全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ ４６(１): ５６￣６２(２０１６)
收稿日期: ２０１５￣０３￣１１ꎻ 修回日期: ２０１５￣０６￣０３
基金项目: 公益性行业(农业)科研专项(２０１３０３０２８)ꎻ国家自然科学基金项目(３１３７１９１０)
通讯作者: 李健强ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ主要从事种子病理及杀菌剂药理学研究ꎻＴｅｌ:０１０￣６２７３４９３８ꎬＥ￣ｍａｉｌ: ｌｉｊｑ２３１＠ｃａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ
第一作者: 梁超琼ꎬ女ꎬ博士研究生ꎬ主要从事分子植物病理学研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:ｌｃｑ１９８８０３０５＠１２６.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１６.０１.００７
黄瓜中与黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染
相关的 ｍｉＲＮＡ表达特征分析
梁超琼１ꎬ刘华威２ꎬ罗来鑫１ꎬ李健强１∗
( １中国农业大学植物病理学系 /种子病害检验与防控北京市重点实验室ꎬ北京 １００１９３ꎻ
２分子植物病理实验室ꎬ美国农业部农业研究中心 贝茨维尔 ２０７０５)
摘要:ＭｉｃｒｏＲＮＡ作为一种内源小分子非编码 ＲＮＡꎬ在植物生长发育、信号转导、转录调控、新陈代谢及各种胁迫条件下发
挥重要作用ꎮ 本研究通过生物信息学技术对黄瓜 ｍｉＲ１５９ 和 ｍｉＲ８５８ 的靶基因进行预测和功能分析ꎬ结果显示 ｍｉＲ１５９ 和
ｍｉＲ８５８的靶基因主要为 ＭＹＢ类转录因子家族成员ꎬ参与植物生长发育和抗病过程ꎮ 实时荧光定量 ＰＣＲ分析黄瓜绿斑驳
花叶病毒(ＣＧＭＭＶ)不同侵染时期在黄瓜不同组织中目的 ｍｉＲＮＡ的表达特征ꎬ结果表明黄瓜 ｍｉＲ１５９和 ｍｉＲ８５８的表达具
有时空特异性和组织特异性ꎬ二者均可对 ＣＧＭＭＶ侵染做出响应并存在显著差异表达ꎮ
关键词:黄瓜ꎻ黄瓜绿斑驳花叶病毒ꎻ侵染ꎻｍｉｃｒｏＲＮＡꎻ靶基因ꎻ表达特征
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｉＲＮＡ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｇｒｅｅｎ ｍｏｔｔｌｅ
ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ＬＩＡＮＧ Ｃｈａｏ￣ｑｉｏｎｇ１ꎬ ＬＩＵ Ｈｕａ￣ｗｅｉ２ꎬ ＬＵＯ Ｌａｉ￣ｘｉｎ１ꎬ ＬＩ Ｊｉａｎ￣ｑｉａｎｇ１ ( １Ｄｅ￣
ｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ / Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｓｅｅｄ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ (ＢＫＬ￣ＳＤＴＣ)ꎬ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙꎬ ＵＳＤＡ￣ＡＲＳꎬ Ｂｅｌｔｓｖｉｌｌｅꎬ ＭＤ ２０７０５ꎬ ＵＳＡ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ (ｍｉＲＮＡｓ) ａｒｅ ｓｍａｌｌ ｎｏｎ￣ｃｏｄｉｎｇ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ＲＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｗｈｉｃｈ ｐｌａｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ
ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎꎬ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎꎬ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ｖａｒｉｏｕｓ
ｓｔｒｅｓｓ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｉＲ１５９ ａｎｄ ｍｉＲ８５８ ｗｅｒｅ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ａｎｄ ａｎａ￣
ｌｙｚｅｄ ｂｙ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｍｏｓｔ ｏｆ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｍｉＲ１５９ ａｎｄ ｍｉＲ８５８ ｗｅｒｅ ｍｅｍｂｅｒｓ
ｏｆ ＭＹＢ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｗｈｉｃｈ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａ ｖａｒｉｅｔｙ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈꎬ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ. Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｉＲ１５９ ａｎｄ ｍｉＲ８５８ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ
ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｅｒｉｏｄｓ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｆｔｅｒ Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｇｒｅｅｎ ｍｏｔｔｌｅ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ (ＣＧＭＭＶ) ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ
ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ￣ＰＣＲ. Ｉｔ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ｍｉＲ１５９ ａｎｄ ｍｉＲ８５８ ｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｔｏ ＣＧＭＭＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓꎬ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｅｍｐｏｒａｌ ａｎｄ ｓｐａｔｉａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙꎬ ａｓ
ｗｅｌｌ ａｓ ｔｉｓｓｕｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｃｕｃｕｍｂｅｒꎻ Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｇｒｅｅｎ ｍｏｔｔｌｅ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓꎻ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎꎻ ｍｉｃｒｏＲＮＡꎻ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅꎻ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
中图分类号: Ｓ４３２.４１ 文献标识码: Ａ 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１６)０１￣００５６￣０７
１期 梁超琼ꎬ等:黄瓜中与黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染相关的 ｍｉＲＮＡ表达特征分析
黄瓜绿斑驳花叶病毒(Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｇｒｅｅｎ ｍｏｔｔｌｅ
ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓꎬ ＣＧＭＭＶ)引起的葫芦科作物病毒病
在我国发生面积不断扩大ꎬ危害日趋严重ꎬ逐渐成
为黄瓜等葫芦科作物生产中的主要病害之一ꎬ严重
制约了黄瓜产量和品质性状的提高[１]ꎮ 鉴于目前
尚未开发出有效的抗病毒药剂ꎬ培育抗病品种依然
是生产中防治病毒病的首选ꎮ 因此ꎬ鉴定和筛选黄
瓜抗 ＣＧＭＭＶ的关键基因ꎬ探究其抗病毒分子机
制ꎬ可为抗病品种的选育提供理论依据ꎮ
ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ是一类内源性的、２１~２５个核苷酸
长度的小分子非编码 ＲＮＡꎬ它主要通过指导剪切
或者抑制翻译这两种方式调节植物基因的表达ꎬ参
与调控植物生长发育、信号转导和逆境胁迫等各个
方面[２~５]ꎮ 有研究表明ꎬ植物内源 ｍｉＲＮＡ 在病原
物相关分子模式触发的免疫(ＰＡＭＰ￣ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｉｍ￣
ｍｕｎｉｔｙꎬＰＴＩ)和效应子触发的免疫 ( ｅｆｆｅｃｔｏｒ￣ｔｒｉｇ￣
ｇｅｒｅｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙꎬＥＴＩ)调控基因表达的过程中发挥
着重要作用ꎮ 当病原物侵入时ꎬｍｉＲＮＡ 通过增强
植物细胞壁等物理机械抗性直接抵御病原物侵害ꎬ
或者作为最初信号源ꎬ通过参与调控抗病相关信号
途径、激活抗病途径关键转录因子从而合理地调控
植物自身的各种抗性机制以抵御病原物的侵害ꎮ
ｍｉＲＮＡ还可直接调控植物抗性基因ꎬ引起抗病防
卫基因的表达ꎬ产生能抑制病原物生长的表达产
物[２ꎬ６ꎬ７]ꎮ 这些 ｍｉＲＮＡ 在病原物侵染时上调或下
调表达ꎬ通过抑制防卫反应中的负调控因子和促进
防卫反应中的正调控因子来行使功能[８]ꎮ
本研究室利用第二代测序技术和芯片表达谱
技术ꎬ从被 ＣＧＭＭＶ 侵染后发病的黄瓜植株体内
获得 ８ 个新的、 ２３ 个已知的和 ８８ 个保守的
ｍｉＲＮＡꎮ 研究发现在 ＣＧＭＭＶ 侵染前后ꎬ宿主黄
瓜体内的部分内源 ｍｉＲＮＡ 的表达模式存在显著
差异[９]ꎬ其中 ｍｉＲ１５９ 和 ｍｉＲ８５８ 等家族的表达差
异较为显著ꎮ 这些差异表达的 ｍｉＲＮＡ 倾向于靶
向与抗逆相关的 ＭＹＢ转录因子家族ꎬ可能在黄瓜
响应 ＣＧＭＭＶ侵染过程中起重要调控作用ꎮ 基于
此ꎬ本研究通过文献检索和生物信息学技术综合筛
选重要的、可能响应 ＣＧＭＭＶ 侵染的黄瓜 ｍｉＲＮＡ
及其靶基因ꎬ并采用实时定量 ＰＣＲ 对筛选到的
ｍｉＲＮＡ真实性进行验证ꎬ同时分析其表达特征ꎬ为
深入研究 ｍｉＲＮＡ 在病毒侵染过程和抗病基因表
达调控过程中的作用机制奠定基础ꎬ为开发抗病品
种提供理论依据ꎮ
１ 材料与方法
１.１ 材料
供试 ＣＧＭＭＶ 毒源由本研究室提供ꎻ供试黄
瓜为市售 “中农 １６号”ꎬ由中国农业科学院蔬菜与
花卉研究所培育ꎬ种植于温室内ꎮ
１.２ 方法
１.２.１ 响应 ＣＧＭＭＶ 侵染的黄瓜 ｍｉＲＮＡ 靶基因
预测及功能分析 结合本研究室已有研究结果ꎬ统
计响应 ＣＧＭＭＶ侵染的黄瓜 ｍｉＲＮＡꎬ从中选出本
研究的目的 ｍｉＲＮＡꎮ 从 ｍｉＲＢａｓｅ ２１ 数据库
(ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｍｉｒｂａｓｅ.ｏｒｇ / )和已报道的文献中获
得 ｍｉＲ１５９ 的成熟序列为 ５’ ￣ＵＵＵＧＧＡＵＵＧＡＡ
ＧＧＧＡＧＣＵＣＵＡ￣３’ꎬｍｉＲ８５８ 的成熟序列为 ５’ ￣
ＵＣＵＣＧＵＵＧＵＣＵＧＵＵＣＧＡＣＣＵＵ￣３’ꎮ
根据 ｍｉＲＮＡ 序列在 ｐｓＲＮＡＴａｒｇｅｔ (Ａ Ｐｌａｎｔ
Ｓｍａｌｌ ＲＮＡ Ｔａｒｇｅｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｅｒｖｅｒꎬｈｔｔｐ: / / ｐｌａｎｔｇｒｎ.
ｎｏｂｌｅ.ｏｒｇ / ｐｓＲＮＡＴａｒｇｅｔ / )中预测其靶基因ꎬ根据各
靶基因名称在 Ｕｎｉ￣ｐｒｏｔＫＢ 蛋白数据库和 ＮＣＢＩ 中
检索、分析其功能ꎮ
１.２.２ 黄瓜 ｍｉＲＮＡ 及其靶基因调控网络 利用
Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ ３.２.０ 软件构建响应 ＣＧＭＭＶ 侵染的黄
瓜 ｍｉＲＮＡ及其靶基因的调控网络ꎮ
１.２.３ 响应 ＣＧＭＭＶ 侵染的黄瓜 ｍｉＲＮＡ 表达特
征分析 播种中农 １６ 号黄瓜种子ꎬ选取长势相同
的黄瓜 ３ 叶期幼苗为试材ꎮ 本研究室保存的
ＣＧＭＭＶ毒源研磨后采用摩擦法接种于待处理黄
瓜的第 ３片真叶ꎬ以摩擦接种磷酸缓冲液(ＰＢＳＴ)
的黄瓜植株作为空白对照ꎮ 接种后将对照组和
ＣＧＭＭＶ处理组置于人工智能温室防虫网内隔离
培养ꎮ
在 ＣＧＭＭＶ接种后的 １、５、１０、１５、２０、２５、３０ 和
３５ ｄ分别对处理组和对照组黄瓜植株不同组织进行
取样ꎬ取样部位分别为接种叶片、植株顶端新生叶、
根、第 ２片真叶与第 ３片真叶之间的茎组织ꎮ
基于 ｍｉＲＮＡ 成熟序列ꎬ依据 ｍｉＲＮＡ ｑＲＴ￣
ＰＣＲ引物设计原则ꎬ设计其上游引物序列(下游引
物为试剂盒中提供的通用引物 Ｕｎｉ￣ｍｉＲ ｑＰＣＲ
Ｐｒｉｍｅｒ ) 及 黄 瓜 内 参 基 因 Ａｃｔｉｎ ( ＧｅｎＢａｎｋ:
ＡＢ０１０９２２.１)的上、下游引物序列(表 １)ꎮ
７５
植物病理学报 ４６卷
Ｔａｂｌｅ １ ｑＲＴ￣ＰＣＲ ｐｒｉｍｅｒｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
Ｐｒｉｍｅｒ ｎａｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５’→３’)
ｃｓａ￣ｍｉＲ１５９ ＴＴＴＧＧＡＴＴＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＣＴＡ
ｃｓａ￣ｍｉＲ８５８ ＴＣＴＣＧＴＴＧＴＣＴＧＴＴＣＧＡＣＣＴＴＧ
Ａｃｔｉｎ￣Ｆ ＡＴＴＣＴＣＣＧＴＴＴＧＧＡＣＣＴＴＧＣＴ
Ａｃｔｉｎ￣Ｒ ＧＣＴＣＣＧＡＴＧＧＴＧＡＴＧＡＣＴＴＧＴ
使用 ＲＮＡｉｓｏ ｆｏｒ Ｓｍａｌｌ ＲＮＡ试剂盒(ＴａＫａＲａꎬ
９５７３Ａ)提取供试样品的 Ｓｍａｌｌ ＲＮＡꎬ取 ３ μＬ Ｓｍａｌｌ
ＲＮＡ 进行 １％琼脂糖凝胶电泳检测ꎮ 用 ｍｉＲＮＡ
ｃＤＮＡ第一链合成试剂盒 ｍｉＲｃｕｔｅ ｍｉＲＮＡ Ｆｉｒｓｔ￣
Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ(ＴＩＡＮＧＥＮꎬＫＲ２０１)对
样品中的 Ｓｍａｌｌ ＲＮＡ进行 Ｐｏｌｙ(Ａ)加尾和反转录
反应ꎬ所得 ｃＤＮＡ 于￣２０℃保存ꎮ 通过实时定量
ＰＣＲ 检测 ＣＧＭＭＶ侵染后不同时间、不同组织中
各目的 ｍｉＲＮＡ 的相对表达量ꎬ按照 ＴＩＡＮＧＥＮ
ｍｉＲＮＡ 实时荧光定量 ＰＣＲ 试剂盒 (ＴＩＡＮＧＥＮꎬ
ＦＰ４０１)要求配制反应液ꎮ 反应体系为 ２０ μＬꎬ包
括:２ × ｍｉＲｃｕｔｅ ｍｉＲＮＡ Ｐｒｅｍｉｘ １０ μＬꎬｃＤＮＡ 模板
１ μＬꎬ正反向引物各 ０. ４ μＬ (引物终浓度为 １０
μＭ)ꎬｄｄＨ２Ｏ ８. ２ μＬꎮ 反应条件为:９４℃预变性
２ ｍｉｎꎻ９４℃ ２０ ｓꎬ６０℃ ３４ ｓ 进行 ４０ 个循环ꎮ 用黄
瓜 Ａｃｔｉｎ 作为内参基因ꎬ采用 ２￣△△Ｃｔ法[１０] 分析
ｍｉＲＮＡ相对表达量并绘制柱状图ꎮ
２ 结果与分析
２.１ 响应 ＣＧＭＭＶ 侵染的黄瓜 ｍｉＲＮＡ 靶基因
预测及功能分析
本研究室已有芯片杂交结果表明ꎬ黄瓜中多个
ｍｉＲＮＡ均可响应 ＣＧＭＭＶ的侵染ꎬ其在接种 ＣＧＭ￣
ＭＶ后 １０、３０和 ５０ ｄ的表达量发生不同程度的变化
(未发表)ꎮ 结合文献检索得知 ｍｉＲ１５９ 和 ｍｉＲ８５８
可能在脱落酸和水杨酸介导的抗病信号通路中协同
发挥调控作用ꎮ 基于以上研究结果ꎬ我们选取了
ｍｉＲ１５９和 ｍｉＲ８５８作为本试验的主要研究对象ꎮ
根据ｍｉＲＮＡ成熟序列ꎬ在 ｐｓＲＮＡＴａｒｇｅｔ软件中
预测到黄瓜 ｍｉＲ１５９有 Ｃｓａ４Ｍ００２９４０.１等 １９个靶基
因ꎬｍｉＲ８５８有 Ｃｓａ５Ｍ１４８６８０.１等 １１个靶基因ꎬ其中
以ＭＹＢ类转录因子家族成员居多ꎬ且目的 ｍｉＲＮＡ
主要通过互补作用靶向切割其靶基因ꎬ进而影响基
因表达ꎮ 在 Ｕｎｉ￣ｐｒｏｔＫＢ 蛋白数据库和 ＮＣＢＩ 中检
索、分析各靶基因功能(参考各靶基因在模式生物拟
南芥中的功能)ꎬ结果表明其主要参与黄瓜生长发
育、代谢、细胞形态建成和抗病过程(表 ２)ꎮ
２.２ 黄瓜ｍｉＲＮＡ及其靶基因调控网络
利用 Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ ３.２.０ 软件构建黄瓜 ｍｉＲ１５９、
ｍｉＲ８５８和其靶基因的调控网络(图 １)ꎬ结果显示 ２个
ｍｉＲＮＡ均携带其靶基因单独存在ꎬ相互间无关联ꎮ
Ｔａｂｌｅ ２ Ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｉＲ１５９ ａｎｄ ｍｉＲ８５８
ｍｉＲＮＡ
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ
Ｎｏ.
Ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ
(Ｅ)
Ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ
(ＵＰＥ)
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅ
ｍｉＲ１５９ Ｃｓａ４Ｍ０２２９４０.１ １ ２３.５２１ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＭＹＢ２９￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ６Ｍ１０５１５０.１ ２ ２２.１９ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｕｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ３Ｍ８５０６７０.１ ２ ２２.３２２ Ｃｌｅａｖａｇｅ ￣
Ｃｓａ６Ｍ０４６４７０.１ ３ ２３.０２ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＧＡＭＹＢ￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ４Ｍ６２８３４０.２ ２.５ １７.４３８ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｕｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ１Ｍ０７７１４０.１ ２.５ １３.６３４ Ｃｌｅａｖａｇｅ ￣
Ｃｓａ４Ｍ６２８３４０.１ ２.５ １７.４３８ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｕｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ６Ｍ４０５３４０.１ ２.５ １５.６３６ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｍａｎｎａｎ ｅｎｄｏ￣１ꎬ４￣ｂｅｔａ￣ｍａｎｎｏｓｉｄａｓｅ ６￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ４Ｍ０８８７４０.２ ２.５ １１.５２７ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｕｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ４Ｍ０８８７４０.１ ２.５ １１.５２７ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｕｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ２Ｍ４２９０１０.１ ２.５ １４.８６４ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ Ｏ￣ｂｅｎｚｏｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ４Ｍ０８３４９０.２ ３ １４.８０４ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ＢＥＳ１ / ＢＺＲ１ ｈｏｍｏｌｏｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ４￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ２Ｍ０３５３５０.１ ３ １３.１８２ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＭＹＢ８６￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
８５
１期 梁超琼ꎬ等:黄瓜中与黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染相关的 ｍｉＲＮＡ表达特征分析
Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ Ｔａｂｌｅ ２
Ｃｓａ４Ｍ０８３４９０.１ ３ １２.１８７ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ＢＥＳ１ / ＢＺＲ１ ｈｏｍｏｌｏｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ４￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ７Ｍ０６２９００.１ ３ １７.３３７ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｏｕｔｅｒ ｅｎｖｅｌｏｐｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ６４ꎬｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ￣ｌｉｋｅꎬｍＲＮＡ
Ｃｓａ５Ｍ１８２６３０.１ ３ １８.０９６ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｔｅｌｏｍｅｒｅ ｒｅｐｅａｔ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ３￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ５Ｍ１８２６３０.２ ３ １８.０９６ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｔｅｌｏｍｅｒｅ ｒｅｐｅａｔ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ３￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ５Ｍ０１１７１０.１ ２.５ １３.３０９ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｐｅｎｔａｔｒｉｃｏｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｐｅａｔ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｔ３ｇ４９７３０￣
ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ１Ｍ００２０４０.１ ３ １７.６０７ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｐｒｏｂａｂｌｅ ｉｎａｃｔｉｖｅ ｐｕｒｐｌｅ ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ２７￣ｌｉｋｅꎬ
ｍＲＮＡ
ｍｉＲ８５８ Ｃｓａ５Ｍ１４８６８０.１ ２.５ １６.４３３ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｍｙｂ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｈｖ１￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ６Ｍ０４０６４０.１ ２ １２.４１７ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＭＹＢ３￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ３Ｍ１８２０４０.１ ２ １０.３６８ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＬＡＦ１￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ３Ｍ１６８９４０.１ ２.５ １１.００５ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ ＭＹＢ６￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ７Ｍ３７５７８０.１ ２.５ １１.４０４ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ ＭＹＢ５￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ３Ｍ３０３６３０.１ ２.５ １５.３０８ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ＯＤＯＲＡＮＴ１￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ５Ｍ４２５４００.１ ２.５ １１.０５２ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｍｙｂ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ３１５￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ３Ｍ０７６５２０.１ ２.５ ２０.６７６ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｕｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ３Ｍ７４８２００.１ ３ ２０.３９２ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ＤＣ￣８￣ｌｉｋｅꎬ ｍＲＮＡ
Ｃｓａ４Ｍ４３２４６０.１ ３ １８.０６６ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ ４￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ５￣ｋｉｎａｓｅ ４￣ｌｉｋｅꎬ
ｍＲＮＡ
Ｃｓａ３Ｍ４２６９００.１ ３ ２２.０９４ Ｃｌｅａｖａｇｅ ￣
Ｆｉｇ. １ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｎｅｔｗｏｒｋ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｉＲ１５９ ａｎｄ ｍｉＲ８５８
ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ
９５
植物病理学报 ４６卷
２.３ 响应 ＣＧＭＭＶ 侵染的黄瓜 ｍｉＲＮＡ 实时定
量 ＰＣＲ检测
ｑＲＴ￣ＰＣＲ 检测 ＣＧＭＭＶ 接种黄瓜 １、５、１０、
１５、２０、２５、３０和 ３５ ｄ 后的处理组和对照组植株接
种叶、顶端新生叶、茎、根组织样品中 ｍｉＲ１５９、
ｍｉＲ８５８的真实性及其表达量ꎮ 结果表明ꎬ在接种
叶、顶端新生叶和茎组织中 ｍｉＲ１５９ 的表达量在
ＣＧＭＭＶ侵染 １ ｄ内均上调表达ꎬ在 ５ ｄ 内迅速降
低ꎮ 而 ｍｉＲ１５９ 在 ＣＧＭＭＶ 侵染 １ ｄ 的根组织中
表达量下调ꎬ在 ５ ｄ 内逐步上调ꎮ ｍｉＲ１５９ 的表达
量呈上调趋势的黄瓜组织和时间点分别为 １、２５ 和
３０ ｄ的接种叶ꎬ１、１５、３０ 和 ３５ ｄ 的顶端新生叶ꎬ１、
５、１５、２０、３０和 ３５ ｄ 的茎ꎬ５、２５ 和 ３０ ｄ 的根ꎻ在接
种叶和茎组织中 ｍｉＲ８５８ 的表达量在 ＣＧＭＭＶ 侵
染 １ ｄ 内均下调表达ꎬ在 ５ ｄ 内逐渐上调ꎮ 而
ｍｉＲ８５８在 ＣＧＭＭＶ侵染 １ ｄ的顶端新生叶和根组
织中表达量上调ꎬ在 ５ ｄ 内逐步下调ꎮ ｍｉＲ８５８ 的
表达量呈上调趋势的黄瓜组织和时间点分别为
３０ ｄ的接种叶ꎬ１、１５ 和 ３０ ｄ 的顶端新生叶ꎬ５ 和
３０ ｄ的茎ꎬ１、１０和 ３０ ｄ的根ꎻｍｉＲ１５９和 ｍｉＲ８５８ 的
表达量呈上调趋势的黄瓜组织和时间部分重合ꎬ其
变化趋势部分一致 (图 ２)ꎮ 整体来看各组织中
ｍｉＲ１５９ 的表达量高于 ｍｉＲ８５８ꎮ 以上结果说明
ｍｉＲ１５９、ｍｉＲ８５８在黄瓜中真实存在ꎬ其表达具有
时空特异性和组织特异性ꎻ黄瓜ｍｉＲ１５９和ｍｉＲ８５８
可响应 ＣＧＭＭＶ侵染ꎬ发生显著差异表达ꎬ进而诱
导其下游众多基因表达量发生变化ꎬ包括其调控的
抗病基因的差异表达ꎬ从而可能在黄瓜抵抗 ＣＧＭ￣
ＭＶ侵染过程中发挥重要作用ꎮ
Ｆｉｇ. ２ Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｍｉＲ１５９ ａｎｄ ｍｉＲ８５８ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ
ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄａｙｓ ｐｏｓｔ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ (ｄｐｉ) ｂｙ ＣＧＭＭＶ
０６
１期 梁超琼ꎬ等:黄瓜中与黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染相关的 ｍｉＲＮＡ表达特征分析
３ 讨论
ｍｉＲＮＡ作为一类内源小分子 ＲＮＡ 在植物生
长发育和胁迫响应过程中扮演重要角色ꎮ ｍｉＲＮＡ
及其靶基因相关研究是 ｍｉＲＮＡ 功能研究的基础ꎮ
随着生物信息学技术和分子生物学技术的快速发
展ꎬ越来越多的植物 ｍｉＲＮＡ 及其功能被人们所发
现并证实ꎮ
本研究采用生物信息学技术预测黄瓜 ｍｉＲ１５９
和 ｍｉＲ８５８ 的靶基因并对其功能进行分析ꎬ结果表
明目的 ｍｉＲＮＡ 的靶基因多为 ＭＹＢ 类转录因子ꎮ
该结果与 Ｍａｏ 等[１１]、Ｍａｒｔíｎｅｚ 等[１２]、Ｈｕ 等[１３]、Ｌｉ
等[１４]的研究结果相符ꎬ其主要通过互补作用靶向
切割其靶基因ꎬ进而参与黄瓜生长发育和抗病过
程ꎮ 例如 ｍｉＲ１５９ 靶向切割其靶基因 ＭＹＢ２９￣ｌｉｋｅ
(Ｃｓａ４Ｍ０２２９４０.１)ꎬ功能分析结果表明转录因子
ＭＹＢ２９ 与 ＭＹＢ２８ 共同促进葡萄糖异硫氰酸盐
(ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅꎬ又称芥子油苷)的生物合成ꎮ 而芥
子油苷及其水解产物在拟南芥、水稻等植物的防御
中具 有 重 要 作 用[１５~１７]ꎮ ｍｉＲ８５８ 的 靶 基 因
Ｃｓａ５Ｍ１４８６８０.１为ＭＹＢ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｈｖ１￣ｌｉｋｅ基
因ꎬ该基因在大麦中响应外部刺激、参与黄酮类化
合物的生物合成ꎬ而黄酮类化合物在植物的生长、
发育、开花、结果以及抗菌防病等方面起着重要作
用[１８]ꎮ ｍｉＲ１５９和 ｍｉＲ８５８均携带其靶基因单独存
在ꎬ相互间无关联ꎬ说明 ２个ｍｉＲＮＡ可能在不同的
信号通路中发挥调控作用ꎬ亦或存在不同的作用机
制ꎮ 为了明确ｍｉＲ１５９和ｍｉＲ８５８在受 ＣＧＭＭＶ侵
染的黄瓜中的表达特征ꎬ我们采用 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 方法
对目的 ｍｉＲＮＡ在黄瓜不同组织、不同接种时间的
相对表达量进行检测ꎬ结果发现ｍｉＲ１５９和ｍｉＲ８５８
均可对 ＣＧＭＭＶ做出响应ꎬ且存在显著差异ꎮ
本研究分析了与 ＣＧＭＭＶ 侵染相关的黄瓜
ｍｉＲＮＡ表达特征并对其靶基因功能进行预测ꎬ为
黄瓜与 ＣＧＭＭＶ 互作机制研究奠定了基础ꎬ提供
了新思路ꎮ 但是ꎬ有关 ＣＧＭＭＶ 侵染后黄瓜
ｍｉＲＮＡ如何调控其靶基因ꎬ预测的抗病相关靶基
因又如何发挥其作用等科学问题还有待于进一步
探究ꎮ
参考文献
[１] Ｆｅｎｇ Ｌ Ｘꎬ Ｘｉｅ Ｂ Ｙꎬ Ｙａｎｇ Ｙ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ. Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ
ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｏｆ Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｇｒｅｅｎ ｍｏｔｔｌｅ ｍｏｓａｉｃ
ｖｉｒｕｓ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｃｈｉｎａ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ (中国蔬
菜)ꎬ２００７ꎬ(９):３４￣３８.
[２] Ｇａｒｃｉａ Ｄ. Ａ ｍｉＲａｃｌｅ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ: Ｒｏｌｅ ｏｆ
ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐａｔｔｅｒｎｉｎｇ [ Ｊ] .
Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００８ꎬ １９:
５８６￣５９５.
[３] Ｌｕｏ Ｍꎬ Ｚｈａｎｇ Ｚ Ｍꎬ Ｇａｏ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｍｉＲ３１９
ｉｎ ｐｌａｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ｈｅ￣
ｒｅｄｉｔａｓ (遗传)ꎬ２０１１ꎬ ３３(１１):１２０３￣１２１１.
[４] Ｊｏｎｅｓ￣Ｒｈｏａｄｅｓ Ｍ Ｗꎬ Ｂａｒｔｅｌ Ｄ Ｐ. Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｉｄｅｎ￣
ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｔａｒｇｅｔｓꎬ ｉｎｃｌｕ￣
ｄｉｎｇ ａ ｓｔｒｅｓｓ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｉＲＮＡ [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌꎬ
２００４ꎬ １４:７８７￣７９９.
[５] Ｗｉｌｌｍａｎｎ Ｍ Ｒꎬ Ｐｏｒｔｈｉｎｇ Ｒ Ｓ. Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖｏｌｕ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲＮＡ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｇｒａｍｓ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐ￣
ｍｅｎｔ [ Ｊ] . Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００７ꎬ
１０: ５０３￣５１１.
[６] Ｌｉ Ｆꎬ Ｐｉｇｎａｔｔａ Ｄꎬ Ｂｅｎｄｉｘ Ｃꎬ ｅｔ ａｌ. ＭｉｃｒｏＲＮＡ ｒｅｇｕｌａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ [ Ｊ] . ＰＮＡＳꎬ
２０１２ꎬ ５(１０９): １７９０￣１７９５.
[７] Ｓｈｕｋｌａ Ｌ Ｉꎬ Ｃｈｉｎｎｕｓａｍｙ Ｖꎬ Ｓｕｎｋａｒ Ｒ. Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｍｉ￣
ｃｒｏＲＮＡｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｓｍａｌｌ ＲＮＡｓ ｉｎ ｐｌａｎｔ
ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ [ Ｊ] . Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａꎬ
２００８ꎬ １７７９: ７４３￣７４８.
[８] Ｋａｔｉｙａｒ￣Ａｇａｒｗａｌ Ｓꎬ Ｊｉｎ Ｈ Ｌ. Ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｍａｌｌ ＲＮＡｓ ｉｎ
ｈｏｓｔ￣ｍｉｃｒｏｂｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ [Ｊ] . Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｈｙ￣
ｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ ２０１０ꎬ ４８(１):２２５￣２４６.
[９] Ｌｉｕ Ｈ Ｗ. Ｐｏｌｌｅｎ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｇｒｅｅｎ ｍｏｔ￣
ｔｌｅ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ
ｃｕｃｕｍｂｅｒ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｄ] . Ｂｅｉｊｉｎｇ: Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌ￣
ｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (北京:中国农业大学)ꎬ ２０１３.
[１０] Ｌｉｖａｋ Ｋ Ｊꎬ Ｓｃｈｍｉｔｔｇｅｎ Ｔ Ｄ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｇｅｎｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄａｔａ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ａｎｄ
ｔｈｅ ２￣△△Ｃｔ ｍｅｔｈｏｄ [Ｊ] . Ｍｅｔｈｏｄｓꎬ ２００１ꎬ ２５: ４０２￣４０８.
[１１] Ｍａｏ Ｗꎬ Ｌｉ Ｚꎬ Ｘｉａ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ. Ａ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈ ｏｆ
ｈｉｇｈ￣ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｇｒａｄｏｍｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅ￣
ｖｅａｌｓ ｔｉｓｓｕｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ
ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ [ Ｊ] . ＰＬｏＳ ＯＮＥꎬ ２０１２ꎬ ７(３):
ｅ３３０４０. ｄｏｉ:１０.１３７１ / ｊｏｕｒｎａｌ.ｐｏｎｅ.００３３０４０.
[１２] Ｍａｒｔíｎｅｚ Ｇꎬ Ｆｏｒｍｅｎｔ Ｊꎬ Ｌｌａｖｅ Ｃꎬ ｅｔ ａｌ. Ｈｉｇｈ￣ｔｈｒｏｕｇｈ￣
ｐｕｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇꎬ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｗ
１６
植物病理学报 ４６卷
ａｎｄ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｉＲＮＡｓ [ Ｊ] . ＰＬｏＳ ＯＮＥꎬ
２０１１ꎬ ６(５): ｅ１９５２３. ｄｏｉ: １０. １３７１ / ｊｏｕｒｎａｌ. ｐｏｎｅ.
００１９５２３.
[１３] Ｈｕ Ｊ Ｈꎬ Ｓｕｎ Ｌ Ｌꎬ Ｚｈｕ Ｚ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ. Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ ｆｒｏｍ ｆｉｖｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｕｃｕｒｂｉｔ ｓｐｅ￣
ｃｉｅｓ ｕｓｉｎｇ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ
[Ｊ] . Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅꎬ ２０１４ꎬ １０２: １３７￣１４４.
[１４] Ｌｉ Ｃ Ｈꎬ Ｌｉ Ｙ Ｓꎬ Ｂａｉ Ｌ Ｑꎬ ｅｔ ａｌ. Ｇｒａｆｔｉｎｇ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ
ｍｉＲＮＡｓ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ａｎｄ ｐｕｍｐｋｉｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ
ｂｙ ｈｉｇｈ￣ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｔ ｗｈｏｌｅ ｇｅｎｏｍｅ ｌｅｖｅｌ
[Ｊ] . Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉａ Ｐｌａｎｔａｒｕｍꎬ ２０１４ꎬ １５１: ４０６￣４２２.
[１５] Ｈｉｒａｉ Ｍ Ｙꎬ Ｓｕｇｉｙａｍａ Ｋꎬ Ｓａｗａｄａ Ｙ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ｏｍｉｃｓ￣
ｂａｓｅｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ Ｍｙｂ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
ｆａｃｔｏｒｓ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ａｌｉｐｈａｔｉｃ ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
[Ｊ] . ＰＮＡＳꎬ ２００７ꎬ １０４(１５): ６４７８￣６４８３.
[１６] Ｋｒａｎｚ Ｈ Ｄꎬ Ｄｅｎｅｋａｍｐ Ｍꎬ Ｇｒｅｃｏ Ｒꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｏｗａｒｄｓ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ
Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｆｒｏｍ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ
[Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ １９９８ꎬ １６: ２６３￣２７６.
[１７] Ｃｈｅｎ Ｙ Ｈꎬ Ｙａｎｇ Ｘ Ｙꎬ Ｈｅ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ ＭＹＢ ｔｒａｎ￣
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ: ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｉｃｅ
ＭＹＢ ｆａｍｉｌｙ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００６ꎬ ６０
(１): １０７￣１２４.
[１８] Ｚｈａｎｇ Ｒ Ｘ. Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｂｒａｓｓｉｃａ
ｎａｐｕｓ ＴＴ８ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｂｙ ＲＮＡｉ ａｎｄ ＣＲＥＳ￣Ｔ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [Ｄ] . Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ: Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (重庆:
西南大学)ꎬ ２０１１.
责任编辑:李晖
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