全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ ４５(３): ３２６￣３３６(２０１５)
收稿日期: ２０１４￣０４￣０２ꎻ 修回日期: ２０１５￣０１￣１７
基金项目: 国家公益性行业(农业)科研专项(２０１５０３１１４)ꎻ山东省“泰山学者”建设工程专项资助
通讯作者: 赵洪海ꎬ教授ꎬ主要从事植物线虫学研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:ｈｈｚｈａｏ＠ｑａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ
第一作者: 丁海燕ꎬ女ꎬ山东青岛人ꎬ硕士研究生ꎬ主要从事植物线虫学研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:５６４１９６１６４＠ｑｑ.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１５.０３.０１２
山东省小麦禾谷孢囊线虫 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列特征
和基于 ＩＳＳＲ的遗传多样性分析
丁海燕１ꎬ 梁 晨１ꎬ 赵洪海１∗ꎬ 彭德良２
( １ 青岛农业大学农学与植物保护学院ꎬ山东省植物病虫害综合防控重点实验室ꎬ青岛 ２６６１０９ꎻ
２中国农业科学院植物保护研究所ꎬ植物病虫害生物学国家重点实验室ꎬ北京 １００１９３)
摘要:小麦孢囊线虫病(ＣＣＮꎬＨｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ)已成为山东省小麦生产上的一种重要病害ꎬ研究 ＣＣＮ群体间和群体内的
遗传多样性可以为其综合防治提供理论依据ꎮ 本实验研究了山东省 １７地市 ３４个群体的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 区ꎬ并采用 ＩＳＳＲ 分子
标记技术对其中 １０个地市的 ２７个种群做了遗传多样性分析ꎮ 结果表明ꎬ在 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ系统发育树中ꎬ山东省 ３４个小麦孢
囊线虫群体与 Ｈ. ｐｒａｔｅｎｓｉｓ、Ｈ. ａｕｓｔｒａｌｉｓ及中国 Ｈ. ａｖｅｎａｅ群体亲缘关系较近ꎮ ３个 ＩＳＳＲ引物共扩增出 ３１条条带ꎬ多态性条
带百分率(ＰＰＢ)为 １００％ꎮ 菏泽、潍坊、烟台群体遗传多样性较高ꎬ枣庄、威海、淄博、滨州群体遗传多样性相对较低ꎮ Ｍａｎｔｅｌ
检测和聚类结果表明ꎬ群体间的遗传分化与地理距离并无显著的相关性ꎬＡＭＯＶＡ分析结果显示ꎬ在总的遗传变异中 １７.７％
的变异发生在群体间ꎬ８２.３％的变异发生在群体内ꎮ 研究结果显示山东省 Ｈ. ａｖｅｎａｅ具有较高的遗传多样性ꎬ且群体间已发
生了一定程度的遗传分化ꎮ
关键词:禾谷孢囊线虫ꎻ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳꎻ ＩＳＳＲꎻ 遗传多样性ꎻ 聚类分析ꎻ 山东省
ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＩＳＳＲ ｏｆ ｃｅｒｅａｌ
ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｏｎ ｗｈｅａｔ ｆｒｏｍ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ＤＩＮＧ Ｈａｉ￣ｙａｎ１ꎬ ＬＩＡＮＧ Ｃｈｅｎ１ꎬ ＺＨＡＯ
Ｈｏｎｇ￣ｈａｉ１ꎬ ＰＥＮＧ Ｄｅ￣ｌｉａｎｇ２ ( １Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｒｏｐ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｇｒｏｎｏｍｙꎬ Ｑｉｎｇｄａｏ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎻ Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ
Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｃｒｏｐ Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６１０９ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｌａｎｔ
Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｐｅｓｔｓꎬ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬ ＣＡＡＳꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｈｅ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ (ＣＣＮꎬ Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ) ｈａｓ ｂｅｅｎ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｐｌａｎｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｎ
ｗｈｅａｔ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｍｏｎｇ ａｎｄ ｗｉｔｈｉｎ ＣＣＮ ｇｒｏｕｐｓ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｉｎ
ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌ. ＩＴＳ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｆｒｏｍ ３４
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ １７ ｃｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ａｎｄ ＩＳＳＲ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｆｒｏｍ ２７ ＣＣＮ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ １０ ｃｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ３４
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓꎬＨ. ｐｒａｔｅｎｓｉｓꎬＨ. ａｕｓｔｒａｌｉｓ ａｎｄ Ｈ. ａｖｅｎａｅ ｆｒｏｍ Ｃｈｉｎａ ｗｅｒｅ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｇｒｏｕｐꎬ ｓｈｏｗｉｎｇ ｈｉｇｈ
ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ. Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ３１ ｂａｎｄｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ３ ＩＳＳＲ ｐｒｉｍｅｒｓꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｂａｎｄｓ (ＰＰＢ) ｗａｓ １００％. Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈｅｚｅꎬ Ｗｅｉｆａｎｇ ａｎｄ Ｙａｎｔａｉ ｇｒｏｕｐｓ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ａｎｄ
ｔｈｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｚａｏｚｈｕａｎｇꎬ Ｗｅｉｈａｉꎬ Ｚｉｂｏ ａｎｄ Ｂｉｎｚｈｏｕ ｇｒｏｕｐｓ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｏｔｈｅｒ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ. Ｍａｎｔｅｌ
ｔｅｓｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｄｉｓｔａｎｃｅ.
Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＡＭＯＶＡ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒ￣ｇｒｏｕｐ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ １７.７％ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎꎬ
ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｉｎｎｅｒ￣ｇｒｏｕｐ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ ８２.３％. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｉｍｐｌｉｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈ.ａｖｅｎａｅ
ｗａｓ ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ ｈｉｇｈ ｉｎ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｍｅ ｅｘｔｅｎｔ ａｍｏｎｇ ｇｒｏｕｐｓ.
３期 丁海燕ꎬ等:山东省小麦禾谷孢囊线虫 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列特征和基于 ＩＳＳＲ的遗传多样性分析
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅꎻ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳꎻ ＩＳＳＲꎻ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎻ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓꎻ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ
中图分类号: Ｓ４３２.４５ 文献标识码: Ａ 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１５)０３￣０３２６￣１１
小麦孢囊线虫病(ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅꎬＣＣＮ)
是危害小麦等禾本科作物的重要病害ꎬ最早于
１８７４年在德国东部首次发现ꎬ现已在世界五大洲
４０多个国家发生为害ꎬ其中以澳洲、欧洲、美洲地
区发生最为严重[１]ꎮ 我国于 １９８９年在湖北省天门
县首次发现此病ꎬ现在河北、河南、北京、安徽、山东
等 １６ 个省市均有发生ꎬ 发生面积达 ４００ 万
ｈｍ２ [２~４]ꎮ ＣＣＮ 在山东省于 ２００５ 年首次正式报
道ꎬ目前在山东省的 １７ 地市均有发生[５~８]ꎮ 在我
国该病害主要有两种病原线虫ꎬ燕麦孢囊线虫
(Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ)和菲利普孢囊线虫(Ｈ. ｆｉｌｉｐｊｅ￣
ｖｉ) [９]ꎬ山东省 ＣＣＮ 群体种类为燕麦孢囊线虫ꎬ菲
利普孢囊线虫在山东省内未见报道[７ꎬ８]ꎮ
核糖体 ＤＮＡ内转录间隔区( ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ)序列
和内转录间隔区限制性内切酶片段长度多态性
(ＩＴＳ￣ＲＦＬＰ)图谱能够有效地区分和鉴别线虫间的
亲缘关系和遗传特征[１０]ꎮ Ｓａｂｏ 等通过 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ
序列分析ꎬ初步研究了 ５ 种孢囊线虫的遗传多样
性[１１]ꎮ 近来 Ｌｉｕ等[８]对山东省部分地区小麦禾谷
孢囊线虫的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列进行了分析ꎬ分析结果
显示 ＣＣＮ山东群体与国外种群的亲缘关系较远ꎬ
而与中国河南、江苏、安徽等地区的亲缘关系较近ꎮ
孢囊线虫的遗传多样性研究多采用 ＩＴＳ￣ＲＦＬＰ 方
法[１２]ꎬＳｕｂｂｏｔｉｏｎ 等[１３]和 Ｚｈｅｎｇ[１４]通过对 Ｈ. ａｖｅ￣
ｎａｅ 群体 ｒＤＮＡ 的 ＩＴＳ￣ＲＦＬＰ 分析ꎬ分别发现了
“Ａ”型、“Ｂ”型以及 “Ｃ”型 ３ 种 ＩＴＳ 类型 ꎮ Ｑｕ
等[１５]用 Ｈｉｎｆ Ｉ、Ａｌｕ Ｉ 和 Ｒｓａ Ｉ 将 Ｈ. ａｖｅｎａｅ 中国群
体与摩洛哥孢囊线虫分开ꎮ Ｗａｎｇ 等[１６]对江苏省
４个地区的 １５个 ＣＣＮ群体进行 ＩＴＳ￣ＲＦＬＰ分析表
明ꎬ所有群体既有与“Ｂ”型群体相同的 Ａｌｕ Ｉ 和
Ｒｓａ Ｉ酶切图谱ꎬ又具有“Ｃ”型群体独特的 Ｈｉｎｆ Ｉ
和 Ｔｒｕ９ Ｉ酶切图谱ꎮ
随机扩增多态性 ＤＮＡ 标记(ＲＡＰＤ)、扩增片
段长度多态性(ＡＦＬＰ)、简单重复序列(ＳＳＲ)等技
术也被广泛地应用于线虫的鉴定和遗传多样性研
究中[１７]ꎮ 简单重复序列区间扩增( ＩＳＳＲ)分子标
记技术在系统发育、遗传作图、遗传多样性分析等
方面被广泛应用[１８~２１]ꎮ ＩＳＳＲ 在引物设计上比
ＳＳＲ简单ꎬ实验重复性好ꎬ其产物多态性比 ＲＡＰＤ、
ＡＦＬＰ、ＳＳＲ更加丰富ꎬ并且比 ＲＡＰＤ具有更好的稳
定性ꎬ可以揭示更高程度的 ＤＮＡ 多态性ꎬ而 ＩＳＳＲ
分子标记技术在孢囊线虫遗传多样性研究中报道
较少ꎮ Ｈｕａｎｇ 等[２２]采用 ＩＳＳＲ 技术对中国 １６ 个
Ｈ. ａｖｅｎａｅ群体和 １ 个 Ｈ. ｆｉｌｉｐｊｅｖｉ 群体进行遗传多
样性分析ꎬ结果表明这 １７ 个中国群体具有丰富的
遗传多样性ꎮ
本研究分析了山东省 １７ 地市 ３４ 个 Ｈ. ａｖｅｎａｅ
种群的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列特征ꎬ并采用 ＩＳＳＲ分子标记
技术分析和评估了来自山东省 １０ 个地级市 ２７ 个
Ｈ. ａｖｅｎａｅ种群的遗传多样性ꎬ对于明确其传播扩散
途径ꎬ制定其相应的防治策略具有重要的意义ꎮ
１ 材料与方法
１.１ 线虫的来源和分离
２０１２年 ５月和 ６月ꎬ从山东省 １７地市采集孢囊
线虫侵染的小麦根系及根际土壤(表 １)ꎬ将土壤样
品混合均匀后ꎬ取 １０００ｇ 土样ꎬ参照 Ｐｅｎｇ 等[２３]的悬
浮过筛法分离孢囊ꎬ挑取饱满的孢囊冷藏备用ꎮ
１.２ ＤＮＡ提取
每个地理种群挑选 １０ 个成熟饱满的孢囊ꎬ参
照 Ｐｅｎｇ等[２３]的方法提取单个孢囊 ＤＮＡꎬ将上清
ＤＮＡ悬浮液放入￣２０℃中保存备用ꎮ
１.３ ＩＴＳ区扩增和序列测定
采用引物 ＴＷ８１(５′￣ＧＴＴＴＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡ
ＣＣＴＧＣ￣３′) 和 ＡＢ２８ ( ５′￣ＡＴＡＴＧＣＴＴＡＡＧＴＴＣＡ
ＧＣＧＧＧＴ￣３′)扩增 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 区[２４]ꎮ 反应体积为
５０ μＬ:１０×ＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ ５ μＬ、ｄＮＴＰｓ ４ μＬ、ＭｇＣｌ２
０.３ μＬ、引物 ＡＢ２８ 和 ＴＷ８１ 各 ０.２ μＬ、Ｔａｑ ＤＮＡ
多聚酶 (５ ＵμＬ￣１) ０. ３ μＬ、模版 ＤＮＡ ２ μＬꎬ
ｄｄＨ２Ｏ 补足 ５０ μＬꎮ ＰＣＲ 反应条件为: ９４℃ ５
ｍｉｎꎻ９４℃ ３０ ｓꎬ５５℃ ４５ ｓꎬ７２℃ １ ｍｉｎꎬ３４ 个循环ꎻ
７２℃ １０ ｍｉｎꎬ４℃保存ꎮ ＰＣＲ扩增后ꎬ取 ５ μＬ 扩增
产物加１ μＬ ６× Ｌｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ在 １.０％的琼脂糖凝
胶上电泳ꎬ１２０ ｖ 下电泳 ４０ ｍｉｎꎬ电泳后在紫外灯
下观测和照相[２４]ꎮ 将 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 区的 ＰＣＲ 扩增产
物送至深圳华大基因公司进行测序ꎬ测序结果用
７２３
植物病理学报 ４５卷
Ｔａｂｌｅ １ Ｓａｍｐｌｅ ｃｏｄｅｓ ａｎｄ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ
Ｃｏｄｅ Ｏｒｉｇｉｎ (ｖｉｌｌａｇｅꎬ ｔｏｗｎꎬ ｃｏｕｎｔｙꎬ ｃｉｔｙ)
ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ
ｆｏｒ ｔｈｅ ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ＳＤＤＹ１ Ｓｈｅｎｍｅｎｇｔｉｎｇ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｇｕａｎｇｒａｏꎬ Ｇｕａｎｇｒａｏꎬ Ｄｏｎｇｙｉｎｇ ＫＦ６７９３６４
ＳＤＬＹ１ Ｌｉｕｌｏｕ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ ＭａｔｏｕꎬＴａｎｃｈｅｎｇꎬ Ｌｉｎｙｉ ＫＦ６７９３６５
ＳＤＺＺ１ Ｄｏｎｇｈｕａｎｇｚｈｕａｎｇ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ ＮｉｇｏｕꎬＴａｉｅｒｚｈｕａｎｇꎬＺａｏｚｈｕａｎｇ ＫＦ６７９３６６
ＳＤＺＺ２ Ｓｈａｎｇｘｕ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｎａｎｓｈａｈｅꎬ Ｔｅｎｇｚｈｏｕꎬ Ｚａｏｚｈｕａｎｇ ＫＦ６７９３６７
ＳＤＪＮ１ Ｎｉａｎｇｎｉａｎｇｍｉａｏ ｖｉａｌｌａｇｅ ｏｆ Ｗａｎｇｙｉｎꎬ Ｙａｎｚｈｏｕꎬ Ｊｉｎｉｎｇ ＫＦ６７９３６８
ＳＤＨＺ１ Ｇａｏｄｉｎｇ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｙｏｎｇｃｈａｎｇꎬ Ｃｈｅｎｗｕꎬ Ｈｅｚｅ ＫＦ６７９３６９
ＳＤＨＺ２ Ｌｖｘｉ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｓｕｉｇｕａｎｔｕｎꎬ Ｙｕｎｃｈｅｎｇꎬ Ｈｅｚｅ ＫＦ６７９３７０
ＳＤＨＺ３ Ｙｏｎｇｇｕ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｘｕｚｈａｉꎬ Ｓｈａｎꎬ Ｈｅｚｅ ＫＦ６７９３９８
ＳＤＬＣ１ Ｓｈｉｈｕｔｏｎｇ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｓｈｏｕｚｈａｎｇꎬ Ｙａｎｇｇｕꎬ Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ ＫＦ６７９３７１
ＳＤＬＣ２ Ｂｅｉｍｅｚｈｕａｎｇ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｄｏｎｇｇｕｃｈｅｎｇꎬ Ｇｕａｎꎬ Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ ＫＦ６７９３７２
ＳＤＬＣ３ Ｓｕｎｗｕｌｉ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｎｇｕａｎꎬ Ｇａｏｔａｎｇꎬ Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ ＫＦ６７９３７３
ＳＤＤＺ１ Ｈｏｕｗａｎｇｚｈｕａｎｇ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｗｕｈｏｕꎬ Ｗｕｃｈｅｎｇꎬ Ｄｅｚｈｏｕ ＫＦ６７９３７４
ＳＤＤＺ２ Ｈａｎｚｈｕａｎｇ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｅｎｃｈｅｎꎬ Ｐｉｎｇｙｕａｎꎬ Ｄｅｚｈｏｕ ＫＦ６７９３７５
ＳＤＤＺ３ Ｔａｉｔｏｕ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｄｅｃｈｅｎｇꎬ Ｄｅｚｈｏｕ ＫＦ６７９３９６
ＳＤｊｎ２ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｌｉｃｈｅｎꎬ Ｊｉｎａｎ ＫＦ６７９３７６
ＳＤＬＷ１ Ｓｈｉｊｉａｈｅ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｙａｎｇｚｈｕａｎｇꎬ Ｌａｉｃｈｅｎｇꎬ Ｌａｉｗｕ ＫＦ６７９３７７
ＳＤＢＺ１ Ｍａｂｕ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｑｉｎｇｙａｎｇꎬ Ｚｏｕｐｉｎｇꎬ Ｂｉｎｇｚｈｏｕ ＫＦ６７９３７８
ＳＤＢＺ２ Ｔｕｎｔｉａｎ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｌｖｙｉꎬ Ｂｏｘｉｎｇꎬ Ｂｉｎｚｈｏｕ ＫＦ６７９３７９
ＳＤＺＢ１ Ｓｈｕｎｈｅ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｍａｑｉａｏꎬ Ｈｕａｎｔａｉꎬ Ｚｉｂｏ ＫＦ６７９３８０
ＳＤＺＢ２ Ｚｈｅｎｇｊｉａｘｉｎ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｈｕａｎｇｃｈｅｎｇꎬ Ｌｉｎｚｉꎬ Ｚｉｂｏ ＫＦ６７９３８１
ＳＤＲＺ１ Ｇａｏｗａｎｇｚｈｕａｎｇ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｔａｏｌｕｏꎬ Ｄｏｎｇｇａｎｇꎬ Ｒｉｚｈａｏ ＫＦ６７９３８２
ＳＤＷＦ１ Ｄｏｎｇｈｕａｙｕａｎ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｘｉｎｘｉｎｇꎬ Ｚｈｕｃｈｅｎｇꎬ Ｗｅｉｆａｎｇ ＫＦ６７９３６３
ＳＤＷＦ２ Ｓｈｉｌｉｐｕ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｘｉｎｇａｎ ꎬ Ａｎｑｉｕꎬ Ｗｅｉｆａｎｇ ＫＦ６７９３８３
ＳＤＷＦ３ Ｄｏｎｇｆｕ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｌｉｕｔｕａｎꎬ Ｃｈａｎｇｙｉꎬ Ｗｅｉｆａｎｇ ＫＦ６７９３８４
ＳＤＷＦ４ Ｓａｎｊｕｅｍｉａｏ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｍｉｈｅꎬ Ｑｉｎｇｚｈｏｕꎬ Ｗｅｉｆａｎｇ ＫＦ６７９３９９
ＳＤＱＤ１ Ｌｕｏｊｉａ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｊｉａｏｄｏｎｇꎬ Ｊｉａｏｚｈｏｕꎬ Ｑｉｎｇｄａｏ ＫＦ６７９３８５
ＳＤＱＤ２ Ｃｈａｎｇｘｕｔｕｎ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｃｕｉｊｉａｊｉꎬ Ｐｉｎｇｄｕꎬ Ｑｉｎｇｄａｏ ＫＦ６７９３８６
ＳＤＹＴ１ Ｓｈｉｑｉａｏｂｏ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｆｅｎｇｇｅｚｈｕａｎｇꎬ Ｌａｉｙａｎｇꎬ Ｙａｎｔａｉ ＫＦ６７９３８７
ＳＤＹＴ２ Ｄａｊｉａｏｊｉａ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｚｈｕｑｉａｏꎬ Ｌａｉｚｈｏｕꎬ Ｙａｎｔａｉ ＫＦ６７９３８８
ＳＤＹＴ３ Ｑｕａｎｓｈｕｉ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｌａｎｇａｏꎬ Ｌｏｎｇｋｏｕꎬ Ｙａｎｔａｉ ＫＦ６７９３８９
ＳＤＹＴ４ Ｘｉａｋｕａｎｇ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｇａｏｌｉｎｇꎬ Ｍｏｕｐｉｎｇꎬ Ｙａｎｔａｉ ＫＦ６７９３９０
ＳＤＷＨ１ Ｔａｚｈｕａｎｇ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｙｕｌｉꎬ Ｒｕｓｈａｎꎬ Ｗｅｉｈａｉ ＫＦ６７９３９１
ＳＤＷＨ２ Ｓｈｅｎｇｇｅｚｈｕａｎｇ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｇｅｊｉａꎬ Ｗｅｎｄｅｎｇꎬ Ｗｅｉｈａｉ ＫＦ６７９３９２
ＳＤＴＡ１ Ｄｏｎｇｈｕｄｏｎｇ ｖｉｌｌａｇｅ ｏｆ Ｈｕｔｕｎꎬ Ｆｅｉｃｈｅｎｇꎬ Ｔａｉａｎ ＫＦ６７９３９３
８２３
３期 丁海燕ꎬ等:山东省小麦禾谷孢囊线虫 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列特征和基于 ＩＳＳＲ的遗传多样性分析
ＤＮＡｓｔａｒ进行拼接ꎬ拼接序列用 ＤＮＡｓｔａｒ 软件分析
后与ＧｅｎＢａｎｋ收录的序列进行比对ꎬ并用 ＭＥＧＡ５.
０的 ＵＰＧＭＡ法构建系统发育树ꎮ
１.４ ＩＳＳＲ￣ＰＣＲ扩增
本研究用于扩增的 ＩＳＳＲ 引物碱基序列参照
Ｔｉｋｕｎｏｖ 等[２５]、Ｚｉｅｔｋｉｅｗｉｃｚ 等[２６]、Ｈｕａｎｇ 等[２７]有关
研究中应用的 １６ 对引物序列ꎬ将扩增条带清晰、多
态性高、重复性好的引物用于正式实验ꎮ 改变引物
浓度、退火温度、循环次数、ＤＮＡ含量、Ｔａｑ 酶、ｄＮＴＰ
等条件ꎬ确定最佳反应条件ꎮ 本实验所采用反应总
体积为 ２５ μＬ:１０×ＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ ２.５ μＬ、ｄＮＴＰｓ ２ μＬ、
ＭｇＣｌ２０. ３ μＬ、引物 ０. ２ μＬ、Ｔａｑ ＤＮＡ 多聚酶(５
ＵμＬ￣１) ０.２ μＬ、模版 ＤＮＡ ２ μＬꎬ最后 ｄｄＨ２Ｏ 补
足 ２５ μＬꎮ 反应条件为:９４℃ ５ｍｉｎꎻ９４℃ ３０ ｓꎬ５２℃
４５ｓꎬ７２℃ １ ｍｉｎꎬ ３８ 个循环ꎻ ７２℃ １０ ｍｉｎꎬ ４℃ 保
存[１]ꎮ ＰＣＲ扩增后ꎬ取 ５ μＬ 扩增产物加 １ μＬ ６×
Ｌｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒꎬ在 ２.０％的琼脂糖凝胶上电泳ꎬ８０ ｖ
下电泳 ９０ ｍｉｎꎬ电泳后在紫外灯下观测和照相ꎮ
１.５ 遗传多样性分析
实验结果采用 Ｂｉｏｎｕｍｅｒｉｃｓ 软件读带ꎬ按扩增
条带的有无进行赋值ꎬ有带的标记为 １ꎬ无带的标
记为 ０ꎬ建立二元数据矩阵ꎮ 利用 ＰＯＰＧＥＮＥ ｖｅｒ￣
ｓｉｏｎ １.３２软件进行数据分析ꎬ计算多态带百分率
(ＰＰＢ)、观测等位基因百分数(Ｎａ)、有效等位基因
数(Ｎｅ)、Ｎｅｉ′ｓ平均期望杂合度(Ｈ)、Ｓｈａｎｎｏｎ 信息
指数( Ｉ)及群体间的遗传分化系数(Ｇｓｔ)、基因流
(Ｎｍ)、总遗传多样性 (Ｈｔ)和种群遗传多样性
(Ｈｓ)ꎬ并计算群体间的遗传距离和遗传相似度ꎮ
利用 ＮＴＳＹＳ￣ｐｃ２.１软件对 ２７个种群进行 ＵＰＧＭＡ
聚类分析ꎮ 利用 Ｍａｎｔｅｌ检测法对群体间的遗传距
离和地理距离进行相关性分析[２８]ꎬ 并利用
ＷＩＮＡＭＯＶＡ ｖｅｒｓｉｏｎ１.５５ 软件对群体间和群体内
的遗传变异进行 ＡＭＯＶＡ分析[２９]ꎮ
２ 结果与分析
２.１ ＰＣＲ扩增结果
对 ３４个禾谷孢囊线虫种群的 ｒＤＮＡ 内转录间
隔区( ＩＴＳ区)进行 ＰＣＲ 扩增ꎬ所有的群体都扩增
出一条约为 １ ０００ ｂｐ的 ＤＮＡ片段(图 １)ꎮ
２.２ 序列分析结果
将扩增得到的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 片段双向测序后进行
拼接ꎬ并将 ３４个所得序列在 ＧｅｎＢａｎｋ中注册(表 １)ꎮ
将这 ３４个序列进行碱基相似度比对ꎬ结果表明ꎬ３４个
群体的序列相似性达 ８２.０８％ꎮ 从 ＧｅｎＢａｎｋ 中下载
Ｈ. ａｖｅｎａｅ ｃｏｍｐｌｅｘ及其近缘种的 ＩＴＳ序列ꎬ与 ３４个山
东种群的序列进行多重比对ꎬ并用ＭＥＧＡ５.０软件的
ＵＰＧＭＡ 法构建系统发育树ꎬ以马铃薯金线虫
(Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ ｒｏｓｔｏｃｈｉｅｎｓｉｓ)为外群ꎮ 从图 ２ 的系统发
育树可以看出ꎬ所有山东群体均与 Ｓｕｂｂｏｔｉｎ 等[１２]报
道的 Ｈ. ａｖｅｎａｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ９ 个种群中的 Ｈ. ａｖｅｎａｅ、
草地孢囊线虫 ( Ｈ. ｐｒａｔｅｎｓｉｓ )、 澳 洲 孢 囊 线 虫
(Ｈ. ａｕｓｔｒａｌｉｓ)、奥克兰孢囊线虫(Ｈ. ａｕｃｋｌａｎｄｉｃａ)、稀
少孢囊线虫(Ｈ. ｍａｎｉ)、蚤缀孢囊线虫(Ｈ. ａｒｅｎａｒｉａ)、
Ｈ. ｆｉｌｉｐｊｅｖｉ和麦类孢囊线虫(Ｈ. ｌａｔｉｐｏｎｓ)处于同一个
大的进化分支簇ꎬ置信度达到 ９９％ꎬ明显区别于甜菜
孢囊线虫组(Ｓｃｈａｃｈｔｉｉ ｇｒｏｕｐ)和豌豆孢囊线虫组
(Ｇｏｅｔｔｉｎｇｉａｎａ ｇｒｏｕｐ)ꎮ 山东群体与 Ｈ. ｐｒａｔｅｎｓｉｓ、
Ｈ. ａｕｓｔｒａｌｉｓ以及中国的 Ｈ. ａｖｅｎａｅ 群体(包括山东、
河北、河南、江苏、安徽群体)亲缘关系较近ꎬ而与
Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ属其他孢囊线虫组亲缘关系较远ꎮ
Ｆｉｇ. １ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ ｗｉｔｈ ｐｒｉｍｅｒｓ ＴＷ８１ ａｎｄ ＡＢ２８
Ｌａｎｅ Ｍ:ＤＬ２０００ ｍａｒｋｅｒꎻＬａｎｅ １￣３４:ＳＤＷＦ１ꎬＳＤＤＹ１ꎬＳＤＬＹ１ꎬＳＤＺＺ１ꎬＳＤＺＺ２ꎬＳＤＪＮ１ꎬＳＤＨＺ１ꎬＳＤＨＺ２ꎬＳＤＨＺ３ꎬＳＤＬＣ１ꎬ
ＳＤＬＣ２ꎬＳＤＬＣ３ꎬＳＤＤＺ１ꎬＳＤＤＺ２ꎬＳＤＤＺ３ꎬＳＤｊｎ２ꎬＳＤＬＷ１ꎬＳＤＢＺ１ꎬＳＤＢＺ２ꎬＳＤＺＢ１ꎬＳＤＺＢ２ꎬＳＤＲＺ１ꎬＳＤＷＦ２ꎬ
ＳＤＷＦ３ꎬＳＤＷＦ４ꎬＳＤＱＤ１ꎬＳＤＱＤ２ꎬＳＤＹＴ１ꎬＳＤＹＴ２ꎬＳＤＹＴ３ꎬＳＤＹＴ４ꎬＳＤＷＨ１ꎬＳＤＷＨ２ ａｎｄ ＳＤＴＡ１.
９２３
植物病理学报 ４５卷
Ｆｉｇ. ２ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｃｌｏｓｅｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｅｓｔｅｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｂａｓｅｄ
ｏｎ ｒＤＮＡ ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｕｓｉｎｇ ＵＰＧＭＡ ｍｅｔｈｏｄ
０３３
３期 丁海燕ꎬ等:山东省小麦禾谷孢囊线虫 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列特征和基于 ＩＳＳＲ的遗传多样性分析
２.３ ＩＳＳＲ分析结果
２.３.１ 引物筛选结果 最终选取(ＣＡ) ８Ａ、(ＧＡ￣
ＣＡ) ４和(ＡＣ) ８Ｃ 三对引物用于 ＩＳＳＲ￣ＰＣＲ 扩增ꎮ
(ＣＡ) ８Ａ、(ＧＡＣＡ) ４和(ＡＣ) ８Ｃ分别扩增出 １４ 个、
７个和 １０个条带ꎬ共产生 ３１ 个多态性条带ꎬ多态
性条带百分率达 １００％ꎮ
２.３.２ 遗传多样性分析 对潍坊、威海、枣庄、菏
泽、淄博、青岛、烟台、聊城、德州和滨州 １０ 个地理
群体进行遗传多样性分析ꎮ 遗传多样性分析表明
(表 ２)ꎬ山东省小麦禾谷孢囊线虫 １０ 个地理群体
的多态性位点百分率 Ｐ 为 １６.１％ ~ ７０.９％ꎬ平均为
４２.９％ꎬ观测等位基因数 Ｎａ为 １.１６１ ３~１.７０９ ７ꎬ平
均为 １. ２７７ ４ꎬ有效等位基因数 Ｎｅ 为 １. １１４ ０ ~
１.４７３ １ꎬ平均为 １.２７７ ４ꎬ期望杂合度 Ｈ 为 ０.０６６ ８
~０.２７３ ４ꎬ平均为 ０.１６３ ２ꎬＳｈａｎｎｏｎ 信息指数 Ｉ 为
０.０９７ ５~０.４０４ ２ꎬ平均为 ０.２４２ ２ꎮ 其中ꎬ菏泽群体
的遗传多样性最高ꎬ其次为潍坊、烟台群体ꎻ枣庄群
体的遗传多样性最低ꎬ威海、淄博、滨州群体也处于
较低水平ꎮ 总体而言ꎬ山东省小麦禾谷孢囊线虫具
有较高的遗传多样性水平ꎮ
Ｆｉｇ. ３ Ｆｉｇ.３ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｉｍａｇｅ ｏｆ ＩＳＳＲ￣ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ２７ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ
ａｖｅｎａｅ ｆｒｏｍ Ｓｈａｎｄｏｎｇ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｗｉｔｈ ｐｒｉｍｅｒ ＵＢＣ７３ (ＧＡＣＡ) ４
Ｌａｎｅ Ｍ:ＤＬ２０００ ｍａｒｋｅｒꎻＬａｎｅ １￣２７:ＳＤＷＦ１ꎬＳＤＺＺ１ꎬＳＤＺＺ２ꎬＳＤＨＺ１ꎬＳＤＨＺ２ꎬＳＤＨＺ３ꎬＳＤＬＣ１ꎬＳＤＬＣ２ꎬ
ＳＤＬＣ３ꎬＳＤＤＺ１ꎬＳＤＤＺ２ꎬＳＤＤＺ３ꎬＳＤＢＺ１ꎬＳＤＢＺ２ꎬＳＤＺＢ１ꎬＳＤＺＢ２ꎬＳＤＷＦ２ꎬＳＤＷＦ３ꎬＳＤＷＦ４ꎬ
ＳＤＱＤ１ꎬＳＤＱＤ２ꎬＳＤＹＴ１ꎬＳＤＹＴ２ꎬＳＤＹＴ３ꎬＳＤＹＴ４ꎬＳＤＷＨ１ ａｎｄ ＳＤＷＨ２.
Ｔａｂｌｅ ２ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ １０ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ
Ｇｒｏｕｐ
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉ / Ｐ
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ
/ Ｎａ
Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ / Ｎｅ
Ａｖｅｒａｇｅ
Ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ / Ｈ
Ｓｈａｎｎｏｎ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
Ｉｎｄｅｘ / Ｉ
Ｗｅｉｆａｎｇ ６７.７ １.６７７ ４±０.４５７ ２ １.４０８ ７±０.３７１ ７ ０.２４１ ５±０.１９３ ８ ０.３６２ ７±０.２７５ ７
Ｗｅｉｈａｉ ２５.８ １.２５８ １±０.４４４ ８ １.１８２ ５±０.３１４ ５ ０.１０６ ９±０.１８４ ２ ０.１５６ １±０.２６９ ０
Ｚａｏｚｈｕａｎｇ １６.１ １.１６１ ３±０.３７３ ９ １.１１４ ０±０.２６４ ４ ０.０６６ ８±０.１５４ ９ ０.０９７ ５±０.２２６ １
Ｈｅｚｅ ７０.９ １.７０９ ７±０.４６１ ４ １.４７３ １±０.３８０ ５ ０.２７３ ４±０.１９５ １ ０.４０４ ２±０.２７６ ９
Ｚｉｂｏ ２５.８ １.２５８ １±０.４４４ ８ １.１８２ ５±０.３１４ ５ ０.１０６ ９±０.１８４ ２ ０.１５６ １±０.２６９ ０
Ｑｉｎｇｄａｏ ３２.３ １.３２２ ６±０.４７５ ２ １.２２８ １±０.３３６ ０ ０.１３３ ６±０.１９６ ８ ０.１９５ １±０.２８７ ４
Ｙａｎｔａｉ ５８.１ １.５８０ ６±０.５０１ ６ １.３８５ ３±０.４０９ ８ ０.２１８ ７±０.２１０ ５ ０.３２３ ５±０.２９８ ２
Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ ５１.６ １.５１６ １±０.５０８ ０ １.２７１ ７±０.３０６ ５ ０.１７２ ９±０.１７８ ４ ０.２６５ ８±０.２６８ ０
Ｄｅｚｈｏｕ ５１.６ １.５１６ １±０.５０８ ０ １.３２２ ５±０.３６７ ８ ０.１９１ １±０.１９９ ６ ０.２８５ ６±０.２９０ ２
Ｂｉｎｚｈｏｕ ２９.０ １.２９０ ３±０.４６１ ４ １.２０５ ３±０.３２６ ３ ０.１２０ ３±０.１９１ １ ０.１７５ ６±０.２７９ ０
Ｍｅａｎ ４２.９ １.２７７ ４ １.２７７ ４ ０.１６３ ２ ０.２４２ ２
１３３
植物病理学报 ４５卷
２.３.３ 遗传分化和遗传变异分析 为进一步分析
群体间的遗传分化程度ꎬ计算群体间的 Ｎｅｉ′ｓ 遗传
距离和遗传相似度(表 ３)ꎮ 各群体间遗传距离的
变化范围为 ０.０９３ ９ ~ ０.３５５ ４ꎬ遗传相似度的变化
范围为 ０.６６７ ６~０.９１１ ４ꎬ其中ꎬ枣庄和德州群体的
遗传距离最大ꎬ遗传相似度最低ꎻ菏泽和烟台群体
的遗传距离最小ꎬ遗传相似度最高ꎮ 小麦禾谷孢囊
线虫的 １０ 个群体总的遗传多样性 Ｈｔ 为 ０.２９７ ８ꎬ
种群内遗传多样性 Ｈｓ 为 ０.１６３ ２ꎬ遗传分化系数
Ｇｓｔ为 ０.４５１ ９ꎬ基因流 Ｎｍ 为 ０.６０６ ４ꎬ说明群体间
虽然存在基因流ꎬ但群体间已经发生了一定程度的
遗传分化ꎮ 通过 Ｇｏｏｇｌｅ Ｍａｐｓ Ｄｉｓｔａｎｃｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｏｒ
(ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｄａｆｔｌｏｇｉｃ. ｃｏｍ / ｐｒｏｊｅｃｔｓ ｍａｐｓ ｄｉｓｔａｎｃｅ
ｃａｌｃ￣ｃｕｌａｔｏｒ.ｈｔｍ) [３０]获得 １０个地区的地理距离ꎬ通
过 Ｍａｎｔｅｌ测验表明ꎬ小麦禾谷孢囊线虫 １０ 个群体
间的遗传距离与地理距离并无相关性(ｒ＝ ０.８５２ ９ꎬ
Ｐ>０.１)ꎮ ＡＭＯＶＡ的等级剖分法可以计算出群体
间和群体内对总遗传变异的贡献率(表 ４)ꎮ 在总
的遗传变异中 １７.７％的变异发生在群体间ꎬ８２.３％
的变异发生在群体内ꎬ说明小麦孢囊线虫的遗传变
异主要发生在群体内ꎬ群体间和群体内变异极显著
(Ｐ<０.００１)ꎮ
２.３.４ 聚类分析 用 ＮＴＳＹＳ￣ｐｃ２.１ 对 １０ 个群体
的 ２７ 个地理种群进行 ＵＰＧＭＡ聚类分析(图 ４)ꎬ
结果表明ꎬ种群间的相似系数介于 ０. ６０ ~ ０. ９４
之间ꎬ平均为 ０.７７ꎮ 在遗传相似系数为 ０.６５ 的水
平上ꎬ２７ 个种群可以聚为 ３ 类ꎮ 聚类结果显示ꎬ
德州、滨州的全部种群及潍坊、聊城、淄博、菏泽
的部分种群聚集为第一类ꎬ威海、青岛、枣庄的全
部种群、烟台的大部分种群及潍坊、菏泽、聊城、
淄博的部分种群聚集为第二类ꎬ烟台、菏泽及潍
坊的部分种群聚集为第三类ꎮ 分析结果表明ꎬ威
海、青岛、德州、枣庄和滨州群体的不同种群均能
聚集在一起ꎬ而潍坊、烟台、聊城、菏泽、淄博群体
间的种群出现了较大的分化ꎬ聚集在不同的分组
内ꎮ 聚类结果也同样说明了不同群体间的遗传
关系远近与地理距离无显著相关性ꎬ与 Ｍａｎｔｅｌ 检
测结果一致ꎮ
Ｔａｂｌｅ ３ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ ｉｎｄｅｘ ａｍｏｎｇ １０ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ
Ｇｒｏｕｐ Ｗｅｉｆａｎｇ Ｗｅｉｈａｉ Ｚａｏｚｈｕａｎｇ Ｈｅｚｅ Ｚｉｂｏ Ｑｉｎｇｄａｏ Ｙａｎｔａｉ Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ Ｄｅｚｈｏｕ Ｂｉｎｚｈｏｕ
Ｗｅｉｆａｎｇ ∗∗∗∗ ０.８１８ ８ ０.７００ ９ ０.８５７ ７ ０.８４３ ９ ０.８４５ ５ ０.８７６ １ ０.８６４ １ ０.９０３ ６ ０.７９８ ２
Ｗｅｉｈａｉ ０.１９９ ９ ∗∗∗∗ ０.７６４ ５ ０.８３７ ８ ０.８００ ８ ０.７４６ ０ ０.８３７ ４ ０.８１２ ４ ０.８０３ １ ０.７８１ １
Ｚａｏｚｈｕａｎｇ ０.３５５ ４ ０.２６８ ５ ∗∗∗∗ ０.８１２ ０ ０.８１４ ５ ０.８４１ ８ ０.７６０ ６ ０.７５５ ３ ０.６６７ ６ ０.７１８ １
Ｈｅｚｅ ０.１５３ ５ ０.１７６ ９ ０.２０８ ２ ∗∗∗∗ ０.８９４ ０ ０.８３７ ６ ０.９１１ ４ ０.９１０ ３ ０.８３０ ７ ０.８４７ ３
Ｚｉｂｏ ０.１６９ ８ ０.２２２ １ ０.２０５ ２ ０.１１２ １ ∗∗∗∗ ０.８３４ ６ ０.８４０ ８ ０.８９３ ８ ０.７９８ ２ ０.７９６ ２
Ｑｉｎｇｄａｏ ０.１６７ ８ ０.２９３ ０ ０.１７２ ２ ０.１７７ ２ ０.１８０ ９ ∗∗∗∗ ０.８４４ ９ ０.８４６ ３ ０.７７０７ ０.７７１ ５
Ｙａｎｔａｉ ０.１３２ ３ ０.１３５ ４ ０.２７３ ６ ０.０９２ ７ ０.１７３ ４ ０.１６８ ６ ∗∗∗∗ ０.８６５ ０ ０.８３６ ０ ０.８３２ ０
Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ ０.１４６ １ ０.２０７ ８ ０.２８０ ６ ０.０９３ ９ ０.１１２ ３ ０.１６６ ９ ０.１４５ ０ ∗∗∗∗ ０.８８８ ９ ０.８７９ １
Ｄｅｚｈｏｕ ０.１０１ ４ ０.２１９ ３ ０.４０４ １ ０.１８５ ５ ０.２２５ ４ ０.２６０ ５ ０.１７９ １ ０.１１７ ８ ∗∗∗∗ ０.８６５ ５
０.２２５ ４ ０.２４７ ０ ０.３３１ １ ０.１６５ ７ ０.２２７９ ０.２５９ ５ ０.１８３ ９ ０.１２８ ９ ０.１４４ ４ ∗∗∗∗
Ｎｏｔｅ: Ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｔｙ (ａｂｏｖｅ ｄｉａｇｏｎａｌ) ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ (ｂｅｌｏｗ ｄｉａｇｏｎａｌ) .
Ｔａｂｌｅ ４ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｖａｒｉａｎｃｅ (ＡＭＯＶＡ) ｏｆ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ １０ ｇｒｏｕｐｓ
Ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｄｆ ＳＳ Ｖａｒｉａｎｃｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｎｃｅ / ％ Ｐ∗
Ａｍｏｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ９ １０２.１７ １.５５ １７.７ <０.００１
Ｗｉｔｈｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ １７ １２２.５０ ７.２１ ８２.３ <０.００１
Ｎｏｔｅ: Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｗｅｒｅ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ １０００ ｐｅｒｍｕｔｅｄ ｓａｍｐｌｅｓ.
２３３
３期 丁海燕ꎬ等:山东省小麦禾谷孢囊线虫 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列特征和基于 ＩＳＳＲ的遗传多样性分析
Ｆｉｇ. ４ Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ ｏｆ ＵＰＧＭＡ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｎｅｉ’ｓ ｕｎｂｉａｓｅｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ
ｏｆ ｔｈｅ ２７ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｆｒｏｍ １０ ｇｒｏｕｐｓ
３ 结论与讨论
小麦禾谷孢囊线虫在山东省 １７ 地市均有发
生[６~８]ꎬ从系统发育树的结果上可以看出ꎬ山东省
３４个小麦禾谷孢囊线虫群体与 Ｈ. ａｖｅｎａｅ ｃｏｍｐｌｅｘ
[３１]处于同一个大的进化分支簇ꎬ说明山东省禾谷
孢囊线虫群体均为 Ｈ. ａｖｅｎａｅ ｃｏｍｐｌｅｘ 成员ꎮ 山东
省 Ｈ. ａｖｅｎａｅ群体除与中国 Ｈ. ａｖｅｎａｅ 群体遗传关
系较近外ꎬ还与 Ｈ. ｐｒａｔｅｎｓｉｓ、Ｈ. ａｕｓｔｒａｌｉｓ 遗传关系
较近ꎬＳｕｂｂｔｉｏｎ等[３１]的研究结果表明ꎬ中国 Ｈ. ａｖｅ￣
ｎａｅ群体与 Ｈ. ｐｒａｔｅｎｓｉｓ 在形态和分子水平上较为
相似ꎬ但寄主范围差异较大ꎮ 分析线虫的 ＩＴＳ区有
很多优势ꎬ在样品数量较少时可以快速的鉴定线
虫ꎬ但依据 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ所建基因树的拓扑结构不完
全等同于物种树ꎬ因此还需要与形态学特征、ＲＦＬＰ
图谱特征及 ２８Ｓ ｒＤＮＡ￣Ｄ２ / Ｄ３ 区特征等相结合ꎬ
以便快速、准确地鉴定线虫种类ꎮ
多态性位点百分率(Ｐ)可以反应群体的遗传
多样性ꎬＰ>５０％为高度多态性ꎬ２５％<Ｐ≤５０％为中
度多态性ꎬＰ≤２５％为低度多态性[３２]ꎮ 本研究中山
东省的 １０ 个群体平均多态性位点百分率为
４２.９％ꎬ属于中度多态性ꎮ Ｈｕａｎｇ 等[２２]指出ꎬ孢囊
线虫的繁殖方式和地理因素的差异是造成群体遗
传多样性增加的主要因素ꎮ 小麦禾谷孢囊线虫在
中国至少存在 ３种不同的致病型ꎬ不同致病型的杂
交会使得遗传多样性大大增加ꎻ禾谷孢囊线虫可以
通过土壤、水流和风传播ꎬ同时也可以通过农机和
人畜携带进行传播ꎬ远距离传播使不同地区间的孢
囊线虫进行基因交流ꎬ也可提高遗传多样性[３３]ꎻ环
境与气候条件也是影响生物遗传多样性的一个重
要因素[３４]ꎬ禾谷孢囊线虫群体的遗传多样性还可
能与海拔、年降雨量、年平均气温等诸多因素有关ꎬ
当然ꎬ这还需要进一步的研究和探讨ꎮ
群体遗传学理论规定ꎬ无论群体大小ꎬ若基因
流 Ｎｍ<１ꎬ遗传漂变就会成为影响群体遗传分化的
主要因素ꎬ若 Ｎｍ≥１ꎬ遗传漂变就不是影响群体间
分化的主要因素[３５]ꎮ １０ 个群体间的 Ｎｍ 值为
０.６０６ ４ꎬ表明遗传漂变是影响群体分化的主要因
素ꎬＭａｎｔｅｌ 检测结果表明群体间的遗传距离与地
理距离无显著相关性ꎮ ＡＭＯＶＡ 方差分析显示ꎬ
１７.７％的变异发生在群体间ꎬ８２.３％的变异发生在
群体内ꎬ这说明遗传变异主要还是存在于群体内
部ꎮ 除了遗传漂变影响遗传分化外ꎬ地理隔离和生
境选择的差异都会引起群体间的变异和分化[３６]ꎮ
聚类分析将所有种群划分为 ３个类群ꎬ部分相
近的种群可以聚集到一起ꎬ但是也有很多相隔较近
的种群聚不到一起ꎬ而与其相隔较远的种群聚到一
个类群里ꎮ 聚类图没有明显的规律性ꎬ很可能是由
３３３
植物病理学报 ４５卷
于小麦禾谷孢囊线虫传播途径的多样性、复杂性和
偶然性所导致的ꎮ Ｚｈａｏ等[７]依据该病害在山东省
的发生情况得出小麦禾谷孢囊线虫在山东省自西
向东传播ꎬ但是在传播过程中又会受到很多因素影
响ꎬ因此它的传播并非连续性的ꎬ而是跳跃性的ꎬ这
也是山东省小麦禾谷孢囊线虫遗传多样性较高的
原因之一ꎮ
小麦孢囊线虫病是积年流行病害ꎬ具有逐年加
重的特性ꎬ且山东省不同地区很可能存在不同的致
病型类群ꎬ其致病力和毒性表现也有很大差异ꎬ这就
给防治工作带来了困难和挑战[３２]ꎮ 研究山东省小
麦禾谷孢囊线虫的遗传多样性ꎬ分析其种群间和种
群内的遗传学关系ꎬ可以为禾谷孢囊线虫在山东省
的发生流行和防治提供理论依据ꎮ 本实验研究了山
东省 １０个地市 ２７ 个种群的遗传多样性ꎬ虽然具有
一定的代表性ꎬ但还不够全面ꎬ因此需要对其余 ７个
地区群体的遗传多样性做进一步系统的研究ꎮ
参考文献
[１] Ｎｉｃｏｌ Ｊ Ｍꎬ Ｒｉｖｏａｌ Ｒ. Ｇｌｏｂａｌ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｌｉ￣
ｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ
ｎｅｍａｔｏｄｅｓ ｏｎ ｗｈｅａｔ [Ａ] . Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ａｎｄ
Ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ａｎｄ Ｇｒａｉｎ Ｃｒｏｐｓ Ｎｅｍａｔｏｄｅｓ
[Ｍ] . Ｂｅｒｌｉｎ: Ｓｐｒｉｎｇｅｒꎬ ２００８ꎬ ２５１－２９４.
[２] Ｐｅｎｇ Ｄ Ｌꎬ Ｌｉ Ｈ Ｘꎬ Ｗａｎｇ Ｘ Ｆꎬ ｅｔ ａｌ. Ｎｅｗ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ
ｏｆ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ (Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ) ｉｎ Ｃｈｉｎａ
( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｃ] . Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｃｈｉｎａ (中
国线虫学研究)ꎬ ２００８ꎬ ２: ３４４－３４５.
[３] Ｈｏｕ Ｓ Ｙꎬ Ｗａｎｇ Ａ Ｌꎬ Ｚｈａｎｇ Ｇꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｅｒｅａｌ
ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｏｎ ａｇｒｏｎｏｍｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｙｉｅｌｄ
ｌｏｓｓｅｓ ｏｆ ｓｐｒｉｎｇ ｗｈｅａｔ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ(农学学报)ꎬ ２０１２ꎬ ２ (８): ３３－３６.
[４] Ｌｉ Ｘ Ｈꎬ Ｌｉｕ Ｙ Ｅꎬ Ｗｅｉ Ｚꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
Ｈｅｔｅｂｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃｅｒｅａｌ ｆｉｅｌｄ ｉｎ ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ
ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ｔｉｂｅｔ ａｎｄ Ｘｉｎｊｉａｎｇ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｃ] .
Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｃｈｉｎａ (中国线虫学研究)ꎬ
２０１２ꎬ ４: １６４－１６５.
[５] Ｌｉｕ Ｗ Ｚꎬ Ｌｉｕ Ｘ Ｙꎬ Ｌｕａｎ Ｚ Ｊ. Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ Ｗｏｌｌｅｎｗｅｂｅｒꎬ １９２４ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｗｈｅａｔ
ｆｉｅｌｄ ｉｎ Ｈｅｚｅ ｃｉｔｙ ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ)
[Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌａｉｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ(莱阳农
学院学报)ꎬ ２００５ꎬ ２２(４): ２６６－２６９.
[６] Ｙａｎｇ Ｙ Ｙꎬ Ｚｈａｏ Ｈ Ｈꎬ Ｐｅｎｇ Ｄ Ｌ. Ｎｅｗ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ
ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｏｎ ｗｈｅａｔ ｉｎ Ｓｈａｎｄｏｎｇ
ｐｒｏｖｉｎｃｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｑｉｎｇｄａｏ Ａｇｒｉ￣
ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (青岛农业大学学报)ꎬ ２０１０ꎬ ２７
(１): １７－２０.
[７] Ｚｈａｏ Ｈ Ｈꎬ Ｙａｎｇ Ｙ Ｙꎬ Ｐｅｎｇ Ｄ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ｎｅｗ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ
ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｏｎ ｗｈｅａｔ ｉｎ Ｓｈａｎｄｏｎｇ
ｐｒｏｖｉｎｃｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｑｉｎｇｄａｏ Ａｇｒｉ￣
ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (青岛农业大学学报)ꎬ ２０１１ꎬ ２８
(４): ２６１－２６６.
[８] Ｌｉｕ Ｃ Ｊꎬ Ｈｕａｎｇ Ｗ Ｋꎬ Ｃｕｉ Ｊ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ. Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ
ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｉｎ Ｓｈａｎ￣
ｄｏｎｇ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕａｚｈｏｎｇ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (华中农业大学学报)ꎬ ２０１３ꎬ
３２(５): ５５－６０.
[９] Ｙｕａｎ Ｈ Ｘꎬ Ｈｏｕ Ｘ Ｓꎬ Ｆｕ Ｂꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ
ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｆｒｏｍ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｈｅｎａｎ
ａｎｄ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｈｅｂｅｉꎬ Ｃｈｉｎａ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ａｃｔａ
Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ (植物病理学报)ꎬ ２０１２ꎬ ４２
(２): ２１９－２２４.
[１０] Ｚｈａｏ Ｊꎬ Ｚｈａｎｇ Ｇ Ｑꎬ Ｎｉｕ Ｘ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ
ＲＦＬＰ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ
ｎｅｍａｔｏｄｅ ｏｎ ｗｈｅａｔ ｆｒｏｍ Ｓｈａｎａｎｘｉ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ( ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ (植物病
理学报)ꎬ ２０１１ꎬ ４１(６): ５６１－５６９.
[１１] Ｓａｂｏ Ａꎬ Ｖｏｖｌａｓ Ｎꎬ Ｆｅｒｒｉｓ Ｖ Ｒ. Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎ￣
ｓｈｉｐｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ ｄａｔａ ｆｏｒ ｆｏｕｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ
ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｉｔａｌｙ ａｎｄ ｏｎｅ ｆｒｏｍ Ｓｙｒｉａ [ Ｊ] .
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙꎬ ２００１ꎬ ３３(４): １８３－１９０.
[１２] Ｓｕｂｂｏｔｉｎ Ｓ Ａꎬ Ｗａｅｙｅｎｂｅｒｇｅ Ｌꎬ Ｍｏｅｎｓ Ｍ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｓｔ ｆｏｒｍｉｎｇ ｎｅｍａｔｏｄｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｕｓ Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ
(Ｎｅｍａｔｏｄａ: Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒｉｄａｅ) ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｒｉｂｏｓｏｍａ
ＤＮＡ￣ＲＦＬＰ [Ｊ] . Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙꎬ ２０００ꎬ ２(２): １５３－１６４.
[１３] Ｓｕｂｂｏｔｉｎ Ｓ Ａꎬ Ｗａｅｙｅｎｂｅｒｇｅ Ｌꎬ Ｍｏｌｏｋａｎｏｖａ Ｉ Ａꎬ ｅｔ
ａｌ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ ｇｒｏｕｐ ｓｐｅｃｉｅｓ
ｂｙ ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃｓ ａｎｄ ＤＮＡ￣ＲＦＬＰｓ [Ｊ] . Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙꎬ
１９９９ꎬ １(３): １９５－２０７.
[１４] Ｚｈｅｎｇ Ｊ Ｗꎬ Ｓｕｂｂｏｔｉｎ Ｓ Ａꎬ Ｗａｅｙｅｎｂｅｒｇｅ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ.
４３３
３期 丁海燕ꎬ等:山东省小麦禾谷孢囊线虫 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列特征和基于 ＩＳＳＲ的遗传多样性分析
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ
ｇｌｙｃｉｎｅｓ ａｎｄ Ｈ.ａｖｅｎａｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＲＦＬＰｓ ａｎｄ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｒＤＮＡ－ＩＴＳ ｒｅｇｉｏｎｓ [ Ｊ] . Ｒｕｓｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙꎬ ２０００ꎬ ８(２): １０９－１１３.
[１５] Ｏｕ Ｓ Ｑꎬ Ｐｅｎｇ Ｄ Ｌꎬ Ｌｉｕ Ｙ. Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｒｅａｌ
ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅꎬ Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] .
Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ(植物保护)ꎬ ２００８ꎬ３４(６): ７－１１.
[１６] Ｗａｎｇ Ｘꎬ Ｌｉａｎｇ Ｚ Ｗꎬ Ｐｅｉ Ｓ Ａꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒＤＮＡ－ＩＴＳ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅｓ
ｏｎ ｗｈｅａｔ ｆｒｏｍ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] .
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｊｉｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ(南京农业
大学学报) ꎬ ２０１０ꎬ３３(６): ５５－６２.
[１７] Ｃｈｅｎｇ Ｆ Ｘꎬ Ｃｈｅｎｇ Ｘ Ｙꎬ Ｘｉｅ Ｂ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ. Ｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｆｏｒ
ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｉｎｅ ｗｏｏｄ ｎｅｍａｔｏｄｅ
(Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ ｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ) ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ａｃｔａ
Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ (植物病理学报)ꎬ ２００５ꎬ ３５
(５): ４１０－４１９.
[１８] Ｂｌａｉｒ Ｍ Ｗꎬ Ｐａｎａｕｄ Ｏꎬ ＭｃＣｏｕｃｈ Ｓ Ｒ. Ｉｎｔｅｒ － ｓｉｍｐｌｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅａｔ ( ＩＳＳＲ) ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ
ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍｏｔｉｆ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ａｎｄ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ｉｎ ｒｉｃｅ
(Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ.) [ Ｊ] . Ｔｈｅｏｒ. Ａｐｐｌ. Ｇｅｎｅｔ.ꎬ１９９９ꎬ
９８: ７８０－７９２.
[１９] Ｈｕａｎｇ Ｊ Ｃꎬ Ｓｕｎ Ｍ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ
ｏｆ ｓｗｅｅｔｐｏｔａｔｏ ａｎｄ ｉｔｓ ｗｉｌｄ ｒｅｌａｔｉｖｅｓ ｉｎ Ｉｐｏｍｏｅａ ｓｅｒｉｅｓ
Ｂａｔａｔａ (Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌａｃｅａｅ) ａｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｉｎｔｅｒ￣ｓｉｍｐｌｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅａｔ ( ＩＳＳＲ) ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ
ＤＮＡ [ Ｊ] . Ｔｈｅｏｒ. Ａｐｐｌ. Ｇｅｎｅｔ.ꎬ ２０００ꎬ １００: １０５０ －
１０６０.
[２０] Ｄｉｒｌｅｗａｎｇｅｒ Ｅꎬ Ｐｒｏｎｉｅｒ Ｖꎬ Ｐａｒｖｅｒｙ Ｃꎬ ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｌｉｎｋａｇｅ ｍａｐ ｏｆ ｐｅａｃｈ [Ｐｒｕｎｕｓ ｐｅｒｓｉｃａ (Ｌ) . Ｂａｔｓｃｈ]
ｕｓｉｎｇ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ [ Ｊ ] .
Ｔｈｅｏｒ. Ａｐｐｌ. Ｇｅｎｅｔ.ꎬ １９９８ꎬ ９７: ８８８－８９５.
[２１] Ｇｉｌｂｅｒｔ Ｊ Ｅꎬ Ｌｅｗｉｓ Ｒ Ｖꎬ Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ Ｍ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ.
Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ａｎ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ [ Ｊ] . Ｔｈｅｏｒ.
Ａｐｐｌ. Ｇｅｎｅｔ.ꎬ １９９８ꎬ ９８: １１２５－１１３１.
[２２] Ｈｕａｎｇ Ｗ Ｋꎬ Ｙｅ Ｗ Ｘꎬ Ｊｉａｎｇ Ｈ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｖａｒｉａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ ｗｏｌｌｅｎｗｅｂｅｒ
(ｎｅｍａｔｏｄａ: ｈｅｔｅｒｏｄｅｒｉｄａｅ) ｕｓｉｎｇ ＩＳＳＲ ｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ＩＴＳ
－ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ [ Ｊ] . Ａｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙꎬ
２０１２ꎬ １(１): １－１２.
[２３] Ｐｅｎｇ Ｄ Ｌꎬ Ｚｈａｎｇ Ｄ Ｓꎬ Ｑｉ Ｓ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐｅｒｉｏｄ ａｎｄ
ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ( ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ (植物保护)ꎬ １９９３ꎬ
１９(６): ４８.
[２４] Ｐｅｎｇ Ｄ Ｌꎬ Ｓｕｂｂｏｔｉｎ Ｓ Ａꎬ Ｍｏｅｎｓ Ｍ. ｒＤＮＡ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ
ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ ｉｎ
Ｃｈｉｎａ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ
(植物病理学报)ꎬ ２００３ꎬ ３３(４): ３２３－３２９.
[２５] Ｔｉｋｕｎｏｖ Ｙｕ Ｍꎬ Ｋｈｒｕｓｔａｌｅｖａ Ｌ Ｉꎬ Ｋａｒｌｏｖ Ｇ Ｉ. Ａｐｐｌｉｃａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ＩＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｕｓ Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ [ Ｊ] .
Ｅｕｐｈｙｔｉｃａꎬ ２００３ꎬ １３１: ７１－８０.
[２６] Ｚｉｅｔｋｉｅｗｉｃｚ Ｅꎬ Ｒａｆａｌｓｋｉ Ａꎬ Ｌａｂｕｄａ Ｄ. Ｇｅｎｏｍｅ ｆｉｎｇｅｒ￣
ｐｒｉｎｔｉｎｇ ｂｙ ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅａｔ ( ＳＳＲ) ￣ａｎｃｈｏｒｅｄ
ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ [Ｊ] . Ｇｅｎｏｍｅꎬ
１９９４ꎬ ２０: １７６－１８３.
[２７] Ｌａｘ Ｐꎬ Ｒｏｎｄａｎ Ｄｕｅｎａｓ Ｊ Ｃꎬ Ｇａｒｄｅｎａｌ Ｃ Ｎꎬ ｅｔ ａｌ.
Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ
Ｎａｃｏｂｂｕｓ ａｂｅｒｒａｎｓ (Ｔｈｏｒｎｅꎬ １９３５) Ｔｈｏｒｎｅ ＆ Ａｌｌｅｎꎬ
１９４４(Ｎｅｍａｔｏｄａ:Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｉｄａｅ) ｆｒｏｍ Ａｒｇｅｎｔｉｎａ [ Ｊ] .
Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙꎬ ２００７ꎬ ９(２): ２６１－２０７.
[２８] Ｌａｂａｔｅ Ｊ Ａ. Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｆｏｒ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ｄａｔａ [ Ｊ] . Ｃｒｏｐ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ２０００ꎬ ４０:
１５２１－１５２８.
[２９] Ｅｘｃｏｆｆｉｅｒ Ｌꎬ Ｓｍｏｕｓｅ Ｐꎬ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｊ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕ￣
ｌａｒ ｖａｒｉａｎｃｅ ｉｎｆｅｒｒｅｄ ｆｒｏｍ ｍｅｔｒｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ａｍｏｎｇ ＤＮＡ
ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ: ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｈｕｍａｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ
ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｄａｔａ [Ｊ] . Ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ １９９２ꎬ １３１: ４７９－４９１.
[３０] Ｌｉｕ Ｙ Ｇꎬ Ｑｉ Ｙ Ｈꎬ Ｌｉ Ｈ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｏｆ
Ｍｙｚｕｓ ｐｅｒｉｓｉｃａｅ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
ｉｎ Ｇａｎｓｕ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ｓｃｉｅｎｔｉａ Ａｇｒｉｃｕｌ￣
ｔｕｒａ Ｓｉｎｉｃａ (中国农业科学)ꎬ ２０１０ꎬ ４３(１５): ３１３４－
３１４２.
[３１] Ｓｕｂｂｏｔｉｎ Ｓ Ａꎬ Ｓｔｕｒｈａｎ Ｄꎬ Ｒｕｍｐｅｎｈｏｒｓｔ Ｈ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ.
Ｍｕｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｃｏｍｐｌｅｘ ( Ｔｙｌｅｎｃｈｉｄａ:
Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒｉｄａｅ) [Ｊ] . Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙꎬ ２００３ꎬ ５(４): ５１５－
５３８.
５３３
植物病理学报 ４５卷
[３２] Ｂｏｔｓｔｅｉｎ Ｄꎬ Ｗｈｉｔｅ Ｒ Ｌꎬ Ｓｋｏｌｎｉｃｋ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ. Ｃｏｎｓｔｒｕｃ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｇｅｎｅｔｉｃ ｌｉｎｋａｇｅ ｍａｐ ｉｎ ｍａｎ ｕｓｉｎｇ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ
ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ [Ｊ] . Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ １９８０ꎬ ３２(３): ３１４－３３１.
[３３] Ｗａｎｇ Ｔꎬ Ｑｉ Ｒ Ｄꎬ Ｗｕ Ｘ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ. Ａ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｔｕｄｙ
ｏｎ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｗａｙｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｒｅａｌ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ (植物保护)ꎬ ２０１２ꎬ ３８
(１): ９８－１００.
[３４] Ｈｕｇｈｅｓ Ａ Ｒꎬ Ｉｎｏｕｙｅ Ｂ Ｄꎬ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｍ Ｔꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｃｏ￣
ｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ [ Ｊ] . Ｅｃｏｌｏｇｙ
Ｌｅｔｔｅｒｓꎬ ２００８ꎬ １１(６): ６０９－６２３.
[３５] Ｗａｌｋｅｒ Ｃ Ｗꎬ Ｖｉｌａ Ｃꎬ Ｌａｎｄａ Ａ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ ｗｏｌｖｅｒｉｎｅ (Ｇｕｌｏ
ｇｕｌｏ) ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ [Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｃｏｌｏｇｙꎬ ２００１ꎬ １０:
５３－６３.
[３６] Ｂａｉｌｌｅ Ｄꎬ Ｂａｒｒｉｅｒｅ Ａꎬ Ｆｅｌｉｘ Ｍ Ａ. Ｏｓｃｈｅｉｕｓ ｔｉｐｕｌａｅꎬ
ａ ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ ｈｅｒｍａｐｈｒｏｄｉｔｉｃ ｓｏｉｌ ｎｅｍａｔｏｄｅꎬ ｄｉｓｐｌａｙｓ
ａ ｈｉｇｈｅｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ｔｈａｎ Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｃｏｌｏｇｙꎬ
２００８ꎬ １７: １５２３－１５３４.
责任编辑:曾晓葳
欢迎订阅«植物病理学报»
«植物病理学报»是中国植物病理学会主办的全国性学术刊物ꎬ“中国科技核心期刊”ꎮ 主要刊登
植物病理学各分支未经发表的专题评述、研究论文和研究简报等ꎬ以反映中国植物病理学的研究水平
和发展方向ꎬ推动学术交流ꎬ促进研究成果的推广和应用ꎮ
本刊现已被英国农业与生物技术文摘(ＣＡＢ)、联合国粮农组织 ＡＧＲＩＳ 等收录ꎮ 据«中国科技期
刊引证报告»(２０１４年版)统计结果ꎬ«植物病理学报»影响因子 ０.８３２ꎮ 荣获首届«中国学术期刊检索
与评价数据规范»(ＣＡＪ￣ＣＤ)执行优秀期刊奖、２０１２ 中国国际影响力优秀学术期刊奖和 ２０１３ 百种中
国杰出学术期刊奖ꎮ
本刊为双月刊ꎬ每期定价 ３０元ꎬ全年 ６期共 １８０元ꎮ
邮发代号: ８２￣２１４ꎮ 欢迎投稿ꎬ欢迎订阅ꎮ
编辑部地址: 北京市海淀区圆明园西路 ２号 中国农业大学植保楼 ４０６室
邮编: １００１９３
电话: (０１０) ６２７３ ２３６４
Ｅ￣ｍａｉｌ:ｚｗｂｌｘｂ＠ ｃａｕ.ｅｄｕ.ｃｎꎮ
６３３