全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４４(５): ５４２￣５４５(２０１４)
收稿日期: ２０１３￣０６￣０６ꎻ 修回日期: ２０１４￣０５￣１４
基金项目: 国家科技支撑计划(２０１２ＢＡＫ１１Ｂ０２)ꎻ国家质检总局科研项目(２０１４ＩＫ０２０)ꎻ浙江省博士后择优资助项目(ＢＳＨ１４０２０１１)ꎻ宁波市
社会发展科研项目(２０１２Ｃ５００４１)ꎻ宁波出入境检验疫局科研项目(甬 Ｋ１０￣２０１３)
通讯作者: 段维军ꎬ高级农艺师ꎬ主要从事有害生物识别与检测技术研究ꎻＴｅｌ:０５７４￣８７０２２９５１ꎬ Ｆａｘ:０５７４￣８７１１３５８４ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ:ｗｅｉｊｕｎｄｕａｎ＠ｔｏｍ.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１４.０５.０１３
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研究简报
进境意大利苹果苗上葡萄茎枯病菌的截获鉴定
段维军１∗ꎬ 顾建锋１ꎬ 张慧丽１ꎬ 陈先锋１ꎬ 吴品珊２
( １宁波检验检疫科学技术研究院ꎬ 宁波 ３１５０１２ꎬ ２中国检科院植物检疫研究所ꎬ 北京 １０００２９)
Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈｏｍａ ｇｌｏｍｅｒａｔａ ｏｎ ａｐｐｌｅ (Ｍａｌｌｕｓ ｓｐ.) ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ
ｉｍｐｏｒｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｉｔａｌｙ 　 ＤＵＡＮ Ｗｅｉ￣ｊｕｎ １ꎬ ＧＵ Ｊｉａｎ￣ｆｅｎｇ１ꎬ ＺＨＡＮＧ Ｈｕｉ￣ｌｉ１ꎬ ＣＨＥＮ Ｘｉａｎ￣ｆｅｎｇ１ꎬ ＷＵ
ｐｉｎ￣ｓｈａｎ２ 　 ( １Ｎｉｎｇｂｏ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅꎬ Ｎｉｎｇｂｏ ３１５０１２ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２９ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ ＺＭ４０￣１ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｏｎ Ｍａｌｌｕｓ ｓｐ. ｉｍｐｏｒｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｉｔａｌｙ ｉｎ Ｎｉｎｇｂｏ ｐｏｒｔ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ＰＤＡ
ｍｅｔｈｏｄ. Ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ ｇｒｅｗ ｗｅｌｌ ｏｎ ｔｈｒｅｅ ｋｉｎｄ ｏｆ ｍｅｄｉｕｍꎬ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＰＤＡꎬ ＭＥＡ ａｎｄ ＯＡꎬ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｍｏｓｔｌｙ ｌｉｔｔｌｅ
ａｅｒｉａｌ ｍｙｃｅｌｉｕｍ ａｎｄ ａｂｕｎｔ ｐｙｃｎｉｄｉａ. Ｔｈｅ ｐｙｃｎｉｄｉａ ｗｅｒｅ ｇｌｏｂｏｓｅ ｏｒ ｓｕｂｇｌｏｂｏｓｅꎬ ３６.４￣１９１.８(８７.２) μｍ ｉｎ ｄｉａｍｅｔｅｒ
ａｎｄ ｃｏｎｉｄｉａ ｗｅｒｅ ｖａｒｉａｂｌｅ ｉｎ ｓｈａｐｅꎬ ｍｏｓｔｌｙ ｏｖｏｉｄ￣ｅｌｌｉｐｓｏｉｄａｌꎬ ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌꎬ ｓｏｍｅｔｉｍｅｓ ｃｕｒｖｅｄꎬ ３.３￣６.２(５.１)μｍ ×
１.９￣３.１(２.７) μｍ ｉｎ ｄｉａｍｅｔｅｒ ａｎｄ ｈｙａｌｉｎｅ. Ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｅｓ ｗｅｒｅ ｍｏｓｔｌｙ ｍｕｌｔｉｃｅｌｌｕｌａｒꎬ ｓｏｌｉｔａｒｙ ｏｒ ｉｎ ｃｈａｉｎｓꎬ
ｂｒｏｗｎ ａｎｄ １８.０￣４８.０(３５.２) μｍ×７.４￣１８.７(１３.８) μｍ ｉｎ ｓｉｚｅ. Ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ (ＩＴＳꎬ ２８Ｓꎬ ＡＣＴ
ａｎｄ ＴＵＢ) ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｏｆ ｒｅｓｐｅｓｔｉｖｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｈｏｍａ ｇｌｏｍｅｒａｔａ ｆｒｏｍ ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ ｄａｔａｂａｓｅｓ ｂｙ ｂｌａｓｔｎ
ｍｅｔｈｏｄꎬ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ ＤＮＡ ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ ｂｙ ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｐｒｉｍｅｒｓ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｗｉｔｈ
ｔｈｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ＮＣＢＩ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｈａｄ １００％ ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓꎬ ｒｅｓｐｅｃ￣
ｔｉｖｅｌｙ. Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ ｄｉｄｎ’ ｔ ｉｎｆｅｃｔ ｓｔｅｍ ｏｆ Ｍａｌｌｕｓ ｓｐ.. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｔｈｅ ｆｒｕｉｔ ａｎｄ ｌｅａｆ
ｗｅｒｅ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｔｏ Ｐ. ｇｌｏｍｅｒａｔａ. Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎬ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ ｒｅ￣
ｓｕｌｔｓꎬ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ ＺＭ４０￣１ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｐｈｏｍａ ｇｌｏｍｅｒａｔａ (Ｃｏｒｄａ) Ｗｏｌｌｅｎｗｅｂｅｒ ＆Ｈｏｃｈａｐｆｅｌ. Ｔｏ ｏｕｒ ｋｎｏｗ￣
ｌｅｄｇｅꎬ ｔｈｉｓ ｉｓ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｉｎｔｅｒｃｅｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐ. ｇｌｏｍｅｒａｔａ ｉｎ Ｃｈｉｎａ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｐｈｏｍａ ｇｌｏｍｅｒａｔａꎻ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎻ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓꎻ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙꎻ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１４)０５￣０５４２￣０４
　 　 葡萄茎枯病菌[Ｐｈｏｍａ ｇｌｏｍｅｒａｔａ (Ｃｏｒｄａ) Ｗｏｌ￣
ｌｅｎｗｅｂｅｒ ＆Ｈｏｃｈａｐｆｅｌ]已被列入我国进境植物检疫
性有害生物名录ꎬ是一种检疫性植物病原真菌ꎮ 目
前ꎬ该病菌分布于意大利、希腊、瑞典、印度、澳大利
亚、以色列、秘鲁、匈牙利美国等国家ꎮ 该病菌寄主
范围广ꎬ可为害近百种植物ꎬ造成葡萄枯萎病、松树
猝倒病、小麦叶斑病、苹果叶部和果实病害、番茄、马
铃薯和柑桔腐烂等[１ꎬ ２]ꎮ 迄今ꎬ我国未有发生报道ꎮ
　 　 ２０１２年 ５月ꎬ宁波检验检疫局从意大利进口的观
赏用苹果种苗上分离到一株疑似葡萄茎枯病菌分离
物 ＺＭ４０￣１ꎬ通过形态学观察、致病性测定和分子序列
比对分析ꎬ对其进行了鉴定ꎬ现报道如下ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 病菌分离与纯化
　 　 采用常规的组织块 ＰＤＡ 平板分离法ꎬ从意大
　
　 ５期 段维军ꎬ等:进境意大利苹果苗上葡萄茎枯病菌的截获鉴定
利苹果种苗叶片的叶斑症状处分离获得分离物ꎬ单
孢分离后得到单孢分离株 ＺＭ４０￣１ꎬ保存于 ＰＤＡ试
管斜面(４℃)ꎬ备用ꎮ
１.１.２　 培养基　 马铃薯葡萄糖琼脂(ＰＤＡ)培养基
用于病菌分离、纯化和保藏ꎮ 马铃薯葡萄糖琼脂
(ＰＤＡ)培养基、燕麦培养基(ＯＡ)、麦芽汁(ＭＥＡ)
培养基用于形态学特征观察ꎮ
　 　 马铃薯葡萄糖琼脂 ( ＰＤＡ)培养基:马铃薯
２００ ｇꎬ葡萄糖 ２０ ｇꎬ琼脂 ２０ ｇꎮ 马铃薯切块加水煮
沸 ２０ ｍｉｎꎬ纱布过滤后加水补足 １ ０００ ｍＬꎬ加琼脂
和葡萄糖ꎮ １２１ ℃高压灭菌 １５ ｍｉｎꎮ
　 　 燕麦培养基(ＯＡ):燕麦片 ３０ ｇꎬ琼脂 ２０ ｇꎬ蒸
馏水 １ ０００ ｍＬꎮ 燕麦片加水 １ ０００ ｍＬꎬ沸水浴加
热处理 １ ｈꎬ纱布过滤后加水补足 １ ０００ ｍＬꎬ加琼
脂ꎮ １２１℃高压灭菌 １５ ｍｉｎꎮ
　 　 麦芽汁(ＭＥＡ)培养基:麦芽浸膏 ３０ ｇꎬ大豆蛋
白胨 ３ ｇꎬ琼脂 １５ ｇꎬ加水配制 １ Ｌꎮ １２１℃高压灭
菌 １５ ｍｉｎꎮ
１.２　 方法
１.２.１　 生物学性状观察 　 将分离物 ＺＭ４０￣１ 分别
接种于 ＰＤＡ、ＯＡ 和 ＭＥＡ 平板上ꎬ２５ ℃下连续暗
培养 １０ ｄꎬ观察记录菌落正反面的颜色和气生菌丝
的疏密程度ꎮ 用解剖针自 ＰＤＡ平板上挑取分生孢
子器、分生孢子和厚垣孢子ꎬ制片后在显微镜下镜
检观察分生孢子器、分生孢子和厚垣孢子的形态特
征ꎬ并对其进行形态学测量ꎮ
１.２.２　 致病性测定 　
１)茎杆部致病性测定　 选用市售健康苹果树苗润
太一号进行接种试验ꎬ在树苗根茎部用灭菌锋利小
刀切割表皮(切割部位长宽约为 １.０ ｃｍ×０.５ ｃｍ)ꎬ
将在 ＰＤＡ平板上培养 １０ ｄ 的菌落用直径 ４ ｍｍ打
孔器在菌落边缘打出菌饼后ꎬ小心放置在切割处ꎬ共
接种 １０株ꎮ 以无菌菌饼接种 ３ 株作为对照ꎮ 用湿
润灭菌脱脂棉覆盖伤口ꎬ２５℃温室条件下进行培养ꎬ
接种 １０ ｄ后ꎬ观察记录发病情况ꎮ
２)果实致病性测定　 选用健康无伤的新鲜市售苹
果ꎬ用无菌水清洗果实表面ꎬ７５％酒精进行表面消
毒ꎬ在果表用直径 ４ ｍｍ 打孔器打出伤口ꎮ 将在
ＰＤＡ平板上培养 １０ ｄ的菌落用直径 ４ ｍｍ打孔器
在菌落边缘打出菌饼后接种在苹果伤口处ꎬ共接种
１０个苹果ꎮ 无菌菌饼接种个苹果作为对照ꎮ 用湿
润灭菌脱脂棉覆盖伤口后ꎬ将接种果实分别套上无
菌塑料袋ꎬ２５ ℃下黑暗保湿培养ꎮ 接种 １０ ｄ后ꎬ观
察记录发病情况ꎬ并对发病果进行病菌再分离ꎮ
３)叶片致病性测定　 选用市售健康苹果树苗润太
一号进行接种试验ꎬ采用活体叶片接种法对分离物
ＺＭ４０￣１进行致病性测定ꎮ 挑取幼嫩健康的苹果
叶片ꎬ将在 ＰＤＡ平板上培养 １０ ｄ 的菌落用直径 ４
ｍｍ打孔器在菌落边缘打出菌饼后ꎬ将菌饼接种在
叶片正面针刺伤口处ꎬ菌丝面贴向叶片ꎬ共接种 １０
个叶片ꎮ 无菌菌饼接种 ３个叶片作为对照ꎬ２５℃温
室条件下进行培养ꎬ接种 １０ ｄ 后观察发病情况ꎬ并
对病叶进行病菌再分离ꎮ
１.２.３　 ＤＮＡ提取　 收集 ＰＤＡ平板上培养 １０ ｄ 的
分离物 ＺＭ４０￣１菌丝体ꎬ根据试剂盒及仪器使用说
明ꎬ在核酸自动化提取仪(ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ 公司 Ｋｉｎｇ￣
Ｆｉｓｈｅｒ ｍＬ 型)上使用核酸提取试剂盒(台湾奈米
技术开发有限公司 ＴＡＮＢｅａｄ Ｐｌａｎｔ ＤＮＡ Ｋｉｔ 试剂
盒)进行 ＤＮＡ 提取ꎮ 提取的 ＤＮＡ 经分光光度计
(ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ 公司 Ｎａｎｏｄｒｏｐ ＮＤ￣２０００ 型)测定
ＤＮＡ浓度后ꎬ冻存于－２０℃冰箱备用ꎮ
１.２.４　 序列扩增和测定　 采用 Ｗｈｉｔｅ 等[３]设计的
引物 ＩＴＳ１和 ＩＴＳ４ 及其反应条件进行 ＩＴＳ 片段扩
增ꎬ采用 Ｖｉｌｇａｌｙｓ[４]设计的的引物 ＬＲ０Ｒ 和 ＬＲ５Ｒ
及其反应条件进行 ２８Ｓ片段扩增ꎬ采用 Ｃａｒｂｏｎｅ 和
Ｋｏｈｎ[５]设计的引物 ＡＣＴ￣５１２Ｆ 和 ＡＣＴ￣７８３Ｒ 及其
反应条件进行 Ａｃｔｉｎ ( ＡＣＴ ) 片段扩增ꎬ 采用
Ａｖｅｓｋａｍｐ等设计的引物 ＴＵＢ２Ｆｄ 和 ＴＵＢ４Ｒｄ 及
其反应条件进行 β￣ｔｕｂｕｌｉｎ (ＢＴＵ)片段扩增[６]ꎮ
ＰＣＲ扩增产物在 ２％琼脂糖凝胶上电泳ꎬ用凝胶成
像系统进行成像分析ꎬ并用 ＤＮＡ 片段纯化试剂盒
进行纯化ꎮ 纯化 ＰＣＲ产物送上海英俊生物技术有
限公司双向测序ꎮ
１.２.５　 序列分析　 利用 ＮＣＢＩ网站上的 ＢＬＡＳＴ程
序对所得的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ、２８Ｓ、ＡＣＴ 和 ＴＵＢ 序列进
行比对分析ꎬ确认序列的可靠性ꎮ
２　 结果与分析
２.１　 菌落性状
　 　 在 ２５℃下ꎬＰＤＡ、ＭＥＡ和 ＯＡ培养基上菌落均
仅有轻微耸立的菌丝体ꎬ气生菌丝少且稀薄ꎬＰＤＡ
上菌丝较 ＭＥＡ 和 ＯＡ 上多ꎮ 菌落边缘颜色均为
白色ꎬ较浅ꎬ菌落中部颜色有所不同(ＰＤＡ上正面 /
反面为灰褐 /灰黑ꎻＭＥＡ 上正面 /反面为红褐 /褐
色ꎻＯＡ上正面 /反面为灰黑 /灰黑) (图 １)ꎮ 培养
３４５
　
植物病理学报 ４４卷
早期以产生大量分生孢子器为主ꎬ培养后期可产生
大量厚垣孢子ꎮ
２.２　 病菌形态特征
　 　 菌落上形成大量的分生孢子器ꎬ球形或半球
形ꎬ直径 ３６.４~ １９１.８(８７.２) μｍꎬ其上有浅玫瑰红
色分生孢子液ꎮ分生孢子通常为单细胞ꎬ无色透
明ꎬ椭圆形至近圆柱形ꎬ直或向内稍弯曲ꎬ具油球
(１~３个)ꎬ多为 ２个ꎬ大小 ３.３~６.２(５.１)μｍ×１.９ ~
３.１(２.７)μｍꎮ 能够产生与链格孢属分生孢子相似
的砖格状厚垣孢子ꎬ单生或链生ꎬ形成分枝或不分
枝的孢子链ꎮ 厚垣孢子多为多细胞ꎬ１８. ０ ~ ４８. ０
(３５.２) μｍ×７.４ ~ １８.７(１３.８)μｍꎮ 显微镜下镜检
观察脱落厚垣孢子较少ꎬ大多连接在一起(图 ２)ꎮ
Ｆｉｇ. １　 Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅ ＺＭ４０￣ １ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ ｐｌａｔｅ ａｆｔｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅｄ １０ ｄａｙｓ
ａꎬ ｃꎬ ｅ:Ｃｏｌｏｎｙ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ｆｒｏｍ ａｂｏｖｅꎻｂꎬ ｄꎬ ｆ:Ｃｏｌｏｎｙ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ｆｒｏｍ ｒｅｖｅｒｓｅ
ｓｉｄｅ( ｆｒｏｍ ｌｅｆｔ ｔｏ ｒｉｇｈｔꎬ ＰＤＡ(ａ / ｂ)、ＭＥＡ(ｃ / ｄ) ａｎｄ ＯＡ(ｅ / ｆ)) .
Ｆｉｇ. ２　 Ｃｈａｉｎ ａｌｔｅｒｎａｒｉｏｉｄ ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｅｓ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅ ＺＭ４０￣１ ｏｎ ＰＤＡ (Ｂａｒ＝１０ μｍ)
４４５
　
　 ５期 段维军ꎬ等:进境意大利苹果苗上葡萄茎枯病菌的截获鉴定
２.３　 致病性测定
　 　 接种 １０ ｄ后发现ꎬ对照和接种分离物 ＺＭ４０￣１
的苹果苗根茎部均未出现任何症状ꎮ 接种菌块的
苹果果实 １０ ｄ 后表现褐腐症状ꎬ病斑边缘与健康
组织界限清晰ꎬ发病部有韧性ꎬ呈干腐症状ꎻ无菌菌
饼接种的对照果未发现上述症状ꎮ 接种菌块的叶
片均出现褐色坏死斑块ꎬ边缘不规则ꎮ 对发病果实
和叶片的病菌再分离证实了分离物的致病性ꎮ
２.４　 序列比对分析
　 　 经在 ＧｅｎＢａｎｋ 中进行 Ｂｌａｓｔｎ 分析ꎬ结果表明:
分离物 ＺＭ４０￣１ 所测 ＩＴＳ 片段与 ＧｅｎＢａｎｋ 中葡萄
茎枯病菌(ＡＦ１２６８１６、ＦＪ４２７０１８、ＦＪ４２７０１１) 序列同
源性为 １００％ꎬ２８Ｓ 序列与与 ＧｅｎＢａｎｋ 中葡萄茎枯
病菌(ＥＵ７５４１８５) 序列同源性为 １００％ꎬＡＣＴ 序列
与 ＧｅｎＢａｎｋ 中 葡 萄 茎 枯 病 菌 ( ＦＪ４２６８９７、
ＦＪ４２６８９６) 序列同源性为 １００％ꎬＴＵＢ 序列与 Ｇｅｎ￣
Ｂａｎｋ中葡萄茎枯病菌(ＦＪ４２７１３１、ＦＪ４２７１２６) 序列
同源性为 １００％ꎮ
２.５　 分离物的鉴定
　 　 将分离物 ＺＭ４０￣１ 的菌落性状及形态特征与
文献中葡萄茎枯病菌的描述相比较ꎬ表明所分离菌
株的菌落性状和形态特征均与前人的报道相
符[１ꎬ ２]ꎮ 致病性测定证明分离物 ＺＭ４０￣１ 能够侵
染苹果果实和叶片ꎮ 经序列测定和通过 ＧｅｎＢａｎｋ
中 ＢＬＡＳＴ 比对分析发现ꎬ所测定分离物 ＺＭ４０￣１
的 ＩＴＳ、２８Ｓ、ＡＣＴ和 ＴＵＢ 序列与已经登录的葡萄
茎枯病菌相应序列高度一致ꎬ同源性均为 １００％ꎮ
综上所述ꎬ从进境意大利苹果种苗中截获的病原真
菌分离物 ＺＭ４０￣１为葡萄茎枯病菌ꎮ
３　 讨论
　 　 本研究采用形态学特征结合 ｒＤＮＡ 序列分析
和致病性测定的方法ꎬ准确鉴定了来自进境意大利
苹果苗上的葡萄茎枯病菌ꎮ 形态学观察结果表明
该菌具有葡萄茎枯病菌典型的形态特征ꎬ如能够产
生球形或半球形分生孢子器ꎬ内生大量分生孢子ꎬ
同时具有分枝或不分枝的链格孢状厚垣孢子[１]ꎮ
序列分析表明该菌株与 ＧｅｎＢａｎｋ 中的多条葡萄茎
枯病菌序列同源性极高ꎬ从分子水平进一步确认了
形态学结果ꎬ同时致病性测定结果表明该菌株能够
侵染苹果果实和叶片ꎬ以上结果支持将该菌株鉴定
为葡萄茎枯病菌ꎮ 葡萄茎枯病菌在我国尚未见发
生分布报道ꎬ本研究属全国首次从意大利进境种苗
中截获该病菌ꎬ为此国家质检总局动植物检疫监管
司已于 ２０１２年 １１ 月向全国检疫系统发布了警示
通报(质检动函(２０１２) ２８３ 号文件)ꎬ并通报意大
利方面ꎬ要求调查原因并采取改进措施ꎮ
　 　 葡萄茎枯病菌具有极强生态适应性ꎬ能够在多
种生境下存活ꎬ包括死亡植株、空气、海水和土壤
等[１]ꎮ 鉴于该病菌的极强适生性、分布广泛性和
危害性ꎬ其随种苗传入我国的风险也随之加大ꎬ此
次的截获鉴定表明ꎬ从意大利进口苹果种苗具有极
大风险ꎬ应继续加强对该类进境种苗上检疫性有害
生物的检测工作ꎬ以防范其危害ꎮ
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ａｌ. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ｏｆ Ｐｈｏｍａ ａｎｄ ａｌｌｉｅｄ ａｎａｍｏｒｐｈ
ｇｅｎｅｒａ: Ｔｏｗａｒｄｓ ａ ｒｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｈｏｍａ ｃｏｍ￣
ｐｌｅｘ [Ｊ] . Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ ２００９ꎬ １１３(４): ５０８
－５１９.
责任编辑:张宗英
５４５