全 文 ：植物生理学报 Plant Physiology Journal 2012, 48 (5): 485~490 485
收稿 2012-01-07　　修定 2012-03-28
资助 德意志学术交流中心(DAAD)特别项目。
致谢 德国波兹坦大学Bernd Müller-Röber教授对论文给予指导。
* 通讯作者(E-mail: dani@sit.edu.cn; Tel: 021-60873128)。
拟南芥AtGLK-N基因的过量表达对代谢物质积累的影响
倪迪安*
上海应用技术学院生态技术与工程学院, 上海201418
摘要: AtGLK-N (At2g01060)是拟南芥转录因子Golden2-like基因家族的一个成员, 仅存在于植物中。本文通过启动子-GUS
和Northern检测分析了AtGLK-N的表达模式, 结果显示: AtGLK-N在愈伤组织、球形胚、心形胚、鱼雷胚中表达, 在幼叶(真
叶)及侧根分生组织中也有表达。此外, Northern检测结果还表明AtGLK-N可被高盐胁迫所诱导。通过农杆菌介导转化拟南
芥, 得到过表达AtGLK-N的转基因植株, 其表现为矮小。为弄清AtGLK-N的功能, 对过表达AtGLK-N拟南芥进行代谢谱分析,
结果显示: 转基因植物的脯氨酸、棉籽糖和海藻糖以及催化上述代谢产物的蛋白酶的基因表达水平明显比对照植株高。
上述结果表明AtGLK-N表达主要分布在分裂细胞或组织, 并可能与高盐胁迫反应相关。
关键词: AtGLK-N (At2g01060); 转录因子; 细胞分裂; 高盐诱导; 代谢谱; 表达谱
Effect of Arabidopsis AtGLK-N Gene Over-Expressing on Metabolite Accumulation
NI Di-An*
School of Ecological Technology and Engineering, Shanghai Institute of Technology, Shanghai 201418, China
Abstract: AtGLK-N gene (At2g01060) is a member of Arabidopsis Golden2-like family of transcription fac-
tors, which exists in plant only. The expression pattern of AtGLK-N gene was investigated by promoter-GUS
system and tissue Northern analysis. The present results indicated that AtGLK-N gene expressed in leaf-derived
callus, mid-globular-, heart- and torpedo-shaped embryos but not the older or younger ones. It also expressed in
root tip of seedlings, new foliage leaves of seedlings, lateral root tips and meristem during all the stages of
plants, suggesting that it is expressed in dividing cells. Northern analysis of Arabidopsis under stress condition
indicated that AtGLK-N was induced by high salinity stress. Further more, Arabidopsis AtGLK-N over-expres-
sion lines were generated; the transgenic plants are small in size and leaf surface cells are also small compared
to control. Metabolic and expression profilings were performed in leaves of Arabidopsis plants over-expressing
AtGLK-N. The data showed that stress-related metabolites, such as proline, raffinose, trehalose, and the
enzymes which are responsible for synthesis of above-mentioned metabolites, were increased significantly in
transgenic plants over-expressing AtGLK-N compared to control. The above-mentioned data suggested that
AtGLK-N expresses in cell dividing and might be involved in salinity stress response.
Key words: AtGLK-N (At2g01060); transcription factor; cell division; high-salinity stress induction; metabolic
profiling; expression profiling
GLK (Golden2-like)基因家族是植物所特有的
一个转录因子家族, 它有一个高度保守的DNA结
合区域(长达54个氨基酸), PHD计算机预测结果显
示该DNA结合区域以HLH (helix-loop-helix)方式
折叠(Fitter等2002; Riechmann等2000)。由于这个
DNA区域存在于玉米Golden2蛋白(Hall等1998)、
拟南芥响应调节子(Arabidopsis response-regulator
B, ARR-B)蛋白(Hwang和Sheen 2001)和衣藻Psr1
蛋白(Wykoff等1999)上, 因此被命名为GARP区
域。玉米Golden2蛋白在光合细胞, 特别是维管束
鞘细胞发育中起重要作用, 玉米Golden2突变体的
叶绿体明显小于对照(Hall等1998); ARR-B蛋白在
细胞分裂素信号转导中发挥功能; 而Psr1蛋白则被
证明是在磷酸代谢中起调节作用(Wykoff等1999)。
迄今为止共发现39个拟南芥Golden2-like蛋白
(Riechmann等2000), 但仅有为数不多的几个蛋白
功能被阐明, 且涉及不同代谢或发育过程。如At-
Glk1和AtGlk2基因在叶绿体发育中发挥重要作用
植物生理学报486
(Waters等2008; Fitter等2002); 过表达phr1基因促
进拟南芥对磷的吸收(Nilsson等2007), HRS1过量
表达显著增加对低磷引起的初生根生长抑制的敏
感性(Liu等2009); KAN1-4同源蛋白参与器官极性
的调节、黄酮类化合物合成等发育或代谢过程
(Gao等2010; Hawker和Bowman 2004; Kerstetter等
2001); MYBC1在拟南芥冻害或冷害反应中起负调
控作用(Zhai等2010); APL在拟南芥韧皮部分化及
微管组织发育中发挥重要作用(Bonke等2003)。
本文通过AtGLK-N基因表达模式、构建过表
达AtGLK-N转基因拟南芥及其代谢物分析初步研
究该基因的功能, 以期为进一步研究该基因的功
能并探讨其在水稻耐盐分子育种中的应用价值建
立基础。
材料与方法
1 实验材料
实验采用拟南芥[Arabidopsis thaliana (L.)
Heynh.]哥伦比亚生态型野生型(wild-type) Col-0,
采用0.1%氯化汞表面消毒, 在含有MS盐和琼脂的
生长培养基(Valvekens等1988)上生长(22 ℃, 16 h光
照, 光照强度约100 µmol·m-2·s-1) 14 d后, 移栽到营
养基质(李俊华等2004) (营养土、蛭石及素沙按体
积比1:1:1混合)中, 在人工气候室培养(20 ℃, 16 h
光照, 光照强度约100 µmol·m-2·s-1)。
2 试验方法
2.1 高盐胁迫处理
拟南芥幼苗在含有MS盐和琼脂的生长培养
基(Valvekens等1988)上生长14 d (22 ℃, 16 h光照,
光照强度约100 µmol·m-2·s-1), 然后在4 ℃培养2 d后,
将幼苗转移至含有250 mmol·L-1氯化钠的生长培养
基上(22 ℃)进行逆境处理(Taji等2002)。
2.2 AtGLK-N cDNA编码区的PCR克隆
以拟南芥花芽为材料提取总RNA (Ni等2009),
逆转录成cDNA, 并以此为模板, 采用引物Glk-f (5
GTTTAAACATGGAAGCAGACAACGGAGGCC
3)和Glk-r (5 TTAATTAATCAAAGATTATCTCCT-
GAAACC 3)扩增AtGLK-N cDNA编码区域。上述
两个引物分别在扩增的cDNA中引入PmeI限制性
酶切位点(5端)和PacI限制性酶切位点(3端)。扩
增得到的AtGLK-N cDNA通过酶切和连接导入
pUni/V5-His-TOPO载体(Invitrogen), 并进一步构
建含有35S-AtGLK-N和35S-AtGLK-N-GFP的植物
表达载体。
2.3 AtGLK-N启动子的分离及克隆
以拟南芥花芽为材料提取基因组总DNA, 然
后以此为模板扩增长度为1 440 bp的AtGLK-N基因
起始密码子上游DNA片段, 扩增得到的AtGLK-N
启动子通过酶切和连接导入pUni/V5-His-TOPO载
体(Invitrogen), 并进一步导入植物表达载体pGPTV-
KAN, 该载体含有GUS报告基因。
2.4 农杆菌介导的拟南芥转化
上述表达载体通过电击仪导入农杆菌GV3101,
并进一步转化拟南芥(Clough和Bent 1998)。
2.5 GUS活性检测
转基因拟南芥(T1、T2和T3代)和对照(哥伦比
亚生态型野生型)在含有50 mg·mL-1卡那霉素的MS
培养基上筛选培养后, 将根、叶、果荚、幼苗等
材料放入反应缓冲液[100 mmol·L-1磷酸钠缓冲液
(pH 6.8)、0.5 mol·L-1亚铁氰化钾、0.5 mmol·L-1铁
氰化钾、0.1% Triton X-100、0.5 mg·mL-1 5-溴-4-
氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷酸酯(X-Gluc)]中, 于37 ℃
反应1 h, 用FAA (福尔马林-醋酸-酒精)溶液固定
(Jefferson等1987)和透明(Ni等2009, 2001)后观察
是否有GUS活性。
2.6 RNA提取和Northern检测
以过表达AtGLK-N的转基因拟南芥及对照植
株花芽和叶片等为材料提取总RNA (Ni等2009),
通过甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分离RNA, 并转移
至尼龙膜上。以引物GLK special f (5 AATATC-
GACTTGCAAAGTATCTTCCAGATT 3)和GLK
special r (5 AGGGTTCGCCGAGTACTCCACT-
GAGTCGTT 3)扩增AtGLK-N基因片段, 分离纯化
后用32P标记, 用作Nouthern杂交的探针。
2.7 基于气相色谱-质谱(GC-MS)的代谢谱分析
以四周龄过表达AtGLK-N的转基因拟南芥及
对照植株叶片为材料, 进行GC-MS (MD800; Ther-
moQuest)。称取约300 mg鲜重的植物样品后, 液
氮冷冻研磨成粉状后装入2 mL离心管, 并准备3个
空的2 mL离心管作为空白对照, 每管加入300 µL
100%甲醇, 60 µg正十九酸甲酯作为非极性相内参,
6 µg核醣醇作为极性相内参, 30 µg氘标记丙氨酸
倪迪安等: 拟南芥AtGLK-N基因的过量表达对代谢物质积累的影响 487
作为内标。在70 ℃条件下振荡反应15 min后, 加
入200 µL氯仿, 在37 ℃条件下振荡反应15 min。然
后加入400 µL水, 充分振荡并离心(20 817×g) 5 min,
上清液转移至2个1.5 mL离心管中, 每管取80 µL,
真空干燥过夜。
一份干燥的极性相样品冲氩气后于-80 ℃保
存备份, 另一份干燥极性相样品通过如下步骤衍
生化: 加入40 µL的20 mg·mL-1盐酸甲氧胺溶液(溶
于吡啶, 新鲜配制), 30 ℃条件下振荡反应1.5 h, 然
后在极性相中加入10 µL烷烃混合物和70 µL N-甲
基-N(三甲硅烷基)三氟乙酰胺(MSTFA), 在37 ℃条
件下振荡反应30 min。取100 µL样品加入样品瓶
进行GC-MS检测。
结果与讨论
1 AtGLK-N基因启动子和编码区序列的克隆及表
达质粒的构建
为了研究AtGLK-N基因的表达模式, 实验采用
引物AtGLK-p-f (5 GTCGACCTGGAAGAACCA-
GACGGACAGAG 3)和AtGLK-p-r (5 TCAGA-
CAGGGCTAAGATATAAACACGATA 3)扩增了At-
GLK-N启动子区域, 并在上述两个引物中分别引入
SalI (5端)和XbaI (3端)位点, 通过SalI/XbaI酶切导
入含有GUS基因的表达载体pGPTV-KAN, 构建了
含有AtGLK-N启动子区域和GUS基因的表达载体,
通过农杆菌感染的方法转化拟南芥。选择10个独
立转基因株系, 检测GUS活性, 结果表明: GUS基因
的表达主要分布在胚胎发育的球形胚到鱼雷胚阶
段(图1-A~D)、新生真叶(图1-E)、侧根原基(图
1-F), 在叶片生长过程中逐渐集中在叶基部。此外,
GUS基因在愈伤组织、根顶端分生组织中也有较
高的表达(未发表数据)。为了验证GUS基因的表
达是否真实反映AtGLK-N基因的表达模式, 又进行
了Northern检测。结果表明, AtGLK-N基因在新生
真叶和愈伤组织中表达水平较高, 但在十天龄幼苗
子叶和成熟莲座叶表达较弱(图2), 说明AtGLK-N基
因表达模式与启动子-报告基因的表达模式完全一
致。上述结果表明AtGLK-N基因可能主要在分裂
细胞中表达, 而且AtGLK-N基因在拟南芥第一片真
叶的表达模式与拟南芥第一片真叶的细胞分裂状
态非常相似(Lijsebettens和Clarke 1998)。
为进一步研究AtGLK-N基因的功能, 实验采
用RT-PCR方法, 克隆得到AtGLK-N基因片段, 序列
测定结果表明其序列与拟南芥数据库中的完全一
致。上述克隆得到的AtGLK-N基因片段与35S启动
子相连并导入植物表达载体, 转化拟南芥后共得
到68个独立转基因株系。对T2代转基因植株进行
表型观察, 发现其中有20个独立株系有明显矮小
的表型(图3-A), 叶片细胞也相应变小(未发表数
据), 所有转基因植株能正常开花结果, 但种子量有
所减少。Northern检测结果显示, 有矮小表型的T1
代转基因植株, AtGLK-N基因表达水平明显高于对
照(图3-B); 并且在T2代转基因株系得到验证(图
3-C)。上述结果表明转基因拟南芥植株矮小的表
型是过量表达AtGLK-N基因所引起的, 但AtGLK-N
基因是否或如何在细胞分裂中起作用还有待于进
一步研究。
2 AtGLK-N基因的表达特征及定位
研究表明, AtGLK-N基因为拟南芥Golden2-like
基因家族的一员, 该家族共有39个基因成员, 均含
图1 转AtGLK-N-Pro-GUS拟南芥株系的GUS活性检测
Fig.1 GUS detection of transgenic Arabidopsis
expressing AtGLK-N-Pro-GUS
A: 球形胚; B和C: 心形胚; D: 鱼雷胚; E: 新生真叶; F: 侧根原
基。蓝色显示为GUS活性。
图2 Northern杂交检测AtGLK-N基因在不同组器官的表达
Fig.2 Detection of AtGLK-N gene expression in
different organs by Northern blot
植物生理学报488
有一个高度保守的DNA结合区域, 且AtGLK-N基
因与在叶绿体发育中起重要作用的AtGlk2基因
(Fitter等2002)有86%的相似性。目前为止已经阐
明功能的Golden2-like基因家族成员均为转录因
子, 序列预测结果显示, AtGLK-N基因具有转录因
子的特征, 因此实验采用GFP融合蛋白及洋葱瞬间
表达的方法研究了AtGLK-N基因的亚细胞定位
(Stacey等1999), 结果表明AtGLK-N基因编码蛋白
定位在细胞核(图4), 符合AtGLK-N基因是转录因
子的特征。
3 过表达AtGLK-N基因拟南芥的代谢谱分析
代谢谱不仅可提供转基因植物生理学改变的
信息, 而且还是研究植物生物化学表型的有效工
具(Meyer等2007; Roessner等2001a, b)。实验采用
GC-MS连用的方法检测过表达AtGLK-N基因的转
基因拟南芥的代谢产物组成(代谢谱), 结果显示,
AtGLK-N基因过表达株系的代谢物组成与对照相
比有较大改变, 在可检出的拟南芥叶片的500个代
谢物中, 转基因株系中有146个代谢产物比对照高
2倍以上, 其中64个是已知化学结构的代谢产物(资
料未列出)。由表1可见, 转基因植株中海藻糖含量
是对照平均的2.3倍, 棉籽糖含量是对照的26.4倍,
脯氨酸含量是对照的6.7倍, 色氨酸和蔗糖含量也
明显比对照高。
代谢谱最初是指对某一类型代谢产物进行定
量分析 , 主要将气相色谱(GC)、高效液相色谱
(HPLC)、质谱(MS)、核磁共振(NMR)等分析技术
联合使用。随着分析技术的发展, 使同时且无偏
差地分析同一样品中成千上万种代谢产物, 从而
实现对代谢产物的全面、高通量分析成为可能。
尽管代谢谱技术已在表型鉴定、代谢调控、基因
组学等方面显示了具大的应用潜力, 但其并不是
独立存在的, 在复杂的调控网络中, 只有将其与表
达谱等数据相互印证及有机整合并进行不同层次
的分析, 才能充分发挥其强大的功能(舒小丽等
2011)。代谢组学研究的是植株小分子化合物、基
因表达的最终产物, 基因表达水平与代谢产物之
间有时可能不完全一致。本文以四周龄过表达At-
GLK-N的转基因拟南芥以及对照植株成熟叶片为
材料, 进行了代谢谱(GC-MS)与表达谱(未发表数
图3 T1和T2代转基因拟南芥植株中AtGLK-N基因表达的检测
Fig.3 Detection of AtGLK-N gene expression in transgenic Arabidopsis (T1 and T2) plants
A: 过表达AtGLK-N基因的转基因植株(左)和哥伦比亚生态型野生型对照植株(右); B和C: 以32P标记的GLK-N探针, 对转基因T1代抗生
素阳性植株(B)和T2代过表达AtGLK-N基因的转基因植株(C)进行Northern检测。T1代转基因株系3、6、8、12、25、26有表型, 而1、22无
表型。
图4 AtGLK-N-GFP融合蛋白定位在细胞核
Fig.4 AtGLK-N-GFP fusion protein was localized in nucleus
采用GFP融合蛋白及洋葱瞬间表达的方法, 进行AtGLK-N基
因编码蛋白亚细胞定位。
倪迪安等: 拟南芥AtGLK-N基因的过量表达对代谢物质积累的影响 489
据)初步比较, 结果显示总体趋势是一致的。如表1
所示, 过表达AtGLK-N基因株系的海藻糖含量是对
照的2.3倍, 与此相应的是, 基因芯片分析结果显示
At2g18700编码的合成海藻糖的海藻糖-6-磷酸合
成酶基因(Jang等2003)为对照的21.8倍; 过表达At-
GLK-N基因株系中棉籽糖含量是对照的26.4倍,
DNA芯片中At3g57520和At5g20250编码的棉籽糖
合成酶(可催化合成棉籽糖)基因表达水平分别为
对照的23.3和21.4倍。
上述结果暗示AtGLK-N基因可能与逆境反应
相关。采用冷、干旱、高盐、ABA处理拟南芥材
料后检测AtGLK-N基因的表达水平, 结果显示该基
因可为高盐胁迫所诱导(图5), 而其他逆境处理与
对照的差异不明显(未发表数据)。
(2003). APL regulates vascular tissue identity in Arabidopsis.
Nature, 426: 181~186
Clough SJ, Bent AF (1998). Floral dip: a simplified method for
Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thali-
ana. Plant J, 16: 735~743
Fitter DW, Martin DJ, Copley MJ, Scotland RW, Langdale JA (2002).
GLK gene pairs regulate chloroplast development in diverse
plant species. Plant J, 31: 713~727
Gao P, Li X, Cui D, Wu L, Parkin I, Gruber MY (2010). A new domi-
nant Arabidopsis transparent testa mutant, sk21-D, and modula-
tion of seed flavonoid biosynthesis by KAN4. Plant Biotechnol J,
8: 979~993
Hall LN, Rossini L, Cribb L, Langdale JA (1998). GOLDEN 2: a
novel transcriptional regulator of cellular differentiation in the
maize leaf. Plant Cell, 10: 925~936
Hawker NP, Bowman JL (2004). Roles for Class III HD-Zip and KA-
NADI genes in Arabidopsis root development. Plant Physiol,
135: 2261~2270
Hwang I, Sheen J (2001). Two-component circuitry in Arabidopsis
cytokinin signal transduction. Nature, 413: 383~389
Jang IC, Oh SJ, Seo JS, Choi WB, Song SI, Kim CH, Kim YS, Seo
HS, Choi YD, Nahm BH et al (2003). Expression of a bifunc-
tional fusion of the Escherichia coli genes for trehalose-6-
phosphate synthase and trehalose-6-phosphate phosphatase in
transgenic rice plants increases trehalose accumulation and abi-
otic stress tolerance without stunting growth. Plant Physiol, 131:
516~524
Jefferson RA, Kavanagh TA, Bevan MW (1987). GUS fusions:
β-glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusion marker
in higher plants. EMBO J, 6: 3901~3907
Kerstetter RA, Bollman K, Taylor RA, Bomblies K, Poethig RS (2001).
KANADI regulates organ polarity in Arabidopsis. Nature, 411:
706~709
Lijsebettens MV, Clarke J (1998). Leaf development in Arabidopsis.
Plant Physiol Biochem, 36: 47~60
Liu H, Yang H, Wu C, Feng J, Liu X, Qin H, Wang D (2009). Overex-
pressing HRS1 confers hypersensitivity to low phosphate-elicited
inhibition of primary root growth in Arabidopsis thaliana. J In-
表1 过表达AtGLK-N的转基因拟南芥代谢谱与表达谱的初步比较
Table 1 Comparison between metabolic and expression profilings of transgenic Arabidopsis over-expressing AtGLK-N gene
基因编号 注解 芯片数据分析* 代谢产物 代谢产物数据分析**
At2g18700 海藻糖-6-磷酸合成酶 1.8 海藻糖 2.3
At3g57520 棉籽糖合成酶 3.3 棉籽糖 26.4
At5g20250 棉籽糖合成酶 1.4 棉籽糖 26.4
At5g64380 果糖-二磷酸酶 -2.0 6-磷酸-果糖 1.9
At3g54050 果糖-二磷酸酶前体蛋白 -2.0 6-磷酸-果糖 1.9
At5g64380 果糖-二磷酸酶前体蛋白 -2.0 6-磷酸-果糖 1.9
At5g14800 二氢吡咯-5-羧基还原酶 1.3 脯氨酸 6.7
At5g38530 色氨酸合成酶β链 2.0 色氨酸 11.8
At4g10120 蔗糖磷酸合成酶样蛋白 -2.0 蔗糖 3.8
　　*数据为转基因株系与对照表达量比值的2的次方; **数据为转基因株系与对照的代谢产物含量的比值。
参考文献
李俊华, 张艳春, 徐云远, 种康, 王辉(2004). 拟南芥室内培养技术.
植物学通报, 21: 201~204
舒小丽, 张琳琳, 吴殿星(2011). 代谢谱技术及其在水稻研究中的应
用. 核农学报, 25: 270~275
Bonke M, Thitamadee S, Mahonen AP, Hauser MT, Helariutta Y
图5 AtGLK-N基因表达可被高盐胁迫所诱导
Fig.5 AtGLK-N gene is induced by high-salinity stress
将拟南芥野生型幼苗用250 mmol·L-1氯化钠分别处理0.5、
3、24 h后, 提取总RNA, 以32P标记的GLK-N为探针, 进行Northern
检测。
植物生理学报490
tegr Plant Biol, 51: 382~392
Meyer RC, Steinfath M, Lisec J, Becher M, Witucka-Wall H, Torjek
O, Fiehn O, Eckardt A, Willmitzer L, Selbig J et al (2007). The
metabolic signature related to high plant growth rate in Arabi-
dopsis thaliana. Proc Natl Acad Sci USA, 104: 4759~4764
Ni DA, Sozzani R, Blanchet S, Domenichini S, Reuzeau C, Cella R,
Bergounioux C, Raynaud C (2009). The Arabidopsis MCM2
gene is essential to embryo development and its over-expression
alters root meristem function. New Phytol, 184: 311~322
Ni DA, Wang LJ, Ding CH, Xu ZH (2001). Auxin distribution and
transport during embryogenesis and seed germination of Arabi-
dopsis. Cell Res, 11: 273~278
Nilsson L, Muller R, Nielsen TH (2007). Increased expression of
the MYB-related transcription factor, PHR1, leads to enhanced
phosphate uptake in Arabidopsis thaliana. Plant Cell Environ,
30: 1499~1512
Riechmann JL, Heard J, Martin G, Reuber L, Jiang CZ, Keddie J,
Adam L, Pineda O, Ratcliffe OJ, Samaha RR et al (2000). Arabi-
dopsis transcription factors: genome-wide comparative analysis
among eukaryotes. Science, 290: 2105~2110
Roessner U, Luedemann A, Brust D, Fiehn O, Linke T, Willmitzer L,
Fernie AR (2001a). Metabolic profiling allows comprehensive
phenotyping of genetically or environmentally modified plant
systems. Plant Cell, 13: 11~29
Roessner U, Willmitzer L, Fernie AR (2001b). High-resolution meta-
bolic phenotyping of genetically and environmentally diverse
potato tuber systems. Identification of phenocopies. Plant Physi-
ol, 127: 749~764
Stacey MG, Hicks SN, von Arnim AG (1999). Discrete domains me-
diate the light-responsive nuclear and cytoplasmic localization of
Arabidopsis COP1. Plant Cell, 11: 349~364
Taji T, Ohsumi C, Iuchi S, Seki M, Kasuga M, Kobayashi M,
Yamaguchi-Shinozaki K, Shinozaki K (2002). Important roles
of drought- and cold-inducible genes for galactinol synthase in
stress tolerance in Arabidopsis thaliana. Plant J, 29: 417~426
Valvekens D, Van Montagu M, Van Lijisebettens M (1988). Agrobac-
terium tumefaciens-mediated transformation of Arabidopsis
thaliana root explants by using kanamycin selection. Proc Natl
Acad Sci USA, 85: 5536 ~5540
Waters MT, Moylan EC, Langdale JA (2008). GLK transcription fac-
tors regulate chloroplast development in a cell-autonomous man-
ner. Plant J, 56: 432~444
Wykoff DD, Grossman AR, Weeks DP, Usuda H, Shimogawara K
(1999). Psr1, a nuclear localized protein that regulates phospho-
rus metabolism in Chlamydomonas. Proc Natl Acad Sci USA,
96: 15336~15341
Zhai H, Bai X, Zhu Y, Li Y, Cai H, Ji W, Ji Z, Liu X, Liu X, Li J (2010).
A single-repeat R3-MYB transcription factor MYBC1 negatively
regulates freezing tolerance in Arabidopsis. Biochem Biophys
Res Commun, 394: 1018~1023