全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４６(１): １７￣２６(２０１６)
收稿日期: ２０１５￣０６￣０１ꎻ 修回日期: ２０１５￣０８￣２６
基金项目: 教育部高等学校博士学科点专项科研基金(２０１２００９７１２００１０)
通讯作者: 张海峰ꎬ副教授ꎬ主要从事植物病原真菌分子生物学研究ꎻＴｅｌ:０２５￣８４３９６４３６ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｈｆｚｈａｎｇ＠ｎｊａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ
第一作者: 刘秀ꎬ 女ꎬ硕士研究生ꎬ主要从事植物病原真菌分子生物学研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:２０１２１０２０４９＠ｎｊａｕ.ｅｄｕ.ｃｎꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１６.０１.００３
ＧＴＰ酶激活蛋白 ＭｏＧｃｓ１参与调控稻瘟病菌的
无性繁殖ꎬ附着胞分化及对外界胁迫的应答
刘 秀ꎬ张海峰∗ꎬ张正光ꎬ郑小波
(南京农业大学植物保护学院 /农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室ꎬ南京 ２１００９５)
摘要:稻瘟病菌(Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ)引起的稻瘟病是水稻上的一种毁灭性真菌病害ꎬ每年导致的稻谷产量损失可养活 ６
千万人口ꎮ 从分子水平了解该病菌的致病机理ꎬ对新型药剂靶标的挖掘和病害防控策略的制定具有重要的理论和实践指
导意义ꎮ 生物体存在两类 ＧＴＰ结合蛋白ꎬ一类是异三聚体 Ｇ蛋白ꎬ另一类是小 Ｇ蛋白ꎮ 小 Ｇ蛋白分子量为 ２０~ ３０ ＫＤꎬ具
有 ＧＴＰ酶活性ꎬ在多种细胞反应中具有分子开关作用ꎮ 小 Ｇ 蛋白结合 ＧＴＰ 时被激活ꎬ可作用于下游分子使之活化ꎮ 当
ＧＴＰ水解成为 ＧＤＰ时ꎬ则恢复为非活化状态ꎮ 细胞中存在一些专门控制小 Ｇ蛋白活性的调节因子ꎬ如鸟嘌呤核苷酸交换
因子(ｇｕａｎｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｆａｃｔｏｒꎬＧＥＦ)和 ＧＴＰ 酶激活蛋白(ＧＴＰａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎꎬ ＧＡＰ)ꎮ ＧＥＦ 能够催化 ＧＴＰ
的转换ꎬ而 ＧＡＰ的作用是加速 ＧＴＰ的水解ꎬ使小 Ｇ蛋白向失活的状态转变ꎮ 本研究在稻瘟病菌中鉴定到一个 ＧＡＰ 蛋白
ＭｏＧｃｓ１ꎬ并对该蛋白编码基因的生物学功能进行了研究ꎮ 对 ＭｏＧＣＳ１ 基因进行敲除突变发现ꎬΔＭｏｇｃｓ１ 突变体产孢量显
著下降ꎬ分生孢子形态异常ꎬ且附着胞形成加快ꎬ但突变体的营养生长和致病能力与野生型比较无明显变化ꎮ 进一步研究
发现ꎬ突变体对外界盐胁迫敏感性升高ꎬ对细胞壁胁迫敏感性降低ꎮ 上述结果表明ꎬＭｏＧｃｓ１是稻瘟病菌生长发育过程中一
个重要的蛋白ꎬ参与调控病菌的无性繁殖、附着胞分化及对外界胁迫的应答ꎮ
关键词:小 Ｇ蛋白ꎻＧＡＰꎻ无性繁殖ꎻ附着胞分化ꎻ胁迫应答
ＧＴＰａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ＭｏＧｃｓ１ ｉｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆｏｒ ａｓｅｘｕａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬ ａｐｐｒｅｓｓｏ￣
ｒｉｕｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ｂｌａｓｔ ｆｕｎｇｕｓ Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ
ｏｒｙｚａｅ　 ＬＩＵ Ｘｉｕꎬ ＺＨＡＮＧ Ｈａｉ￣ｆｅｎｇꎬ ＺＨＡＮＧ Ｚｈｅｎｇ￣ｇｕａｎｇꎬ ＺＨＥＮＧ Ｘｉａｏ￣ｂｏ　 (Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ /
Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｒｏｐ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｐｅｓｔ Ｉｎｓｅｃｔｓꎬ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｎａｎｊｉｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００９５ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｒｉｃｅ ｂｌａｓｔꎬ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅꎬ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｄｅｖａｓｔａｔｉｎｇ ｆｕｎｇａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｒｉｃｅ
ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ. Ｉｎ ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓꎬ ｔｈｅｒｅ ａｒｅ ｔｗｏ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ＧＴＰ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓꎬ ｏｎｅ ｉｓ ｈｅｔｅｒｏｔｒｉｍｅｒｉｃ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎꎬ ａｎｄ ｔｈｅ
ｏｔｈｅｒ ｉｓ ｓｍａｌｌ ＧＴＰａｓｅ ｐｒｏｔｅｉｎ. Ｓｍａｌｌ ＧＴＰａｓｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｈａｖｅ ＧＴＰａｓｅ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ
２０~３０ ＫＤꎬ ａｎｄ ｐｌａｙ ａｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｗｉｔｃｈ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ. Ｓｍａｌｌ ＧＴＰａｓｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｒｅ ａｃｔｉｖｅ ｗｈｅｎ
ｂｏｕｎｄ ｔｏ ＧＴＰ ａｎｄ ｃａｎ ｔｈｕｓ ａｃｔｉｖａｔｅ ｔｈｅ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｐｒｏｔｅｉｎｓ. Ｗｈｅｎ ＧＴＰ ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｓ ｔｏ ＧＤＰꎬ ｓｍａｌｌ ＧＴＰａｓｅ ｐｒｏ￣
ｔｅｉｎ ｒｅｔｕｒｎｓ ｔｏ ｉｔｓ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｓｔａｔｕｓ. Ｔｈｅｒｅ ａｒｅ ｍａｎｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｓｕｃｈ ａｓ ＧＥＦ ａｎｄ ＧＡＰꎬ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ
ｓｍａｌｌ ＧＴＰａｓｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ ｗｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ａ ＧＡＰ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ Ｍ.
ｏｒｙｚａｅꎬ ｎａｍｅｄ ＭｏＧｃｓ１. Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｇｅｎｅ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ＭｏＧＣＳ１ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＭｏＧＣＳ１ ｐｌａｙｓ ｃｒｕｃｉａｌ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ａｓｅｘｕａｌ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬ ｃｏｎｉｄｉａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙꎬ ａｐｐｒｅｓｓｏｒｉｕｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓꎬ ｂｕｔ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｓｈｏｗｅｄ ｎｏ ｒｏｌｅｓ
ｉｎ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ＭｏＧｃｓ１ ｉｓ ａ ｋｅｙ ＧＡＰ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ｂｌａｓｔ ｆｕｎｇｕｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｓｍａｌｌ ＧＴＰａｓｅ ｐｒｏｔｅｉｎꎻＧＡＰꎻａｓｅｘｕａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎻ ａｐｐｒｅｓｓｏｒｉｕｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎꎻ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ

　
植物病理学报 ４６卷
中图分类号: Ｓ４３２.４４　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１６)０１￣００１７￣１０
　 　 稻瘟病菌(Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ)引起的稻瘟病
是水稻生产上最严重的病害之一ꎬ每年给水稻生产
造成 １０％~３０％的产量损失ꎬ严重威胁着全球的粮
食生产安全[１]ꎮ 由于稻瘟病菌全基因组测序的完
成及其遗传转化体系的易操作性ꎬ稻瘟病菌与水稻
互作研究已成为病原菌与植物互作的模式研究系
统[２]ꎮ 在自然界中ꎬ稻瘟病菌主要依靠分生孢子
完成其侵染循环ꎮ 分生孢子接触到水稻叶片时分
泌出黏性物质[３]ꎬ２ ｈ后萌发长出芽管ꎬ４ ｈ 后顶端
弯曲逐渐膨大形成附着胞ꎮ 附着胞随后形成黑色
素层ꎬ产生巨大膨压迫使侵入钉穿透寄主表皮细
胞ꎬ侵入钉在寄主细胞内扩展形成侵染菌丝ꎬ引起
水稻发病ꎮ 在合适的温度和湿度条件下ꎬ发病部位
可在 ３~５ ｄ 内产生分生孢子ꎬ从而完成整个病害
循环过程[４]ꎮ
细胞内物质转运对生物体的生长发育至关重
要ꎬ包括促进细胞膜、溶酶体等的形成ꎬ分泌蛋白
质、激素和神经递质并通过胞吞作用摄取外源分子
等[５]ꎮ 胞吞作用是普遍存在于酵母及哺乳动物中
的复杂的质膜运输过程ꎬ包括各种蛋白质及脂质激
酶、磷酸(脂)酶、信号分子的吸收和肌动蛋白骨架
的排列ꎮ 质膜蛋白、脂质及一些大分子物质在此过
程中通过胞内的囊泡运输被分配到早期内含体中ꎬ
随后在成熟的内含体及液泡中降解ꎬ或者作为一种
蛋白受体被重新利用[５]ꎮ 囊泡运输过程受多种蛋
白分子控制ꎬ其中包括 ＡＤＰ 核糖基化因子(ＡＤＰ￣
ｒｉｂｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒꎬＡＲＦ) [６]ꎮ 一般情况下ꎬＡＲＦ 是
由鸟嘌呤核苷酸交换因子( ｇｕａｎｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｅｘ￣
ｃｈａｎｇｅ ｆａｃｔｏｒꎬＧＥＦ)激活ꎬ将 ＧＤＰ 转化为 ＧＴＰꎬ激
活的 ＧＴＰ 酶与 ＳＮＡＲＥ( ｓｏｌｕｂｌｅ Ｎ￣ｅｔｈｙｌｍａｌｅｉｍｉｄｅ￣
ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ)蛋白及被运输的物质结
合形成复合体ꎬ向囊泡运输途径中的下一个部位转
移ꎮ 该复合体在运输过程中会被 ＧＴＰ酶激活蛋白
(ＧＴＰａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎꎬ ＧＡＰ)所稳定ꎮ 当复合
体达到一定数量后ꎬ相关细胞器质膜融合形成囊
泡ꎬ最后使 ＡＲＦ 重新返回到细胞质中[７]ꎮ 可见ꎬ
ＧＡＰ蛋白在囊泡运输过程中具有重要的调控作
用ꎮ 在酿酒酵母中ꎬＧＡＰ 蛋白 Ｇｃｓ１ 和 Ｇｌｏ３ 在高
尔基体向内质网的逆向运输过程中具有重要的作
用ꎮ 敲除突变 ＧＬＯ３导致细胞内的逆向运输受阻ꎬ
而敲除 ＧＣＳ１影响并不明显[８ꎬ ９]ꎮ 在稻瘟病菌中ꎬ
小 Ｇ蛋白 Ｒａｃ１参与调控产孢、分生孢子形态和致
病性[１０]ꎮ Ｃｄｃ４２ 参与调控孢子形态ꎬ附着胞分化
和对寄主的侵入过程[１１]ꎮ ＧＡＰ 蛋白 Ｒｇａ１ 在无性
繁殖和附着胞分化过程中具有重要的调控作
用[１２]ꎮ
本文对稻瘟病菌中的一个 ＧＡＰ 蛋白 ＭｏＧｃｓ１
的生物学功能进行了分析ꎮ 研究结果表明ꎬ
ＭｏＧｃｓ１参与调控病菌的无性繁殖、分生孢子形态
建成、附着胞分化及对外界胁迫的应答过程ꎮ 研究
结果有助于深入了解稻瘟病菌生长发育的分子机
理ꎬ同时对研究其它病原真菌 ＧＡＰ 蛋白的生物学
功能具有一定的借鉴意义ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 供试菌株
　 　 稻瘟病菌野生型菌株 Ｇｕｙ１１ 由本实验室保
存ꎬ敲除突变体 ΔＭｏｇｃｓ１ 及互补菌株 ΔＭｏｇｃｓ１ /
ＭｏＧＣＳ１由本研究获得ꎮ
１.２　 ＭｏＧｃｓ１蛋白结构域及系统发育树分析
　 　 根据酿酒酵母中的 Ｇｃｓ１序列在稻瘟病菌全基
因组数据库中(ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｂｒｏａｄ.ｍｉｔ. ｅｄｕ / ａｎｎｏｔａ￣
ｔｉｏｎ / ｇｅｎｏｍｅ / ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ＿ｇｒｉｓｅａ / Ｈｏｍｅ. ｈｔｍｌ)进行
Ｂｌａｓｔｐ分析ꎬ获得与其高度同源的 Ｇｃｓ１ 蛋白序列
(ＭＧＧ＿０１７４５)ꎮ 根据 ＭｏＧｃｓ１ 蛋白序列在 ＮＣＢＩ
(ｈｔｔｐ: / / ｂｌａｓｔ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ / Ｂｌａｓｔ.ｃｇｉ)数据库中获
得其他１０个物种的同源序列ꎬ利用Ｍｅｇａ５.０ Ｂｅｔａ[１３ꎬ１４]
软件对这些蛋白进行聚类分析生成系统进化树ꎮ 采
用 Ｓｍａｒｔ Ｓｅｒｖｅｒ(ｈｔｔｐ: / / ｓｍａｒｔ.ｅｍｂｌｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ.ｄｅ / )网
站对ＭｏＧｃｓ１蛋白进行结构域预测ꎮ
１.３　 ＭｏＧＣＳ１基因敲除载体构建及突变体鉴定
１.３.１ ＭｏＧＣＳ１ 敲除载体构建及原生质体转化　 根
据同源重组原理构建 ＭｏＧＣＳ１ 基因敲除载体ꎮ 以
野生型菌株 Ｇｕｙ１１ 为模板ꎬ分别利用引物 ＭＧＧ＿
０１７４５Ｆ１(Ｆ) / ＭＧＧ＿０１７４５Ｆ２(Ｒ)和 ＭＧＧ＿０１７４５Ｆ３
(Ｆ) / ＭＧＧ＿０１７４５ Ｆ４(Ｒ) (表 １)进行 ＰＣＲ 扩增基
因同源重组的上、下臂ꎬ回收纯化目的片段ꎮ 以回
收的片段为模板ꎬ利用引物 ＭＧＧ＿０１７４５Ｆ１(Ｆ) /
ＭＧＧ＿０１７４５Ｆ４ (Ｒ)进行 ｏｖｅｒ￣ｌａｐ ＰＣＲ 扩增ꎮ 将
８１

　
　 １期 刘 秀ꎬ等:ＧＴＰ酶激活蛋白 ＭｏＧｃｓ１参与调控稻瘟病菌的无性繁殖ꎬ附着胞分化及对外界胁迫的应答
ｏｖｅｒ￣ｌａｐ回收产物连接到 ｐＭＤ１９￣Ｔ ｓｉｍｐｌｅ ｖｅｃｔｏｒ
(ＴａＫａＲａꎬ Ｄａｌｉａｎꎬ Ｃｈｉｎａ) 并测序ꎬ获得 ｐＭＤ::
ＧＣＳ１质粒载体ꎮ 以质粒 ｐＣＢ１００３为模板ꎬ利用引
物 ＦＬ１１１１ ( Ｆ) / ＦＬ１１１２ (Ｒ)扩增抗性筛选基因
ＨＰＨꎮ 将扩增得到的片段克隆到质粒 ｐＭＤ::
ＧＣＳ１中ꎬ获得敲除载体 ｐＭＤ::ＧＣＳ１::ＨＰＨꎮ 以
测序正确的质粒为模板ꎬ利用引物 ＭＧＧ＿０１７４５Ｆ１
(Ｆ) / ＭＧＧ＿０１７４５Ｆ４(Ｒ)扩增出约 ３.４ ｋｂ的片段用
于稻瘟病菌的原生质体转化ꎬ转化方法参照 Ｄｏｕ
等的方法[１５]ꎮ
１.３.２　 ＭｏＧＣＳ１ 基因敲除突变体的筛选及验证　
提取具有潮霉素抗性的转化子基因组 ＤＮＡꎮ 以基
因组 ＤＮＡ 为模板ꎬ采用基因探针引物 ＭＧＧ ＿
０１７４５ＫＯ￣Ｆ(Ｆ) / ＭＧＧ＿０１７４５ＫＯ￣Ｒ(Ｒ)和臂外引
物 ＭＧＧ＿０１７４５ ＢＹ(Ｆ) / Ｈｐｈ(表 １)进行 ＰＣＲ 验
证ꎬ基因探针引物不能扩增出目的条带而臂外引物
可扩增出目的条带的转化子为候选敲除突变体ꎮ
对上述候选敲除突变体进一步进行 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ
ｂｌｏｔ分析:分别提取野生型菌株 Ｇｕｙ１１和候选敲除
突变体的基因组 ＤＮＡꎬ经限制性内切酶 Ｈｉｎｄ Ⅲ酶
切后进行凝胶电泳ꎬ分别以基因探针引物 ＭＧＧ＿
０１７４５ＫＯ￣Ｆ(Ｆ) / ＭＧＧ＿０１７４５ＫＯ￣Ｒ(Ｒ)和 ＨＰＨ 引
物 ＦＬ１１１１ / ＦＬ１１１２(表 １)的扩增片段为探针进行
Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析ꎮ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ操作过程参照罗
氏地高辛标记及检测试剂盒操作手册(Ｒｏｃｈｅ Ａｐ￣
ｐｌｉｅｄ ＳｃｉｅｎｃｅꎬＰｅｎｚｂｅｒｇꎬＧｅｒｍａｎｙ)ꎮ 以基因片段为
探针未能检测到条带ꎬ且以 ＨＰＨ 片段为探针能检
测到一条目标带的转化子即为基因成功敲除突
变体[１６]ꎮ
１.３.３　 ＭｏＧＣＳ１ 基因敲除突变体互补菌株的获得
设计 引 物 ＭＧＧ ＿ ０１７４５ＧＦＰ￣１ ( Ｆ ) 和 ＭＧＧ ＿
０１７４５ＧＦＰ￣２(Ｒ) (表 １)ꎬＰＣＲ 扩增包括 ＭｏＧＣＳ１
基因及其自身启动子序列在内的互补片段ꎮ 扩增
获得的 ＰＣＲ 产物经纯化后与 ＸｈｏⅠ线性化的
ｐＹＦ１１载体片段共转入酵母感受态细胞 ＸＫ￣１２５ꎬ
形成互补转化载体 ｐＹＦ１１::ＭｏＧＣＳ１ 并测序ꎮ 将
测序正确的载体转化到 ΔＭｏｇｃｓ１ 突变体的原生质
体中ꎬ对转化子进行抗生素(博来霉素)筛选、ＰＣＲ
验证和相关表型测定ꎬ获得与野生型表型一致的菌
株即为互补菌株[１６]ꎮ
１.４　 ＭｏＧＣＳ１基因敲除突变体的生物学表型分析
１.４.１　 不同培养基上的表型测定　 从菌落边缘切
取约 ２ ｍｍ×２ ｍｍ 的菌丝块接种于完全培养基
ＣＭ、基本培养基 ＭＭ、产孢培养基 ＳＤＣ 和燕麦培
养基 ＯＭ 平板上ꎬ２８°Ｃ 黑暗培养 ７ ｄ 后观察菌落
形态、测量菌落直径并拍照ꎮ 以野生型菌株 Ｇｕｙ１１
为对照ꎬ每个菌株设 ３个重复ꎬ试验重复 ３次ꎮ
Ｔａｂｌｅ １　 Ｐｒｉｍｅｒｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
Ｎａｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′→ ３′)
ＭＧＧ＿０１７４５Ｆ１ ＧＣＴＡＣＴＣＧＴＡＣＧＡＴＣＡＣＡＴＴＧ
ＭＧＧ＿０１７４５Ｆ２ ＣＴＴＣＴＣＣＡＧＡＣＴＣＡＣＡＣＧＴＣＧＡＴＡＴＣＧＣＧＣＴＧＡＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＧＡＣ
ＭＧＧ＿０１７４５Ｆ３ ＧＴＣＡＧＴＣＡＴＣＡＣＡＴＣＡＧＣＧＣＧＡＴＡＴＣＧＡＣＧＴＧＴＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＡＡＧ
ＭＧＧ＿０１７４５Ｆ４ ＧＣＴＣＴＧＣＴＴＧＣＣＣＡＧＧＡＴＣＡＣ
ＭＧＧ＿０１７４５ＫＯ￣Ｆ ＡＴＧＧＣＣＴＣＣＡＡＧＧＧＣＡＴＧＴＧ
ＭＧＧ＿０１７４５ＫＯ￣Ｒ ＣＴＴＧＧＧＣＴＣＴＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧ
ＭＧＧ＿０１７４５ＧＦＰ￣１ ＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣＧＡＡＴＴＧＧＧＴＡＣＴＣＡＡＡＴＴＧＧＴＴＴＣＡＧＡＡＴＣＡＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＴ
ＭＧＧ＿０１７４５ＧＦＰ￣２ ＣＡＣＣＡＣＣＣＣＧＧＴＧＡＡＣＡＧＣＴＣＣＴＣＧＣＣＣＴＴＧＣＴＣＡＣＣＣＡＡＴＣＡＴＣＣＣＡＴＴＣＡＴＣＣＴ
ＭＧＧ＿０１７４５ＧＦＰ￣Ｆ ＴＣＡＣＧＡＡＧＡＣＴＧＣＣＡＣＴＡＣＡ
ＦＬ１１１１ ＧＧＡＧＧＴＣＡＡＣＡＣＡＴＣＡＡＴＧ
ＦＬ１１１２ ＣＴＣＴＡＴＴＣＣＴＴＴＧＣＣＣＴＣＧ
ＭＧＧ＿０１７４５ＢＹ￣Ｆ ＡＧＣＣＡＣＣＡＣＴＧＣＴＴＡＧＡＣＴＴ
ＨｐｈＲ ＣＡＴＴＧＡＴＧＴＧＴＴＧＡＣＣＴＣＣ
９１

　
植物病理学报 ４６卷
１.４.２　 突变体对不同胁迫因子的耐受性测定　 分
别从野生型 Ｇｕｙ１１、敲除突变体及互补菌株的菌落
边缘切取约 ２ ｍｍ×２ ｍｍ 的菌丝块接种于含有不
同胁迫因子的 ＣＭ 培养基上ꎬ２８°Ｃ 黑暗培养 ７ ｄꎬ
观察菌落形态、测量菌落直径并拍照ꎮ 每个胁迫因
子设 ３个重复ꎬ实验重复 ３次ꎮ 盐胁迫和渗透胁迫
因子:０.７ Ｍ ＮａＣｌ、０.６ Ｍ ＫＣｌ 和 １ Ｍ ｓｏｒｂｉｔｏｌ 分别
添加于 ＣＭ培养基中ꎮ 细胞壁胁迫因子:２００ μｇ􀅰
ｍＬ￣１ ＣＦＷꎬ ２００ μｇ􀅰ｍＬ￣１ Ｃｏｎｇｏ ｒｅｄ 和 ０. ００５％
ＳＤＳ分别添加于 ＣＭ培养基中ꎮ
１.４.３　 突变体产孢量和附着胞形成分析 　 参照
Ｚｈａｎｇ等[１６]的方法ꎬ分别统计 Ｇｕｙ１１、ΔＭｏｇｃｓ１突变
体和互补菌株 ΔＭｏｇｃｓ１ / ＭｏＧＣＳ１的分生孢子产量ꎮ
每个菌株 ３个重复ꎬ实验重复 ３ 次ꎮ 将孢子悬浮液
的浓度调节至 １×１０４个􀅰ｍＬ￣１ꎬ分别吸取野生型和突
变体的孢子 ２０ μＬ 滴于载玻片上(Ｆｉｓｈｅｒｂｒａｎｄꎬ１２￣
５４０￣Ａ １８×１８￣２)ꎬ置于 ２８°Ｃ黑暗保湿培养ꎬ在 １、２、３
和 ４ ｈ分别观察附着胞形态和形成率ꎮ
１.４.４　 ＭｏＧＣＳ１ 基因敲除突变体致病性分析　 选
取生长 １４ ｄ的对野生型菌株 Ｇｕｙ１１敏感的水稻品
种(ＣＯ３９)和生长 ７ ｄ 的大麦幼苗ꎬ收集野生型菌
株 Ｇｕｙ１１、ΔＭｏｇｃｓ１ 突变体和互补菌株的分生孢
子ꎬ将孢子浓度调节至 ５×１０４个􀅰ｍＬ￣１ꎬ用喷雾器
将孢子悬浮液均匀的喷洒至水稻和大麦叶片上ꎬ先
置于 ２８°Ｃ黑暗培养 ２４ ｈꎬ随后置于 ２８°Ｃꎬ１２ ｈ 黑
暗 １２ ｈ 光照交替培养ꎮ 观察水稻和大麦发病情
况ꎬ水稻 ７ ｄ后拍照ꎬ大麦 ５ ｄ 后拍照ꎬ实验重复至
少 ３次ꎮ
１.５　 实时定量 ＰＣＲ 分析
　 　 提取各菌株的总 ＲＮＡꎬ经 ＤＮＡａｓｅ 消解后反
转录成 ｃＤＮＡꎬ供实时定量 ＰＣＲ(Ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉ￣
ｔａｔｉｖｅ　 ＰＣＲꎬ　 ｑＲＴ ￣ＰＣＲ)使用ꎮ 根据待测基因的
ｃＤＮＡ序列ꎬ使用 Ｐｒｉｍｅｒ３.０ 设计 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 引物ꎮ
在 ＡＢＩ ７５００ Ｆａｓｔ Ｒｅａｌ￣Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ 中采用 ＳＹＢＲ
Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ(Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ)试剂盒(ＴａＫａ￣
Ｒａꎬ Ｄａｌｉａｎꎬ Ｃｈｉｎａ)进行 ｑＲＴ ￣ＰＣＲꎮ 反应程序为:
９５°Ｃ ３０ ｓꎬ９５°Ｃ ５ ｓꎬ６０°Ｃ ３４ ｓꎬ４０ 个循环ꎻ９５°Ｃ
１５ ｓꎻ６０°Ｃ １ ｍｉｎꎻ９５°Ｃ １５ ｓꎮ 以稻瘟病菌中稳定表
达的 ＡＣＴＩＮ 基因(ＭＧＧ＿０３９８２) 为内参进行标准
化ꎬ将野生型菌株中待分析的基因表达量定为 １ꎬ
分析比较相应基因在突变体中的相对转录量ꎮ
２　 结果与分析
２.１　 ＭｏＧｃｓ１的鉴定及系统进化树分析
　 　 根据酿酒酵母(Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ)Ｇｃｓ１
的蛋白序列ꎬ在稻瘟病菌全基因组数据库中进行
ＢＬＡＳＴ＿Ｐ比对ꎬ鉴定到一个与其同源的蛋白编码基
因ＭＧＧ＿０１７４５ꎬ命名为 ＭｏＧＣＳ１ꎮ ＭｏＧＣＳ１ 基因组
序列全长 １ ６１７ ｂｐꎬ含有 ２个内含子ꎬ编码 ４０４个氨
基酸ꎮ 结构域预测分析发现ꎬ该蛋白在 Ｎ端含有一
个保守的 ＧＡＰ结构域(图 １￣Ａ)ꎮ 该结果与酿酒酵
母及其他物种中的 Ｇｃｓ１ 蛋白类似ꎮ 利用 Ｍｅｇａ５.０
Ｂｅｔａ 软件对该蛋白及其同源蛋白进行进化树分析发
现ꎬＭｏＧｃｓ１与Ｇａｅｕｍａｎｎｏｍｙｃｅｓ ｇｒａｍｉｎｉｓ的Ｇｃｓ１蛋
白序列最为相似 (图 １￣Ｂ)ꎬ 上述结果表明 Ｇｃｓ１ 蛋
白在不同物种中是一个非常保守的蛋白ꎮ
Ｆｉｇ. １　 Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＭｏＧｃｓ１ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｃｓ１ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ
Ａ: Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＭｏＧｃｓ１ꎻ Ｂ: Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＭｏＧｃｓ１ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ Ｇｃｓ１ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ. Ｓｅ￣
ｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＣＬＵＳＴＡＬ＿Ｗ １.８３ ｐｒｏｇｒａｍ. Ｔｈｅ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｕｓｉｎｇ
ｔｈｅ Ｍｅｇａ５.０ Ｂａｔａ ｐｒｏｇｒａｍ.
０２

　
　 １期 刘 秀ꎬ等:ＧＴＰ酶激活蛋白 ＭｏＧｃｓ１参与调控稻瘟病菌的无性繁殖ꎬ附着胞分化及对外界胁迫的应答
２.２　 ＭｏＧＣＳ１基因敲除突变体及互补菌株的获得
　 　 为了进一步研究 ＭｏＧＣＳ１ 在稻瘟病菌中的生
物学功能ꎬ采用如图 ２￣Ａ 所示的方法构建敲除载
体ꎬ并转化到野生型菌株 Ｇｕｙ１１ 中ꎮ 采用 ＰＣＲ 技
术对转化子进行初筛验证获得候选敲除突变体ꎮ
进一步采用 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ对候选突变体进行验证ꎮ
当以 ＭｏＧＣＳ１基因片段为探针时ꎬ在野生型基因
组中能检测到一条 ６ ｋｂ 的条带ꎬ而突变体中检测
不到条带ꎻ相反ꎬ当以潮霉素 ＨＰＨ 基因为探针时ꎬ
突变体基因组中能检测到一条 ６ ｋｂ 的条带ꎬ而野
生型中检测不到条带(图 ２￣Ｂ)ꎬ表明ＭｏＧＣＳ１基因
在稻瘟病菌中被成功敲除ꎮ 为了验证突变体的表
型是否由 ＭｏＧＣＳ１ 基因的敲除引起ꎬ采用 ＰＥＧ 介
导的原生质体转化方法ꎬ将互补载体质粒 ｐＹＦ１１::
ＭｏＧＣＳ１转化到 ΔＭｏｇｃｓ１ 突变体的原生质体中ꎬ
通过抗生素筛选、ＰＣＲ 验证及表型测定ꎬ成功获得
了互补菌株 ΔＭｏｇｃｓ１ / ＭｏＧＣＳ１ꎮ
２.３　 ＭｏＧＣＳ１不参与稻瘟病菌的营养生长
　 　 为了阐明 ＭｏＧＣＳ１ 基因对稻瘟病菌营养生长
的影响ꎬ将野生型菌株 Ｇｕｙ１１、ΔＭｏｇｃｓ１ 突变体和
互补菌株 ΔＭｏｇｃｓ１ / ＭｏＧＣＳ１ 分别接种于 ＣＭ、
ＭＭ、ＳＤＣ和 ＯＭ平板中ꎬ２８°Ｃ 黑暗培养 ７ ｄ 后观
察菌落形态并测量菌落直径ꎮ 结果显示ꎬΔＭｏｇｃｓ１
突变体在 ４种培养基上的菌落形态与野生型和互
补菌株比较无明显变化(图 ３￣Ａ)ꎻ进一步统计分析
发现突变体的生长速率与野生型比较无显著性差
异(图 ３￣Ｂ)ꎮ 上述结果表明 ＭｏＧＣＳ１ 基因不参与
调控稻瘟病菌的菌落形态和营养生长过程ꎮ
２.４　 ＭｏＧＣＳ１ 参与调控稻瘟病菌的无性繁殖和
分生孢子形态建成
　 　 稻瘟病菌主要通过分生孢子完成其侵染循
环[１７]ꎮ 目前在该病菌中已鉴定和报道了一系列与
产孢相关的基因ꎬ 包括 ＣＯＮ２、 ＣＯＮ７、 ＣＯＭ１、
ＳＴＵ１、ＨＯＸ２和 ＣＯＳ１等ꎮ 它们主要参与病菌分生
孢子的产生ꎬ同时也参与生长或致病过程[１７~２２]ꎮ
为了阐明 ＭｏＧＣＳ１是否参与调控稻瘟病菌的无性
繁殖过程ꎬ将野生型 Ｇｕｙ１１、ΔＭｏｇｃｓ１ 突变体和互
补菌株分别接种到 ＳＤＣ培养基上诱导产孢ꎮ １０ ｄ
后收集孢子ꎬ观察孢子形态并用血球计数板统计孢
子数目ꎮ 结果发现ꎬΔＭｏｇｃｓ１ 突变体 ８５％的孢子
形态发生了明显变化ꎬ较野生型更加狭长(图 ４￣Ａꎬ
４￣Ｂ)ꎮ 对产孢量进行统计分析发现ꎬΔＭｏｇｃｓ１ 突
变体的产孢量较野生型显著下降ꎬ约为野生型的
３０％(图 ４￣Ｃ)ꎮ 上述结果表明 ＭｏＧＣＳ１参与调控
Ｆｉｇ. ２　 Ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ＭｏＧＣＳ１ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｍａｇｎａｐｏｒｈｔｅ ｏｒｙｚａｅ
Ａ: Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ ｄｉａｇｒａｍ ｏｆ ｔｈｅ ＭｏＧＣＳ１ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔꎻ Ｂ: Ｔｈｅ ΔＭｏｇｃｓ１ ｍｕｔａｎｔ ｗａｓ ｖｅｒｉｆｉｅｄ ｂｙ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ
ｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ. Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｏｆ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ Ｇｕｙ１１ ａｎｄ ｔｈｅ ΔＭｏｇｃｓ１ ｍｕｔａｎｔ ｗｅｒｅ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｗｉｔｈ ＥｃｏＲ Ｉ ａｎｄ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｉｎ ａ １％
ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ. Ｔｈｅ ＤＮＡ ｗａｓ ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｐｒｏｂｅ １ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｂｙ ｐｒｉｍｅｒｓ ＭＧＧ＿０１７４５ＫＯ￣Ｆ (Ｆ) / ＭＧＧ＿０１７４５ＫＯ￣Ｒ (Ｒ) ａｎｄ
ｐｒｏｂｅ ２ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｂｙ ｐｒｉｍｅｒｓ ＦＬ１１１１ (Ｆ) / ＦＬ１１１２ (Ｒ) .
１２

　
植物病理学报 ４６卷
稻瘟病菌的无性繁殖和分生孢子的形态建成ꎮ 为
了解释突变体产孢量下降的原因ꎬ进一步在野生型
和突变体中对几个产孢相关基因的表达进行了分
析ꎮ ｑＲＴ￣ＰＣＲ 结果显示ꎬ产孢相关基因 ＣＯＮ２、
ＣＯＮ７、ＣＯＭ１、ＳＴＵ１、ＨＯＸ２ 和 ＣＯＳ１ 的表达量在
突变体中均显著下降(图 ４￣Ｄ)ꎬ表明 ＭｏＧＣＳ１ 可
能通过调控这几个产孢相关基因的表达ꎬ从而参与
调控稻瘟病菌的无性繁殖过程ꎮ
Ｆｉｇ. ３　 Ｃｏｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ΔＭｏｇｃｓ１ ｍｕｔａｎｔ ｏｎ ｖａｒｉｏｕｓ ｍｅｄｉａ
Ａ: Ｃｏｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎ Ｇｕｙ１１ꎬ ΔＭｏｇｃｓ１ ｍｕｔａｎｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔ ｏｎ ＣＭꎬ ＭＭꎬ ＯＭ
ａｎｄ ＳＤＣ ｍｅｄｉａꎻ Ｂ: Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ. Ｅｒｒｏｒ ｂａｒｓ ａｒｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ.
Ｆｉｇ. ４　 Ｃｏｎｉｄｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｉｄｉａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｍｕｔａｎｔ
Ａ: Ｃｏｎｉｄｉａｌ ｓｈａｐｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅꎬ ｍｕｔａｎｔ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓꎻ Ｂ: Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｂｎｏｒｍａｌ ｍｏｒ￣
ｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｉｄｉａꎻ Ｃ: Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｉｄｉａꎻ Ｄ: ｑＲＴ￣ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ ｃｏｎｉｄｉ￣
ａｔｉｏｎ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ＷＴ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｕｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ. Ｅｒｒｏｒ ｂａｒｓ ａｒｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ａｓｔｅｒｉｓｋｓ “∗” ａｎｄ “∗∗” ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ａｔ Ｐ<０.０５ ａｎｄ Ｐ<０.０１ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
２２

　
　 １期 刘 秀ꎬ等:ＧＴＰ酶激活蛋白 ＭｏＧｃｓ１参与调控稻瘟病菌的无性繁殖ꎬ附着胞分化及对外界胁迫的应答
２.５　 ＭｏＧＣＳ１参与调控附着胞的形成
　 　 附着胞是稻瘟病菌侵染水稻的重要结构ꎮ 为
了解 ＭｏＧＣＳ１是否参与附着胞的形成ꎬ我们在诱
导界面上观察了 ΔＭｏｇｃｓ１ 突变体附着胞的形成情
况ꎮ 结果显示ꎬ与野生型 Ｇｕｙ１１ 和互补菌株比较ꎬ
ΔＭｏｇｃｓ１突变体的附着胞形成明显提前ꎮ 诱导 ２ ｈ
观察附着胞形成率发现ꎬ突变体 ８８％的分生孢子
形成了附着胞ꎬ而野生型和互补菌株约 ９５％的分
生孢子仅形成芽管(图 ５)ꎮ 该结果表明ꎬＭｏＧＣＳ１
参与调控稻瘟病菌附着胞的形成ꎮ
２.６　 ＭｏＧＣＳ１不参与稻瘟病菌的致病过程
　 　 为了阐明 ＭｏＧＣＳ１ 是否参与稻瘟病菌的致病
过程ꎬ将野生型菌株 Ｇｕｙ１１、ΔＭｏｇｃｓ１ 突变体和互
补菌株的分生孢子(孢子浓度为 ５×１０４个􀅰ｍＬ￣１)
分别喷雾接种到水稻幼苗上ꎬ７ ｄ 后观察结果发
现ꎬ突变体的致病能力与野生型比较无明显差异ꎬ
在水稻叶片上均能形成典型的稻瘟病病斑(图 ６￣
Ａ)ꎮ 进一步在大麦幼苗上进行喷雾实验也出现与
接种水稻一致的结果(图 ６￣Ｂ)ꎮ 上述结果表明ꎬ
ＭｏＧＣＳ１不参与稻瘟病菌的致病过程ꎮ
２.７　 ＭｏＧＣＳ１参与对外界胁迫的应答
　 　 为了正常的生长发育及侵染寄主ꎬ病原菌首
先必须适应外界的各种胁迫条件ꎮ 为了解
ＭｏＧＣＳ１ 是否参与对外界胁迫的应答ꎬ将野生型
Ｇｕｙ１１、ΔＭｏｇｃｓ１ 突变体和互补菌株分别接种于
含有盐胁迫(ＮａＣｌꎬＫＣｌ)ꎬ渗透胁迫( ｓｏｒｂｉｔｏｌ)和
细胞壁胁迫(ＣＦＷ、ＳＤＳ 和 Ｃｏｎｇｏ ｒｅｄ)的 ＣＭ 平
板中ꎬ２８°Ｃ 黑暗培养 ７ ｄ 后测量菌落直径ꎬ并统
计抑制率ꎮ 结果显示ꎬ ΔＭｏｇｃｓ１ 突变体在 ＫＣｌ培
养基上的耐受性与野生型相比明显降低ꎬ而在含
ｓｏｒｂｉｔｏｌ和 ＮａＣｌ的培养基上无明显变化(图 ７￣Ａ、
７￣Ｂ)ꎮ 相反ꎬΔＭｏｇｃｓ１ 突变体在含细胞壁胁迫因
子 ＣＦＷ 和 ＳＤＳ的培养基上耐受性明显升高ꎬ而
对 Ｃｏｎｇｏ ｒｅｄ无明显变化(图 ７￣Ｃ、７￣Ｄ)ꎮ 上述结
果表明ꎬＭｏＧＣＳ１ 参与对外界胁迫的应答过程ꎮ
Ｆｉｇ. ５　 Ａｐｐｒｅｓｓｏｒｉｕｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ΔＭｏｇｃｓ１ ｍｕｔａｎｔꎬ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ
ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ
Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒａｔｅ ｏｆ ａｐｐｒｅｓｓｏｒｉｕｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｎ ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｓｕｒｆａｃｅｓ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ. Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ａｐｐｒｅｓｓｏｒｉａ ｆｒｏｍ １００ ｃｏｎｉｄｉａ
ｏｆ ｅａｃｈ ｓｔｒａｉｎ ｗｅｒｅ ｃｏｕｎｔｅｄ ａｔ １ꎬ ２ꎬ ３ ａｎｄ ４ ｈ ｐｏｓｔ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ｒｅｐｌｉｃａｔｅｄ ｔｈｒｅｅ ｔｉｍｅｓ.
３２

　
植物病理学报 ４６卷
Ｆｉｇ. ６　 Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙｓ ｏｎ ｒｉｃｅ ａｎｄ ｂａｒｌｅｙ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ
Ａ: Ｔｗｏ￣ｗｅｅｋ￣ｏｌｄ ｒｉｃｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｗｅｒｅ ｓｐｒａｙｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｉｄｉａｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｇｕｙ１１ ａｎｄ ｍｕｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ. Ｄｉｓｅａｓｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ
ａｎｄ ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｅｄ ａｔ ７ ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎꎻ Ｂ: Ｂａｒｌｅｙ ｌｅａｖｅｓ ｓｐｒａｙｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｉｄｉａｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ ｆｒｏｍ Ｇｕｙ１１ ａｎｄ ｍｕｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ.
Ｄｉｓｅａｓｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｗｅｒｅ ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｅｄ ａｔ ５ ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ. Ｃｏｎｉｄｉａｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｏｆ ｅａｃｈ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ ｆｉｖｅ ｍｉｌｌｉｌｉｔｅｒｓ (５×１０４ｓｐｏｒｅｓ􀅰ｍＬ￣１).
Ｆｉｇ. ７　 Ｇｒｏｗｔｈ ａｓｓａｙｓ ｏｆ ΔＭｏｇｃｓ１ｍｕｔａｎｔ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｎ ＣＭｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｒｅｓｓｏｒｓ
Ａ ａｎｄ Ｃ: Ｗｉｄｅ ｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎ Ｇｕｙ１１ꎬ ΔＭｏｇｃｓ１ ｍｕｔａｎｔ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｏｎ ＣＭ ｐｌａｔｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＮａＣｌꎬ
ＫＣｌꎬ ｓｏｒｂｉｔｏｌꎬ ＣＦＷꎬ ＳＤＳ ａｎｄ Ｃｏｎｇｏ ｒｅｄꎻ Ｂ ａｎｄ Ｄ: Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｓｔｒｅｓｓｏｒｓ. Ｅｒｒｏｒ ｂａｒｓ ａｒｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｓｔｅｒｉｓｋｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ａｔ Ｐ<０.０１(∗∗) ａｎｄ Ｐ<０.０５(∗) .
４２

　
　 １期 刘 秀ꎬ等:ＧＴＰ酶激活蛋白 ＭｏＧｃｓ１参与调控稻瘟病菌的无性繁殖ꎬ附着胞分化及对外界胁迫的应答
３　 讨论
在酿酒酵母中ꎬ已发现 ４ 个 ＧＡＰ 蛋白具有相
似的功能ꎬ其中 Ｇｃｓ１和 Ｇｌｏ３在高尔基体向内质网
的逆向运输过程中具有重要作用[８ꎬ９]ꎬ且在高尔基
体向内质网运输的过程中具有部分重叠的功
能[２３]ꎮ 敲除 ＧＬＯ３导致细胞内的逆向运输严重受
阻ꎬ而敲除 ＧＣＳ１却只出现轻微的缺陷ꎬ说明 Ｇｌｏ３
是参与该过程的主要蛋白[２４]ꎮ 而过表达 ＧＣＳ１ 可
部分互补 ＧＬＯ３敲除突变体的功能ꎮ Ｇｃｓ１ 可以通
过液泡蛋白分选(ｖａｃｕｏｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｏｒｔｉｎｇꎬ ＶＰＳ)和
依赖于 ＡＰ￣３ 的途径调节从高尔基体反向运输
( ｔｒａｎｓ￣Ｇｏｌｇｉ ｎｅｔｗｏｒｋꎬ ＴＧＮ)到液泡的囊泡运输过
程[２４]ꎮ 在酵母中有研究证明 Ｇｃｓ１ 是 Ａｒｆ１ 和 Ａｒｆ２
的 ＧＡＰ 蛋白[２５]ꎮ 在稻瘟病菌中ꎬ一系列小 Ｇ 蛋
白和 ＧＡＰ蛋白被报道在病菌的生长、无性繁殖、附
着胞形成及致病过程中具有重要的调控作
用[１０~１２]ꎮ
本研究中ꎬ我们初步研究了稻瘟病菌中的一
个 ＧＡＰ蛋白 ＭｏＧｃｓ１ 的生物学功能ꎮ 结果显示
该基因主要参与病菌的无性繁殖和附着胞的形
成过程ꎬ而不参与生长和致病过程ꎮ 说明 ＧＡＰ蛋
白在产孢及附着胞形成阶段中具有重要的调控
作用ꎮ ＭｏＧｃｓ１ 通过调控多个产孢相关基因的表
达ꎬ从而影响病菌的产孢能力和孢子形态ꎮ 这与
以前报道的小 Ｇ蛋白和 ＧＡＰ 蛋白具有相似的功
能[１０~ １２] ꎻ同时提示小 Ｇ 蛋白和 ＧＡＰ 蛋白在功能
上比较保守且存在重叠ꎮ ＭｏＧＣＳ１ 基因敲除突变
体 ΔＭｏｇｃｓ１ 对外界盐胁迫耐受性增强ꎬ对细胞壁
胁迫耐受性降低ꎬ说明 ＭｏＧＣＳ１ 参与对外界的胁
迫应答ꎬ但对不同的胁迫可能存在不同的应答机
制ꎮ 同时ꎬ该结果也提示 ＭｏＧＣＳ１ 可能参与了细
胞壁完整性过程ꎮ 此外ꎬ突变体的分生孢子形态
发生改变ꎬ进一步提示 ＭｏＧＣＳ１ 可能参与细胞壁
的完整性ꎮ 另外ꎬΔＭｏｇｃｓ１ 突变体附着胞形成提
前ꎬ但突变体的致病能力并没有变化ꎬ说明
ＭｏＧＣＳ１ 不影响附着胞的正常功能ꎮ 我们的研究
结果表明ꎬＭｏＧｃｓ１ 是稻瘟病菌中一个重要的
ＧＡＰ蛋白ꎬ参与调控病菌的无性繁殖、附着胞形
成及对外界胁迫的应答过程ꎮ 但是ꎬ该蛋白具体
的调控机制如何还有待进一步研究ꎮ
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ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｙｅａｓｔ Ｇｏｌｇｉ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｗｏ ＡＲＦ
ＧＡＰ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎ [ Ｊ] . ＥＭＢＯ
Ｊｏｕｒｎａｌꎬ １９９９ꎬ １８: ５５５￣５６４.
[９] 　 Ｚｈａｎｇ Ｃ Ｊꎬ Ｂｏｗｚａｒｄ Ｊ Ｂꎬ Ａｎｉｄｏ Ａꎬ ｅｔ ａｌ. Ｆｏｕｒ ＡＲＦ
ＧＡＰｓ ｉｎ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｈａｖｅ ｂｏｔｈ ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ
ａｎｄ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ [Ｊ]. Ｙｅａｓｔꎬ ２００３ꎬ ２０: ３１５￣３３０.
[１０] Ｃｈｅｎ Ｊ Ｓꎬ Ｚｈｅｎｇ Ｗꎬ Ｚｈｅｎｇ Ｓ Ｑꎬ ｅｔ ａｌ. Ｒａｃ１ ｉｓ ｒｅ￣
ｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｃｈｍ１￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｏｎｉｄｉｏ￣
ｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｉｃｅ ｆｕｎｇａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ
[Ｊ] . ２００８ꎬ ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓꎬ ４: ｅ１０００２０２.
[１１] Ｚｈｅｎｇ Ｗꎬ Ｚｈａｏ Ｚ Ｙ.ꎬ Ｃｈｅｎ Ｊ Ｓꎬ ｅｔ ａｌ. Ａ Ｃｄｃ４２ ｏｒ￣
ｔｈｏｌｏｇ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｏｆ Ｍａｇ￣
ｎａｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ [ Ｊ] . Ｆｕｎｇａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ
２００９ꎬ ４６ꎬ ４５０￣４６０.
[１２] Ｙｅ Ｗ Ｙ.ꎬ Ｃｈｅｎ Ｘꎬ Ｚｈｏｎｇ Ｚ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐｕｔａｔｉｖｅ Ｒｈｏ￣
ＧＡＰ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｅ ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ ｇｒｏｗｔｈꎬ ｃｏｎｉｄｉｏ￣
ｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ｂｌａｓｔ ｆｕｎｇｕｓ
５２

　
植物病理学报 ４６卷
Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ [ Ｊ] . Ｆｕｎｇａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏ￣
ｇｙꎬ ２０１４ꎬ ６７: ３７￣５０.
[１３] Ｋｕｍａｒ Ｓꎬ Ｔａｍｕｒａ Ｋꎬ Ｎｅｉ Ｍ. ＭＥＧＡ３: Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ
ｓｏｆｔｗａｒｅ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ
ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ [ Ｊ] . Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ ｉｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａ￣
ｔｉｃｓꎬ ２００４ꎬ ５: １５０￣１６３.
[１４] Ｔａｍｕｒａ Ｋꎬ Ｄｕｄｌｅｙ Ｊꎬ Ｎｅｉ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ. ＭＥＧＡ４: Ｍｏｌｅｃｕ￣
ｌａｒ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ (ＭＥＧＡ) ｓｏｆｔｗａｒｅ
ｖｅｒｓｉｏｎ ４. ０ [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎꎬ
２００７ꎬ ２４: １５９６￣１５９９.
[１５] Ｄｏｕ Ｘ Ｙꎬ Ｗａｎｇ Ｑꎬ Ｑｉ Ｚ Ｑꎬ ｅｔ ａｌ. ＭｏＶａｍ７ꎬ ａ ｃｏｎ￣
ｓｅｒｖｅｄ ＳＮＡＲＥ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｖａｃｕｏｌｅ ａｓｓｅｍｂｌｙꎬ ｉｓ ｒｅ￣
ｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｇｒｏｗｔｈꎬ ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓꎬ ＲＯＳ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎꎬ
ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ [ Ｊ] . ＰＬｏＳ
Ｏｎｅꎬ ２０１１ꎬ ６: ｅ１６４３９.
[１６] Ｚｈａｎｇ Ｈ Ｆꎬ Ｔａｎｇ Ｗꎬ Ｌｉｕ Ｋ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｉｇｈｔ ＲＧＳ ａｎｄ
ＲＧＳ￣ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｅ ｇｒｏｗｔｈꎬ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎꎬ
ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ [ Ｊ] . ＰＬｏＳ
Ｐａｔｈｏｇｅｎｓꎬ ２０１１ꎬ ７: ｅ１００２４５０.
[１７] Ｋｉｍ Ｓ Ｔꎬ Ｋａｎｇ Ｙ Ｈꎬ Ｗａｎｇ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓｅｃｒｅｔｏｍｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｒｉｃｅ
ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ￣ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｅｌｌｓ ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｂｙ ｒｉｃｅ ｂｌａｓｔ ｆｕｎｇｕｓ
ａｎｄ ｅｌｉｃｉｔｏｒ [Ｊ] . Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓꎬ ２００９ꎬ ９: １３０２￣１３１３.
[１８] Ｓｈｉ Ｚꎬ Ｌｅｕｎｇ Ｈ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ
Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ ｂｙ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎａｌ ｍｕｔａ￣
ｇｅｎｅｓｉｓ [ Ｊ ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ￣Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓꎬ
１９９５ꎬ ８: ９４９￣９５９.
[１９] Ｓｈｉ Ｚꎬ Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ Ｄꎬ Ｌｅｕｎｇ Ｈ. Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ
ｓｐｏｒｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｆｆｅｃｔ ｃｅｌｌ ｔｙｐｅｓꎬ ｓｐｏｒｕ￣
ｌａｔｉｏｎꎬ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ [ Ｊ] .
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ￣Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓꎬ １９９８ꎬ １１: １９９￣
２０７.
[２０] Ｚｈｏｕ Ｚꎬ Ｌｉ Ｇꎬ Ｌｉｎ Ｃꎬ ｅｔ ａｌ. Ｃｏｎｉｄｉｏｐｈｏｒｅ ｓｔａｌｋ￣ｌｅｓｓ１
ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｚｉｎｃ￣ｆｉｎｇｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ
ｅａｒｌｙ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｃｏｎｉｄｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｙｃｅｌｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ
Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ [Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ￣Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎ￣
ｔｅｒａｃｔｉｏｎｓꎬ ２００９ꎬ ２２: ４０２￣４１０.
[２１] Ｙａｎｇ Ｊꎬ Ｚｈａｎｇ Ｘꎬ Ｓｕｎ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｍ１
ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｉｄｉｕｍ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｆｕｌｌ
ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｉｎ Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ [Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ￣
Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎꎬ ２０１０ꎬ ２３: １１２￣１２３.
[２２] Ｋｉｍ Ｓꎬ Ｐａｒｋ Ｓ Ｙꎬ Ｋｉｍ Ｋ Ｓꎬ ｅｔ ａｌ. Ｈｏｍｅｏｂｏｘ ｔｒａｎ￣
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ａｒｅ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｃｏｎｉｄｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐ￣
ｐｒｅｓｓｏｒｉｕｍ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ｂｌａｓｔ ｆｕｎｇｕｓ Ｍａｇ￣
ｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ [ Ｊ ] . ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ ２００９ꎬ ５:
ｅ１０００７５７.
[２３] Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ Ｃꎬ Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ Ｆꎬ Ｐｏｏｎ Ｐ Ｐꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ ＧＡＰ
ｄｏｍａｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ＳＮＡＲＥꎬ ｃｏａｔｏｍｅｒ ａｎｄ ｃａｒｇｏ ｉｎｔｅｒａｃ￣
ｔｉｏｎ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＡｒｆＧＡＰ２ / ３ Ｇｌｏ３ ａｒｅ ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ ｆｏｒ
Ｇｌｏ３ ｆｕｎｃｔｉｏｎ [Ｊ] . Ｔｒａｆｆｉｃꎬ ２００９ꎬ １０: １３６２￣１３７５.
[２４] Ｐｏｏｎ Ｐ Ｐꎬ Ｎｏｔｈｗｅｈｒ Ｓ Ｆꎬ Ｓｉｎｇｅｒ Ｒ Ａꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ Ｇｃｓ１
ａｎｄ Ａｇｅ２ ＡｒｆＧＡＰ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｐｒｏｖｉｄｅ ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ ｅｓｓｅｎ￣
ｔｉａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｙｅａｓｔ ｔｒａｎｓ￣Ｇｏｌｇｉ
ｎｅｔｗｏｒｋ [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００１ꎬ １５５:
１２３９￣１２５０.
[２５] Ｐｏｏｎ Ｐ Ｐꎬ Ｗａｎｇ Ｘꎬ Ｒｏｔｍａｎ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ Ｇｃｓ１ ｉｓ ａｎ ＡＤＰ￣ｒｉｂｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＧＴＰａｓｅ￣
ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ [ Ｊ ] . ＰＮＡＳꎬ １９９６ꎬ ９３: １００７４￣
１００７７.
责任编辑:李晖
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