全 文 ：植物生理学通讯 第 40 卷 第 3期，2004 年 6 月 331
收稿 2003-04-22 修定 　 2003-08-25
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濒危品种软籽石榴的组织培养和快速繁殖
闫志佩*
枣庄师范高等专科学校生物系，枣庄 277160
Tissue Culture and Rapid Propagation of Punica granatum
YAN Zhi-Pei *
Department of Biology, Zaozhuang Teachers’ College, Zaozhuang 277160
1 植物名称 石榴(Punica granatum)。
2 材料类别 新梢茎尖。
3 培养条件 (1)芽诱导培养基：MS+6-BA 1.5 mg.
L-1(单位下同)+IBA 0.2+NAA 0.1；(2)芽增殖培养
基：MS+6-BA 2.0+IBA 0.5；(3)生根培养基：
1/2MS+NAA 0.1。培养基(1)、(2)加蔗糖30 g.L-1，
培养基(3)加蔗糖15 g.L-1；(1)、(2)、(3)均加琼脂
0.7 g.L-1；pH 5.8。培养温度为(28±1)℃，光照
度为2 000~3 000 lx，光照时间12~14 h.d-1。
4 生长与分化情况
4.1 无菌外植体的获得 初始材料取自山东省枣庄
市峄城万亩石榴园中的软籽石榴植株。将新萌枝
条用自来水冲洗 5~10 min，切取茎尖1.0 cm 左
右，摘除多余枝叶，先用70% 乙醇浸泡30 s，然
后再用0.1% HgCl2 消毒 10~15 min，在无菌室内
用无菌水漂洗材料 4~5 次后，置无菌水中待用。
4.2 接种和芽的诱导培养 在无菌条件下，将处理
好的无菌外植体材料于超净工作台上，在实体显
微镜下剥除茎尖幼叶，切取茎尖生长锥 1~3 mm，
接种于装有芽诱导培养基(1)的试管中培养。培养
条件：温度 25℃，先暗培养 72 h 后，再转为
光照培养，光强 1 000 lx，光照时间 12 h.d-1。
10~15 d后，外植体周边有愈伤组织形成并不断增
大、变绿；15~20 d，有丛生芽体分化。30 d
后可将芽体分离，进行转管继代培养。
4.3 芽体的增殖培养 在超净工作台上将芽体愈伤
组织块取出，用无菌水冲净愈伤组织块上残留的
培养基，用无菌解剖刀将带有芽体的愈伤组织块
切成几个小块，再接种到装有增殖培养基(2)的三
角瓶中。在与芽体诱导相同的培养条件下增殖培
养，10~15 d 芽体即可长大变绿；20~30 d 后，
芽体逐渐长大，形成小枝条。通过增殖培养可获
得大量芽体材料，用于诱导生根培养。
4.4 生根培养 待无根小枝条长至长2~3 cm时，
在无菌条件下，将幼枝条取出，切取无根枝条长
约 1 cm，接种到生根培养基(3)中培养。培养条
件：温度为(28±1)℃，光照度为2 000~3 000 lx，
光照时间为12~14 h.d-1。约7~10 d即有数条白色
幼根生出，15~20 d 幼根可生长3~5 cm。待试管
苗长至高 4~6 cm，可将试管苗在无菌条件下取
出，截成长约1 cm枝条后接种到生根培养基(3)中
扩大生根苗培养；也可转入炼苗移栽。
4.5 炼苗和移栽 将培养生根试管苗的三角瓶口打
开，在培养室内炼苗 3~5 d，让试管苗逐渐适
应外界环境。移栽时，将试管苗小心地取出，
用自来水洗净培养基后，用 5% 高锰酸钾浸泡 1
m i n，迅速植入蛭石土移植袋中，先在培养室
或大棚内炼苗 10~15 d。炼苗期间保持温度 25~
　28℃，湿度 80%~85%，光强 3 000 lx，光照
12~14 h.d-1，每 2 d用 2% MS大量元素营养液喷
洒 1 次。待移栽苗健壮成活后，移入大田或大棚
栽培，成活率可达 9 0 % 以上。
5 意义与进展 石榴是石榴科石榴属落叶小乔木，
是我国北方地区的重要果树之一。山东省枣庄市
峄城万亩石榴园有栽培石榴的悠久历史。人们在
长期栽培石榴的过程中，选育出了许多优良品
种，如软籽石榴、大红袍等都是比较珍贵的稀有
品种，特别是软籽石榴以其果实硕大、汁液甘
甜、籽多仁软(石细胞少)而著名，在清代道光年
间当地官吏曾将软籽石榴作为贡品进奉朝廷。但
是，目前软籽石榴植株数量极少，在峄城万亩石
榴园中仅有几株，濒临绝迹。本文采用组织培养
技术，以软籽石榴新梢茎尖为材料快速繁殖获得
大量无毒试管苗，对挽救软籽石榴这一珍贵濒危
品种有重要意义。采用本文方法已获得大量软籽
石榴试管苗，并移入大田栽培成活。