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Characteristics of Low Molecular Weight Organic Acids in Roots,Stems and Leaves,and Root Exudates in Four Species Seedlings

4种植物幼苗根茎叶及根系分泌物中低分子量有机酸的特征



全 文 :书西北植物学报!
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收稿日期$
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基金项目$中国科学院战略性先导科技专项重大课题"
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#&江苏省高校优势学科资助项目"苏财教
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(
4
号#&江苏大学研究
生科研创新计划资助项目"
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作者简介$赵
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#04*
#!男!在读博士研究生!主要从事逆境植物生理生化的研究)
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通信作者$吴沿友!研究员!主要从事生态环境和地球化学方面的研究)
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种植物幼苗根茎叶及根系分泌物中
低分子量有机酸的特征

!
宽#!吴沿友#!"
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现代农业装备与技术教育部重点实验室!江苏大学农业工程研究院!江苏镇江
!#!"#%
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!
中国科学院地球化学研究所!环境地
球化学国家重点实验室!贵阳
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#

!
要$该研究建立了植物根茎叶及根系分泌物中有机酸的离子色谱分析测定方法!并测定了
$
种不同植物幼苗
根茎叶及根系分泌物中低分子量有机酸的组成!为揭示逆境胁迫下植物体内有机酸的作用提供依据)结果表明$
离子色谱分析法对植物有机酸的加标回收率为
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"
#"&+$!D
!检测限为
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"+%*8
E
%
6
!方法线性关系良
好"
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"+0044
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种植物根茎叶及根系分泌物中都可以检测出草酸*柠檬酸*苹果酸*丁二酸和酒石
酸!其中草酸*柠檬酸和苹果酸为优势酸&有机酸的组成和含量具有物种以及器官的差异性&根系分泌物中的有机
酸与根茎叶中有机酸的相关性也因种属差异而不同)这为研究逆境胁迫下植物器官及根系分泌物提供了可靠
方法)
关键词$根系分泌物&器官&离子色谱&有机酸
中图分类号$
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文献标志码$
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9/-?9?-C.
!!
有机酸是指含有一个或几个羧基基团!主要含
碳氢氧元素的有机化合物!包括脂肪酸和芳香酸!特
别是低分子量有机酸种类较多)常见的低分子量有
机酸有甲酸*乙酸*丙酸*丁酸*草酸*丁二酸*苹果
酸*延胡索酸*胡索酸*柠檬酸*酒石酸*水杨酸*莽草
酸等!其中草酸*柠檬酸*苹果酸等碳链类脂肪酸在
植物体内及根系分泌物中最为常见)这些低分子量
有机酸在植物体内大量存在!它们主要来源于糖酵
解以及三羧酸循环过程!对调节植物体内的酸碱平
衡以及植物
)
土壤生态系统具有重要的作用#)%()这
些低分子量有机酸在植物体内的积累与植物的种
类*树龄和器官类型"根茎叶#有关&根系分泌的有机
酸是应对环境胁迫的一个重要机制!其影响因素除
了与植物本身相关以外!还与营养胁迫*土壤类型等
因素相关$)(()
目前!应用定性定量检测植物体内及根系分泌
物中有机酸的仪器有高效液相色谱仪"
I\65
#*气
相色谱仪"
Z5
#*离子色谱仪"
V5
#*液相色谱
)
质谱
"
65)RY
#联用技术*气相色谱
)
质谱"
Z5)RY
#联用
技术和毛细管电泳"
57
#等等4()
2-/]?-

0
(和
L9/
E
等#"(利用
I\65
能较好地分离
4
种有机酸!并能保
持较小的相对偏差)杨红等##(利用离子色谱法分
离甲酸*乙酸*柠檬酸等
&
种有机酸!最后进行回收
时其回收率平均能达到
00+&D
)
W9-P^
等#!(利用
65)RY
对柠檬酸*马来酸*丁二酸等
(
种有机酸进
行分离!其最小检测限能达到
#/8@:
%
6
)由于离子
色谱仪是一种专门测定阴离子及有机酸阴离子的仪
器!比之其他仪器!该仪器的专一性更好!因此!本试
验探讨了应用离子色谱法同时测定不同植物根茎叶
及根系分泌物样品中草酸*柠檬酸*苹果酸*丁二酸*
酒石酸等
&
种有机酸的方法!并以之研究和比较了
$
种植物根茎叶及根系分泌物中有机酸的特征!较
系统地分析了根茎叶及根系分泌的有机酸的种间差
异性)
#
!
材料和方法
C+C
!
试验材料
本实验以构树*桑树"木本桑科植物#以及诸葛
菜和油菜"草本十字花科植物#为研究材料!在江苏
大学农业工程研究院的智能温室中进行育苗!待其
长出两片真叶后!移栽至
%_$
的穴盘"有托底#中进
行培养!每个穴孔中移栽
%
株幼苗!
%
次重复)每天
定量补充
I@9
E
:9/C
完全营养液!幼苗培养
&
周后!
开始收集根系分泌物)
C+D
!
根系分泌物的收集与分离纯化方法
选择晴朗的天气!加入
!""86I@9
E
:9/C
完全
营养液于
#"
$
""
"
#*
$
""
进行培养!用蒸馏水调节营
养液的体积!收集穴盘里面的营养液并用去离子水
冲洗植物的根部所得的滤液!即为植物的根系分泌
物(()将滤液先过阳离子交换树脂柱"
#!?8_#&
88
#!柱内装填
&
E
38O<=:-P"
I
b
#树脂!
然后流过阴离子交换树脂柱"
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#!柱内
装填
!
E
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树脂"
JI)
型!
#"")!""
目#)
滞留在阴离子交换树脂柱内的有机酸用
#8@:
+
6
#
I5:
洗脱!洗脱液用旋转蒸发器浓缩至近干!之
后保存于
$c
冰箱中!待测#"()
C+E
!
植物根茎叶中有机酸的提取方法
植物根"茎#中有机酸的提取根据
J:-X<-=9
等#%(的方法&植物叶片中有机酸的提取方法参考
d-.
T
<=@.)59==-等#$(的方法)
C+$
!
有机酸的测定方法
根系分泌物及根茎叶中的有机酸的组成含量都
采用离子色谱法"
V5
#分析)色谱分析条件如下$瑞
士万通
44%
型离子色谱仪&检测器$电导型检测器&
色谱柱$
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E
E
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(+488
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+
6
#
I
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&流速$
"+*86
+
8-/
#
&进样量$
!"
#
6
)流动相和洗脱液
在使用之前须过
"+!!
#
8
滤膜及超声脱气)
!
!
结果与分析
D+C
!
分析方法的精确性及标准曲线的绘制
回收率是表征分析方法准确度的重要指标)从

#
可以看出!草酸*柠檬酸*酒石酸*苹果酸和丁二
酸的回收率在
0#+#"D
"
#"&+$!D
!这说明应用离
子色谱法具有较好的分析精度!该方法完全符合分
析精度的要求#&()
从图
#
!
3
*
a
可以看出!混合标准样品及植物样
品中的各有机酸能得到较好的分离!
&
种有机酸的
峰对称性均良好)植物样品中
&
种有机酸均能进行
检测!虽然存在未知物"
!

%
之间的峰#!但不影响
%""#
&

!!!!!!!!!!

!
宽!等$ 种植物幼苗根茎叶及根系分泌物中低分子量有机酸的特征
样品中有机酸的分离!不会造成保留时间的滞后!这
说明该方法分离有机酸的可行性较高)
从表
!
可知!各有机酸标准曲线的回归方程的
相关系数均能达到
"+0&
以上!这说明应用标准曲线
法作为本实验中计算根系分泌物中的有机酸的浓度
的方法具有较高的可行性)从检测限中可以看出!
草酸*柠檬酸和苹果酸的检测限浓度较小!说明这
%
种物质较容易检测出!这与大多数的研究相类
似#*)#0()同时也表明用离子色谱法可以检测有机酸
含量较低的根系分泌物!并具有很好的可行性)
D+D
!
植物根茎叶中有机酸种间差异特征
植物种属及根茎叶的不同影响植物体内有机酸
的含量!
N9/
E
等!"(研究发现不同锌基因型水稻根
部累积有机酸的含量差异较大!刘娣等!#(的研究表
明缺锌下甜茶根茎叶中有机酸的组成含量均存在差
异性)从表
%
可以看出!有机酸在不同植物*根茎叶
中具有较大的差异性)从
$
种植物根茎叶有机酸的
总量上看!构树根茎叶中的有机酸总量最高!而油菜
根茎叶中有机酸总量最低)从各有机酸的比例上
看!草酸*柠檬酸和苹果酸是
$
种植物根茎叶中的优
势酸!其中构树根茎叶中草酸*柠檬酸和苹果酸的含
量占了
(&D
!桑树和诸葛菜则为
*&D
!而油菜则高

4"D
)
$
种植物叶片中草酸*柠檬酸和苹果酸的
含量均高于其茎根中的含量)
D+E
!
根系分泌物中有机酸的种间差异特征
从表
$
可知!两种木本桑科植物根系分泌的有
机酸总量高于两种草本十字花科植物!两种木本植
物"草本植物#根系分泌的有机酸总量之间无显著差
异)两种木本桑科植物根系分泌的柠檬酸和苹果酸

#
!
有机酸混合标准品"
3
#及植物样品"
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#
中有机酸的离子色谱图
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9/C
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离子色谱法测定有机酸加标回收率
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有机酸
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9/-?9?-C
添加值
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+
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#
测定值
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8
E
+
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#
#
回收率
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%
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草酸
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"
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柠檬酸
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"
#"&+$!
酒石酸
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"
0(+4$
苹果酸
R9:-?9?-C "+$0"% "+$((* "+$4*% "+$4$! 0(+$#
"
00+#4
丁二酸
YA??-/-?9?-C "+*#"0 "+*"$$ "+&0#0 "+&($( 0$+"(
"
04+0$

D
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应用离子色谱法测定有机酸的主要参数
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9=98E
9/-?9?-C.O
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E
=9
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编号
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有机酸
J=
E
9/-?9?-C
保留时间
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8-/
线性方程
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S
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决定系数
!
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检测限
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E
+
6
#
#
线性范围
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E
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E
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#
#
草酸
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"
!"
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柠檬酸
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"
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酒石酸
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"
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苹果酸
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"
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丁二酸
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"
&"
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注$
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表示有机酸的浓度"
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E
+
6
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#&
$
表示峰面积)
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"-/C-?9PE
9/-?9?-C.
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$-/C-?9PT
<9]9=<9+
$""#
西
!

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!

!

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的含量占了总量的
&"D
以上&两种草本十字花科植
物根系分泌的优势有机酸则为草酸和苹果酸!这两
种有机酸占了总量的
&"D
以上)桑树和油菜根系
分泌的酒石酸含量较低!不超过总量的
#"D
)构树
根系分泌的草酸和柠檬酸含量低于桑树!而其丁二
酸和酒石酸含量高于桑树!这说明在正常生长条件
下!构树和桑树根系分泌的有机酸活化土壤营养
"磷*铁#及对重金属的解毒能力相似!这与正常生长

E
!
$
种植物根茎叶中有机酸含量的特征
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!
U;E
9/-?9?-C?@/?!
.P<8.9/C:<9X<.@QQ@A=.
T
"
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#
植物种类
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有机酸
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9/-?9?-C

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含量
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8
E
+
E
#
#
比例
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%
D

YP<8
含量
5@/P%"
8
E
+
E
#
#
比例
9`P-@
%
D

6<9Q
含量
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+
E
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#
比例
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%
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构树
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&

&(
)*
+
,)
草酸
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柠檬酸
5-P=-?9?-C "+40f"+"* !0+$ "+0#f"+"! !(+$ "+40f"+"# !&+!
酒石酸
U9=P9=-?9?-C "+("f"+"! !%+# "+4(f"+"* !*+! "+40f"+"% !&+%
苹果酸
R9:-?9?-C "+%(f"+"# #!+# "+$#f"+"! #!+$ "+$(f"+"# #%+%
丁二酸
YA??-/-?9?-C "+%&f"+"# ##+( "+%0f"+"# ##+0 "+$4f"+"# #%+*
总量
U@P9:?@/P

桑树
-#./
草酸
J[9:-?9?-C "+*"f"+"% !%+$ "+&*f"+"! #4+* "+*!f"+"# !#+0
柠檬酸
5-P=-?9?-C "+*(f"+"! !*+# "+*4f"+"# !!+( "+4(f"+"# %"+*
酒石酸
U9=P9=-?9?-C "+*#f"+"% !$+" "+(&f"+"! !$+0 "+&4f"+"# !"+$
苹果酸
R9:-?9?-C "+%%f"+"# #!+0 "+$(f"+"# #&+( "+$#f"+"# #$+*
丁二酸
YA??-/-?9?-C "+%&f"+"# #%+& "+&&f"+"# #4+% "+%*f"+"! #!+&
总量
U@P9:?@/P

诸葛菜
0#1*2.3,45
草酸
J[9:-?9?-C "+&(f"+#( !#+& "+*#f"+"# !&+" "+(!f"+"& !%+$
柠檬酸
5-P=-?9?-C "+(%f"+"& !(+4 "+&$f"+"$ !!+% "+40f"+"4 !4+*
酒石酸
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苹果酸
R9:-?9?-C "+*"f"+"0 !!+* "+$%f"+"( #(+* "+%0f"+"% #!+*
丁二酸
YA??-/-?9?-C "+%"f"+"! ##+% "+%(f"+"$ #&+% "+%%f"+"! #"+*
总量
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油菜
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45
草酸
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柠檬酸
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酒石酸
U9=P9=-?9?-C "+%#f"+"% !$+& "+**f"+"$ !4+$ "+*$f"+"! !(+4
苹果酸
R9:-?9?-C "+#%f"+"# #"+% "+!#f"+"# 0+" "+#$f"+"# *+%
丁二酸
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总量
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种植物根系分泌物中有机酸含量的特征
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酒石酸
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丁二酸
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总量
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宽!等$ 种植物幼苗根茎叶及根系分泌物中低分子量有机酸的特征

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种植物根茎叶与根系分泌的
F

有机酸之间的相关系数
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异!这说明两种植物运用根系分泌的有机酸活化土
壤中难溶性磷能力相似!这与正常生长条件下诸葛
菜的光合作用与油菜相似的结论相符!$()两种木
本桑科植物根茎叶及根系分泌的有机酸含量高于两
种草本十字花科植物!这说明了植物种属对有机酸
的含量影响较大)本实验中的木本植物由于其根茎
叶的生长速度及根茎粗"生物量#大于草本植物!因
此影响植物体内及根系分泌物中的有机酸含量!这

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从表
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可以看出!构树和油菜根茎叶的有机酸
之间具有显著的相关性!而它们与根系分泌的有机
酸之间均没有相关性!这说明这两种植物根系分泌
的有机酸含量并不取决于它们植物根茎叶内有机酸
的含量&桑树根与叶之间*根叶与根系分泌的有机酸
之间均存在显著的相关性!这说明桑树根系分泌的
有机酸与桑树根储存的有机酸含量具有一定的联
系&诸葛菜根茎叶之间*根茎叶与根系分泌的有机酸
之间均没有相关性)由此可以看出!在正常生长条
件下!植物根系分泌物中的有机酸与根茎叶中有机
酸的含量特征具有种属差异!不同植物根茎叶及根
系分泌的有机酸特征及相关性差异较大)
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实验表明!应用离子色谱法可以同时测定植物
根茎叶及根系分泌物中的有机酸!分离度好!准确度
高!重现性好!测定过程连贯!是一种方便可靠的分
析手段)不同的植物*根茎叶及根系分泌物中的优
势有机酸种类及含量的特征具有差异性!有机酸的
种间差异性明显)这为后续研究逆境胁迫下的根系
分泌物提供了重要的方法!分离*纯化和测定根系低
分子质量有机酸对理解在逆境胁迫下植物获取营
养*抗重金属的机制及调节基质
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