 5104 1163 0199 4164 4189 0139 0158
内源总氨基酸流量
Endogenous TAA flow ( g/d) 9113 9153 9193 0141 0140 11105 11177 11127 3175 0199 10117 10172 0167 0149
3　讨论
Met是饲喂玉米 -豆粕型日粮山羊的第一限制性
AA [ 6 ]。已有很多试验研究了限制性 AA对反刍动物
营养成分消化代谢、采食行为、生长性能等方面的影
响 [ 22, 23 ] ,而关于日粮限制性 AA水平对反刍动物 EN
和 ENAA影响的研究报道非常鲜见。本研究结果显
示 ,山羊小肠 EN和 ENAA流量不受日粮 Met水平的
影响 ,这可能与本试验日粮 Met水平采用纯的 Met而
非过瘤胃保护 Met调节有关。统计结果显示 ,当日粮
Met含量为 0115%时 , 2种方法测定山羊十二指肠 EN
和 ENAA流量均最低 (表 3)。
十二指肠 TN和 MN流量均呈现随日粮 Met水平
增加而增加的趋势 (表 2) ,这可能与随着日粮 Met水
平的增加 ,山羊瘤胃微生物合成 MN的能力随之加强
有关。关于测定山羊胃肠道不同部位 EN和 ENAA流
量的文献相当有限。Larsen等 [ 4 ]利用差量法测定饲喂
不同精粗比日粮经产荷斯坦奶牛十二指肠 EN ,结果显
示 , EN流量为 135 ±16g/d。Zhou等 [ 24 ]利用差量法
的测定结果表明 ,日粮纤维水平 (31149% ～39169% )
对山羊十二指肠 EN流量无显著影响。在本试验条件
下 ,利用差量法测定的山羊十二指肠 EN流量均高于
Zhou等 [ 24 ]测定结果 ,这可能与不同试验条件下日粮
组成及其营养成分不同有关。Ouellet等 [ 5 ]利用 15 N同
位素稀释法测定饲喂不同纤维水平日粮 (HF: NDF含
量为 3714% ; LF: NDF含量为 2313% )荷斯坦奶牛十
二指肠 EN 流量结果表明 , 十二指肠 EN 流量为
4123g/kg DM I, EN流量不受日粮纤维水平的显著影
响。本研究结果显示 ,山羊采食不同 Met水平日粮 ,十
二指肠 EN平均流量为 4127g /kg DM I。以 DM I为基
础计算的奶牛和山羊十二指肠 EN流量结果表明 ,同
位素稀释法是一种相对稳定的测定反刍动物内源蛋白
流量的方法。本试验结果显示 ,同位素稀释法测定的
山羊十二指肠 EN流量不受日粮 Met水平的影响 ,且
利用差量法测定的十二指肠 EN和 ENAA流量均低于
同位素稀释法。这可能是由于 2种测定方法的计算过
程不同所致 ,即一方面差量法是将十二指肠 N和 AA
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2010, 24 (1) : 0181～0186
组分分成几部分分别测定或计算 ,进而得出 EN流量 ,
其多个指标的测定或计算过程所带来的误差可能导致
EN流量测定结果偏低。另外 Souffrant等 [ 25 ]认为 ,同
位素稀释技术利用示踪原理 ,借助放射性或稳定性同
位素标记内源 (动物 )蛋白质 ,进而区分排泄物或食糜
中的内、外源成分 ,是最有前途的直接检测饲料因素对
EN和 ENAA流量影响的测定技术 ;而利用同位素标
记内源 (动物 )蛋白质被认为是直接测定含 N日粮对
EN损失的最为准确的方法 ,其测定结果能更真实的反
映动物内源代谢物的排泄水平。
很多研究结果表明 ,猪和鸡食糜内源蛋白中 ,谷氨
酸和天冬氨酸等含量占主要部分 [ 26, 27 ]。有研究证实 ,
食糜内源蛋白主要由分泌的胆汁和黏液素糖蛋白组
成 ,这 2类物质具有很强的抗蛋白质水解作用 ,黏液素
糖蛋白富含谷氨酸和天冬氨酸 [ 28 ] ;内源蛋白中谷氨酸
和天冬氨酸在肠腔被吸收的速率低于其他 AA [ 29 ] ,所
以内源蛋白中这 2种 AA含量较高。这也可能是本试
验条件下 , 2种测定方法均显示山羊十二指肠内源谷
氨酸和天冬氨酸流量较高的原因
4　结论
①日粮 Met水平为 0115%时 ,利用同位素稀释法
和差量法测定山羊十二指肠 EN 和 ENAA 流量均最
低。
②差量法测定的 EN和 ENAA流量略低于同位素
稀释法。
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