全 文 ：三花龙胆中龙胆苦苷的超声提取工艺
张大伟 ,田　桦 ,王惠娟
(佳木斯大学附属第一医院 ,黑龙江 佳木斯 154003)
摘要: 目的: 优选提取三花龙胆中龙胆苦苷的最佳工艺。方法:采用正交试验法 ,以龙胆苦苷含量为指标 ,考察了乙醇用
量、提取时间、提取次数及提取温度对三花龙胆中龙胆苦苷提取率的影响 ,优选出合理的提取工艺。结果: 以乙醇浓度为 80% ,
提取时间为 40min,提取温度为 60℃ ,提取功率为 80 k Hz最佳。结论: 经验证性实验证明所选条件可靠 ,适合三花龙胆中龙胆
苦苷的提取。
关键词: 三花龙胆 ;龙胆苦苷 ;超声提取 ;正交试验设计
中图分类号: R284　文献标识码: A　文章编号: 1008- 0104( 2011) 05- 0025- 01
　　三花龙胆为龙胆科植物三花龙胆 ( Gentiana triflo ra
Pall. )的干燥根及根茎。是中国重要的传统中药 ,龙胆味苦、
性寒、入肝胃经、有泻肝火、除下焦湿热的功效 [1]。龙胆苦苷
为环烯醚萜类化合物 ,现代药理学研究表明其具有保肝、利
胆、健胃、抗炎、抗菌等活性 [2～ 4]。本实验采取了正交实验的
方法 ,以龙胆苦苷为指标 ,对三花中龙胆苦苷的提取工艺进
行了实验。
1　实验仪器及材料
1. 1　 仪器
KQ- 250DE型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有
限公司 ) ; KDM型调温电热套 (山东邺城华鲁电热仪器有限
公司 ) ; SHB- III循环水式多用真空泵 (郑州长城科工贸有限
公司 ) ; FA- 2004电子分析天平 (上海恒平科技仪器有限公
司 ) ; FZ102型植物粉粹机 (天津市泰斯特仪器有限公司 ) ;
PH030电热恒温干燥箱中 (上海市崇明实验仪器厂 ) ; 2695型
高效液相色谱仪 (美国安捷伦科技有限公司 )。
1. 2　 材料、试剂
龙胆苦苷对照品 (中国药品生物制品检定所 ) ;三花龙胆
(购于佳木斯市金天大药房 ,经佳木斯大学刘娟教授鉴定为
三花龙胆 ) ;无水乙醇 (分析纯 )天津 ;甲醇 (色谱纯 )天津 ;蒸
馏水。
2　实验方法
2. 1　 三花龙胆药材处理
将三花龙胆药材置于电热恒温干燥箱中 55℃干燥 10h ,
用植物粉碎机粉碎成粉末 ,得到三花龙胆粉末。用电子天平
称量 1. 0g的三花龙胆若干份 ,备用。
2. 2　 样品的提取
三花龙胆的有效成分偏亲水性 ,以乙醇为提取溶剂 ,单
因素考察各个不同的因素对龙胆苦苷提取的影响。分别以乙
醇的浓度、提取的时间、提取的温度、超声仪器的功率为考察
因素 ,设计以下的实验:
2. 2. 1　 乙醇浓度对提取效果的影响
精密称取三花龙胆细粉 5份 ,每份约 1. 0g ( 1. 0262g、
1. 0110g、 1. 0232g、 1. 0190g、 1. 0705g ) ,然后配置五种不同浓
度的乙醇溶液各 20mL ,浓度分别为 20% 、 40% 、 60% 、 80% 、
100% 。将五份样品分别放到五份不同浓度的乙醇溶液里 ,温
度定为 50℃ ,超声功率定为 80kHz,超声时间定为 50min,进行
超声 ,过滤 ,取滤液进行龙胆苦苷含量的测定。结果分别为:
1. 91% 、 2. 47% 、 3. 26% 、 3. 19% 、 3. 21%。
2. 2. 2　 提取的时间对提取效果的影响
精密称取三花龙胆细粉 5份 ,每份约 1. 0g ( 1. 0080g、
1. 0158g、 1. 0118g、 1. 0053g、 1. 0134g ) ,将五份样品都放到浓
度为 60%的乙醇溶液里 ,温度定为 40℃ ,超声功率定为 80
k Hz,超声时间分别为 20min、 30min、 40min、 50min、 60min进
行超声 ,过滤 ,取滤液进行龙胆苦苷含量的测定。结果分别
为: 2. 12% 、 2. 34% 、 3. 10% 、 3. 24% 、 3. 32%。
2. 2. 3　 提取的温度对提取效果的影响
精密称取三花龙胆细粉 5份 ,每份约 1. 0g ( 1. 0603g、
1. 0153g、 1. 0260g、 1. 0324g、 1. 0021g ) ,将五份样品都放到浓
度为 60%的乙醇溶液里 ,提取时间都定为 30min,超声功率定
为 80 k Hz,超声时的提取温度分别为 30℃ , 40℃ , 50℃ , 60℃ ,
70℃。开始超声 ,超声结束后进行过滤 ,取滤液进行龙胆苦苷
含量的测定。结果分别为: 3. 07% 、 3. 15% 、 3. 19% 、 3. 27% 、
3. 24%。
2. 2. 4　 超声仪器功率对提取效果的影响
精密称取三花龙胆细粉 3份 ,每份约 1. 0g ( 1. 0285g ,
1. 0510g , 1. 0104g ) ,将三份样品都放到浓度为 60%的乙醇溶
液里 ,温度定为 40℃ ,超声时间都定为 50min,超声功率分别
为 70k Hz, 80k Hz, 90kHz,开始进行超声 ,之后过滤 ,取滤液进
行龙胆苦苷含量的测定。结果分别为: 3. 20% 、 3. 25% 、
3. 31%。
2. 2. 5　 设计正交试验
总结上述实验考查结果 ,按 4因素 3水平即 L9 ( 34 )设计正
交试验 ,以乙醇浓度 ( A )、提取时间 ( B)、提取温度 ( C)、提取
功率 ( D)为主要因素 ,如图表 1。
表 1　 试验因素与水平
水平
因　　　　 素
A B C D
乙醇浓度 (% ) 提取时间 ( min) 提取温度 (℃ ) 提取功率 ( k Hz)
1 40 40 50 70
2 60 50 60 80
3 80 60 70 90
2. 3　 制备对照品溶液
精密称取龙胆苦苷对照品 1. 5mg放于 10m L容量瓶中 ,
加入适量甲醇使之溶解然后稀释至刻度 ,摇匀 ,既得浓度为
0. 15mg /m L的对照品溶液备用。依次取龙胆苦苷对照品溶
液不同量进样 ,以峰面积定量 ,测得回归方程如下: Y =
59328748. 686x + 44497. 613, R2= 0. 9998。
2. 4　 色谱条件
色谱条件 Symmetry - C18柱 ,柱温: 30℃ ,灵敏度:
20AU FS,流动相:甲醇 - 水 ( 3: 7) ,流速: 1. 0m L /min,测定波
长: 274nm,进样量: 10μL。
2. 5　 制备供试品溶液
精 密称取三花龙胆细粉 9份 ,每份 1. 0g ( 1. 0752g、
1. 0870g、 1. 0553g、 1. 0347g、 1. 0013g、 1. 0262g、 1. 0105g、
1. 0294g、 1. 0135g ) ,按 L9 ( 34 )正交试验表进行试验操作 (如
表 2) ,超声提取 ,过滤 ,然后将滤液在旋转蒸发仪上蒸干 ,干
浸膏用甲醇超声溶解 ,转移到 50m L容量瓶中 ,用甲醇定容 ,
在精密吸取 1m L转移到 25m L容量瓶中用甲醇定容 ,作为供
试品溶液。 (下转第 26页 )
·25·HEILONGJIAN G MEDICINE AND PHARMACY Oct. 2011, Vo l. 34 No. 5　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
大孔吸附树脂纯化紫花地丁中绿原酸类成分的研究
刘　娟 ,罗家函 ,刘德江 ,高　原 ,马珂佳
(佳木斯大学药学院 ,黑龙江 佳木斯 154007)
摘要: 目的: 通过对 8种大孔吸附树脂筛选 ,寻找适用于纯化紫花地丁中绿原酸类成分的大孔吸附树脂 ,为从紫花地丁中
分离纯化绿原酸类有效成分提供依据。方法:采用 8种大孔吸附树脂对紫花地丁提取物进行吸附纯化 ,以总绿原酸纯度作为指
标综合评价。结果: 8种吸附树脂中 ,以 H- 107型大孔树脂的吸附率较高为 74. 71% ,解析率最高为 95. 91% ,以其所纯化的样品
纯度为 38. 61% 。结论: H- 107型大孔吸附树脂综合性能良好 ,适用于紫花地丁中绿原酸类成分的纯化。
关键词: 紫花地丁 ;绿原酸 ;大孔吸附树脂 ;纯化
中图分类号: R284　文献标识码: A　文章编号: 1008- 0104( 2011) 05- 0026- 02
　　紫花地丁 ( Viola y edoensis Makino )为堇菜科堇菜属植
物 ,又名光瓣堇菜、地丁草、独行虎等 ,全草入药 ,味微苦、辛 ,
性寒 ,无毒 ,有清热解毒 ,抗炎消肿的功能 [1]。紫花地丁主要
抗炎成分为其所含的绿原酸和黄酮等 ,绿原酸 [2]异名咖啡鞣
酸 ,是植物在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙
素类物质 ,为众多药材和中成药的抗菌解毒、消炎利胆的主
要有效成分。大孔吸附树脂作为一种新型的吸附剂 ,鉴于其
具有操作简便、可再生、分离纯化效果佳等许优点 ,近年来得
到了广泛的应用 [3]。本实验以紫花地丁中总绿原酸为指标 ,
采用紫外 -可见分光光度法 ,对 8种大孔吸附树脂进行筛选 ,
结果表明 H- 107型大孔树脂对紫花地丁中的绿原酸类成分
选择吸附性好 ,易于解析且纯化效果优良。
1　 仪器与试药
757型紫外 -可见分光光度计 (上海精密科学仪器有限
公司 )。大孔吸附树脂: D- 101(安徽三星树脂有限公司 ) ; S-
8、 AB- 8、 H- 107、 H- 103(南开大学化工厂 ) ; HPD100、
HPD400、 HPD600(河北沧州宝恩吸附材料有限公司 )。
紫花地丁药材产于黑龙江佳木斯 ,经佳木斯大学药学院
生药教研室刘娟教授鉴定 ,符合《中华人民共和国药典》 2010
年版一部标准。绿原酸标准品由天津一方科技有限公司购
得。乙醇为 GR级。
(上接第 25页 )
2. 6　 正交试验及结果
表 2　 正交试验方案及结果
序号 因　　　素
A B C D
龙胆苦苷的含量
(% )
1 1 1 1 1 2. 02
2 1 2 2 2 2. 54
3 1 3 3 3 2. 16
4 2 1 2 3 2. 97
5 2 2 3 1 3. 48
6 2 3 1 2 4. 04
7 3 1 3 2 4. 23
8 3 2 1 3 3. 56
9 3 3 2 1 3. 50
表 3　 极差分析表
项目 因素 A 因素 B 因素 C 因素 D
K1 6. 72 9. 22 9. 62 9. 00
K2 10. 49 9. 58 9. 01 10. 82
K3 11. 29 9. 70 9. 87 9. 69
k1 2. 24 3. 01 3. 21 3. 00
k2 3. 48 3. 19 3. 00 3. 11
k3 3. 76 3. 23 3. 29 3. 23
R 1. 52 0. 22 0. 29 0. 23
3　 讨论
3. 1　 根据文献报道 ,龙胆苦苷在甲醇中有很大的溶解度 ,
但是由于甲醇有很强的黏膜刺激性 ,而且毒性较大 ,所以不
适于用来提取药用有效成分。因此 ,采用乙醇作为提取溶剂 ,
经过试验验证得知 , 80%浓度的乙醇最适合。
3. 2　 三花龙胆的主要成分是龙胆苦苷 ,其含量也是三花龙
胆药材质量的重要研究标准。而且药理研究表明 ,龙胆苦苷
对化学性及免疫性肝损伤具有保护作用 ,采用现代化的提
取 ,纯化手段 ,将其开发为具有保肝作用的二类新药是较为
可行的。
4　 结论
通过考察单因素对三花龙胆中龙胆苦苷的提取率影响
的研究 ,考察到各个因素对龙胆苦苷提取都有影响 ,所以综
合四种因素设计正交试验进行综合考察。考察结果由表 3极
差分析可知 ,乙醇浓度对龙胆苦苷提取率大小的影响最大 ,
提取温度对龙胆苦苷提取率的大小影响次之 ,提取时间与提
取功率对龙胆苦苷提取率的影响最小 ,即各因素的影响大小
顺序为 A> C> D> B;再根据正交试验结果可知 ,采用以
A3B1C3D2水平为佳 ,即乙醇浓度为 80% 、提取时间为 40min、
提取温度为 60℃、提取功率为 80k Hz。经进一步验证 ,与试验
结论相符。
参考文献:
[1 ]国家药典委员会 .中华人民共和国药典:一部 [M ].北京: 化学工
业出版社 , 2005, 64
[2 ]郑虎占 ,董泽宏 ,佘靖 .中药现代研究与应用:第二卷 [M ] .北京:
学苑出版社 , 1997, 1398-1408
[3 ]徐国钧 .中国药材学:上 [M ] .北京:中国医药科技出版社 , 1996,
365
[4 ]陈雷 ,王海波 ,孙晓丽 ,等 .龙胆苦苷镇痛抗炎药理作用研究 [ J ].
天然产物研究与开发 , 2008, 20( 5): 903-906
(收稿日期: 2010- 12- 05)
基金项目: 黑龙江省卫生厅科研项目 ( 2010- 476) ,黑龙江省中医药科学技术研究项目 ( ZHY10- Z112) ,黑龙江省生物药
制剂重点实验室基金项目。
作者简介: 张大伟 ( 1969～ )男 ,山东龙口人 ,学士 ,主管药师。
·26·　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　黑龙江医药科学　 2011年 10月第 34卷第 5期