全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４６(１): ４７￣５５(２０１６)
收稿日期: ２０１４￣１０￣１５ꎻ 修回日期: ２０１５￣０９￣１７
基金项目: “国家自然科学基金”(３１４６０４５９)
通讯作者: 黎起秦ꎬ教授ꎬ主要从事植物病害及其防治研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:ｑｑｌｉ５８０６＠ｇｘｕ.ｅｄｕ.ｃｎ
第一作者: 范腕腕ꎬ女ꎬ河南南阳人ꎬ博士研究生ꎬ主要从事植物病害及其防治研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ: ｋｅｒｅｎｆ８８８＠１６３.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１６.０１.００６
茄青枯拉尔氏菌 Ｒｓ￣Ｔ０２在 ３ꎬ４ꎬ５￣三羟基苯
甲酸甲酯作用下的差异蛋白分析
范腕腕ꎬ余功明ꎬ袁高庆ꎬ林 纬ꎬ魏昌英ꎬ黎起秦∗
(广西大学农学院ꎬ南宁ꎬ５３０００４)
摘要:为探明 ３ꎬ４ꎬ５￣三羟基苯甲酸甲酯(ＭＧ)抑制茄青枯拉尔氏菌的机制ꎬ利用二维电泳技术ꎬ分析了ＭＧ作用下茄青枯拉
尔氏菌 Ｒｓ￣Ｔ０２菌株的差异蛋白ꎮ 结果发现ꎬ在 ＭＧ作用下的菌体中检测出 ２９个差异蛋白点ꎮ 采用质谱技术鉴定出 ２２个
差异蛋白ꎬ其中新增蛋白 １１种、缺失蛋白 ５种、表达上调蛋白 １ 种和表达下降蛋白 ５ 种ꎮ 这些蛋白参与能量代谢、信号转
导、物质运输和 ＤＮＡ修复等途径ꎮ 我们推测ꎬ与能量代谢相关的新增蛋白 ｓｐｏｔ ９和缺失蛋白 ｓｐｏｔ ６５可能与 ＭＧ抑制茄青
枯拉尔氏菌的机制有关ꎮ
关键词:茄青枯拉尔氏菌ꎻ３ꎬ４ꎬ５￣三羟基苯甲酸甲酯ꎻ差异蛋白
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｓｔｒａｉｎ Ｒｓ￣Ｔ０２ ａｆｔｅｒ ｍｅｔｈｙｌ
ｇａｌｌａｔｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　 ＦＡＮ Ｗａｎ￣ｗａｎꎬＹＵ Ｇｏｎｇ￣ｍｉｎｇꎬ ＹＵＡＮ Ｇａｏ￣ｑｉｎｇꎬ ＬＩＮ Ｗｅｉꎬ ＷＥＩ Ｃｈａｎｇ￣ｙｉｎｇꎬ ＬＩ
Ｑｉ￣ｑｉｎ　 (Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬＧｕａｎｇｘｉ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＮａｎｎｉｎｇ ５３０００４ꎬＣｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｅｘｐｌａｉｎ ｔｈｅ ａｎｔｉ￣ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｍｅｔｈｙｌ ｇａｌｌａｔｅ (ＭＧ) ｉｎ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ
ｓｔｒａｉｎ Ｒｓ￣Ｔ０２ꎬ ｔｗｏ￣ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ (２￣ＤＥ) ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｅｐｅｒａｔｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗｉｔｈ ＭＧ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ２９ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｐｏｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ. Ｔｗｅｎｔｙ ｔｗｏ
ｐｒｏｔｅｉｎｓꎬ ｗｈｉｃｈ ｉｎｃｌｕｄｅｄ １１ ｎｅｗｌｙ￣ｅｍｅｒｇｅｄꎬ ５ ｄｉｓａｐｐｅａｒｅｄꎬ １ ｕｐ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ａｎｄ ５ ｄｏｗｎ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓꎬｗｅｒｅ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ＬＣ￣ＭＳ / ＭＳ. Ｔｈｅｓｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｅｎｅｒｇｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍꎬ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｌｏｃａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｌｕｔｅ ｏｒ ＤＮＡ ｒｅｐａｉｒ. Ｗｅ ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｚｅｄ ｔｈａｔ ｎｅｗｌｙ￣ｅｍｅｒｇｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｐｏｔ ９ ａｎｄ ｄｉｓａｐｐｅａｒｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｐｏｔ
６５ꎬ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｅｎｅｒｇｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍꎬ ｍｉｇｈｔ ｉｎｖｏｌｖｅ ｉｎ ｔｈｅ ａｎｔｉ￣ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＭＧ ｉｎ Ｒ. Ｓｏ￣
ｌａｎａｃｅａｒｕｍ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍꎻ ｍｅｔｈｙｌ ｇａｌｌａｔｅꎻ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
中图分类号: Ｓ４３２.４２　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１６)０１￣００４７￣０９
　 　 植物青枯病(Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｗｉｌｔ)是由茄青枯拉尔
氏菌(Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ)系统侵染引起的一
种植物毁灭性病害ꎬ广泛分布于热带、亚热带和温
带地区ꎮ 该病原菌又名茄青枯劳尔氏菌、茄青枯雷
尔氏菌ꎬ其寄主范围广ꎬ可侵染 ５０多科 ４００ 多种植
物[１]ꎮ 受植物青枯病为害的作物一般造成减产
１０％~２０％ꎬ严重时达 ５０％ꎬ甚至绝收ꎬ给农业生产
造成巨大的经济损失[２]ꎮ 目前防治该病害属世界
性难题ꎬ化学防治仍是防治该病害的重要手段ꎬ农
业生产迫切需要提供新的、高效安全的农药[３]ꎮ
　 　 本项目组在前期的研究工作中ꎬ从漆树科植物
木蜡树(Ｔｏｘｉｃｏｄｅｎｄｒｏｎ ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ)中分离和纯化出

　
植物病理学报 ４６卷
对 Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ有较强的抑制作用的 ３ꎬ４ꎬ５￣三
羟基苯甲酸甲酯(ｍｅｔｈｙｌ ｇａｌｌａｔｅꎬ ＭＧ)ꎮ 用平板菌
落稀释法测定该化合物对 Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ的最低
抑菌浓度(Ｍｉｎｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎꎬＭＩＣ)为
２０ μｇ􀅰ｍＬ￣１ꎬ在此浓度作用下ꎬＲ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ 的
菌体形态明显变形ꎬ细菌总蛋白质合成量大大降低ꎬ
琥珀酸脱氢酶、果胶酶和纤维素酶活性下降[４ꎬ５]ꎮ
　 　 目前有关植物抑菌化合物对植物病原菌的作
用机制研究尚处于初步阶段ꎬ研究技术多是建立在
病菌的形态学、细胞生理和生化基础上的ꎬ在分子
水平上尚鲜有报道[ ６ ]ꎮ 差异蛋白质组学方法是检
测生物样本在不同处理条件下特定蛋白质在表达
和修饰等方面变化的有力工具ꎬ在阐明生物体的发
病机理和药剂的作用机制等方面有着明显的优
势[７]ꎬ而 Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ 全基因组测序分析业已
完成[ ８ ]ꎬ为该菌的蛋白质组学研究以及从分子水
平上揭示该菌的致病机制和寻找新的药物靶标奠
定基础[ ９~１１ ]ꎮ 本文通过二维电泳结合质谱鉴定技
术对 ３ꎬ ４ꎬ ５￣三羟基苯甲酸甲酯作用下 Ｒ. ｓｏ￣
ｌａｎａｃｅａｒｕｍ菌表达的差异蛋白进行分析ꎬ为探索
３ꎬ４ꎬ５￣三羟基苯甲酸甲酯抑制茄青枯拉尔氏菌的
机制奠定基础ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 试验材料
　 　 供试菌株 为 茄 青 枯 拉 尔 氏 菌 ( Ｒ. ｓｏ￣
ｌａｎａｃｅａｒｕｍ) Ｒｓ￣Ｔ０２ 菌株ꎬ属于 ｐｈｙｌｏｔｙｐｅ Ｉꎬ ｓｅ￣
ｑｕｅｖａｒ １４ꎬ由广西大学植物病理学研究室提供ꎮ 菌
株在灭菌水中 ２０℃下保存ꎮ
　 　 ＮＡ 培养基(Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ａｇａｒꎬ ＮＡ 培养液不加
琼脂):酵母粉 ３ ｇꎬ蛋白胨 ５ ｇꎬ蔗糖 １０ ｇꎬ琼脂 １７
ｇꎬ蒸馏水 １ ＬꎬｐＨ调至 ７.０ꎮ
　 　 ３ꎬ４ꎬ５￣三羟基苯甲酸甲酯(ＭＧ)由阿拉丁试
剂有限公司生产ꎮ
１.２　 菌株生长曲线的测定
　 　 以 １０％二甲基亚砜(ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅꎬ ＤＭ￣
ＳＯ)为溶剂配制 ＭＧ 母液ꎬＲｓ￣Ｔ０２ 菌株在 ＮＡ 培
养液中培养(２８℃ꎬ１２０ ｒ􀅰ｍｉｎ￣１)２０ ｈꎬ之后移入新
鲜的 ＮＡ 培养液中使菌液浓度为 １０８ ＣＦＵ􀅰ｍＬ￣１ꎬ
加入 ＭＧ液使其终浓度为 ２０ μｇ􀅰ｍＬ￣１ꎬ在 ２８℃下
１２０ ｒ􀅰ｍｉｎ￣１振荡培养ꎬ３６ ｈ 前每隔 ４ ｈ 测一次
ＯＤ６００值ꎬ３６ ｈ 后每隔 １２ ｈ 测一次 ＯＤ６００值ꎮ 以加
相同体积的 ＤＭＳＯ作为对照ꎮ
１.３　 菌体制备
　 　 Ｒｓ￣Ｔ０２菌株在 ＮＡ 培养液中培养(２８℃ꎬ１２０
ｒ􀅰ｍｉｎ￣１)至对数生长期ꎬ用 ＮＡ培养液将其稀释成
浓度为 １０８ＣＦＵ􀅰ｍＬ￣１的菌液ꎬ备用ꎮ
　 　 用 １０％ＤＭＳＯ 溶解 ＭＧ 配制成 ＭＧ 母液ꎬ将
ＭＧ母液加入菌液中ꎬ制备好的菌液 ＭＧ终浓度为
２０ μｇ􀅰ｍＬ￣１ꎬＤＭＳＯ 终浓度为 ０.１％ꎮ 以含 ０.１％
ＤＭＳＯ菌液为对照ꎬ置于 ２８℃摇床中ꎬ１２０ ｒ􀅰ｍｉｎ￣１
培养ꎬ使其分别处于迟缓期、对数生长初期和中期ꎮ
每处理 ３次重复ꎮ
１.４　 差异蛋白的确定及分析
１.４.１　 菌株总蛋白的制备　 菌株总蛋白的制备参
照 Ｃａｒｐｅｎｔｉｅｒ等的方法[１２]ꎮ
１.４.２　 菌株总蛋白的 １￣Ｄ 和 ２￣Ｄ 凝胶电泳　 蛋白
质定量参考 Ｂｒａｄｆｏｒｄ法[１３]ꎮ 茄青枯拉尔氏菌总蛋
白的 １￣Ｄ凝胶电泳参照 Ｌａｅｍｍｌｉ的方法[１４]ꎮ 二维
凝胶电泳参照 Ｓｅｌｉｃｈａｒｏｖａ的方法[１５]ꎮ
１.４.３　 凝胶染色和图像分析 　 采用硝酸银染色
法[１６]对凝胶进行染色ꎮ 银染后用 ＰＤＱｕｅｓｔ ８.０ 对
凝胶图谱进行扫描、分析ꎬ将差异表达蛋白点挖出ꎮ
１.４.４　 差异蛋白的质谱鉴定和生物学信息分析　
从胶上挖出的蛋白用双蒸水清洗ꎬ蛋白质经脱色及
真空干燥后ꎬ用 Ｔｒｙｐｓｉｎ 酶液消化ꎬ酶解后的肽片
段用体积分数为 ５０％乙腈萃取ꎮ 用 ＭＡＬＤＩ￣ＴＯＦ
质谱仪(ＲｅｆｌｅｘＩＩＩꎬ Ｂｒｕｋｅｒ￣Ｄａｌｔｏｎｉｃｓꎬ Ｂｒｅｍｅｎꎬ Ｇｅｒ￣
ｍａｎｙ)进行分析匹配ꎬ得出的质谱数据在 ｈｔｔｐ: / /
ｗｗｗ.ｍａｔｒｉｘｓｃｉｅｎｃｅ.ｃｏｍ搜索相应结果ꎮ 检索 ＮＣ￣
ＢＩ蛋白质数据库及查阅相关文献分析蛋白功能ꎮ
１.４.５　 二维电泳准确性的验证　 随机抽取 ２ 种蛋
白基因作为实时 ＰＣＲ( ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲ)的对象ꎬ一是
用浓度为 ２０ μｇ􀅰ｍＬ￣１的 ＭＧ 处理菌株 Ｒｓ￣Ｔ０２ 后
菌体新增蛋白 ｓｐｏｔ １ꎬ另一个是菌株经 ＭＧ处理后
菌体的缺失蛋白 ｓｐｏｔ ６５ꎬ检测其在转录水平的表
达差异ꎬ以确保二维电泳的准确ꎮ
　 　 菌株在含 ＭＧ ２０ μｇ􀅰ｍＬ￣１的 ＮＡ培养液中分
别振荡培养至迟缓期、对数生长初期和中期ꎬ参照
Ｒｅｉｄ等的方法[１７]分别提取菌体总 ＲＮＡꎬ以在含
０.１％ＤＭＳＯ的 ＮＡ 培养液中培养相同时间的菌体
总 ＲＮＡ 为对照ꎮ 总 ＲＮＡ 采用试剂盒 Ｒｅｖｅｒ Ａｉｄ
８４

　
　 １期 范腕腕ꎬ等:茄青枯拉尔氏菌 Ｒｓ￣Ｔ０２在 ３ꎬ４ꎬ５￣三羟基苯甲酸甲酯作用下的差异蛋白分析
Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ(Ｆｅｒｍｅｎｔａｓꎬ ＵＳＡ)
反转录成 ｃＤＮＡꎮ 选用 １６ｓ ｒＲＮＡ基因为内参ꎮ 根
据所选蛋白基因的编码序列设计实时 ＰＣＲ 引物
(表 １)ꎮ
　 　 实时 ＰＣＲ的反应体系为:ｃＤＮＡ模板 １.０ μＬꎬ
２×ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ １０ μＬꎬ正向引物
０.３ μＬꎬ反向引物 ０.３ μＬꎬｄｄＨ２Ｏ ８.４ μＬꎮ 反应程
序:９５℃预变性 １０ ｍｉｎꎻ９５℃变性 １５ ｓꎬ６０℃退火
６０ ｓꎬ４０个循环ꎮ
　 　 将所得数据置于 Ｅｘｃｅｌ 中ꎬ分析基因在不同时
期的表达情况ꎮ
２　 结果与分析
２.１　 ＭＧ对病菌生长曲线的影响
　 　 Ｒｓ￣Ｔ０２ 野生菌株在 ２０ μｇ􀅰ｍＬ￣１的 ＭＧ 作用
下ꎬ菌株的迟缓期、对数生长期分别为 ０ ~ １２ 和 １２
~３６ ｈ(图 １)ꎮ 因此ꎬ本研究以 ６、１２ 和 ２４ ｈ 作为
在药剂处理下该菌的迟缓期、对数生长初期和中期
的培养时间ꎮ
　 　 Ｒｓ￣Ｔ０２ 野 生 菌 株 于 ２８℃ 摇 床 中ꎬ １２０
ｒ􀅰ｍｉｎ￣１振荡培养 ８ 和 ３６ ｈ 后分别进入对数生长
期和稳定生长期ꎬ而在 ２０ μｇ􀅰ｍＬ ￣１的 ＭＧ 作用
下ꎬ菌株生长的迟缓期延长ꎬ１２ ｈ 后进入对数生
长期ꎬ虽然也是在 ３６ ｈ 后进入稳定生长期ꎬ但生
长的峰值显著低于对照菌ꎬ且提前进入衰亡期
(图 １)ꎬ说明 ＭＧ 对 Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ 的生长有明
显抑制作用ꎮ
２.２　 ３ꎬ４ꎬ５￣三羟基苯甲酸甲酯与茄青枯拉尔氏菌
Ｒｓ￣Ｔ０２相互作用的差异蛋白质
　 　 用浓度为 ２０ μｇ􀅰ｍＬ￣１的 ＭＧ 处理菌株 Ｒｓ￣
Ｔ０２后ꎬ菌体在处理不同时间的蛋白和对照组的蛋
白ꎬ经 １￣Ｄ和 ２￣Ｄ凝胶电泳后ꎬ获得了重复间高度
一致且清晰的蛋白质图谱ꎮ 在上样量一致的情况
下ꎬ各处理菌的 １￣Ｄ 蛋白质谱带无显著差异(图
２)ꎮ 用 ＰＤＱｕｅｓｔ ８.０分析 ２￣Ｄ电泳图像ꎬ将药剂处
理和溶剂对照菌的蛋白图谱比较ꎬ找出差异点ꎬ最
后把 ３组图片中共同的 ２９个差异蛋白点确定为质
谱鉴定对象(图 ３)ꎮ ２９ 个差异蛋白点中ꎬ新增斑
点为 １４个ꎬ缺失斑点 ６ 个ꎬ表达上调斑点 ２ 个ꎬ表
达下降斑点 ７个ꎮ
Ｔａｂｌｅ １　 Ｐｒｉｍｅｒｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
Ｐｒｉｍｅｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ / ５′￣３′
ｓｐｏｔ１￣Ｆ ＡＣＧＣＣＧＡＡＧＧＣＡＡＴＣＡＣＴＡ
ｓｐｏｔ１￣Ｒ ＴＴＴＧＧＴＧＧＡＧＣＣＣＡＣＡＡＡＧ
ｓｐｏｔ６５￣Ｆ ＡＴＧＧＴＴＴＣＣＧＣＡＴＣＧＴＣＧ
ｓｐｏｔ６５￣Ｒ ＴＣＡＡＣＡＴＣＣＧＣＴＣＧＧＴＣＡＡ
１６ｓｒＲＮＡ￣Ｆ ＡＴＧＣＣＡＣＴＡＡＣＧＡＡＧＣＡＧＡＧＡ
１６ｓｒＲＮＡ￣Ｒ ＴＴＧＣＧＧＧＡＣＴＴＡＡＣＣＣＡＡＣ
　
Ｆｉｇ. １　 Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｃｕｒｖｅ ｏｆ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ
ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＭＧ
Ｆｉｇ. ２ 　 １￣Ｄ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ
ｆｒｏｍ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｓｔｒａｉｎ
Ｒｓ￣Ｔ０２ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＭＧ ａｎｄ ＤＭＳＯ (ｃｋ)
Ｔｈｅ ｆｉｇｕｒｅ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ １￣Ｄ ｇｅｌｓ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｒｅｐｌｉ￣
ｃａｔｅｓ. Ａ: ６ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＤＭＳＯ ( ｃｋ) ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎻ Ｂ: ６ ｈｏｕｒｓ
ａｆｔｅｒ ＭＧ ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎻ Ｃ: １２ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＤＭＳＯ ( ｃｋ) ｔｒｅａｔ￣
ｍｅｎｔꎻ Ｄ: １２ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＭＧ ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎻ Ｅ: ２４ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ
ＤＭＳＯ (ｃｋ) ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎻ Ｆ: ２４ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＭＧ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ.
９４

　
植物病理学报 ４６卷
Ｆｉｇ. ３　 ２￣ＤＥ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ
ｓｔｒａｉｎ Ｒｓ￣Ｔ０２ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＭＧ ａｎｄ ＤＭＳＯ (ｃｋ)
Ａｒｒｏｗｓ ｓｈｏｗ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ. Ｆｉｇｕｒｅ Ａ ｔｏ Ｆ ｗａｓ ｏｎｅ ｏｆ ２￣ＤＥ ｇｅｌｓ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ ｏｆ ｅａｃｈ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ.
Ａ: ６ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＤＭＳＯ (ｃｋ) ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎻ Ｂ: ６ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＭＧ ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎻ Ｃ: １２ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＤＭＳＯ (ｃｋ) ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎻ
Ｄ: １２ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＭＧ ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎻ Ｅ: ２４ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＤＭＳＯ (ｃｋ) ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎻ Ｆ: ２４ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＭＧ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ.
０５

　
　 １期 范腕腕ꎬ等:茄青枯拉尔氏菌 Ｒｓ￣Ｔ０２在 ３ꎬ４ꎬ５￣三羟基苯甲酸甲酯作用下的差异蛋白分析
２.３　 差异蛋白的质谱鉴定
　 　 根据质谱鉴定的结果ꎬ在 ２９个差异蛋白点中ꎬ
有 ２２ 个蛋白点的鉴定分值 Ｓｃｏｒｅ 大于 ５８ (Ｐ <
０.０５)ꎬ这 ２２ 个蛋白点被鉴定出的蛋白名称见表
２ꎮ Ｓｐｏｔ １、２、３、４、５、９、１０、６３、６７、１００ 和 １１８ 蛋白
只存在于菌体受 ＭＧ 作用的蛋白质图谱中ꎬ在对
照的菌中未出现ꎬ为药剂处理后菌体新增的蛋白ꎮ
Ｓｐｏｔ １６、１７、６５、６６ 和 ７０ 蛋白只存在于对照菌中ꎬ
在药剂处理菌的图谱中未出现ꎬ为缺失蛋白ꎮ 药剂
处理菌图谱中的 ｓｐｏｔ ６蛋白与对照菌图谱相比ꎬ表
达上调ꎬ而药剂处理菌图谱中的 ｓｐｏｔ ７、１３、１５、６４
和 ６９蛋白与对照菌的图谱相比ꎬ表达量下降ꎮ
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｂｙ ＬＣ￣ＭＳ / ＭＳ
Ｐｒｏｔｅｉｎ
ｓｐｏｒｔ
Ｐｒｏｔｅｉｎ ｎａｍｅ Ｓｏｕｒｃｅ
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ
ｎｕｍｂｅｒ
Ｓｃｏｒｅ
Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ
ｐｏｉｎｔ / ｐＩ
１
Ｐｕｔａｔｉｖｅ ｐｏｌｙｐｒｅｎｙｌ￣ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ
ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＣＭＲ１５ ｇｉ ２９９０６９６４３ １００.００ ６.２９
２ Ａｒｇｉｎｉｎｅ ｄｅｉｍｉｎａｓｅ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ ＳＫ６７８ ｇｉ ３２４９９５３２ ８５.００ ５.１７
３ ｓｓＤＮＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＰＳＩ ０７ ｇｉ ３００６９２６２ １００.００ ５.９４
４ ＦＫＢＰ￣ｔｙｐｅ ｐｅｐｔｉｄｙｌ￣ｐｒｏｌｙｌ ｃｉｓ￣ｔｒａｎｓ
ｉｓｏｍｅｒａｓｅ
Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＧＭＩ１０００ ｇｉ １７５４５５０３ ９９.９４ ５.０２
５ Ｆｅｒｒｉｃ ｕｐｔａｋｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ (ＦＵＲ)￣
ｌｉｋｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＧＭＩ １０００ ｇｉ １７５４８４６８ １００.００ ５.８０
６ ＤｎａＫ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔ Ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｕｓ ｍａｒｉｎｕｓ ｓｕｂｓｐ.
ｍａｒｉｎｕｓｓｔｒ. ＣＣＭＰ ３７５
ｇｉ ３３２４１３２０ ９１.００ ４.７８
７ ＤｎａＫ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＭｏｌＫ ２ ｇｉ ２０７７２７５２ １００.００ ５.３９
９ Ｆ０Ｆ１ ＡＴＰ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｓｕｂｕｎｉｔ ｅｐｓｉｌｏｎ Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＧＭＩ １０００ ｇｉ １７５４８０３３ ９９.８２ ５.２５
１０ Ｐｕｔａｔｉｖｅ ｐｉｒｉｎ￣ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＧＭＩ １０００ ｇｉ １７５４６９２７ ９９.７２ ５.６７
１３ Ｅｘｏｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ ＡＨ １２７３ ｇｉ ２２９０１８９８ ８４.００ ６.１２
１５ Ｌｅｕｃｉｎｅ / ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ / ｖａｌｉｎｅ ｔｒａｎｓ￣
ｐｏｒｔｅｒ ｓｕｂｕｎｉｔꎻ ＡＴＰ￣ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃｏｍ￣
ｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ＡＢＣ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ
Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＣＭＲ１５ ｇｉ ２９９０６５９６５ １００.００ ７.０７
１６ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＧＭＩ１０００ ｇｉ １７５４９３３１ １００.００ ６.５６
１７ Ｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ＲＳｃ２１６９ Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＧＭＩ１０００ ｇｉ １７５４６８８８ １００.００ ５.８０
６３ Ｐｕｔａｔｉｖｅ [ Ａｃｙｌ￣ｃａｒｒｉｅｒ￣ｐｒｏｔｅｉｎ ]
ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ
Ｒ.ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＧＭＩ１０００ ｇｉ １７５４９４７７ １００.００ ５.４４
６４ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＬｆａｒＫ３￣１２６３３ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ ＫＣＴＣ ３６８１ ｇｉ ３３６３９６５４１ ８６.００ ６.１０
６５ Ｐｏｌｙ[Ｄ( ￣) ￣３￣Ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔ] ｄｅ￣
ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｇｉ ２９９０６６９７４ １００.００ ６.６３
６６ ＤａｐＣ Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＵＷ ５５１ ｇｉ ８３７４８８１７ １００.００ ６.１２
６７ Ｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ＨＭＰＲＥＦ ９３３３
＿０１６６５ꎬ ｐａｒｔｉａｌ
Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ ｉｇｎａｖａ ＡＴＣＣ ５１２７６ ｇｉ ３５８０６８３１７ ８５.００ ５.３２
６９ Ｕｎｎａｍｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓ ｓｔｒ.
ＭＣ２１５５
ｇｉ １１８４７３１７６ ９２.００ ５.７７
７０ Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｈｙｐｏｔｈｅｔｈｉｃａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ
ＤＵＦ７７０
Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｇｉ ２９９０６９１１０ １００.００ ５.０１
１００ Ｆｏｒｍａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｓｕｂｕｎｉｔ
ａｌｐｈａ
Ａｒｏｍａｔｏｌｅｕｍ ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ ＥｂＮ １ ｇｉ ５６４７７０８７ ８９.００ ６.７２
１１８ Ｆｌａｇｅｌｌａｒ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｌａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｄｏｎｇｈａｅｎｓｉｓ ＭＰＡ １ Ｕ２ ｇｉ ３２３４９０１５８ ８６.００ ４.８２
１５

　
植物病理学报 ４６卷
２.４　 二维电泳的准确性
　 　 测试结果见图 ４ꎮ 从图 ４ 可以看出ꎬ２０ μｇ􀅰
ｍＬ￣１的 ＭＧ 处理菌株 Ｒｓ￣Ｔ０２ 后ꎬ菌体新增蛋白
ｓｐｏｔ １的基因表达量ꎬＭＧ 处理菌体高于对照处理
菌体ꎬＭＧ 处理时间 ６、１２ 和 ２４ ｈ 的菌蛋白 ｓｐｏｔ １
基因表达量分别是处理相同时间的对照菌的
１７.２３、１２４.９３和 ２.３９倍ꎮ 缺失蛋白 ｓｐｏｔ ６５的基因
表达量ꎬＭＧ处理菌低于对照菌ꎬ对照菌处理时间
６、１２ 和 ２４ ｈ 的蛋白 ｓｐｏｔ ６５ 基因表达量分别是
ＭＧ处理相同时间菌体的 ３２.９８、１.５３ 和 ２０.５４ 倍ꎮ
由此说明ꎬ这些差异蛋白质确实存在于菌体内ꎬ且
其基因转录表达与蛋白表达水平基本一致ꎬ证实了
二维电泳的准确性ꎮ
３　 结论与讨论
　 　 本研究应用差异蛋白质组学的方法ꎬ对 Ｒ. ｓｏ￣
ｌａｎａｃｅａｒｕｍ Ｒｓ￣Ｔ０２在 ＭＧ作用下蛋白质表达水平
的变化进行了分析ꎬ该菌株在 ＭＧ 作用下ꎬ与溶剂
对照相比ꎬ菌体蛋白质表达差异明显的蛋白质斑点
共有 ２９个ꎬ其中新增斑点 １１个ꎬ缺失斑点 ５ 个ꎬ表
达上调斑点 １ 个ꎬ表达下降斑点 ５ 个ꎮ 新增的 １１
个差异蛋白中ꎬｓｐｏｔ １蛋白为聚异戊二烯焦磷酸结
合假想蛋白ꎮ Ｈａｎｄａ 等[１８]指出该类群蛋白广泛存
在于真核和原核的生物体内ꎬ在类异戊二烯醌代谢
中起重要作用ꎬ而生物体内的类异戊二烯醌主要负
责呼吸链上的电子传递以及调控氧化应激反应ꎮ
新增的蛋白 ｓｐｏｔ １ 蛋白可能是茄青枯拉尔氏菌在
ＭＧ作用下呼吸作用异常[５]所做出的应激反应ꎮ
ｓｐｏｔ ２蛋白为精氨酸脱亚胺酶ꎬ在医学上用于抗肿
瘤的重要酶类ꎬ可抑制肿瘤细胞增殖[１９]ꎮ 该酶在
微生物中参与细胞内多种生理代谢活动ꎬ在逆境条
件下对微生物的生长代谢也有重要的调节功
能[２０~２２]ꎮ ｓｐｏｔ ３蛋白为单链 ＤＮＡ 结合蛋白ꎬＣｈｅ￣
ｄｉｎ等[２３]和 Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ 等[２４]的研究表明ꎬ在细菌
和真核生物中ꎬ单链 ＤＮＡ 结合蛋白在 ＤＮＡ 的体
外复制及重组修复方面都是必须的ꎮ ｓｐｏｔ ４ 蛋白
为 ＦＫＢＰ 型肽酰￣脯氨酰￣顺反式异构酶 ( ＦＫＢＰ
ＰＰＩａｓｅ)ꎬＢｅｒｎｈａｒｄｔ 等[２５]确定了一个以 ｓｌｙＤ 基因
编码的 ＦＫＢＰ型肽酰￣脯氨酰￣顺反式异构酶ꎬ该酶
在噬菌体 ФＸ １７４ 内能够阻止溶菌基因 Ｅ 破坏胞
质壁的生物合成ꎬ使菌体继续处于营养生长阶段ꎮ
ｓｐｏｔ ９ 蛋白为 Ｆ０Ｆ１ ＡＴＰ 合酶 ε 亚基ꎮ Ｆ０Ｆ１ ＡＴＰ
合酶是存在于细菌和叶绿体中的一种调控能量代
谢的酶ꎬε亚基在 Ｆ０Ｆ１ ＡＴＰ 合酶的调控过程中起
着极为显著的作用ꎬ可影响 ＡＴＰ 合酶的偶联效率
和催化途径ꎬ有选择的抑制 ＡＴＰ 水解[ ２６ ]ꎮ ｓｐｏｔ ６３
蛋白为假想的酰基载体蛋白磷酸二酯酶ꎬ该酶在细
菌的脂肪酸合成中起重要作用[２７]ꎮ ｓｐｏｔ １００ 为甲
酸脱氢酶(ＦＤＨ)ꎬ在多种原核生物中ꎬ该酶可将甲
酸盐氧化为ＣＯ２ ꎬ同时将ＮＡＤ
＋还原成ＮＡＤＨꎬ还
Ｆｉｇ. ４　 Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｐｏｔ １ ａｎｄ ｓｐｏｔ ６５ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ
ｓｔｒａｉｎ Ｒｓ￣Ｔ０２ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＭＧ ａｎｄ ＤＭＳＯ (ｃｋ)
Ａ: ６ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＤＭＳＯ (ｃｋ) ａｎｄ ＭＧ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓꎻ Ｂ: １２ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＤＭＳＯ (ｃｋ) ａｎｄ ＭＧ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓꎻ
Ｃ: ２４ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ＤＭＳＯ (ｃｋ) ａｎｄ ＭＧ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ.
２５

　
　 １期 范腕腕ꎬ等:茄青枯拉尔氏菌 Ｒｓ￣Ｔ０２在 ３ꎬ４ꎬ５￣三羟基苯甲酸甲酯作用下的差异蛋白分析
原的 ＮＡＤＨ为机体提供能量以抵御不良环境[２８]ꎮ
ｓｐｏｔ １１８为鞭毛合成蛋白ꎬ参与细菌鞭毛的生物合
成ꎬ调控细菌的运动性ꎮ ｓｐｏｔ ５ 蛋白为细菌中铁摄
入转录类转录调控蛋白、ｓｐｏｔ １０ 蛋白为假想类皮
林蛋白ꎬ ｓｐｏｔ ６７ 蛋白为假想蛋白 ＨＭＰＲＥＦ９３３３ ＿
０１６６５(局部)ꎬ这些蛋白的功能未知ꎮ
　 　 缺失蛋白中ꎬｓｐｏｔ ６５ 蛋白为聚[Ｄ( ￣) ￣３￣羟基
丁酸酯]解聚酶ꎬ此酶可在细菌碳源充足但生长所
需的其他养分耗尽时降解为单体ꎬ为细菌继续生长
提供能量[２９]ꎮ 该蛋白缺失ꎬ则说明在生长受到限
制时细菌失去了一条再利用能量的补救途径ꎮ
ｓｐｏｔ ６６蛋白为 ＤａｐＣꎬ是合成 Ｌ￣赖氨酸的琥珀酰酶
分支蛋白ꎬ Ｈａｒｔｍａｎｎ 等[３０] 将谷氨酸棒杆菌的
ＤａｐＣ基因敲除后ꎬ突变体仍正常生长ꎬ说明该蛋
白缺失与否对菌株生长无影响ꎮ ｓｐｏｔ １６ 蛋白为转
录调控蛋白ꎬｓｐｏｔ １７ 蛋白为假想蛋白 ＲＳｃ ２１６９ꎬ
ｓｐｏｔ ７０ 蛋白为保守的假想蛋白 ＤＵＦ ７７０ꎬ这些蛋
白的功能均未知ꎮ ｓｐｏｔ ６蛋白为 ｄｎａＫ 基因表达的
蛋白 ( ｄｎａＫ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔ)ꎬ表达上调ꎬ Ｓｋｏｗｙｒａ
等[３１]的研究发现ꎬ大肠杆菌中的该蛋白可保护
ＲＮＡ聚合酶在一个不依赖 ＡＴＰ 的反应中免受高
温的钝化ꎮ
　 　 表达下调的蛋白中ꎬｓｐｏｔ ７ 蛋白为 ｄｎａｋ 抑制
蛋白 ( ｄｎａｋ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎꎬＤＫｓａ)ꎬ是细菌中
ｒＲＮＡ调控的关键因子ꎬ在敲除了 ＤＫｓａ 的突变体
中ꎬｒＲＮＡ 的激活子对有效氨基酸及生长速率的变
化均失去反应[３２]ꎮ ｓｐｏｔ １３蛋白为脱氧核糖核酸外
切酶ꎬ此类蛋白质对微生物细胞的同源重组必不可
少ꎬ同源重组直接影响集体的 ＤＮＡ 修复ꎮ 该蛋白
的表达下调ꎬ说明该蛋白的作用受到抑制ꎬ其具有
的 ＤＮＡ修复功能则不能发挥完全[３３]ꎮ ｓｐｏｔ １５ 蛋
白为细菌亮氨酸 /异亮氨酸 /缬氨酸转运亚基ꎬＡＢＣ
超家族的 ＡＴＰ 结合元件参与氨基酸的转运结合ꎮ
ｓｐｏｔ ６４为假想蛋白 ＬｆａｒＫ３＿１２６３３ꎬｓｐｏｔ ６９ 蛋白为
未命名蛋白ꎬ这些蛋白的功能均未知ꎮ
　 　 根据以上差异蛋白的功能分析ꎬ推测 ＭＧ 对
茄青枯拉尔氏菌应有多个作用靶标ꎮ 在已鉴定出
的蛋白中ꎬ引起我们注意的是新增蛋白 ｓｐｏｔ ９ Ｆ０Ｆ１
ＡＴＰ合酶 ε亚基和缺失蛋白 ｓｐｏｔ ６５聚[Ｄ( ￣) ￣３￣羟
基丁酸酯]解聚酶ꎬＦ０Ｆ１ＡＴＰ合酶广泛存在于线粒
体、叶绿体、原核藻、异养菌和光合细菌中ꎬ是能量
代谢的关键酶ꎬ参与氧化磷酸化与光合磷酸化反
应ꎬ在跨膜质子动力势的推动下催化合成 ＡＴＰꎮ ε
亚基是 ＡＴＰ合酶最小的一个亚基ꎬ有阻塞 ＡＴＰ 合
酶的质子通道和抑制其水解 ＡＴＰ活力的功能ꎮ 质
子通道堵塞和 ＡＴＰ 不能被水解ꎬ则使菌体得不到
能量供给ꎮ 本研究前期的生理测定结果显示ꎬ在
ＭＧ作用下ꎬ菌体的 Ｎａ＋Ｋ＋ ￣ＡＴＰ含量显著升高[５]ꎬ
也证明了 ＡＴＰ水解受到了抑制ꎮ 聚[Ｄ( ￣) ￣３￣羟基
丁酸酯] (ＰＨＢ)是一种广泛存在于微生物细胞中
并作为其营养和能量储存物质参与细胞代谢的天
然产物ꎮ ＰＨＢ 的分解产物 ３￣羟丁酸和乙酰乙酸
(少量)可以作为能源被细胞利用ꎬ以防止细胞自
溶和死亡ꎮ 而 ＰＨＢ的分解则依赖聚[Ｄ( ￣) ￣３￣羟基
丁酸酯]解聚酶的解聚作用ꎮ ＰＨＢ 解聚酶的缺失
使得 Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ 失去了另一条能量供给途
径ꎮ 此外ꎬＭＧ 还破坏了 Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ 细胞壁
的完整性ꎬ且胞内 ＤＮＡ、ＲＮＡ 等大分子物质有明
显外漏ꎬ扫描电镜观察的结果也与此一致[５]ꎮ 综
上所述ꎬＭＧ 对 Ｒ. ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ 的抑菌作用之一
可能是通过作用于 Ｆ０Ｆ１ＡＴＰ 合酶 ε 亚基和聚[Ｄ
( ￣) ￣３￣羟基丁酸酯]解聚酶以及溶解破坏细胞壁ꎬ
抑制了 ＡＴＰ和聚[Ｄ( ￣) ￣３￣羟基丁酸酯]的分解ꎬ同
时又破坏细菌细胞壁的完整性ꎬ致使菌体得不到能
量供应且胞内物质外泄来实现的ꎮ 但其具体的抑
菌机制有待进一步研究ꎮ
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１６０(３): ９２８￣９３４.
[２１] Ｍｅｒｃｅｎｉｅｒ Ａꎬ Ｓｉｍｏｎ Ｊ Ｐꎬ Ｈａａｓ Ｄꎬ ｅｔ ａｌ. １９８０. Ｃａｔａｂｏ￣
ｌｉｓｍ ｏｆ Ｌ￣ａｒｇｉｎｉｎｅ ｂｙ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ [ Ｊ] .
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ １９８０ꎬ １１６(２): ３８１￣
３８９.
[２２] Ｓｔａｌｏｎꎬ Ｖꎬ Ｍｅｒｃｅｎｉｅｒ Ａ. Ｌ￣Ａｒｇｉｎｉｎｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉ￣
ｏｌｏｇｙꎬ １９８４ꎬ １３０: ６９￣７６.
[２３] Ｃｈｅｄｉｎ Ｆꎬ Ｓｅｉｔｚ Ｅ Ｍꎬ Ｋｏｗａｌｃｚｙｋｏｗｓｋｉ Ｓ Ｃ. Ｎｏｖｅｌ
ｈｏｍｏｌｏｇｓ ｏｆ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ ｉｎ Ａｒｃｈａｅａ: ｉｍｐｌｉｃａ￣
ｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｓｓＤＮＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ [Ｊ] .
Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ １９９８ꎬ ２３(８): ２７３￣
２７７.
[２４] Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ Ｒ Ｉꎬ Ｗｈｉｔｅ Ｍ Ｆ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｐｅｒ￣
ｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｒｅｎａｒｃｈａｅａｌ ｓｉｎｇｌｅ￣ｓｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ ｓｏｌｆａｔａｒｉｃｕｓ [Ｊ] . Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ ２００１ꎬ ２９(４):９１４￣９２０.
[２５] Ｂｅｒｎｈａｒｄｔ Ｔ Ｇ. Ｔｈｅ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＦＫＢＰ￣ｔｙｐｅ ＰＰＩａｓｅ
ＳｌｙＤ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｅ ｌｙｓｉｓ ｐｒｏ￣
ｔｅｉｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ ｐｘｉ Ｘ１７４ [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｉｃｒｏ￣
ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００２ꎬ ４５(１): ９９￣１０８.
４５

　
　 １期 范腕腕ꎬ等:茄青枯拉尔氏菌 Ｒｓ￣Ｔ０２在 ３ꎬ４ꎬ５￣三羟基苯甲酸甲酯作用下的差异蛋白分析
[２６] Ｆｅｎｉｏｕｋ Ｂ Ａꎬ Ｓｕｚｕｋｉ Ｔꎬ Ｙｏｓｈｉｄａ Ｍ. Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｕｂ￣
ｕｎｉｔ ｅｐｓｉｌｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｃａｔａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＦＯＦ１￣
ＡＴＰｓｙｎｔｈａｓｅ [ Ｊ ] . Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ
(ＢＢＡ) ￣Ｂｉｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓꎬ ２００６ꎬ １７５７(５￣６): ３２６￣３３８.
[２７] ＭｃＫｅｏｎ Ｔꎬ Ｓｔｕｍｐｆ Ｐ Ｋ. Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎꎬ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｃｙｌ ｃａｒｒｉｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓ￣
ｔｅｒａｓｅ ｆｒｏｍ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ [ Ｊ] . Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘ￣
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ. ２０１０ꎬ ７１(２): １３２￣１３８.
[２８] Ｊｏｒｍａｋｋａ Ｍꎬ Ｂｙｒｎｅ Ｂꎬ Ｉｗａｔａ Ｓ. Ｆｏｒｍａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎ￣
ａｓｅ￣ａ ｖｅｒｓａｔｉｌｅ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎ ｃｈａｎｇｉｎｇ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ [ Ｊ] .
Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００３ꎬ １３(４):
４１８￣４２３.
[２９] Ｓａｅｇｕｓａ Ｈꎬ Ｓｈｉｒａｋｉ Ｍꎬ Ｋａｎａｉ Ｃꎬ ｅｔ ａｌ. Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ａｎ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｏｌｙ [Ｄ ( ￣) ￣３￣Ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ] ｄｅｐｏｌｙ￣
ｍｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｅｕｔｒｏｐｈａ Ｈ１６ ａｎｄ ｃｈａｒａｃ￣
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏ￣
ｌｏｇｙꎬ ２００１ꎬ １８３: ９４￣１００.
[３０] Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｍꎬ Ｔａｕｃｈ Ａꎬ Ｅｇｇｅｌｉｎｇ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ￣
ｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｔｗｏ ｕｎｋｎｏｗｎ
ｇｅｎｅｓꎬ ｄａｐＣ ａｎｄ ｄａｐＦꎬ ｉｎ ｔｈｅ ｓｕｃｃｉｎｙｌａｓｅ ｂｒａｎｃｈ ｏｆ
ｔｈｅ Ｌ￣ｌｙｓｉｎｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉ￣
ｃｕｍ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ ２００３ꎬ １０４(１￣３):
１９９￣２１１.
[３１] Ｓｋｏｗｙｒａ Ｄꎬ Ｇｅｏｒｇｏｐｏｕｌｏｓ Ｃꎬ Ｚｙｌｉｃｚ Ｍ. Ｔｈｅ Ｅ. ｃｏｌｉ
ｄｎａＫ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔꎬ ｔｈｅ ｈｓｐ７０ ｈｏｍｏｌｏｇꎬ ｃａｎ ｒｅａｃｔｉｖａｔｅ
ｈｅａｔ￣ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｉｎ ａｎ ＡＴＰ ｈｙｄｒｏｌｙ￣
ｓｉｓ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ [ Ｊ] . Ｃｅｌｌꎬ １９９０ꎬ ６２(５): ９３９￣
９４４.
[３２] Ｐａｕｌ Ｂ Ｊꎬ Ｂａｒｋｅｒ Ｍ Ｍꎬ Ｒｏｓｓ Ｗꎬ ｅｔ ａｌ. ＤｋｓＡ: ａ ｃｒｉｔｉ￣
ｃａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｍａｃｈｉｎｅｒｙ
ｔｈａｔ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｒＲＮＡ ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ ｂｙ
ｐｐＧｐｐ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｉｔｉａｔｉｎｇ ＮＴＰ [Ｊ] . Ｃｅｌｌꎬ ２００４ꎬ ６ꎬ １１８
(３): ３１１￣３２２.
[３３] Ｃｅｎｔｏｒｅ Ｒ Ｃꎬ Ｌｅｓｔｉｎｉ Ｒ. Ｓａｎｄｌｅｒ Ｓ Ｊ. ＸｔｈＡ (Ｅｘｏｎｕｃｌｅ￣
ａｓｅ ＩＩＩ) ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｆ ＲｅｃＡ ｏｎｔｏ ＤＮＡ ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ
ｉｎ ｌｏｇ ｐｈａｓｅ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｉ￣
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００８ꎬ ６７(１):８８￣１０１.
责任编辑:曾晓葳
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