全 文 ：植物生理学通讯 第 46卷 第 1期，2010年 1月 6 3
收稿 2009-11-03 修定 　2009-12-23
资助 国家科技部 “国家科技攻关计划引导项目 ”(2005BA741C)。
* 通讯作者(E-mail: gudizhou@163.com; Tel: 0435-3208073)。
三花龙胆嫩叶的离体培养与快速繁殖
顾地周 *, 陆爽, 解艳君
通化师范学院生物系, 吉林通化 134002
In vitro Culture and Rapid Propagation of Young Leaves of Gentiana triflora Pall.
GU Di-Zhou*, LU Shuang, XIE Yan-Jun
Department of Biology, Tonghua Normal College, Tonghua, Jilin 134002, China
1 植物名称 三花龙胆(Gentiana triflora Pall.)。
2 材料类别 新萌发嫩叶。
3 培养条件 基本培养基为MS。(1)嫩叶直接再生
芽苗诱导培养基: 1/2MS+6-BA 2.20 mg·L-1 (单位下
同)+IAA 0.08+3%蔗糖; (2)芽苗继代增殖培养基:
1/2MS+6-BA 2.20+IAA 0.05+3%蔗糖; (3)生根培养
基: 1/4MS+IBA 0.01+1.5%蔗糖。上述各培养基
均加 7.0 g琼脂粉, pH 5.8。培养温度为(26±2) ℃,
光照强度为 22 μmol·m-2·s-1, 光照时间 10 h·d-1。
4 诱导与分化情况
4.1 嫩叶直接再生芽苗的诱导 于6月上旬, 取三花
龙胆新萌发的嫩叶, 在超净工作台上用75%酒精涮
洗 10 s, 再用含 3%次氯酸钠溶液浸泡 5 min, 然后
用无菌水冲洗6次, 无菌滤纸吸干叶片表面的水分
(顾地周等 2008a), 然后将其接种到培养基(1)中进
行叶片直接再生芽苗诱导培养。培养 10 d叶片开
始增厚, 继续培养 24 d, 叶片表面出现颗粒状锥形
凸起, 36 d后颗粒状锥形凸起逐渐伸长为芽苗, 芽
苗诱导率达 98.0%以上。
4.2 芽苗的继代与增殖 将带有芽苗的增厚嫩叶切
割成 0.2~0.3 cm的小块, 转接到培养基(2)中进行
继代增殖培养。27 d为 1个继代增殖周期, 增殖
倍数平均达 70 以上。
4.3 壮苗与生根 将生长健壮的芽苗切下, 然后将其
移入培养基(3)中。培养 18 d, 幼苗的基部长出 2~3
条肉质的不定根; 28 d后, 苗高达 4.0 cm, 根长可达
2.5 cm以上, 有的长出 2条以上肉质的侧根, 生根
率达 98.5%。
4.4 炼苗与移栽 待苗生根后, 从培养瓶中取出试管
苗, 在含有50倍液的杀毒矾溶液中洗去苗上残留的
琼脂(顾地周等 2007), 然后植入经 500倍液多菌灵
过的田园土、腐烂松针和细河砂(3:1:1)混合的基
质中, 用透性好的塑料薄膜覆盖以保湿保温(顾地周
等 2008b), 湿度保持在 80%, 温度控制在(16±2) ℃,
每天自然光照11 h, 每天中午通风换气30 min, 1周
后揭去薄膜, 每天早晚喷洒清水各 1次(顾地周等
2008c)。成活率达 96% 以上。
5 意义与进展 三花龙胆是龙胆科龙胆属多年生草
本植物, 在《吉林省野生动植物保护管理暂行条
例》中定为省级一类重点保护植物, 是长白山区野
生珍稀濒危药用植物。据中华人民共和国药典(一
部)记载, 其干燥根及根茎具有清热燥湿、泻肝胆
火的功效, 主治湿热黄疸、阴肿阴痒、带下、强
中、湿疹瘙痒、目赤等症。另外, 其花冠深蓝色,
通常3~7朵簇生于茎端或叶腋, 可引种开发做鲜切
花和用于花坛的绿化。其在长白山区数量稀少, 分
布区域十分狭窄, 仅零星分布在长白山区海拔
640~1 800 m的草甸、山坡草地、灌木丛中或林
中空地。因其种子成熟度差, 萌发率低, 其常规繁
殖主要靠分蘖方式, 繁殖系数小, 不易操作。本文
结果对其开发和利用可能有一定的参考意义。与
其同属的其它种植物的组培快繁已有报道(顾地周
等 2009), 但三花龙胆的组织培养和快速繁殖的报
道尚未见。
参考文献
顾地周, 丛小力, 姜海智, 张秋菊, 姜云天, 朱俊义(2008a). 牛皮杜
鹃的组织培养与快速繁殖. 植物生理学通讯, 44 (2): 300
顾地周, 丛小力, 姜云天, 何晓燕(2008b). 色木槭的组织培养与
快速繁殖. 植物生理学通讯, 44 (2): 314
顾地周, 丛小力, 宋利丽, 王艳萍, 姜云天(2008c). 木通马兜铃的
组织培养和快速繁殖. 植物生理学通讯, 44 (1): 136
顾地周, 何晓燕, 朱俊义, 孙忠林, 张秋菊(2007). 细叶杜香的组
织培养和快速繁殖. 植物生理学通讯, 43 (5): 898
顾地周, 赵淑玲, 杨静秋(2009). 高山龙胆的离体培养和快速繁
殖. 植物生理学通讯, 45 (6): 586