全 文 ：核 农 学 报 2010，24(6):1166 ～ 1171
Journal of Nuclear Agricultural Sciences
文章编号:1000-8551(2010)06-1166-06
收稿日期:2010-03-09 接受日期:2010-06-24
基金项目:国家“973”项目(2004CB19604)，国家“863”项目(2007AA021305)，国家自然科学基金重点资助项目(30830006)，农业部行业专项
(200803034)，浙江省科技厅项目(2006E10058)
作者简介:华孝挺(1984-)，男，浙江苍南人，博士，研究方向为 DNA 修复和突变研究。E-mail:xthua111@ zju. edu. cn
通讯作者:华跃进(1959-)，男，浙江东阳人，博士，博士生导师，从事 DNA 损伤修复与分子调控方面的研究。E-mail:yjhua@ zju. edu. cn
不同利福平浓度压力下耐辐射球菌的
自发突变率与突变谱研究
华孝挺1，2 王 超1 黄丽芬3 李铭峰1 王 媛1 陈 玙1
翁石莉1 童艳铮1 田 兵1 华跃进1
(1. 浙江大学原子核农业科学研究所 /农业部和浙江省核农学重点实验室，浙江 杭州 310029;
2. 浙江大学医学院附属邵逸夫医院感染科，浙江 杭州 310016;
3. 扬州大学水稻遗传生理学江苏省重点实验室，江苏 扬州 225009)
摘 要:根据耐辐射球菌(Deinococcus radiodurans)rpoB 基因的保守性，建立了 rpoB /Rifr突变分析系统。
为研究不同利福平(rifampin，Rif)浓度对耐辐射球菌自发突变率和突变谱的影响，分别检测耐不同利福
平浓度下辐射球菌的突变率。结果表明:在 5μg /ml 的利福平浓度下耐辐射球菌的突变率显著高于其
在 25 和 50μg /ml 浓度下的突变率。随利福平浓度的不同而表现出的突变谱差异，表明在不同利福平浓
度引起的活性自由氧(reactive oxygen species，ROS)压力下，耐辐射球菌可能使用不同抗突变的应对策
略。在低利福平浓度下，耐辐射球菌重点修复碱基替换突变导致的 DNA 损伤。这可能是因为 ROS 的
主要作用是导致 DNA 出现氧化性碱基损伤。
关键词:DNA 修复;突变;低浓度利福平
MUTATION RATE AND SPECTRUM OF SPONTANEOUS MUTATIONS OF
Deinococcus radiodurans UNDER RIFAMPIN STRESS
HUA Xiao-ting1，2 WANG Chao1 HUANG Li-fen3 LI Ming-feng1 WANG Yuan1
CHEN Yu1 WENG Shi-li1 TONG Yan-zheng1 TIAN Bin1 HUA Yue-jin1
(1. Key Laboratory for Nuclear Agricultural Sciences of Chinese Ministry of Agriculture and Zhejiang Province /
Institute of Nuclear Agricultural Sciences，Zhejiang University，Hangzhou，Zhejiang 310029;
2. Department of Infections Diseases，Sir Run Run Shaw Hospital，College of Medicine，Zhejiang University，
Hangzhou，Zhejiang 310016;3. Key Laboratory of Crop Genetics and Physiology of Jiangsu Province，
Yangzhou University，Yangzhou，Jiangsu 225009)
Abstract:An rpoB /Rifr mutation analysis system has been developed from D. radiodurans based on the conservation of
rpoB gene. To investigate the concentration effect of rifampin on the spontaneous mutation rate and spectrum of D.
radiodurans，the mutation frequencies and rates of D. radiodurans were measured under a wide concentration range of 5
～ 50μg /ml of rifampin. It was found that the mutation rate of the bacterium in 5μg /ml of rifampin was significantly
higher than those in 25 and 50μg /ml rifampin. Rifampin had concentration-denpendent effect not only on the mutation
rate but also on the mutation spectrum. The different mutation spectrum under different concentration of rifampin
suggested that D. radiodurans might change its anti-mutant strategy under reactive oxygen species (ROS)stress caused
6611
6 期 不同利福平浓度压力下耐辐射球菌的自发突变率与突变谱研究
by low concentration of rifampin. It is speculated that D. radiodurans focuses on preventing base substitution mutation
under low concentration of rifampin as ROS induces mainly oxidative base damage.
Key words:DNA repair;mutation;low rifampin concentration
原核生物对极端环境的适应能力(特别是与 DNA
结构、复制及修复相关的压力)可能对遗传稳定机制
的研究提供重要线索。耐辐射球菌 (Deinococcus
radiodurans)能在电离辐射、紫外线(UV)辐射、干旱、
氧化压力等多种胁迫环境下存活［1］，是一种高效 DNA
双链断裂修复的模式生物［2］。对电离辐射敏感的耐
辐射球菌菌种也对干旱敏感［1］，并且干旱和电离辐射
这两种环境压力都能产生 DNA 双链断裂、单链断裂以
及 DNA 交联［3］。这暗示着耐辐射球菌的干旱抗性机
制与耐辐射机制存在相关性。
利用自发突变分析可以从分子机制研究 DNA 复
制、DNA 重组和修复。耐辐射球菌的 rpoB /Rifr 突变分
析系统是基于 rpoB 基因的保守性发展而来［4］。突变
菌株对利福平的抗性来源于 RNA 聚合酶 β 亚基中的
氨基酸突变。RNA 聚合酶 β 亚基参与结合利福平，并
在细菌中高度保守［5］。 rpoB /Rifr 突变分析系统提供
了耐辐射球菌突变的细节，这有助于研究该物种的逃
避突变的机制［4］。该系统已广泛应用于观察诸多耐
辐射球菌突变子的突变率，如 uvrD，mutS1，mutS2，
mutS1 mutS2， mutL， zwf， zwf mutS1， recQ， uvrA1
uvrA2，uvrA1 uvrA2 uvsE，uvrA1 uvrA2 uvsE recQ ［4，6 ～ 9］。
耐辐射球菌的突变率并不能被 UV 所诱导，却随着电
离辐射剂量的提高而上升，并在 2kGy 时达到平台
期［10］。突变事件的差异说明点突变主要在低辐射剂
量下产生，而转座突变则产生于高剂量条件下［6，10］。
Kim 等 使 用 的 利 福 平 浓 度 是 50μg /ml［4］，
Mennecier 等则使用 25μg /ml 的利福平浓度来筛选
Rifr 克隆。为了探讨利福平浓度对突变率和突变谱的
影响，本研究测定了不同利福平浓度下耐辐射球菌的
突变率和突变谱。
1 材料与方法
1. 1 材料
耐辐射球菌(ATCC13939)培养于 30℃ 的 TGY
(0. 5% trytone，0. 3% yeast extract，0. 1% glucose，pH
7. 0)液体培养基或含 1. 3%琼脂的固体培养基。限制
性内切酶，T4 连接酶和 Taq DNA 聚合酶购于 TaKaRa
公司。利福平购于中国 Sanland 化工公司，并用二甲
基亚砜溶解。二甲基亚砜购于 Sigma 公司。
1. 2 突变频率和突变率的测定
突变频率的分析方法参见文献［4，9］。收集位于
稳定早期的细菌，用磷酸缓冲液(20mmol /L，pH7. 4)
漂洗 2 次后重悬。重悬液涂布于含有不同 rifampin
(Rif)浓度的 TGY 平板(5μg /ml，25μg /ml，50μg /ml)，
孵育 3d 后计数。总克隆数则由稀释后的重悬液涂布
于 TGY 平板后计数确定。利福平抗性的突变频率的
值等于 Rif 平板上的克隆数除于 TGY 平板上的克隆
数。突变率应用 Drake 的方法计算［11］。利用统计学
中的 Student’s 双尾 t 检验来评估样本间的突变频率
和突变率是否存在显著性差异。TGY 培养基中的 Rifr
克隆用于提取基因组和进行 PCR 扩增测序。
1. 3 DNA 的分离和测序
DNA 的分离方法参照文献［9］。饱和的 1. 5ml 细
菌以 13，000 × g 离心 1min 后重悬于 200μl 磷酸缓冲
液。向重悬液加入 200μl 苯酚，200μl 氯仿 /异戊醇
(24 /1)和 100μl 石英砂后，用 Mixer Mill type MM301
(Retsch GMbh＆Co. KG，Germany)震荡 1min，最后以
13，000 × g 离心 30min。上清液转移到一新管后，加入
200μl 异丙醇。混合后置于 － 20℃ 30min，接着以
13，000 × g 离心 10min。沉淀的 DNA 用乙醇漂洗 2
次，然后用 30μl MilliQ 水溶解。分别使用 2 对引物
(rpoB1S1 和 rpoB1A1，rpoB2S1 和 rpoB2A1)扩增 rpoB
基因的片段(见表 1)。扩增条件为 94℃ 4min;94℃
1min，58℃ 1min，72℃ 1min30sec，30 个循环后，72℃
8min。PCR 产物由南京金斯特生物技术公司纯化并
进行测序，测序所用的引物为 rpoB1seq(5′端 1221bp)
和 rpoB2seq(5′端 323bp)。
1. 4 耐辐射球菌利福平最小抑菌浓度(MIC)的测定
表 1 用于 PCR 和测序的引物序列［4］
Table 1 Oligonucleotides used for
PCR and sequencing［4］
引物名称
primes name
序列(5′3′)
sequence (5′3′)
rpoB1S1 AAACTGTGCCGATGGTGGAC
rpoB1A1 TAGCTCACGCGGCCATTCAC
rpoB1seq CATGCTGCTCGGCAACCC
rpoB2S1 TCTTTCCCATCGACGAGTCC
rpoB2A1 CACGATGGGGCGGTTGTT
rpoB2seq TGATTCACAAAGACACTGGCGT
7611
核 农 学 报 24 卷
MIC 值由经过修改的管稀释法测定［12］。取 10μl
稳定生长期的细菌分别加到 5ml 含有梯度稀释的利福
平的 TGY 培养基中培养，30℃下 250r /min 摇床中培
养 72h 后进行测定，生物学重复 4 次。
2 结果与分析
2. 1 突变频率和突变率
耐辐射球菌在不同浓度抗生素中突变频率和突变
率见表 2。耐辐射球菌在 5μg /ml 利福平的筛选压力
下的突变频率和突变率分别是 50μg /ml 浓度的 2. 4 倍
和 1. 6 倍，同时其突变率与其他利福平浓度相比具有
显著性差异(P < 0. 05)，但是 25 和 50μg /ml 之间则
没有显著性差异(P = 0. 47)。
2. 2 不同利福平浓度下的 Rifr 突变位点分析
表 3 显示筛选出的 86 个突变结果，浓度 50μg /ml
有 42 种突变，25μg /ml 有 28 种突变，5μg /ml 有 22 种
突变。
表 2 耐辐射球菌 rpoB 突变频率和突变率
Table 2 D. radiodurans rpo B mutation frequencies (f)and ratesa(μ)
菌种
strain
利福平浓度
rifampin concentration (g /ml)
突变频率
mutation frequency(× 10 － 8)
P 值
P value
突变率
mutation rate(× 10 － 8)
P 值
P value
重复次数
number of replicate
R1 50 3. 33 (2. 18 － 4. 48)b < 0. 05 1. 79(1. 29 － 2. 28) < 0. 05 19
R1 25 3. 42(1. 43 － 5. 42) < 0. 05 1. 47 (0. 62 － 2. 32) < 0. 05 9
R1 5 8. 20(4. 88 － 11. 53) 2. 88(2. 02 － 3. 73)
注:a 突变率依照 Drake［11］的方法进行计算;
b 95% 置信区间;
c P 值是通过 50μg /ml 和 20μg /ml 分别和 5μg /ml 比较而计算出来的。
Note:a Rates are calculated by the method of Drake ［11］;
b 95% confidence limits;
c The P value is calculated by comparing 50μg /ml and 20μg /ml with 5μg /ml，respectively.
表 3 耐辐射球菌利福平抗性突变株的突变分布
Table 3 Distribution of mutations leading to Rifr in D. radiodurans
耐辐射球菌位点
D. radiodurans
site (bp)
氨基酸变化
amino acid change
碱基变化
base-pair change
野生型 wild type
(50μg /ml)a (25μg /ml)b (5μg /ml)c
大肠杆菌位点
E. coli
site (bp)
1259 L420P AT = > GC 5 0 0 1532
1273 D425N GC = > AT 2 10 1 1546
1319 S440F GC = > AT 6 0 0 1592
1327 G443R GC = > AT 1 2 0 1592
1418 P473L GC = > AT 0 4 0 1691
1448 S483L GC = > AT 0 0 2 1721
457 I153F AT = > TA 1 0 0 436
458 I153N AT = > TA 1 0 0 437
1304 H435L AT = > TA 3 0 0 1577
1259 L420R AT = > CG 14 5 1 1532
1304 H435P AT = > CG 1 00 0 1577
1441 I481L AT = > CG 0 0 1 1714
1443 I481M AT = > CG 0 0 2 1716
1273 D425Y GC = > TA 1 0 0 1546
1250 － 58 9 － bp deletion 3 3 0 1523 － 31
1258 － 66 9 － bp deletion 1 4 15 1531 － 39
1259 － 67 9 － bp deletion 1 0 0 1532 － 40
1301 － 1303 TGC 3bp insertion 2 0 0 1584 － 86
mutation type 14 6 6
total 42 28 22
注:检测到的 rpoB 基因中的 DNA 序列改变:a在 50μg /ml 的利福平浓度下筛选到的 rpoB 基因中的 DNA 序列改变;b在 25μg /ml 的利福平浓度下筛选
到的 rpoB 基因中的 DNA 序列改变;c在 5μg /ml 的利福平浓度下筛选到的 rpoB 基因中的 DNA 序列改变。
Note:The DNA sequence change in rpoB was determined in each case:a The DNA sequence change in rpoB was determined at 50μg /ml rifampin;b The DNA
sequence change in rpoB was determined at 25μg /ml rifampin;c The DNA sequence change in rpoB was determined at 5μg /ml rifampin.
在 50μg /ml 利福平浓度下得到的突变株中，有 3 种缺失突变和 11 种碱基替换的突变热点，这些突变类
8611
6 期 不同利福平浓度压力下耐辐射球菌的自发突变率与突变谱研究
型与 Kim 等提到的突变类型是一致的［4］。缺失突变
率 11. 9%。另外，在 1259 和 1319bp 处有 2 处碱基替
换突变热点 (G:C － > A:T)，突变率达 47. 6% 和
14. 3%。有趣的是，利用 rpoB /Rifr 还鉴定到 3 个 3bp
的插入突变。该 3bp 的“TGC”以重复序列存在于插入
位点前后。同时，还鉴定到未见报道过位于 458bp 位
点上的突变(A:T － > T:A)。
在 25μg /ml 利福平浓度的筛选压力下，突变位点
的分布相对比较集中，只鉴定出了 2 种 9bp 的碱基缺
失突变以及 4 种类型的碱基替换突变热点。突变位点
的缺失突变率为 25%，4 种碱基替换突变位点分别是
位于 1259bp(A:T － > C:G)，1273bp (G:C － > A:T)，
1327bp (G:C － > A:T)以及 1418bp(G:C － > A:T)。
位于 1273bp(G:C － > A:T)热点的突变率为 35. 7%。
在 5μg /ml 利福平浓度下，鉴定到 1 种 9bp 的缺失
突变和 5 种类型的碱基替换突变热点。在 22 个测序
的突变株中，6. 2%是碱基替换突变，68. 2%是 1258 －
669bp 缺失突变。本文也鉴定到 1 个未见报道的位于
1448bp(G:C － > A:T)的突变位点。
图 1 不同利福平浓度下耐辐射球菌
rpoB 的相对突变频率
Fig. 1 Relative mutation frequencies of rpoB in
D. radiodurans at different rifampin concentrations
2. 3 rpoB 的利福平浓度特异性突变热点
把所有突变分成 3 类:即碱基替换突变，碱基缺失
突变和碱基插入突变。碱基替换突变类型的数量与利
福平浓度存在正相关，而缺失突变的类型与利福平浓
度存在负相关(见图 1)。此外，本研究只鉴定到 Kim
等报道的 6 种碱基替换突变类型中的 5 种，没有发现
任何类似“GC － > CG“的突变热点［4］。这可能与该类
型的突变比较罕见有关。与 50μg /ml 利福平浓度筛
选压力相比，在 5 和 25μg /ml 利福平浓度下，GC － >
AT 和 AT － > CG 这 2 种类型的突变更为常见(见图
2A)。本文也比较了 AT 相关突变和 GC 相关突变，发
现在 25μg /ml 浓度下，突变热点大多集中在 GC 碱基
上(见图 2B)。相反，AT 碱基相关的突变热点在
50μg /ml 的利福平浓度筛选压力下比较常见。而在
5μg /ml 利福平浓度下，这 2 种大类突变热点分布比较
均匀。此外，在 5 和 50μg /ml 浓度下的碱基转换突变
和颠换突变频率比较接近，但在 25μg /ml 利福平浓度
下，转换突变占据主导地位(见图 2C)。
2. 4 耐辐射球菌野生株和 Rifr 突变株的最小抑菌浓
度(MIC)值测定
测定耐辐射球菌野生株和 Rifr 突变株的 MIC 值，
发现 R20 (1258 ～ 66，9bp 缺失突变)的 MIC 值是
128μg /ml，R21(L420R)是 64μg /ml，另外，野生株的
MIC 值是 1μg /ml。
3 讨论
利福平是转录和翻译抑制因子。它通过结合大肠
杆菌的 RNA 聚合酶的 β 亚基避免 mazEF 基因的转
录，进而启动 mazEF 介导的细胞程序性死亡。一般认
为利福平是起抑菌作用，但由 mazEF 介导的细胞程序
性死亡调控网络的启动会把它转化成起杀菌作用的，
该过程通过氧化途径进行［13，14］。
mazEF 的激活提高了蛋白羰基化水平，而 ROS 解
毒蛋白过氧化氢酶和铁螯合剂 2-2′-dipyridyl 可降低蛋
白羰基化水平［13］。Kim 等分析了 185 个自发突变、33
的 NTG 诱导突变、195 个 AZ 诱导突变以及 17 个 uvrD
突变，并且鉴定了耐辐射球菌中分布于 22 个突变位点
的 33 种碱基替换突变［4］。本文鉴定了 3 种分别位于
458，1505 和 1448 的新突变热点［9］和 1 种 3bp 的插入
突变热点。
5μg /ml 利福平筛选下的突变率与 25 和 50μg /ml
有显著性差异，而后两者之间没有显著性差异，5μg /
ml 的 突 变 率 是 50μg /ml 的 1. 6 倍。 这 与
Staphylococcus aureus 的结果一致［25］。 S. aureus 在
1mg /L 的利福平突变率比在 16mg /L 浓度下高 1. 4
倍。由于抗性株和敏感株对一特定的抗生素浓度的反
应不同，抗性种群的筛选只在一个比较狭窄的抗生素
浓度范围内比较合适。突变率随着抗生素浓度降低而
升高，这说明抗生素浓度对细菌的突变率有很重要的
影响，同时支持突变率对药物浓度的改变非常敏
感［25，26］。
R20(缺失突变菌株)的表现令人困惑。在群体中
占最大比例的突变株应该是在接近 MIC 值的抗生素
浓度下筛选到的［26］。例如，R21(碱基替换突变)的
9611
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图 2 不同利福平浓度下耐辐射球菌的 rpoB 基因上碱基替换的突变频率对比
Fig. 2 Relative mutation frequencies of base substitution in rpoB of
D. radiodurans at different rifampin concentrations
A:rpoB 基因上 5 种不同碱基替换突变频率的对比;B:AT 和 GC 上发生的突变的对比;C:碱基转换和颠换的对比
A:Comparison of relative mutation frequencies of five different base substitutions in rpoB;B:Comparison of the percentage
of the mutation occurred among AT pairs and GC pairs in rpoB;C:Comparison of the percentage of transitions and transversions in rpoB
MIC 值是 64μg /ml，它的最大比例群体浓度是 50μg /
ml。然而，R20(缺失突变组)的 MIC 值是 128μg /ml，
但是它的最大比例群体筛选浓度是 5μg /ml。不同利
福平浓度下得到的不同的突变谱支持这样一种假设:
在不同的抗生素范围内可能非连续地得到以不同类型
突变为主的突变谱［26］。低浓度的利福平可能不能有
效杀死细菌，细菌得以在利福平诱导的 ROS 压力下存
活［13］。耐辐射球菌可能在 ROS 压力下采取不同的抵
御突变策略，即在主要产生碱基损伤的 ROS 压力下采
取防止碱基替换突变策略［27 ～ 29］。Mennecier 等提到碱
基替换突变主要在低电离辐射剂量条件下产生［10］。
较低 Rif 浓度没有获得 3bp 插入突变的原因可能在
于，耐辐射球菌在低利福平浓度下主要避免碱基替换
突变。而一旦出现 3bp 插入突变，就可能出现 3bp 的
错配，细菌能及时进行修复，从而避免 3bp 插入突变的
出现。而在高浓度的 Rif 下，细胞主要是避免大片段
的插入突变发生。因此，耐辐射球菌在低利福平浓度
下可能主要避免碱基替换突变(5μg /ml)。
应用 rpoB /Rifr 突变分析系统测定在不同利福平
浓度下耐辐射球菌的突变率和突变谱。结果显示抗生
素的浓度不仅影响突变率，也影响突变谱。抗生素浓
度特异性的突变谱为进一步研究利福平与耐辐射球菌
的 DNA 复制，损伤修复以及重组修复途径的关系打下
了良好的基础。
参考文献:
［1 ］ Mattimore V， Battista J R. Radioresistance of Deinococcus
radiodurans:functions necessary to survive ionizing radiation are also
necessary to survive prolonged desiccation［J］. J Bacteriol，1996，
178(3):633 － 637
［2 ］ White O，Eisen J A，Heidelberg J F，et al. Genome Sequence of the
Radioresistant Bacterium Deinococcus radiodurans R1［J］. Science，
1999，286(5444):1571 － 1577
［3 ］ Tanaka M，Earl A M，Howell H A，et al. Analysis of Deinococcus
radiodurans’s transcriptional response to ionizing radiation and
desiccation reveals novel proteins that contribute to extreme
radioresistance［J］. Genetics，2004，168(1):21 － 33
［4 ］ Kim M，Wolff E，Huang T，et al. Developing a genetic system in
Deinococcus radiodurans for analyzing mutations［J］. Genetics，
2004，166(2):661 － 668
［5 ］ Garibyan L，Huang T，Kim M，et al. Use of the rpoB gene to
determine the specificity of base substitution mutations on the
Escherichia coli chromosome［J］. DNA Repair (Amst)，2003，2
(5):593 － 608
［6 ］ Mennecier S，Coste G，Servant P，et al. Mismatch repair ensures
fidelity of replication and recombination in the radioresistant organism
Deinococcus radiodurans［J］. Molecular Genetics and Genomics，
2004，272(4):460 － 469
［7 ］ Liu X， Wu J， Zhang W， et al. Resistance of Deinococcus
radiodurans to mutagenesis is facilitated by pentose phosphate
pathway in the mutS1 Mutant Background ［ J ］. Current
Microbiology，2008，57(1):66 － 71
［8 ］ Tanaka M， Narumi I， Funayama T， et al. Characterization of
pathways dependent on the uvsE，uvrA1，or uvrA2 gene product for
UV resistance in Deinococcus radiodurans ［ J ］. Journal of
Bacteriology，2005，187(11):3693 － 3697
［9 ］ Hua X，Huang L，Tian B， et al. Involvement of recQ in the
ultraviolet damage repair pathway in Deinococcus radiodurans［J］.
Mutation Research － Fundamental and Molecular Mechanisms of
Mutagenesis，2008，641:48 － 53
［10］ Mennecier S， Servant P， Coste G， et al. Mutagenesis via IS
0711
Journal of Nuclear Agricultural Sciences
2010，24(6):1166 ～ 1171
transposition in Deinococcus radiodurans［J］. Mol Microbiol，2006，
59(1):317 － 325
［11］ Drake J W. A constant rate of spontaneous mutation in DNA-based
microbes［J］. Proc Natl Acad Sci USA，1991，88(16):7160 －
7164
［12］ Hawiger J， Jeljaszewicz J. Antibiotic sensitivity of Micrococcus
radiodurans［J］. Applied and Environmental Microbiology，1967，
15(2):304 － 306
［13］ Kolodkin － Gal I，Sat B，Keshet A，et al. The communication factor
EDF and the toxin-antitoxin module mazEF determine the mode of
action of antibiotics［J］. PLoS Biol，2008，6(12):e319
［14］ Sat B，Hazan R， Fisher T， et al. Programmed cell death in
Escherichia coli:some antibiotics can trigger mazEF lethality［J］.
Journal of Bacteriology，2001，183(6):2041 － 2045
［15］ Wolff E，Kim M，Hu K，et al. Polymerases leave fingerprints:
analysis of the mutational spectrum in Escherichia coli rpoB to assess
the role of polymerase IV in spontaneous mutation［J］. J Bacteriol，
2004，186(9):2900 － 2905
［16］ Miller J H，Funchain P，Clendenin W，et al. Escherichia coli strains
(ndk)lacking nucleoside diphosphate kinase are powerful mutators
for base substitutions and frameshifts in mismatch － repair － deficient
strains［J］. Genetics，2002，162(1):5 － 13
［17］ Davidsen T，Bjoras M，Seeberg E C，et al. Antimutator role of DNA
glycosylase MutY in pathogenic Neisseria species［J］. J Bacteriol，
2005，187(8):2801 － 2809
［18］ Meier P，Wackernagel W. Impact of mutS inactivation on foreign
DNA acquisition by natural transformation in Pseudomonas stutzeri
［J］. J Bacteriol，2005，187(1):143 － 154
［19］ Morlock G P，Plikaytis B B，Crawford J T. Characterization of
spontaneous， In vitro-selected， rifampin － resistant mutants of
Mycobacterium tuberculosis strain H37Rv［J］. Antimicrob Agents
Chemother，2000，44(12):3298 － 3301
［20］ Anthony R M，Schuitema A R，Bergval I L，et al. Acquisition of
rifabutin resistance by a rifampicin resistant mutant of Mycobacterium
tuberculosis involves an unusual spectrum of mutations and elevated
frequency［J］. Ann Clin Microbiol Antimicrob，2005，4:9
［21］ Wang G，Wilson T J，Jiang Q，et al. Spontaneous mutations that
confer antibiotic resistance in Helicobacter pylori［J］. Antimicrob
Agents Chemother，2001，45(3):727 － 733
［22］ Nicholson W L，Maughan H. The spectrum of spontaneous rifampin
resistance mutations in the rpoB gene of Bacillus subtilis 168 spores
differs from that of vegetative cells and resembles that of
Mycobacterium tuberculosis［J］. J Bacteriol，2002，184(17):4936
－ 4940
［23］ Maughan H，Galeano B，Nicholson W L. Novel rpoB mutations
conferring rifampin resistance on Bacillus subtilis:global effects on
growth，competence，sporulation，and germination［J］. J Bacteriol，
2004，186(8):2481 － 2486
［24］ O’Sullivan D M，McHugh T D，Gillespie S H. The effect of
oxidative stress on the mutation rate of Mycobacterium tuberculosis
with impaired catalase / peroxidase function ［J］. J Antimicrob
Chemother，2008，62(4):709 － 712
［25］ O’Neill A，Oliva B，Storey C，et al. RNA polymerase inhibitors
with activity against rifampin-resistant mutants of Staphylococcus
aureus［J］. Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2000:3163 －
3166.
［26］ Martinez J L， Baquero F. mutation frequencies and antibiotic
resistance［J］. Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2000:
1771 － 1777
［27］ Kow Y W，Dare A. Detection of abasic sites and oxidative DNA base
damage using an ELISA-like assay［J］. Methods，2000，22(2):
164 － 169
［28］ Zastawny T H，Kruszewski M，Olinski R. Ionizing radiation and
hydrogen peroxide induced oxidative DNA base damage in two
L5178Y cell lines［J］. Free Radical Biology and Medicine，1998，
24(7 － 8):1250 － 1255
［29］ Das A，Boldogh I，Lee J W，et al. The human Werner syndrome
protein stimulates repair of oxidative DNA base damage by the DNA
glycosylase NEIL1［J］. Journal of Biological Chemistry，2007，282
(36):26591
(责任编辑 王媛媛)
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