全 文 ：植物生理学通讯 第41卷 第6期，2005年12月 789
小金海棠叶片的组织培养与快速繁殖
王忆 许雪峰 李天忠 韩振海*
中国农业大学园艺植物研究所，北京 100094
Tissue Culture and Rapid Propagation of Leaves of Malus xiaojinensis Cheng
et. Jiang
WANG Yi, XU Xue-Feng, LI Tian-Zhong, HAN Zhen-Hai*
Institute for Horticultural Plants, China Agricultural University, Beijing 100094, China
收稿 2004-12-28 修定 　 2005-06-28
资助　 国家转基因植物研究与产业化开发专项(JY04-B-02)。
*通讯作者(E-mail: hanzhh@cau.edu.cn，Tel: 010-62731118)。
1 植物名称 苹果(砧木)小金海棠(Malus xiaojinensis
Cheng et. Jiang)。
2 材料类别 组培苗。
3 培养条件 以MS 为基本培养基。(1)起始和增殖
培养基：MS+6-BA 0.2 mg·L-1(单位下同)+IAA
0.5+3%蔗糖+6.5 g·L-1琼脂；(2)生长培养基：MS+
6-BA 0.6+NAA 0.2+GA3 0.3+3% 蔗糖 +7 g·L-1 琼
脂；(3)再生培养基：MS+6-BA 1.0+NAA 1.0+TDZ
4.0+3% 蔗糖 +7 g·L-1 琼脂；(4)生根培养基：1/2
MS+IAA 1.0+3%蔗糖 +6 g·L-1 琼脂。培养基pH调
整至 5.8，121℃、0.11 MPa 灭菌 20 min。培养
温度为(25±2)℃，光照时间 14 h·d-1，光强为
40 mmol·m-2·s-1。
4 生长与分化情况
4.1 材料的准备 直接取实验室小金海棠无菌组培
苗，将其剪成带 1~2 片叶的茎段，接种至起始培
养基中，生长约 20 d。选取长势良好、植株粗
壮的组培苗，接种至增殖培养基中，培养30 d左
右。每个植株的腋芽可萌发长成 3~6 个 4~5 cm
高、具 3~4 片叶的侧茎。将侧茎接种至生长培养
基中约30 d后，其叶片可作为再生培养材料。按
照这种方法可大量繁殖组培苗，每30 d增殖系数
达 6.8 以上。
4.2 叶片再生 无菌条件下，将生长培养基中植株
顶部 2~4 叶位已展开的幼嫩叶片剪下，手术刀垂
直主脉进行横切，切断主脉，造成伤口，但不
穿透叶缘。叶片均匀放置于再生培养基上，9 cm
的培养皿中约放置10片，远轴面接触培养基。培
养皿边缘缝隙使用封口膜缠绕，(25±2)℃黑暗培养
14~16 d后，转入光培养。每28 d更换新鲜再生
培养基，50 d左右可见有再生植株产生。叶片再
生频率可达62%，叶片平均再生芽数达2.64。
4.3 再生植株生根及炼苗 将再生植株转移至起始
培养基中培养45~50 d，待主茎达5~8 cm高、具
6~8片叶后接种至生根培养基。温度(22±2)℃，光
照时间12 h·d-1，经 25~30 d，每棵再生植株可产
生2~6 条 2~5 cm 长的不定根，生根率达 88.4%。
闭盖培养炼苗10 d 后，开盖炼苗3~4 d，避免强
光照射，可加入 0.5 cm 深自来水防污、保湿。
4.4 移栽 在温室中对再生苗进行移栽。将其移至
半营养液中，盆上覆盖塑料膜保湿，14 d后换为
全营养液培养，成活率可达 9 0 % 以上。或以营
养土(蛭石与腐殖土 1∶1 混和)为基质，0 . 3 %
KMnO4 浸渍 3~4 h，0.11 MPa 灭菌 20 min，移
栽容器为塑料钵。移栽前基质水浸渍12 h，移栽
后覆塑料膜保湿 80% 以上，7 d 后逐渐通风至完
全揭膜，每隔2 d 喷洒营养液，成活率可达85%。
5 意义与进展 小金海棠为具极强的抗缺铁黄叶病
能力的苹果砧木，耐盐、耐旱、耐涝、耐寒和
耐热能力也均属最强的种之一，产于物种分化活
跃的四川岷江—大渡河一带，是极为重要的种质
资源。小金海棠叶片再生植株的组织培养与快繁
技术至今未见报道。本文用组培技术得到的小金
海棠组培苗进行繁殖再生，不仅种苗整齐、一
致，而且叶片再生效率高，再生植株质量好，建
立了两步成苗、一步生根、一次移栽的组培再生
快繁体系。