全 文 ：第24 卷　第 4期　　　　　　　　　　　　　植　　　物　　　研　　　究 2004 年　10月
Vol.24　No.4　　　　　　　　　　　　BULLETIN OF BOTANICAL RESEARCH Oct., 　2004
第一作者简介:李庆勇(1973—) ,女,博士研究生 ,从事植物学研究。
＊　通讯作者　E-mail:zygorl@public.hr.hl.cn
收稿日期:2004-01-07
高效液相色谱法测定刺五加超临界提取物中异嗪皮啶的含量
李庆勇　祖元刚＊　付玉杰　郑春英　赵春建
(东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室 ,哈尔滨　150040)
摘　要　用高效液相色谱法在线检测刺五加超临界提取物中异嗪皮啶的含量 ,采用 ODS 色谱柱 ,检
测波长为345 nm ,流动相为乙腈/超纯水(v/v)=2/8 ,异嗪皮啶加样回收率100.8%,RSD为2.0%,该方
法简便 ,结果准确可靠。
关键词　刺五加;异嗪皮啶;高效液相色谱法
Determination of isofraxidin in the extract by supercritical CO2 from
Acanthopanax senticosus by HPLC
LI Qing-Yong　ZU Yuan-Gang＊　FU Yu-Jie　ZHENG Chun-Ying　ZHAO Chun-Jian
(Key Laboratory of Forest Plant Ecology , Ministry of Education , Northeast Forestry University , Harbin　150040)
Abstract　Established HPLC determination method of isofraxidin from Acanthopanax senticosus by supercritical
CO2 , Method:ODS column was used;The detection wave length was at 345 nm;Mobile phase was acetoni-
trile/ultrapure water(v/v)=2/8;The recovery of the added sample was 100.8% and RSD was 2.0%.This
method is simple and the result is reliable.
Key words　Acanthopanax senticosus;isofraxidin;HPLC
五加科植物刺五加(Acanthopanax senticosus
(Rupr.&Maxin.)Harms.)商品名为五加参 ,是我国东
北地区典型的药用植物 ,味辛 、微苦 、性温 、无毒 ,主
要分布在我国黑龙江 、吉林 、辽宁 、河北等地[ 1] 。刺
五加具有强身健体及预防肿瘤作用 [ 2 ,3]。异嗪皮啶是
刺五加的主要活性成分之一 ,有明显的镇静安神作
用 ,心血管作用及抗肿瘤作用也很明显[ 4 ,5] ,异嗪皮
啶的含量是制定刺五加类药物标准的重要指标[ 6] ,
高效液相色谱法是测定有效成分含量的重要手
段[ 7 ,8] ,本文利用高效液相色谱法来在线检测刺五加
的超临界萃取物中异嗪皮啶的含量 ,为刺五加类相
关产品的生产加工过程提供了简便 、准确的在线质
量检测方法 。
1　仪器与材料
超临界CO2萃取装置产自江苏南通华安超临界
萃取有限公司 , AB104型电子天平 , JASCO高效液相
色谱仪 ,进口 ODS 色谱柱(4.6mm×25 cm),乙腈为
色谱纯 ,其它试剂为分析纯 ,异嗪皮啶标准品(≥
99.5%)购自日本和光纯药工业株式会社 ,原料刺五
加产于黑龙江省张广才岭地区。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm ,5μm);检测波
长为345 nm ,流动相为乙腈/超纯水(v/v)=2/8 ,流速
为1 mL/min ,进样量为10μL。
2.2　标准曲线的建立
精密称取异嗪皮定标准品2.1 mg ,置于10 mL容
量瓶 ,流动相定容 ,摇匀备用 ,分别配制不同浓度梯
度的标准液 ,按照上述条件进行测试 ,重复三次 ,标
准品谱图见图1 ,取峰面积平均值 ,用 Excel做峰
图 1　异嗪皮啶标准品色谱图
Fig.1　The chromatogram of isofraxidin standard
图 2　试样色谱图
Fig.2　The chromatogram of sample
面积(Y)与异嗪皮啶浓度(X , mg/mL)的线性回归方
程为:Y =39 470 393.6X +23 540.3 , R =0.999 9 ,表
明异嗪皮啶浓度在0.021 mg/mL ～ 0.21 mg/mL之间
与峰面积呈良好的线性。
2.3　超临界CO2 —夹带剂萃取异嗪皮啶的方法
称取刺五加根茎粉(40 ～ 60目)200 g ,用50%乙
醇溶液200 mL作为夹带剂预浸过夜 ,装入萃取罐进
行萃取 ,萃取压力/温度25MPa/50℃,分离压力/温
度5.5MPa/50℃,CO2流量15㎏/h ,收集分离罐析出
的萃取物 ,量取一定体积萃取物的混悬液 ,用流动相
充分溶解 ,用上述色谱条件进行测定 ,样品色谱图见
图2 ,用面积归一法计算萃取液中异嗪皮啶的含量 ,
量取萃取液的体积 ,算出萃取液中异嗪皮啶的总量 ,
进而算出萃取率 ,结果见表 1。
表 1　在 5次超临界萃取产物中异嗪皮定总萃取率
的 HPLC 检测结果
Table 1　Result of determination of total Isofraxidin in
preparation(n=5)
制备品
Preparation
提取率
Extraction rate(%)
相对标准偏差
RSD(%)
1 0.054 1 2.09
2 0.053 0 1.89
3 0.052 8 2.01
4 0.053 5 1.96
5 0.054 6 2.08
2.4　精密度和稳定性试验
对同一浓度的样品和对照品 ,连续进样 5次 ,以
异嗪皮啶的峰面积计算 ,精密度分别为0.6%和
0.4%。每隔2 h进样 ,峰面积基本不变 ,常温下样品
在48 h内稳定。
2.5　重复性试验
称取刺五加粉末约200 g ,精确称量 5份 ,按样品
测定项下方法萃取 、测定 。测得总异嗪皮啶的平均
萃取率为0.5381‰,RSD为1.9%(n=5)。
2.6　回收率试验
称取已知含量的刺五加细粉约200 g ,精确称量
后 ,精确添加异嗪皮啶对照品40μg ,按样品测定项
下方法萃取 、测定 。平均回收率100.8%, RSD =
2.0%(n=5)。
3　讨论
从图 2超临界样品的色谱图看到 ,保留时间在
10.733的色谱峰是异嗪皮啶 ,样品中异嗪皮啶的相对
峰面积可达到60%以上 ,可见超临界方法实现了对刺
五加中异嗪皮啶的选择性萃取 ,该方法具有产物中异
嗪皮啶得率高 、纯度高 ,工艺稳定 ,重现性好的特点。
本文所采用的高效液相色谱条件与文献 6的不同 ,在
保证好的分离效果前提下 ,本文适当调整流动相 ,缩
短了异嗪皮啶保留时间 ,实现了准确 、快捷的在线检
测刺五加超临界提取物中异嗪皮啶的含量。
参　考　文　献
1.周以良主编.黑龙江树木志.哈尔滨:黑龙江科学技术出
版社, 1986
2.Azizov A P.Efects of eleutherococcus , elton , leuzea , and leveton
on the bloodcoagul-ation system during training in athletes.Eksp
Klin Farmakol , 1997 , 60(5):58～ 60
3.Starosel skii I V , Lisetskii V A , Kaban A P.Prevention of post-
operative complicat-ions in the surgical treatment of cancer of the
lung esophagus , stomach , large i-ntestine and the rectum in pa-
tients over 60 years old.Vopr Onkol , 1991 , 37(7):873
4.李庆勇.刺五加有效成分的提取 、纯化及利用:[ 学位论
文] .哈尔滨:东北林业大学 , 2001
5.李庆勇 ,付玉杰 , 吕欣, 等.超声波法提取刺五加(Acan-
thopanax senticosus)中丁香甙的研究.植物研究 , 2003 , 23
(2):182～ 184
6.张素梅 , 王焕伟, 刘亚芹.高效液相色谱法测定更年康片
中异嗪皮定含量.沈阳药科大学学 , 1996 ,13(3):216～ 217
7.赵昕 ,袁晓颖, 付玉杰 ,等.高效液相色谱法测定豚草茎中
绿原酸含量的研究.植物研究 , 2003 , 23(2):185～ 188
8.王洋 ,张璞 ,于涛 ,等.高效液相色谱法测定红景天甙含量
方法的研究.植物研究 , 2001 , 21(1):113～ 115
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